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反义猪α(1,3)半乳糖转移酶转基因小鼠的人鼠异种反应性降低(英文)

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Acta Pharmacologica Sinica 2001年第3期22卷 41-48页

作者：马映华周筱刚胡佳华费俭夏国宏郭礼和中国科学院上海生命科学研究院生物化学和细胞生物学研究所中国科学院上海生命科学研究院生物化学和细胞生物学研究所上海中国 200031

目的:研究体内α(1,3)半乳糖转移酶α(1,3)GT反义抑制降低Galα(1,3)Gal(Gal表位)异种抗原的作用。方法:原核显微注射法产生转基因小鼠,PCR和Southern-blot鉴定转基因的整合,RT-PCR检测小鼠α(1,3)GT的表达,组织学染色检查脾脏形态,免... 详细信息

目的:研究体内α(1,3)半乳糖转移酶α(1,3)GT反义抑制降低Galα(1,3)Gal(Gal表位)异种抗原的作用。方法:原核显微注射法产生转基因小鼠,PCR和Southern-blot鉴定转基因的整合,RT-PCR检测小鼠α(1,3)GT的表达,组织学染色检查脾脏形态,免疫荧光检测Gal表位,流式细胞仪分析人血清中异种天然抗体(IgM和IgG)和补体(C3c)对鼠源细胞的结合。结果:猪反义α(1,3)半乳糖转移酶转基因小鼠发育正常,但部分杂合体小鼠脾脏有细胞坏死特征。转基因小鼠细胞表面Gal表位数量明显减少。与野生型对照相比,转基因小鼠多种组织的细胞对人血清异种天然抗体的结合降低30％-60％,对补体的结合降低40％-50％。结论:通过反义基因抑制α(1,3)半乳糖转移酶的表达能有效降低人异种反应性。

关键词：表位半乳糖转移酶类异种移植荧光抗体技术反义DNA 逆转录聚合酶链反应 DNA印迹法猪

过量表达Stat3诱导COS7细胞显著的形态变化

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Acta Biochimica et Biophysica Sinica 2003年第8期35卷 717-722页

作者：颜晔夏彩虹曹新民景乃禾中国科学院上海生命科学研究院生物化学与细胞生物学研究所分子细胞生物学重点实验室、干细胞生物学重点实验室上海200031 中国科学院上海生命科学研究院生物化学与细胞生物学研究所分子细胞生物学重点实验室、干细胞生物学重点实验室中国科学院上海生命科学研究院分子细胞生物学研究所新加坡117609

信号转导和转录激活蛋白Stat3在细胞的生长、分化、存活和运动过程中扮演重要角色。通过免疫细胞化学染色 ,免疫沉淀结合免疫蛋白质印迹法 ,以及瞬时转染由Stat3特异识别DNA元件所指导的报道基因等技术 ,证明COS7细胞中存在活性Stat3蛋... 详细信息

信号转导和转录激活蛋白Stat3在细胞的生长、分化、存活和运动过程中扮演重要角色。通过免疫细胞化学染色 ,免疫沉淀结合免疫蛋白质印迹法 ,以及瞬时转染由Stat3特异识别DNA元件所指导的报道基因等技术 ,证明COS7细胞中存在活性Stat3蛋白的表达。Stat3cDNA和报道基因在COS7细胞中的共转染实验表明 ,外源的Stat3蛋白具有DNA结合活性 ,并可增强报道基因的表达。同时 ,过量表达Stat3的COS7细胞呈现显著的细胞形态变化 ,如细胞体积增大、胞体伸出突起 ,有些突起有分枝和伪足。这些结果提示 ,Stat3蛋白在细胞的粘附和迁移 ,以及细胞骨架的重建过程中可能具有重要功能。

关键词： COS7细胞 Stat3 过量表达细胞形态报道基因

基于结构动力学的EGFR罕见突变型(S768I)致NSCLC分子机制研究

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原子与分子物理学报 2025年第1期42卷 41-48页

作者：王雨婷刘梦婷王妍雯侯清梅杨力权桑鹏大理大学农学与生物科学学院大理671003 大理大学云南省教育厅生物信息与计算生物学重点实验室大理671003

表皮生长因子受体(EGFR)基因突变是导致非小细胞肺癌(NSCLC)的重要诱因.S768I点突变作为EGFR的一种罕见突变,目前尚无标准的靶向治疗方法,因此详细了解EGFR S768I突变体与野生型的结构差异对于开发相关药物至关重要.为了探究S768I突变在... 详细信息

表皮生长因子受体(EGFR)基因突变是导致非小细胞肺癌(NSCLC)的重要诱因.S768I点突变作为EGFR的一种罕见突变,目前尚无标准的靶向治疗方法,因此详细了解EGFR S768I突变体与野生型的结构差异对于开发相关药物至关重要.为了探究S768I突变在NSCLC中的作用,对WT-EGFR和S768I-EGFR进行分子动力学(MD)模拟、本质动力学(ED)分析和自由能图谱(FEL)重构.MD模拟表明S768I突变增加了EGFR的全局和局部柔性;ED分析得出的大尺度协同运动表明,区分活性状态和非活性状态的两个重要结构元件A-loop和αC-helix在S768I-EGFR中比在WT-EGFR中具有更明显的过渡到活动状态的趋势;自由能计算显示S768I-EGFR的FEL比WT-EGFR的更粗糙更复杂,这意味着S768I突变体具有更丰富的构象多样性.研究结果为S768I突变导致NSCLC提供了合理的分子机理解释,并为开发针对S768I突变患者的新靶向治疗药物提供帮助.

关键词：表皮生长因子受体(EGFR) S768I 分子动力学模拟本质动力学自由能图谱

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丙型肝炎病毒包膜蛋白E1的分泌表达及性质

Acta Biochimica et Biophysica Sinica 2001年第6期33卷 634-640页

作者：朱皑孔玉英刘晶张祖传汪垣李光地中国科学院上海生命科学研究院生物化学与细胞生物学研究所

为了实现HCV包膜蛋白E1在哺乳动物细胞中的分泌表达 ,选用分泌表达载体pSecTagB ,构建了 3种E1羧端不同程度缩短的融合表达质粒 ,并在E1的上游融合乙型肝炎病毒前表面抗原S1中含肝细胞结合位点的免疫表位 preS1(2 1～ 47)序列作为标识。... 详细信息

为了实现HCV包膜蛋白E1在哺乳动物细胞中的分泌表达 ,选用分泌表达载体pSecTagB ,构建了 3种E1羧端不同程度缩短的融合表达质粒 ,并在E1的上游融合乙型肝炎病毒前表面抗原S1中含肝细胞结合位点的免疫表位 preS1(2 1～ 47)序列作为标识。在HeLa细胞中进行了暂时表达 ,并对产物的性质进行了鉴定。去除羧端疏水区有利于E1融合蛋白的分泌 ,其中以S1E1t32 5分泌最佳。表达的融合蛋白都能被 preS1单抗及HCVE1多抗识别 ,是具有双重抗原性的糖蛋白 ,其糖链类型为高甘露糖型。建立了稳定表达S1E1t310、S1E1t32 5、S1E1t34 0的CHO细胞株 ,选择其中CHO/pSecS1E1t32 5对表达的分泌蛋白作了进一步研究。利用亲和纯化方法可由细胞培养液中富集和纯化分泌表达的HCVE1,为进一步开展E1性质的研究创造了条件。

关键词：包膜蛋白E1 preS1 双重抗原性分泌表达糖基化

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芋螺毒素研究进展

生物化学与生物物理进展 2003年第4期30卷 537-545页

作者：王承忠蒋辉戚正武中国科学院上海生命科学研究院生物化学与细胞生物学研究所

芋螺毒素是近年来国际上的一个研究热点 .它属于一类海洋生物活性多肽 ,多数由 12～ 4 6个氨基酸残基所组成 ,能特异性地作用于体内各种离子通道和细胞膜上神经递质和激肽的受体 .具有分子质量小、结构多样、作用靶点广泛、功能专一、... 详细信息

芋螺毒素是近年来国际上的一个研究热点 .它属于一类海洋生物活性多肽 ,多数由 12～ 4 6个氨基酸残基所组成 ,能特异性地作用于体内各种离子通道和细胞膜上神经递质和激肽的受体 .具有分子质量小、结构多样、作用靶点广泛、功能专一、组织特异性强等优点 ,因而较之其他生物来源的活性多肽有更多的优越性 .芋螺毒素是一待挖掘的“富矿区” ,可作为体内一些具有重要生理功能靶点的探针和“解密器” ,亦可作为新药的先导化合物或直接开发成新药。

关键词：芋螺毒素活性多肽离子通道神经递质拮抗剂激动剂

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精氨酸加压素C端片段(4～8)对大鼠海马神经元CCT的影响(英文)

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Acta Biochimica et Biophysica Sinica 2002年第4期34卷 418-422页

作者：徐侃彦熊樱杜雨苍中国科学院上海生命科学研究院生物化学与细胞生物学研究所上海200031 中国科学院上海生命科学研究院生物化学与细胞生物学研究所

为了研究精氨酸加压素C端片断 4～ 8(AVP4～ 8)对大鼠海马神经元中胞苷三磷酸 :磷酸胆碱胞苷转移酶 (CCT)的mRNA水平和酶活性的影响及其作用机制。将大鼠海马神经元用不同药物处理一定时间后 ,用RT PCR结合Southern杂交的方法测定CCT的m... 详细信息

为了研究精氨酸加压素C端片断 4～ 8(AVP4～ 8)对大鼠海马神经元中胞苷三磷酸 :磷酸胆碱胞苷转移酶 (CCT)的mRNA水平和酶活性的影响及其作用机制。将大鼠海马神经元用不同药物处理一定时间后 ,用RT PCR结合Southern杂交的方法测定CCT的mRNA水平 ,用测定胞苷二磷酸胆碱中 [14 C]的参入率来确定CCT活性。结果表明 :AVP4～ 8能上调海马神经元内CCT的mRNA水平 ,AVP4～ 8的拮抗剂ZDC(C)PR对此有抑制作用 ,当用放线菌素D中止基因转录 ,发现用AVP4～ 8共处理的细胞 ,比单独用放线菌素D处理的细胞 ,其CCTmRNA的半衰期较长 ;AVP4～ 8处理后 ,神经元内CCT的酶活性也有一定程度的上升。由此得出结论 :AVP4～ 8通过提高神经元内CCTmRNA的稳定性 ,提高了CCTmRNA的水平 ,进而影响了胞内CCT的酶活性。

关键词：精氨酸加压素胞苷三磷酸(CTP):磷酸胆碱胞苷转移酶(CCT) 海马磷脂酰胆碱放线菌素D

锤头状核酶在HepG2.2.15细胞内的抗HBV特性

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生物化学与生物物理学报 2002年第2期34卷 204-208页

作者：冯英孔玉英汪垣祁国荣中国科学院上海生命科学研究院生物化学与细胞生物学研究所中国科学院上海生命科学研究院生物化学与细胞生物学研究所上海200031

乙型肝炎病毒 (HBV)C基因区的 3′端序列在HBV各亚型中是高度保守的 ,它编码的多肽链都富含精氨酸 ,同时与前基因组RNA的包装和病毒DNA的复制有关。因此 ,HBV中C基因的 3′端保守区是核酶介导的抗病毒研究的理想靶位点。针对上述位点设... 详细信息

乙型肝炎病毒 (HBV)C基因区的 3′端序列在HBV各亚型中是高度保守的 ,它编码的多肽链都富含精氨酸 ,同时与前基因组RNA的包装和病毒DNA的复制有关。因此 ,HBV中C基因的 3′端保守区是核酶介导的抗病毒研究的理想靶位点。针对上述位点设计了锤头状核酶RzC ,同时作为对照 ,设计了相应的突变型核酶dRzC。HepG2 .2 .15细胞系是由头尾相接的HBVayw亚型基因组转染肝癌细胞系HepG2而建立的一株能稳定分泌HBV各种抗原和完整病毒颗粒的细胞系。因而用HepG2 .2 .15细胞进行核酶的抗病毒研究更接近于疾病的治疗过程。为此 ,把体外转录的核酶RzC和dRzC以及核酶表达载体pCRzC和 pCdRzC直接转染HepG2 .2 .15细胞。初步结果表明 ,体外转录的核酶RzC对HBV复制的抑制很弱 ,这可能是由于核酶在细胞内快速被RNA酶降解造成的 ;而通过内源性传递产生的核酶RzC能够明显地抑制HBV的复制。结果说明 ,锤头状核酶RzC在HepG2 .2 .15细胞内显示抗病毒感染的能力 ,有可能作为HBV基因治疗的一种手段

关键词：锤头状核酶 HBV HepG2.2.15细胞

慈菇蛋白酶抑制剂A和B中Trp残基周围构象与酶抑制专一性的关系(英文)

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生物化学与生物物理学报 2002年第4期34卷 494-497页

作者：李炯戚正武阮康成中国科学院上海生命科学研究院生物化学与细胞生物学研究所中国科学院上海生命科学研究院生物化学与细胞生物学研究所上海200031

通过定点诱变结合荧光光谱学方法研究了慈菇蛋白酶抑制剂A和B(APIA和APIB)Trp残基周围构象与酶抑制专一性之间的关系。研究表明APIB中的两个Trp残基 (93和 12 2位 )所处环境的疏水性要比APIA中的强。Trp定点诱变研究表明 ,在APIB中 ,Trp... 详细信息

通过定点诱变结合荧光光谱学方法研究了慈菇蛋白酶抑制剂A和B(APIA和APIB)Trp残基周围构象与酶抑制专一性之间的关系。研究表明APIB中的两个Trp残基 (93和 12 2位 )所处环境的疏水性要比APIA中的强。Trp定点诱变研究表明 ,在APIB中 ,Trp12 2 周围环境的疏水性要比Trp93 强。用Ser和Leu分别替代 82位Leu和 87位Arg ,使APIB中色氨酸荧光特性变得与APIA的基本相同 ,同时还发现其酶的抑制专一性也变得趋近APIA的 ,暗示Trp周围的构象与酶抑制剂的抑制专一性有关。

关键词：慈菇蛋白酶抑制剂定点诱变荧光光谱构象抑制专一性

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兔抗仿蜘蛛牵丝蛋白抗体的制备及应用

生物化学与生物物理学报 2003年第8期35卷 756-760页

作者：郭廷晴赵昀汪生鹏董良陆长德中国科学院上海生命科学研究院生物化学与细胞生物学研究所中国科学院上海生命科学研究院生物化学与细胞生物学研究所上海200031

将仿蜘蛛牵丝基因s6 0 0克隆到GST融合蛋白表达质粒pGEX KG中 ,利用大肠杆菌表达系统表达并纯化了仿蜘蛛牵丝蛋白S6 0 0 ,以之作为抗原制备了兔抗血清。S6 0 0的氨基酸组分分析与理论值相吻合。蛋白质免疫印迹发现该抗血清能与天然蜘蛛... 详细信息

将仿蜘蛛牵丝基因s6 0 0克隆到GST融合蛋白表达质粒pGEX KG中 ,利用大肠杆菌表达系统表达并纯化了仿蜘蛛牵丝蛋白S6 0 0 ,以之作为抗原制备了兔抗血清。S6 0 0的氨基酸组分分析与理论值相吻合。蛋白质免疫印迹发现该抗血清能与天然蜘蛛丝反应 ,表明设计的仿蜘蛛丝与天然蜘蛛丝有相似的免疫原性。为了定量检测仿蜘蛛牵丝蛋白在转基因家蚕丝腺中 (或茧壳中 )的表达 ,建立了用ELISA方法定量检测茧壳中仿蜘蛛牵丝蛋白量的工作系统

关键词：仿蜘蛛牵丝蛋白兔抗血清茧壳 ELISA