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中药萜类成分合成中法尼基二磷酸合成酶基因的克隆及功能表征

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中国实验方剂学杂志 2025年第3期 175-183页

作者：张悦张烽张越刘超越张柏林刘佳王彩霞中国中医科学院中药研究所北京林业大学生物科学与技术学院

目的：通过异源表达不同植物来源的法尼基二磷酸合成酶（FPS）编码基因，提高酿酒酵母中法尼基焦磷酸（FPP的合成效率，进而提高工程酵母合成萜类化合物的产量。方法：采用柱色谱法提取拟南芥、玫瑰、青蒿、积雪草、啤酒花、苜蓿和人参... 详细信息

目的：通过异源表达不同植物来源的法尼基二磷酸合成酶（FPS）编码基因，提高酿酒酵母中法尼基焦磷酸（FPP的合成效率，进而提高工程酵母合成萜类化合物的产量。方法：采用柱色谱法提取拟南芥、玫瑰、青蒿、积雪草、啤酒花、苜蓿和人参7种的植物根、茎、叶混样RNA，并反转录为互补DNA(cDNA)第一链，基于该7种植物的转录组数据，设计CaFPS、RrFPS、MsFPS、HiFPS、PgFPS、AtFPS和AaFPS基因序列特异性引物，克隆基因全长，对这些基因进行生物信息分析，构建pESC酵母穿梭载体。利用实验室构建的产β-榄香烯酿酒酵母为底盘菌株，异源表达7种不同植物来源的FPS，以β-榄香烯的产量作为评估标准，在实验室先前构建的高产β-榄香烯的酿酒酵母菌株中进行验证。结果：7种基因获得编码区域序列长均为1 021 bp，编码301个氨基酸，均与酿酒酵母内源的FPS编码基因ERG20具有相近的亲缘关系。通过在酿酒酵母中异源表达7种基因，筛选出催化异戊烯焦磷酸酯（IPP）和二甲基烯丙基二磷酸（DMAPP）合成FPP效果最佳的基因为RrFPS，过表达RrFPS酿酒酵母菌株YB-1-Rr和YB-3-Rr的β-榄香烯产量分别比对照菌株YB-1和YB-3高231.25%和189.3%。结论：通过比较7种不同植物来源的FPS编码基因的功能，确定了来自玫瑰中的RrFPS基因所编码的蛋白具有最佳的催化能力。该研究为构建高产萜类化合物的工程酵母菌株构建提供了关键基因元件。

关键词：酿酒酵母倍半萜 β-榄香烯基因克隆法尼基焦磷酸(FPP) 法尼基二磷酸合成酶(FPS)

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佛手中的两个新糖苷类化合物

药学学报 2025年第01期 196-200页

作者：苗瀞瀞夏格格赵格格郑玉忠王彦志河南中医药大学药学院韩山师范学院食品工程与生物技术学院广东省粤东药食资源功能物质与治未病研究重点实验室

采用MCI Gel CHP-20、ODS、Sephadex LH-20和硅胶等方法,结合制备薄层和半制备液相色谱对佛手85%醇提物的乙酸乙酯部位进行分离纯化,从中得到6个化合物,通过NMR、HR-ESI-MS、UV和IR等方法鉴定其结构为citrusin G (1)、citrusin H (2)、c... 详细信息

采用MCI Gel CHP-20、ODS、Sephadex LH-20和硅胶等方法,结合制备薄层和半制备液相色谱对佛手85%醇提物的乙酸乙酯部位进行分离纯化,从中得到6个化合物,通过NMR、HR-ESI-MS、UV和IR等方法鉴定其结构为citrusin G (1)、citrusin H (2)、citrusin E (3)、紫丁香酚苷(4)、松柏苷(5)、甲基松柏苷(6)。其中化合物1和2为新化合物, 3～6均为首次从佛手中分离得到。化合物1在TGF-β1诱导大鼠肾小管上皮细胞(NRK-52e)肾纤维化体外模型上显示抗肾纤维化活性。

关键词：佛手化学成分分离鉴定糖苷

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短毛木耳的生物学特性与驯化栽培研究

热带作物学报 2025年第1期46卷 171-179页

作者：聂晨红周炳沼丰景韦仕岩祁亮亮王晓国广西民族大学海洋生物与技术学院广西南宁530006 贺州学院食品与生物工程学院广西贺州542899 广西壮族自治区农业科学院微生物研究所广西南宁530007

短毛木耳是黑木耳的近似种,主要分布于热带、亚热带高海拔地区,能较好地适应广西高温高湿的气候,目前有关短毛木耳驯化栽培的报道较少。本研究以野外采集的短毛木耳子实体(TY081)为材料,采用序列分析方法,建立短毛木耳鉴定的分子标记;... 详细信息

短毛木耳是黑木耳的近似种,主要分布于热带、亚热带高海拔地区,能较好地适应广西高温高湿的气候,目前有关短毛木耳驯化栽培的报道较少。本研究以野外采集的短毛木耳子实体(TY081)为材料,采用序列分析方法,建立短毛木耳鉴定的分子标记;通过单因素试验探究不同温度、碳源、氮源对短毛木耳菌丝生长的影响,用正交试验对培养基的碳、氮源进一步优化。结果表明:开发的分子标记方法可以快速有效地鉴别出短毛木耳;短毛木耳TY081菌丝生长的最适温度是30℃,最适碳源为葡萄糖,最适氮源为黄豆粉;优化后的培养基碳氮组合为果糖、酵母浸粉,菌丝生长速度达0.92 mm/d。短毛木耳TY081在栽培菌袋中的发菌温度为28℃,培养60 d满袋,刺孔后大棚培养10 d形成原基,子实体生长温度为24℃,湿度为85%,每袋的产量为20.943 g(干质量)。

关键词：短毛木耳分子验证生物学特性驯化栽培

翻译调控肿瘤蛋白的结构、功能以及在肿瘤发展中的作用

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生物化学与生物物理进展 2017年第2期44卷 148-154页

作者：肖斌阳正盟肖鸣陈昊马强南方医科大学检验与生物技术学院抗体工程研究所广州510515

翻译调控肿瘤蛋白(translational controlled tumor protein,TCTP),又称p23、组胺释放因子(histamine releasing factor,HRF)等,是一类在动植物中具有高度保守性和同源性的蛋白,主要介导细胞凋亡、细胞增殖与分化、细胞骨架重排、炎症... 详细信息

翻译调控肿瘤蛋白(translational controlled tumor protein,TCTP),又称p23、组胺释放因子(histamine releasing factor,HRF)等,是一类在动植物中具有高度保守性和同源性的蛋白,主要介导细胞凋亡、细胞增殖与分化、细胞骨架重排、炎症反应等重要事件,与肿瘤的发生发展进程密切相关.针对TCTP的相关研究不仅有助于进一步了解各种肿瘤的生理病理周期,同时也提示其在寻找治愈肿瘤的方法中有望成为新的靶点.本文将对TCTP的结构、生物学功能以及在各种肿瘤中的作用进行综述.

关键词：翻译调控肿瘤蛋白结构细胞凋亡细胞周期肿瘤

结合Udwadia-Kalaba控制理论的下肢外骨骼步态轨迹跟踪控制

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西安交通大学学报 2025年第1期59卷 148-158页

作者：肖志毅沙连森邹学坤黄锟李永斌刘斌中国科学技术大学生物医学工程学院(苏州) 江苏苏州215000 中国科学院苏州生物医学工程技术研究所江苏苏州215000

针对现有轨迹跟踪控制方法较难兼顾控制精度与稳定性的问题,提出一种基于Udwadia-Kalaba(U-K)控制理论的鲁棒控制方法。基于拉格朗日法建立机器人动力学模型,将动力学参数分为确定的名义部分与不确定部分;结合U-K理论与系统名义部分参... 详细信息

针对现有轨迹跟踪控制方法较难兼顾控制精度与稳定性的问题,提出一种基于Udwadia-Kalaba(U-K)控制理论的鲁棒控制方法。基于拉格朗日法建立机器人动力学模型,将动力学参数分为确定的名义部分与不确定部分;结合U-K理论与系统名义部分参数确定外骨骼机器人系统理想运动轨迹约束下的名义部分控制力矩;为消除机器人系统不确定部分的影响,引入鲁棒控制器,通过划分不确定性边界确定其应输出的额外控制力矩。仿真结果表明:相较于传统PID算法,基于U-K控制理论的鲁棒控制的外骨骼机器人髋关节、膝关节角度的轨迹跟踪控制精度分别提高了76.4%和96.8%。基于设计的下肢外骨骼机器人样机进行轨迹跟踪对比实验,实验结果表明:基于该方法的下肢外骨骼髋关节、膝关节角度的轨迹跟踪精度为0.467 0°和0.114 1°,相比作为对照的PID算法,分别提高了82.6%和86.8%,同时系统整体控制周期缩短了56.6%,该控制方法具有更高的同步性、控制精度与稳定性。

关键词：下肢外骨骼机器人 Udwadia-Kalaba控制理论鲁棒控制轨迹跟踪控制

C肽与胰岛素双标记时间分辨荧光免疫分析法的建立及初步临床应用

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生物化学与生物物理进展 2011年第7期38卷 670-676页

作者：马强李来庆贺安林冠峰邹丽萍李明吴英松南方医科大学生物技术学院抗体工程研究所广州510515 广州市达瑞抗体工程技术有限公司广州510663

建立钐(Sm3+)标记检测C肽(C-peptide)及铕(Eu3+)标记检测胰岛素(insulin)的双标记时间分辨荧光免疫分析法(TRFIA),并初步尝试检测人血C肽以及胰岛素含量.将抗C肽单克隆抗体(Biodesign No.E54094M)与抗insulin单克隆抗体(BiodesignNo.E86306M)混合包被96孔板,然后用Sm3+标记抗C肽单克隆抗体(Medix No.9103),Eu3+标记抗insulin单克隆抗体(Biodesign No.E86802M),运用双抗体夹心一步法建立C肽/胰岛素双标记时间分辨免疫荧光分析法.结果显示:C肽分析灵敏度为0.2μg/L,线性范围为0.5～22μg/L,平均回收率达到99.6%,分析内和分析间变异系数分别为4.6%～6.0%和5.1%～7.6%.胰岛素分析灵敏度为0.8 mU/L,线性范围为3.6～180 mU/L,平均回收率为99.4%,分析内和分析间变异系数分别为3.7%～6.0%和5.1%～8.0%.C肽/胰岛素双标记检测试剂与PerkinElmer公司对应的单标记进口试剂盒分别同时测定血清样本200份,检测结果高度相关,具有较好的一致性,相关系数分别为0.98与0.99.总之,自建C肽/胰岛素双标记时间分辨荧光免疫分析方法的性能均可以达到临床检测要求,有望替代现有国内外较为昂贵的单标记试剂,可用于胰岛素分泌不足导致的糖尿病诊断及糖尿病的大规模普查筛选.

关键词：双标记时间分辨荧光免疫分析 C肽胰岛素

抗羊口疮病毒ORFV118蛋白单克隆抗体的制备、鉴定及其应用

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病毒学报 2016年第3期32卷 292-297页

作者：肖斌郝文波杜政伦廖小青罗树红南方医科大学生物技术学院抗体工程研究所广州510515

制备抗羊口疮病毒118(ORFV118)重组蛋白的单克隆抗体并鉴定其生物学特性。构建ORFV118原核表达重组质粒pET33b-ORFV118,将重组质粒转化大肠杆菌BL21,诱导表达出ORFV118重组蛋白;利用Ni-NTA亲和层析法纯化ORFV118重组蛋白;以纯化蛋白为... 详细信息

制备抗羊口疮病毒118(ORFV118)重组蛋白的单克隆抗体并鉴定其生物学特性。构建ORFV118原核表达重组质粒pET33b-ORFV118,将重组质粒转化大肠杆菌BL21,诱导表达出ORFV118重组蛋白;利用Ni-NTA亲和层析法纯化ORFV118重组蛋白;以纯化蛋白为抗原免疫小鼠,通过杂交瘤技术制备单克隆抗体;利用间接ELISA法、Western blot、免疫组化等方法分别对单抗特异性、效价、亚型以及ORFV118蛋白的功能进行研究。获得了3株稳定分泌单克隆抗体的细胞株,分别命名为1A2,3B5,5D10,它们诱生的小鼠腹水效价分别为110 000,16 400,18 000。其中效价最高的1A2抗体亚型为IgG1,能特异性结合其免疫原蛋白、真核表达产物以及病羊皮肤组织中的ORFV118蛋白。免疫组化结果显示单抗1A2染色局限于皮肤表皮层角化细胞及浸润至皮下组织的炎症细胞,与病毒侵染上皮组织层的特性相符。制备的单抗1A2能特异性识别ORFV118。深入研究单抗1A2将为了解ORFV118的生物学特性,为羊传染性脓疱病的诊断、预防与治疗提供可能和新思路。

关键词：羊口疮病毒 ORFV118 单克隆抗体早期蛋白诊断

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中华稻蝗低分子肽抑菌及对南果梨保鲜作用

北华大学学报（自然科学版） 2025年第1期26卷 93-98页

作者：王亚茹牛莉卜毛迪锐王瑞俭刘艳秋北华大学林学院吉林吉林132013 吉林省林业生物技术工程研究中心吉林吉林132013

以中华稻蝗为原料制备低分子肽,通过滤纸片法研究低分子肽对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、青霉菌的抑菌效果;测定不同浓度低分子肽涂膜对南果梨失重率、还原糖含量、腐烂指数、可溶性固形物含量、可滴定酸含量的影响。结果表明:中华稻蝗... 详细信息

以中华稻蝗为原料制备低分子肽,通过滤纸片法研究低分子肽对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、青霉菌的抑菌效果;测定不同浓度低分子肽涂膜对南果梨失重率、还原糖含量、腐烂指数、可溶性固形物含量、可滴定酸含量的影响。结果表明:中华稻蝗低分子肽对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌和青霉菌均有抑制作用;低分子肽溶液对大肠杆菌的抑菌效果显著高于金黄色葡萄球菌和青霉菌(P<0.05);随着低分子肽溶液浓度提高,抑制作用增强,质量浓度为3.5、4.0 mg/mL的低分子肽溶液抑菌效果较好。低分子肽涂膜能有效减缓南果梨失重率上升、还原糖含量下降、腐烂指数升高、可溶性固形物含量减小、硬度降低和可滴定酸含量下降等一系列不良变化;质量浓度为4 mg/mL的低分子肽溶液对南国梨的防腐效果最好。

关键词：中华稻蝗低分子肽抑菌南果梨保鲜

甲壳类水产品致敏原及特异性免疫制品的研究进展

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食品工业科技 2025年第1期46卷 403-412页

作者：李梦思夏菲刘庆梅黄苏杰卢艺彬桓霏刘萌刘翼翔刘光明漳州职业技术学院食品工程学院福建漳州363000 集美大学海洋食品与生物工程学院福建省海洋功能食品工程技术研究中心厦门市海洋功能食品重点实验室福建厦门361021 厦门海洋职业技术学院福建厦门361100

甲壳类水产品是我国常见的致敏食物之一,除了规避致敏食物的摄入,目前仍无有效的根治方法。因此,致敏原的性质分析及防控技术方法的研究至关重要。本文针对甲壳类水产品致敏原,介绍了致敏原的免疫学特性与分子结构,归纳了致敏原的抗原表... 详细信息

甲壳类水产品是我国常见的致敏食物之一,除了规避致敏食物的摄入,目前仍无有效的根治方法。因此,致敏原的性质分析及防控技术方法的研究至关重要。本文针对甲壳类水产品致敏原,介绍了致敏原的免疫学特性与分子结构,归纳了致敏原的抗原表位,探讨了应用于致敏原特异性治疗的免疫制品,比较了不同免疫制品的作用机理及优缺点,可为研发水产品过敏的防控技术方法提供参考。

关键词：甲壳类水产品致敏原分子结构抗原表位特异性免疫制品

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