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共表达IBDV VP2蛋白和AIV HA蛋白的重组NDV的构建

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中国兽医科学 2025年

作者：王晓晓司凯新尚珂陈松彪余祖华丁轲陈建李日顺郁川何雷洛阳市活载体生物材料与动物疫病防控重点实验室河南科技大学动物科技学院功能微生物与畜禽健康实验室洛阳职业技术学院

为构建共表达新变异型传染性法氏囊病毒（nVarIBDV）VP2蛋白和H9亚型禽流感病毒（AIV）HA蛋白的耐热型重组NDV，将nVarIBDV VP2基因和AIV HA基因经2A肽连接后插入重组质粒pNDV-Ⅶ-F中; 然后，重组质粒与辅助质粒pTM-N/P/L共转染BHK-21... 详细信息

为构建共表达新变异型传染性法氏囊病毒（nVarIBDV）VP2蛋白和H9亚型禽流感病毒（AIV）HA蛋白的耐热型重组NDV，将nVarIBDV VP2基因和AIV HA基因经2A肽连接后插入重组质粒pNDV-Ⅶ-F中; 然后，重组质粒与辅助质粒pTM-N/P/L共转染BHK-21细胞，拯救出共表达VP2蛋白和HA蛋白的重组病毒rNDV-Ⅶ-F-VP2-HA和rNDV-Ⅶ-F-HA-VP2并鉴定。RT-PCR鉴定表明目的基因成功插入至重组NDV的P、M基因之间；IFA检测结果表明，重组病毒rNDV-Ⅶ-F-HA-VP2感染细胞可稳定表达VP2蛋白和HA蛋白，而重组病毒rNDV-Ⅶ-F-VP2-HA感染细胞后仅检测到VP2蛋白表达。生物学特性检测表明两株重组病毒均具有亲本毒株的高增殖效价、低毒力和良好耐热性特点。综上所述，本研究成功地构建了共表达nVarIBDV VP2蛋白和H9N2 AIV HA蛋白的重组病毒rNDV-Ⅶ-F-VP2-HA和rNDV-Ⅶ-F-HA-VP2，为nVarIBDV、H9N2及基因Ⅶ型NDV的综合防控提供了一种新的策略。

关键词：新城疫病毒传染性法氏囊病毒 VP2蛋白禽流感病毒 HA蛋白

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葡萄穗霉科3个中国新记录种

菌物研究 2025年

作者：牛启光郑焕娣余知和曾昭清长江大学生命科学学院中国科学院微生物研究所真菌学国家重点实验室

通过形态特征观察和多基因联合分析的方法对分离自北京、湖北和新疆土壤样品的5株葡萄穗霉科真菌进行系统分类研究，发现了3个中国新记录种：海枣阿氏菌Alfaria dactyli、绿孢近漆斑菌Paramyrothecium viridisporum和汤加异漆斑菌Xenomy... 详细信息

通过形态特征观察和多基因联合分析的方法对分离自北京、湖北和新疆土壤样品的5株葡萄穗霉科真菌进行系统分类研究，发现了3个中国新记录种：海枣阿氏菌Alfaria dactyli、绿孢近漆斑菌Paramyrothecium viridisporum和汤加异漆斑菌Xenomyrothecium tongaense，并详细描述了每个种的菌落和微观形态特征。该研究结果丰富了我国葡萄穗霉科真菌的物种多样性。

关键词：肉座菌目阿氏菌属近漆斑菌属异漆斑菌属

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不同花球颜色的花椰菜自交系转录组分析

北方园艺 2025年

作者：张全 HOLGERBUDAHN 丁云花北京市农林科学院蔬菜研究所/蔬菜生物育种全国重点实验室/国家蔬菜工程技术研究中心/蔬菜种质改良北京市重点实验室/农业农村部华北地区园艺作物生物学与种质创制重点实验室德国JKI联邦栽培植物研究中心园艺作物育种研究所

以不同花球颜色的花椰菜高代自交系P535（紫花）和W535（白花）为材料，选取结球期花球组织样本，采用转录组测序分析，研究了2种材料间差异表达基因及作用通路，以期进一步解析花椰菜花球颜色形成的遗传基础。结果表明，P535与W535间存... 详细信息

以不同花球颜色的花椰菜高代自交系P535（紫花）和W535（白花）为材料，选取结球期花球组织样本，采用转录组测序分析，研究了2种材料间差异表达基因及作用通路，以期进一步解析花椰菜花球颜色形成的遗传基础。结果表明，P535与W535间存在291个差异表达基因，其中102个基因在P535中表达上调，189个基因P535中表达下调。GO富集分析和KEGG富集分析发现差异表达基因主要集中于黄酮生物合成、类黄酮生物合成、异黄酮合成、花青素合成等通路。对差异表达基因进行同源分析发现13个花青素合成相关基因在P535中显著上调，其中包含一个MYB转录因子BoPAP1，推测是BoPAP1的表达上调进一步促进了花青素合成结构基因的表达，群体基因型鉴定证明了BoPAP1变异与花色变化的相关性。序列分析发现BoPAP1启动子的变异与前人报道变异不同，可能是花椰菜中调控紫色花球建成的新的自然变异。

关键词：花椰菜花青素花球转录组分析 MYB

青海牦牛源益生菌分离、鉴定及其益生特性的研究

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动物营养学报 2025年

作者：谢林林曹瑾赵玉琪张欣郝力壮简莹娜孙偲李军训宋洪宁王楠天津科技大学生物工程学院教育部工业发酵微生物学重点实验室青海大学青海省高原放牧家畜动物营养与饲料科学重点实验室青海大学畜牧兽医科学院青海省动物疾病病原诊断与绿色防控技术研究重点实验室青海百分牛生物科技有限公司山东泰山生力源集团股份有限公司

本研究旨在从青海省牦牛源样品中分离筛选可用于改善牦牛腹泻的潜在益生菌菌株,并评价其体外益生特性。试验首先从健康牦牛粪便和酸奶中分离纯化出乳酸菌,通过菌落形态观察、16S rDNA以及对部分菌株进行保守基因rpoA测序,并进行BLAST比... 详细信息

本研究旨在从青海省牦牛源样品中分离筛选可用于改善牦牛腹泻的潜在益生菌菌株,并评价其体外益生特性。试验首先从健康牦牛粪便和酸奶中分离纯化出乳酸菌,通过菌落形态观察、16S rDNA以及对部分菌株进行保守基因rpoA测序,并进行BLAST比对,对筛选菌株进行鉴定。然后,通过评价菌株的生长、耐酸、耐胆盐、自动聚集能力和疏水性等特性筛选出优异菌株,重点考察其对来自腹泻致死牦牛中分离的致病菌的抑制能力,同时对其抗生素耐药性、细胞黏附能力、抗氧化能力[2,2-二苯基-1-苦基肼(DPPH)自由基清除率、羟自由基清除率及还原能力]及抗炎能力[巨噬细胞释放一氧化氮(NO)]进行测定。结果表明:试验共获得8株乳酸菌,其中1株为罗伊氏黏液乳杆菌,3株为植物乳植杆菌,4株为屎肠球菌。其中,罗伊氏黏液乳杆菌QM11具有较强的耐酸和耐胆盐能力;自动聚集率和疏水率分别为(64.07±1.36)%和(26.90±1.51)%;对牦牛源致病性大肠杆菌QH01、QH02和QH03的抑菌率分别为(87.29±0.98)%、(74.67±1.28)%和(86.43±0.21)%,对金黄色葡萄球菌、单增李斯特菌和鼠伤寒沙门氏菌等多种病原指示菌的抑菌率达74%以上;对氨苄西林、青霉素、庆大霉素和链霉素等多种抗生素敏感。与对照菌株鼠李糖乳杆菌GG相比,罗伊氏黏液乳杆菌QM11对结肠细胞的黏附能力更强,黏附率为(54.38±2.15)%;菌悬液的抗氧化能力更强,DPPH自由基清除率、羟自由基清除率和还原能力分别为(4.19±1.03)%、(180.29±9.28)%和(6.07±0.60)%;抑制巨噬细胞释放NO的能力与鼠李糖乳杆菌GG相当。综上所述,本试验筛选出的罗伊氏黏液乳杆菌QM11可作为后续研制用于防治牦牛腹泻益生菌制剂的备选菌株。

关键词：牦牛益生菌筛选益生特性

白纹伊蚊唾液蛋白rAlb-34kDa-1促进Raw264.7细胞免疫应答及DENV-2的复制

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中国热带医学 2025年

作者：旷晓元肖秋秋吴文诗牟小会吴家红贵州医科大学基础医学院人体寄生虫学教研室贵州省微生物组与传染性疾病防控重点实验室贵州省安顺市人民医院生殖医学科

目的探讨白纹伊蚊唾液蛋白rAlb-34kDa-1对巨噬细胞（Raw264.7）的免疫调控作用及对Raw264.7细胞中2型登革病毒（Denguevirustype2，DENV-2）复制的影响。方法将原核表达质粒pET32a(+)-rAlb-34kDa-1转入到大肠埃希菌（***）BL21（DE3）... 详细信息

目的探讨白纹伊蚊唾液蛋白rAlb-34kDa-1对巨噬细胞（Raw264.7）的免疫调控作用及对Raw264.7细胞中2型登革病毒（Denguevirustype2，DENV-2）复制的影响。方法将原核表达质粒pET32a(+)-rAlb-34kDa-1转入到大肠埃希菌（***）BL21（DE3）后，按实验室前期建立的表达纯化条件获取唾液蛋白并通过SDS-PAGE及WesternBlot（WB）方法鉴定；以CCK8法分析rAlb-34kDa-1蛋白对Raw264.7细胞的毒性。将0.02 、0.20和2.0μg/mL浓度rAlb-34kDa-1作用Raw264.7细胞6、12和24 h，采用实时荧光定量逆转录PCR（Real-timequantitativereversetranscriptionPCR，qRT-PCR）检测细胞中白细胞介素-1β（Interleukin-1β，IL-1β）、白细胞介素-6（Interleukin-6，IL-6）、肿瘤坏死因子-α(Tumornecrosisfactor-α，TNF-α)、趋化因子配体2（Chemokineligand2，CCL2）、干扰素-β（Interferon-β，IFN-β）、干扰素刺激基因15（InterferonStimulatedGene15，ISG15）的表达，运用酶联免疫吸附实验（Enzymelinkedimmunosorbentassay，ELISA）检测细胞培养上清IL-6和TNF-α的分泌；免疫荧光法观察rAlb-34kDa-1作用Raw264.7细胞后p65进入细胞核的情况，分析rAlb-34kDa-1蛋白是否通过NF-κB信号通路实现对Raw264.7细胞的免疫调控；按分组（DENV-2作用组、唾液蛋白+DENV-2共孵育组）加不同的处理因素作用6、12和24 h后收集细胞，利用qRT-PCR检测细胞内DENV-2的mRNA表达量及运用流式细胞术（FCM）检测不同处理因素作用24h细胞内J2（dsRNA）的荧光强度。结果 SDS-PAGE及WB结果显示成功获得rAlb-34kDa-1蛋白且经CCK8法分析该蛋白对Raw264.7细胞无毒性；0.2μg/mL和2.0μg/mL的rAlb-34kDa-1均能诱导Raw264.7细胞中IL-1β、IL-6、TNF-α、CCL2、IFN-β、ISG15的表达；rAlb-34kDa-1作用Raw264.7细胞1 h后显著增强Raw264.7细胞核内的p65的荧光强度；rAlb-34kDa-1与DENV-2作用于Raw264.7细胞12 h时，2 μg/mL的rAlb-34kDa-1显著增强细胞中DENV-2的mRNA表达量。作用24 h时，0.02μg/mL、0.2μg/mL、2μg/mL的rAlb-34kDa-1均能增强Raw264.7细胞中DENV-2的mRNA表达量，2μg/mL的rAlb-34kDa-1与DENV-2共孵育于Raw264.7细胞24h后细胞内J2的荧光信号显著增强；结论 rAlb-34kDa-1蛋白能调节小鼠Raw264.7细胞免疫应答，促进DENV-2在Raw264.7细胞中复制。

关键词：白纹伊蚊 rAlb-34kDa-1蛋白 2型登革病毒免疫调控

鱼类褪黑素合成酶系编码基因的系统进化与生理功能

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中山大学学报（自然科学版）（中英文） 2025年第1期64卷 158-171页

作者：卞超张新辉张凯魏汉银何哲文正勇黄玉石琼深圳大学生命与海洋科学学院水产基因组学实验室广东深圳518057 深圳市华大海洋研究院广东深圳518081 内江师范学院生命科学学院/长江上游鱼类资源保护与利用四川省重点实验室四川内江641100 中国科学院水生生物研究所湖北武汉430072

褪黑素是一种小分子神经递质,主要在脊椎动物的松果腺中合成与分泌,到达机体各部位来参与调控生物节律、生殖、生长与发育等生理过程。在鱼类中,松果腺是一个复合体,主要由类光感细胞构成,具有感光与内分泌双重功能。褪黑素的生物合成... 详细信息

褪黑素是一种小分子神经递质,主要在脊椎动物的松果腺中合成与分泌,到达机体各部位来参与调控生物节律、生殖、生长与发育等生理过程。在鱼类中,松果腺是一个复合体,主要由类光感细胞构成,具有感光与内分泌双重功能。褪黑素的生物合成从色氨酸开始,涉及色氨酸羟化酶(TPH)、芳香族L-氨基酸脱羧酶(AAAD)、芳香烷胺-N-乙酰转移酶(AANAT)和乙酰色胺甲基转移酶(ASMT)。前期,我们通过对众多脊椎动物开展比较基因组学研究,发现这4个褪黑素合成酶系编码基因的系统进化与脊椎动物的物种进化基本一致,表明这些基因(同褪黑素一样)都很保守。有意思的是,在鱼类中各催化酶基因拷贝数出现显著增加,但四倍体与二倍体鱼中的拷贝数并不一定是2∶1,这是因为鱼类基因组复制后存在部分基因丢失的现象。此外,在大多数鱼类基因组中还鉴定到一些新基因,譬如aaad-like和asmt-like,可能拥有新的功能;有的催化酶基因缺失、出现移码突变或假基因化,可提升物种对特殊生境(诸如洞穴或深海)的生存适应性。本综述主要以我们团队近十年来的相关工作为主线,综合简介鱼类褪黑素合成酶系编码基因的系统进化与生理功能,以期深入理解褪黑素对鱼类生殖内分泌活动的影响,为进一步促进鱼类性腺发育、人工繁殖和分子育种等提供指导和支撑。

关键词：褪黑素褪黑素合成酶系统进化生理功能适应机制

卵形鲳鲹促性腺激素β亚基的克隆鉴定及其受雌二醇的调控

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中山大学学报（自然科学版）（中英文） 2025年第1期64卷 172-181页

作者：黄春艳陈华谱郭煜文王岩杨浩李广丽广东省名特优鱼类生殖调控与繁育工程技术研究中心/广东省水产经济动物病原生物学及流行病学重点实验室/广东省海水养殖生物育种工程实验室/广东海洋大学水产学院广东湛江524088

促性腺激素(GtH,gonadotropin hormone)是垂体合成和分泌的一类重要糖蛋白激素,包括促卵泡生成素(Fsh,follicle stimulating hormone)和促黄体生成素(Lh,luteinizing hormone),在促进性腺发育和成熟过程中发挥重要作用。本研究成功克隆... 详细信息

促性腺激素(GtH,gonadotropin hormone)是垂体合成和分泌的一类重要糖蛋白激素,包括促卵泡生成素(Fsh,follicle stimulating hormone)和促黄体生成素(Lh,luteinizing hormone),在促进性腺发育和成熟过程中发挥重要作用。本研究成功克隆了卵形鲳鲹(Trachinotus ovatus)fshβ和lhβ基因的开放阅读框(ORF,open reading frame)序列,fshβORF长度为363 bp,lhβORF长度为447 bp。通过荧光定量PCR技术(qPCR,quantitative realtime PCR)检测,发现fshβ和lhβ基因在卵形鲳鲹的下丘脑-垂体-性腺轴(HPG,hypothalamus-pituitary-gonadal axis)显著表达,在垂体中的表达水平最高,其次是下丘脑和性腺。此外,通过体外实验评估17β-雌二醇(E2,17β-estradiol)对卵形鲳鲹垂体组织中fshβ和lhβ基因表达的影响。结果显示,10μmol/L E2处理6 h后,GtHβ亚基基因的表达被极显著抑制。最后,使用雌激素受体(ER,estrogen receptor)拮抗剂体外孵育卵形鲳鲹垂体组织,发现广谱性拮抗剂Fulvestrant、ERβ拮抗剂Cyclofenil和ERα拮抗剂MPP(MPP dihydrochloride)均能够消除E2对GtHβ亚基基因表达的抑制作用。综上所述,研究结果表明E2对卵形鲳鲹GtH的分泌具有负反馈调节作用,为卵形鲳鲹生殖调控机制提供了有价值的见解。

关键词：卵形鲳鲹(Trachinotus ovatus) 促性腺激素(GtH) 雌激素受体(ER) 17β-雌二醇(E2)

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耻垢分枝杆菌的蚯蚓血红蛋白样蛋白MSMEG_3312影响其大环内酯类药物的敏感性

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微生物学报 2014年第11期54卷 1279-1288页

作者：黄鹂歌胡新玲陶均米凯霞安徽大学生命科学学院安徽合肥230601 中国科学院病原微生物与免疫学重点实验室中国科学院微生物研究所北京100101 北京市病原微生物耐药与耐药基因组重点实验室北京100101

【目的】活性氧类分子是机体有氧代谢的自然产物,可以引起氧化损伤,导致细胞DNA突变、蛋白质失活,是细菌耐药产生的原因之一。蚯蚓血红蛋白家族是能携带氧、可逆地结合氧的一类蛋白,在氧代谢过程中发挥重要作用,与活性氧类分子介导的细... 详细信息

【目的】活性氧类分子是机体有氧代谢的自然产物,可以引起氧化损伤,导致细胞DNA突变、蛋白质失活,是细菌耐药产生的原因之一。蚯蚓血红蛋白家族是能携带氧、可逆地结合氧的一类蛋白,在氧代谢过程中发挥重要作用,与活性氧类分子介导的细菌耐药相关。预测耻垢分枝杆菌(Mycobacterium smegmatis)MSMEG_3312是蚯蚓血红蛋白样蛋白,其功能可能与细菌抗药性有关。【方法】通过生物信息学预测耻垢分枝杆菌MSMEG_3312的结构特征。通过基因敲除、遗传互补和抗药性分析以及启动子表达测定等方法研究MSMEG_3312与耻垢分枝杆菌抗药的相关性。【结果】与野生菌株mc2155相比,msmeg_3312敲除菌株表现为抗大环内酯类抗生素,而且回补msmeg_3312部分丧失了这种耐药表型。此外,大环内酯类抗生素的胁迫在统计上显著下调msmeg_3312启动子的表达。另外,对作用于核糖体的其他药物,敲除菌株和野生菌株没有抗药性差异。【结论】生物信息学分析显示MSMEG_3312的氨基酸序列具有典型的蚯蚓血红蛋白保守的HHE结构域,预测其二级结构含有4个α-螺旋组成的典型蚯蚓血红蛋白结构。MSMEG_3312与耻垢分枝杆菌对大环内酯类抗生素的药物敏感性相关,其可能通过影响药物与核糖体50S亚基的作用来发挥功能。

关键词：蚯蚓血红蛋白样蛋白 MSMEG_3312 活性氧耐药性

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轮作对香草兰病原菌及根际土壤微生物群落的影响

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热带作物学报 2025年第1期46卷 189-201页

作者：邢诒彰洪珊杨劲明赵青云苏凡庄辉发王辉中国热带农业科学院香料饮料研究所/农业农村部香辛饮料作物遗传资源利用重点实验室/海南省热带香辛饮料作物遗传改良与品质调控重点实验室海南万宁571533 中国科学院遗传与发育生物学研究所/植物基因组学国家重点实验室北京100101 海南省种业实验室海南三亚572025 海南省农业科学院三亚研究院/海南省农业科学院蔬菜研究所海南三亚572025 海南大学热带农林学院海南海口570228

香草兰是重要的天然香料经济作物,由尖孢镰刀菌引起的土传病害严重限制了其可持续发展,而作物轮作是防控土传病害的有效途径。本研究采用实时荧光定量PCR结合高通量测序方法,在温室盆栽条件下,研究轮作胡椒/斑兰叶/糯米香茶对香草兰病... 详细信息

香草兰是重要的天然香料经济作物,由尖孢镰刀菌引起的土传病害严重限制了其可持续发展,而作物轮作是防控土传病害的有效途径。本研究采用实时荧光定量PCR结合高通量测序方法,在温室盆栽条件下,研究轮作胡椒/斑兰叶/糯米香茶对香草兰病原菌及根际土壤微生物群落的影响。结果表明:与撂荒和连作香草兰处理相比,轮作斑兰叶和糯米香茶显著降低了土壤中尖孢镰刀菌(Fusarium oxysporum)的数量,并显著提高了根际土壤细菌群落的丰富度和多样性。撂荒、连作和轮作显著诱导形成3种不同的群落结构,但轮作斑兰叶和糯米香茶结构相似。轮作后门水平上显著增加了优势细菌酸杆菌门(Acidobacteria)、绿弯菌门(Chloroflexi)及Rokubacteria门,以及优势真菌子囊菌门(Ascomycota)的相对丰度,且属水平上增加了优势细菌类诺卡氏属(Nocardioides)的相对丰度,即轮作胡椒后该属的相对丰度为64.26%,轮作斑兰叶后相对丰度达到98.54%,轮作糯米香茶后则为63.07%。随机森林结果表明,轮作斑兰叶能特异激发Terriglobus属、克雷伯杆菌属(Kribbella)、粘球菌属(Myxococcus)细菌核心类群,以及枝顶孢霉属(Acremonium)、帚枝霉属(Sarocladium)真菌核心类群,且轮作斑兰叶后真菌群落物种间网络互作更紧密。轮作后显著提高土壤pH,而土壤pH、细菌和真菌群落结构是显著抑制病原菌的最重要指示因子。综合表明,在长期连作的香草兰土壤中轮作短期且经济价值高的香料作物斑兰叶,对缓解香草兰土传病害的发生效果较好。

关键词：轮作香草兰斑兰叶根际微生物微生物群落