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杏叶防风的化学成分及抗炎活性研究(Ⅱ)

天然产物研究与开发 2024年第8期36卷 1357-1367页

作者：汪洋薛靖怡雷艳潘洁杨畅李勇军马雪贵州医科大学民族药与中药开发应用教育部工程研究中心贵州省药物制剂重点实验室国家苗药工程技术研究中心贵州医科大学药学院贵阳550004 贵州省毕节市七星关区妇幼保健院毕节市第二人民医院毕节551700

为了研究杏叶防风(Pimpinella candolleana)的化学成分及其抗炎活性,采用正相硅胶、ODS反相硅胶、D101大孔吸附树脂及MCI树脂等多种色谱方法对杏叶防风70%乙醇提取物部位进行了分离,并通过与文献对比波谱数据鉴定化合物结构。体外培养... 详细信息

为了研究杏叶防风(Pimpinella candolleana)的化学成分及其抗炎活性,采用正相硅胶、ODS反相硅胶、D101大孔吸附树脂及MCI树脂等多种色谱方法对杏叶防风70%乙醇提取物部位进行了分离,并通过与文献对比波谱数据鉴定化合物结构。体外培养小鼠单核巨噬细胞白血病细胞(RAW 264.7)细胞,脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)诱导RAW 264.7细胞建立氧化损伤模型,利用一氧化氮(NO)试剂盒检测NO浓度,评价各化合物的抗炎活性。从该植物中分离得到25个黄酮类化合物,分别鉴定为1-hydroxy-2,3,4,7-tetramethoxyxanthone(1)、1-hydroxy-2,3,4,6-tetramethoxyxanthone(2)、bellidifolin(3)、desmethylbellidifolin(4)、当药醇苷(5)、日本当药黄素(6)、异日本獐牙菜素(7)、木犀草素-7-O-β-D-芸香糖苷(8)、luteolin-7-O-β-D-glucopyranosyl-(1→6)-[6′′′-O-caffeoyl]-β-D-glucopyranoside(9)、木犀草素-4′-O-β-D-葡萄糖苷(10)、木犀草素-6-C-β-L-岩藻糖苷(11)、荭草素(12)、异荭草素(13)、槲皮素-3-O-β-D-半乳糖苷(14)、芹菜素(15)、quercetin-3-O-β-D-(6″-caffeoylgalactoside)(16)、小麦黄素-7-O-β-D-葡萄糖苷(17)、葛根素(18)、牡荆素(19)、商陆素-3-O-β-D-葡萄糖苷(20)、商陆素-3-O-β-D-半乳糖苷(21)、鼠李素-3-O-β-D-半乳糖苷(22)、鼠李素-3-O-β-D-葡萄糖苷(23)、异鼠李素-3-O-β-D-葡萄糖苷(24)、柯伊利素-7-O-β-D-葡萄糖苷(25)。其中,化合物13~15首次从杏叶防风中分离得到,化合物1~12、16~25首次从茴芹属植物中分离得到;生物活性测定结果表明,化合物1~3、6~10、12~15、17~20、23、25能抑制LPS诱导的RAW 264.7细胞的NO释放,显示出一定的抗炎活性。

关键词：杏叶防风化学成分结构鉴定抗炎

AIM2炎症复合体活化体系的体外构建及初步应用

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中国预防兽医学报 2024年第2期46卷 178-184页

作者：许锦霞吴龙建胡燕萍孙敏捷宋厚辉杨杨浙江农林大学动物科技学院/动物医学院/浙江省畜禽绿色生态健康养殖应用技术研究重点实验室/动物健康互联网检测技术浙江省工程研究中心/浙江省动物医学与健康管理国际科技合作基地/中澳动物健康大数据分析联合实验室浙江杭州311300

AIM2炎症复合体参与自身免疫性疾病和机体抵御病原体的过程,研究其激活机制具有重要的意义。为构建AIM2炎症复合体的体外活化体系,本研究通过PCR方法从人单核细胞(THP-1细胞)中扩增AIM2、ASC、pro-Caspase-1、pro-IL-1β基因片段后,构... 详细信息

AIM2炎症复合体参与自身免疫性疾病和机体抵御病原体的过程,研究其激活机制具有重要的意义。为构建AIM2炎症复合体的体外活化体系,本研究通过PCR方法从人单核细胞(THP-1细胞)中扩增AIM2、ASC、pro-Caspase-1、pro-IL-1β基因片段后,构建重组质粒p3×Flag-AIM2、p3×Flag-ASC、p3×Flag-pro-Caspase-1和p3×Flag-pro-IL-1β,分别转染HEK293T细胞后采用western blot鉴定各蛋白的表达。结果显示,分别约在41.9 ku、34.1 ku、48.5 ku、24.6 ku处出现特异性条带,表明融合Flag标签的AIM2、ASC、Caspase-1和IL-1β蛋白在HEK293T细胞中获得了表达。除此之外,还可以在HEK293T细胞中检测到39 ku的内源性AIM2蛋白特异性条带,表明HEK293T细胞自身也表达内源性AIM2蛋白。将不同浓度比例的上述重组质粒转染或共转染HEK293T细胞,24 h后各组再转染poly(dA:dT),采用间接ELISA检测各组细胞中IL-1β的分泌水平。结果显示,空白对照组、p3×Flag-pro-IL-1β实验组和共转染p3×Flag-ASC、p3×Flag-pro-IL-1β实验组细胞上清中均未检测到IL-1β,共转染p3×Flag-ASC、p3×Flag-pro-Caspase-1、p3×Flag-pro-IL-1β和共转染p3×Flag-AIM2、p3×Flag-ASC、p3×Flag-pro-Caspase-1、p3×Flag-pro-IL-1β的实验组细胞上清中均能检测到高浓度的IL-1β,且共转染p3×Flag-AIM2的HEK293T细胞中IL-1β的分泌水平更高。此外,与对照组相比,poly(dA:dT)刺激后的各组HEK293T细胞中IL-1β的分泌水平极显著升高(P研究正确构建了AIM2炎症复合体活化体系,并初步通过该活化体系证实AIM2炎症复合体具有抗细菌感染的功能,为后续研究该活化体系的具体作用机制奠定了基础。

关键词：质粒构建 AIM2炎症复合体 IL-1β

糖基转移酶WekM参与禽致病性大肠杆菌脂多糖合成和环境适应

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微生物学报 2024年第8期64卷 2702-2712页

作者：曹启予高宇杰张晓荟陈歆丹罗平翟瑞东韩先干宋厚辉程昌勇于纪棉韩月浙江农林大学动物科技学院·动物医学院、浙江省畜禽绿色生态健康养殖应用技术研究重点实验室、动物健康互联网检测技术浙江省工程研究中心、浙江省动物医学与健康管理国际科技合作基地、中澳动物健康大数据分析联合实验室浙江杭州311300 中国农业科学院上海兽医研究所上海201199 宁波卫生职业技术学院浙江宁波315100

【目的】研究O_(1)血清型禽致病性大肠杆菌(avian pathogenic Escherichia coli,APEC)的O抗原糖基转移酶WekM在脂多糖合成和环境适应中的作用。【方法】采用Red同源重组方法,构建APEC O_(1)菌株的wekM基因缺失株,并构建wekM回补株。随... 详细信息

【目的】研究O_(1)血清型禽致病性大肠杆菌(avian pathogenic Escherichia coli,APEC)的O抗原糖基转移酶WekM在脂多糖合成和环境适应中的作用。【方法】采用Red同源重组方法,构建APEC O_(1)菌株的wekM基因缺失株,并构建wekM回补株。随后分析wekM基因对APEC O_(1)菌株生长和运动能力的影响,通过银染和Western blotting鉴定细菌脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)图谱以及与兔抗O_(1)血清的反应能力,通过实时荧光定量PCR测定细菌鞭毛相关基因转录水平,使用溴化乙锭测定细菌细胞膜通透性。最后,通过药敏试验检测细菌对环丙沙星等抗生素敏感性。【结果】PCR验证及DNA测序结果表明ΔwekM缺失株和回补株构建成功。银染鉴定ΔwekM缺失株较野生株LPS图谱不完整,部分O-抗原条带缺失;同时,Western blotting检测未见到ΔwekM与O因子血清的反应条带,这说明O-抗原糖基转移酶wekM基因缺失后影响LPS合成。生长运动能力分析显示,ΔwekM缺失株的运动能力较野生株显著减弱,生长速率与野生株一致。实时荧光定量PCR检测发现,ΔwekM缺失株的flgC等鞭毛相关基因转录水平降低,表明wekM基因影响细菌鞭毛的合成。此外,ΔwekM的细胞膜通透性较野生株显著增加(P研究揭示了禽致病性大肠杆菌糖基转移酶wekM基因缺失导致细菌LPS完整性受损,运动能力降低,鞭毛合成受阻,鞭毛形成基因转录水平下降,细胞膜通透性增强,对抗生素敏感性增加。这些结果为解析wekM基因的功能奠定了研究基础,有助于深入了解禽致病性大肠杆菌O_(1)的环境适应机制。

关键词：禽致病性大肠杆菌O_(1) 脂多糖 O-抗原糖基转移酶环境适应

葡萄糖苷转运蛋白Lmo0738介导单增李斯特菌毒力的作用研究

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微生物学报 2024年第8期64卷 2671-2683页

作者：沈云勤王建峰应煜翁艳岚郝云黄丽英韩月孙静赵秀玲宋厚辉徐加利程昌勇浙江农林大学动物科技学院·动物医学院、浙江省畜禽绿色生态健康养殖应用技术研究重点实验室、动物健康互联网检测技术浙江省工程研究中心、浙江省动物医学与健康管理国际科技合作基地、中澳动物健康大数据分析联合实验室浙江杭州311300 宁波检验检疫科学技术研究院宁波海关技术中心浙江宁波315100

【目的】以单增李斯特菌葡萄糖苷转运蛋白Lmo0738为研究对象,研究其介导细菌毒力发挥的生物学作用。【方法】通过细菌同源重组技术构建lmo0738基因缺失株和回补株,研究它们在生长、溶血、细胞黏附与侵袭以及胞间迁移等方面与野生株的差... 详细信息

【目的】以单增李斯特菌葡萄糖苷转运蛋白Lmo0738为研究对象,研究其介导细菌毒力发挥的生物学作用。【方法】通过细菌同源重组技术构建lmo0738基因缺失株和回补株,研究它们在生长、溶血、细胞黏附与侵袭以及胞间迁移等方面与野生株的差异。同时,采用荧光定量PCR和Western blotting方法检测Δlmo0738毒力相关基因的转录水平和毒力相关蛋白的表达情况。【结果】缺失lmo0738后,李斯特菌体外生长能力、溶血能力、黏附和侵袭能力以及胞间迁移能力均显著减弱,溶血素O(listeriolysin O,LLO)蛋白毒力表达水平和关键毒力基因转录水平均显著降低。【结论】本研究证实缺失lmo0738能够降低单增李斯特菌毒力,为完善包括单增李斯特菌在内的重要食源性病原菌磷酸转移酶系统(phosphotransferase system,PTS)糖分解代谢及感染机制奠定了关键基础。

关键词：单增李斯特菌葡萄糖苷转运蛋白毒力

猪星状病毒(PAstV)在中国流行的研究进展

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中国预防兽医学报 2024年第7期46卷 769-774页

作者：周以铁王宇涛孙静苏明俊宋厚辉浙江农林大学动物科技学院动物医学院/浙江省畜禽绿色生态健康养殖应用技术研究重点实验室/动物健康互联网检测技术浙江省工程研究中心/浙江省动物医学与健康管理国际科技合作基地/中澳动物健康大数据分析联合实验室浙江杭州311300

猪星状病毒(Porcine astrovirus,PAstV)是一种无包膜的、单股正链RNA病毒,存在5种基因型,是一种常见的猪肠道传染病病毒。PAstV广泛流行于我国猪群中,常与其他猪肠道病原混合感染而引起腹泻,给我国养猪业带来了严重的经济损失。本文综述... 详细信息

猪星状病毒(Porcine astrovirus,PAstV)是一种无包膜的、单股正链RNA病毒,存在5种基因型,是一种常见的猪肠道传染病病毒。PAstV广泛流行于我国猪群中,常与其他猪肠道病原混合感染而引起腹泻,给我国养猪业带来了严重的经济损失。本文综述了PAstV在我国2006年~2021年间猪群中的流行情况,系统分析了PAstV在不同年份的阳性率、各省份地区分布情况、与不同猪肠道病原的混合感染情况以及不同基因型的流行特点,为掌握我国PAstV流行情况以及病毒防控提供重要参考。

关键词：猪星状病毒混合感染不同基因型肠道病原地区分布情况养猪业肠道传染病单股正链RNA病毒

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二十一个茯苓菌株的菌丝形态及遗传差异分析

热带农业科学 2024年

作者：钟培星邱翔宇徐苗杨宇平余彦岚刘仔妮江西环境工程职业学院江西省森林菌物资源综合开发工程研究中心江西农业大学

茯苓Wolfiporiahoelen（Fr.）***&***是常用的大宗药材之一，因其保健功能和药用价值而深受人们青睐，市场需求量大。优质的菌种是保证产量的基础，但现今存在种质资源驳杂、可用菌种少、退化严重等现象，为此，笔者以21个不同来源的茯... 详细信息

茯苓Wolfiporiahoelen（Fr.）***&***是常用的大宗药材之一，因其保健功能和药用价值而深受人们青睐，市场需求量大。优质的菌种是保证产量的基础，但现今存在种质资源驳杂、可用菌种少、退化严重等现象，为此，笔者以21个不同来源的茯苓菌株为材料，通过观察其在PDA母种培养基、松木屑栽培种培养基中的生长状态分析不同茯苓的活力状态，提取DNA后，用真菌核糖体编码基因通用引物ITS1和ITS5 进行序列扩增，利用RAxML软件对其ITS序列用最大似然法聚类分析，构建系统发育树来区分亲缘关系。结果显示：菌丝生长状态上，11号、14号、20号菌丝长势旺盛，生长速度快，整体均一活力高，而12号、13号菌株生长势弱，生长慢未长满培养皿，有菌种退化趋势；在生长速度方面，在PDA中生长最快的21号菌株达到了6.06 mm/d，最慢的13号菌株只有3.60 mm/d；而在松木培养基中，生长速度最快的15号菌株，达到13.25 mm/d，最慢的13号菌株，只有6.45 mm/d；在遗传多样性方面，所测21个茯苓菌株的ITS序列长度在834-1098 bp之间，G/C含量在58.62%～61.27%范围内，序列一致性在95.20%～99.90%之间，遗传距离范围为0～0.02778，遗传差异不大，聚类为3个群。研究表明不同茯苓菌株菌丝体特征生长状态差异明显，不同茯苓菌株菌丝生长速度快慢趋势在PDA培养基和松木屑培养基中的表现不一致，总体上在PDA中表现差的菌株在松木屑培养基上表现也不佳，但在PDA中表现最好的在木屑培养基上却未必一样表现最好，在遗传差异上ITS序列可以对菌株进行区分，但21个茯苓菌株遗传差异不大。该结果为茯苓种植的品种选择及后续新品种选育提供了参考。

关键词：茯苓菌种系统发育遗传鉴定 ITS

灵芝中C_(2)H_(2)锌指蛋白家族全基因组鉴定及表达分析

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中草药 2024年第16期55卷 5609-5618页

作者：刘力维宋鸿雁杨湾何心雨李振皓杨继鸿李依鸿李威杨宗岐杨东风浙江理工大学生命科学与医药学院浙江省植物次生代谢调控重点实验室浙江杭州310018 浙江寿仙谷植物药研究院有限公司浙江杭州311121 浙江理工大学绍兴生物医药研究院有限公司药食同源保健食品开发技术浙江省工程研究中心浙江绍兴312366 全省食药用菌生物育种与综合开发利用重点实验室浙江金华321200

目的基于灵芝Ganoderma lucidum的基因组和转录组数据,挖掘灵芝C_(2)H_(2)型锌指转录因子(C_(2)H_(2)-ZFPs)基因家族成员,并分析其菌丝在茉莉酸甲酯(methyl jasmonate,Me JA)诱导后的表达模式,以期发现在灵芝的生长发育、胁迫应对及次... 详细信息

目的基于灵芝Ganoderma lucidum的基因组和转录组数据,挖掘灵芝C_(2)H_(2)型锌指转录因子(C_(2)H_(2)-ZFPs)基因家族成员,并分析其菌丝在茉莉酸甲酯(methyl jasmonate,Me JA)诱导后的表达模式,以期发现在灵芝的生长发育、胁迫应对及次生代谢等方面起作用的C_(2)H_(2)-ZFPs。方法通过隐马尔可夫模型搜索和保守结构域分析,对灵芝中的C_(2)H_(2)转录因子进行全基因组鉴定,利用Peptides软件包分析C_(2)H_(2)-ZFPs的理化性质,利用IQtree构建C_(2)H_(2)锌指蛋白系统发育树,利用MEME和GSDS 2.0在线工具分析保守基序和基因结构,利用q RT-PCR测定Me JA诱导后菌丝中C_(2)H_(2)基因的相对表达量。结果灵芝中含有20个C_(2)H_(2)型基因家族成员(Gl C_(2)H_(2).01~Gl C_(2)H_(2).20),可分为5个亚群,分布在灵芝的10条染色体上。系统发育和保守基序显示灵芝中C_(2)H_(2)转录因子具有进化上的保守性,且至少含有1个zf-C_(2)H_(2),启动子区预测分析发现了多类激素及逆境响应顺式作用元件。转录组分析结果表明C_(2)H_(2)基因在灵芝原基期表达最高,在孢子粉中几乎不表达。Me JA诱导9 h后,菌丝中Gl C_(2)H_(2).11和Gl C_(2)H_(2).20表达显著下降,其他Gl C_(2)H_(2)在处理后3~9 h呈下降趋势,12 h后恢复至正常表达水平。结论从灵芝全基因组中系统鉴定了C_(2)H_(2)转录因子家族基因,为进一步研究C_(2)H_(2)转录因子在调控灵芝发育及次生代谢方面的生物学功能提供理论参考。

关键词：灵芝 C_(2)H_(2)转录因子生物信息学全基因组鉴定表达分析

Kindler综合征1家系临床及基因突变报道

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中华皮肤科杂志 2024年第4期57卷 370-372页

作者：凌鸣孔祥平黄芙蓉徐俊赵梦华黄丽张爱民湖南省人民医院(湖南师范大学第一附属医院)儿童呼吸病学湖南省重点实验室长沙410000 岳阳市中心医院儿童重症医学科岳阳414000 黔西南布依族苗族自治州妇幼保健院新生儿科兴义562409

Kindler综合征(Kindler syndrome,KS,OMIM 173650).又称伴大疱的先天性皮肤异色症,是一种罕见的常染色体隐性遗传性皮肤病。临床上具有营养不良型大疱性表皮松解症(epidermolysis bullosa,EB)和皮肤异色症的双重表现,主要表现为先天性水... 详细信息

Kindler综合征(Kindler syndrome,KS,OMIM 173650).又称伴大疱的先天性皮肤异色症,是一种罕见的常染色体隐性遗传性皮肤病。临床上具有营养不良型大疱性表皮松解症(epidermolysis bullosa,EB)和皮肤异色症的双重表现,主要表现为先天性水疱.皮肤萎缩、光敏感、皮肤脆性增加和脱皮,是EB的一种新类型,其致病基因为编码Fermitin家族同源物1蛋白(FERMT1)基因。

关键词：皮肤萎缩皮肤异色症大疱基因突变致病基因光敏感

蒙荷杂交牛与荷斯坦牛重要经济性状的比较研究

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中国畜牧杂志 2024年第7期60卷 195-198页

作者：陈坤琳夏淑雯连红沈阳阳赵芳丁强崔兆康仲跻峰田雨王慧利江苏省农业科学院畜牧研究所江苏南京210014 江苏省畜禽精准育种工程研究中心江苏南京210014 农业农村部种养结合重点实验室江苏南京210014 江苏优源奶业产业研究院有限公司江苏南京211100

本试验旨在研究蒙贝利亚与荷斯坦牛杂交后代泌乳、繁殖、生长和健康等重要经济性状,为荷斯坦牛的杂交改良效果提供参考依据。研究采用最小二乘线性模型,对比分析相同饲养环境下的蒙荷杂交后代与自繁荷斯坦牛的各项性状。结果显示,在泌... 详细信息

本试验旨在研究蒙贝利亚与荷斯坦牛杂交后代泌乳、繁殖、生长和健康等重要经济性状,为荷斯坦牛的杂交改良效果提供参考依据。研究采用最小二乘线性模型,对比分析相同饲养环境下的蒙荷杂交后代与自繁荷斯坦牛的各项性状。结果显示,在泌乳性状方面,蒙荷杂交牛的日产奶量和乳脂率与自繁荷斯坦牛相比基本一致,乳蛋白率高于荷斯坦牛(P<0.01),体细胞评分低于荷斯坦牛(P<0.05);在繁殖性状方面,蒙荷杂交后代青年牛首配日龄提前5 d,成母牛配妊次数低于荷斯坦牛(P<0.01),空怀天数缩短50 d,且青年牛和成母牛妊娠期长度均延长5 d,产犊间隔缩短19.53 d;在生长性状方面,蒙荷杂交牛成母牛体重高于荷斯坦牛(P<0.05),平均增加53.05 kg,公牛体重高于荷斯坦牛20.87 kg;在健康性状方面,蒙荷杂交牛总体发病率低于荷斯坦牛,但差异不显著,其中消化代谢类疾病和呼吸类疾病发病率均低于荷斯坦牛(P<0.001),肢蹄类疾病发病率低于荷斯坦牛(P<0.05),乳房类疾病和繁殖类疾病发病率均低于荷斯坦牛,但差异不显著。综上所述,蒙荷杂交牛在泌乳性状、繁殖性状、生长性状及健康性状方面均具有优势,可显著提高养殖经济效益。

关键词：蒙荷杂交牛泌乳性状繁殖性状生长性状健康性状

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