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基于网络药理学和实验验证探讨大补肝汤治疗广泛性焦虑症的作用机制

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中国中药杂志 2024年第12期49卷 3373-3384页

作者：李艳明马秀兰黄仕琦韦春昕谭国伟安耀荣王小荣甘肃中医药大学甘肃省中医方药挖掘与创新转化重点实验室甘肃省中药新产品创制工程实验室

基于网络药理学、分子对接和动物实验探讨大补肝汤治疗广泛性焦虑症(generalized anxiety disorder, GAD)的作用机制。通过网络药理学和分子对接获得大补肝汤治疗GAD的可能靶点和相关信号通路。建立GAD大鼠模型，随机分组后相应药物灌... 详细信息

基于网络药理学、分子对接和动物实验探讨大补肝汤治疗广泛性焦虑症(generalized anxiety disorder, GAD)的作用机制。通过网络药理学和分子对接获得大补肝汤治疗GAD的可能靶点和相关信号通路。建立GAD大鼠模型，随机分组后相应药物灌胃，连续干预28 d后检测各组大鼠焦虑状态，并检测大鼠海马病理改变，采用酶联免疫吸附法(ELISA)、蛋白免疫印迹法(Western blot)检测相关蛋白表达水平。初步筛选共得到大补肝汤中化合物65种，作用靶点403个，GAD疾病靶点7 398个，“药物-疾病”共有靶点279个，蛋白-蛋白互作(protein-protein interaction, PPI)网络关键节点为丝氨酸和苏氨酸激酶1(Akt1)、肿瘤坏死因子(tumor necrosis factor, TNF)、白细胞介素(interleukin, IL)-6、细胞肿瘤抗原p53(tumor protein 53,TP53)、IL-1β等；基因本体论(Gene Ontology, GO)功能分析与京都基因与基因组百科全书(Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes, KEGG)通路富集分析显示，PI3K-Akt信号通路是最主要途径。分子对接显示，药物核心成分与对应关键靶点均具有较好的结合活性。动物实验显示，大补肝汤可有效改善大鼠焦虑行为，增加大鼠在高架十字迷宫中开臂端运动距离及总距离、进入明箱次数及停留时间、进入旷场中央时间百分比及次数。苏木精-伊红(HE)染色、尼氏染色显示，大鼠海马神经细胞数量增加，排列紧密，细胞体损坏改善，细胞中尼氏体增加，海马组织中TNF-α、IL-6、IL-1β表达下降，TP53、磷酸化丝氨酸和苏氨酸激酶1(p-Akt1)、磷酸化磷脂酰肌醇3-激酶(p-PI3K)表达上升，其机制可能与激活PI3K-Akt信号通路、抑制炎症反应有关。结果表明，大补肝汤对GAD起到很好的治疗调控作用，体现了中药复方整体作用和多靶点、多通路的特点。同时，初步探讨了大补肝汤治疗GAD可能通过激活PI3K-Akt信号通路，抑制炎症反应、抗细胞凋亡，从而改善GAD状态，为大补肝汤的临床应用提供实验数据支持。

关键词：大补肝汤广泛性焦虑症网络药理学分子对接多通路

基于p38MAPK/NF-kB信号通路探讨柴胡加龙骨牡蛎汤干预广泛性焦虑模型大鼠的作用机制

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中国实验方剂学杂志 2024年第4期30卷 114-123页

作者：韦春昕胡亦明黄仕琦谭国伟安耀荣甘肃中医药大学甘肃省中医方药挖掘与创新转化重点实验室兰州730000

目的:研究柴胡加龙骨牡蛎汤是否可以通过调控抑制p38丝裂原活化蛋白激酶/核转录因子-κB(p38 MAPK/NF-κB)信号通路抑制广泛性焦虑(GAD)大鼠下丘脑区炎症反应,改善GAD大鼠的焦虑样行为,缓解GAD大鼠的焦虑症状。方法:74只Wistar大鼠随机... 详细信息

目的:研究柴胡加龙骨牡蛎汤是否可以通过调控抑制p38丝裂原活化蛋白激酶/核转录因子-κB(p38 MAPK/NF-κB)信号通路抑制广泛性焦虑(GAD)大鼠下丘脑区炎症反应,改善GAD大鼠的焦虑样行为,缓解GAD大鼠的焦虑症状。方法:74只Wistar大鼠随机选择12只作为空白组,剩余大鼠采用慢性束缚应激法制造GAD模型大鼠,造模14 d后进行旷场实验(OFT)和高架十字迷宫实验(PMT)检测各组大鼠焦虑样行为,筛选造模成功的大鼠60只,随机分为模型组、柴胡加龙骨牡蛎汤低、中、高剂量组(6、12、24 g·kg^(-1))和地西泮组(1 mg·kg^(-1)),每组12只,连续14 d灌胃相应剂量柴胡加龙骨牡蛎汤和地西泮,给药14 d后继续通过旷场和十字迷宫实验观察大鼠焦虑样行为的变化;酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测大鼠下丘脑和血清中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素IL-6(IL-6)、白细胞介素-1β(IL-1β)水平;实时荧光定量聚合酶链式反应(Realtime PCR)检测p38 MAPK、NF-κB p65、NF-κB抑制因子α(IκBα)、钙结合蛋白(Iba-1)mRNA的水平;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测大鼠下丘脑p38 MAPK、磷酸化(p)-p38 MAPK、NF-κB p65、p-NF-κB p65、IκBα蛋白的表达水平;免疫荧光法检测大鼠下丘脑小胶质细胞激活蛋白Iba-1表达情况。结果:与空白组比较,模型组大鼠体质量较轻且皮毛散乱黯黄、易躁易怒、喜在角落蛰伏,OFT边缘运动距离和边缘运动时间显著增加(P室旁核小胶质细胞激活标志蛋白Iba-1荧光强度显著升高(P<0.01),血清和下丘脑中IL-1β、IL-6、TNF-α显著增多(P<0.01),下丘脑p38 MAPK、NF-κB p65、p-p38 MAPK、p-NF-κB p65、Iba-1蛋白及mRNA表达明显升高(P<0.05,P<0.01),IκBα蛋白及mRNA表达显著减低(P<0.01)。与模型组比较,柴胡加龙骨牡蛎汤中、高剂量组和地西泮组大鼠体质量较重且皮毛较为光滑、活动较为正常,OFT边缘运动距离和时间明显减少(P<0.05,P<0.01),PMT开臂运动距离及开臂运动时间明显增加(P<0.05,P<0.01),下丘脑小胶质细胞激活标志蛋白Iba-1荧光强度降低(P<0.05,P<0.01),血清和下丘脑组织中IL-1β、IL-6、TNF-α明显降低(P<0.05,P<0.01),下丘脑p38 MAPK、NF-κB p65、p-p38 MAPK、p-NF-κB p65、Iba-1蛋白及mRNA表达明显降低(P<0.05,P<0.01),IκBα蛋白及mRNA表达明显升高(P<0.05,P<0.01)。结论:柴胡加龙骨牡蛎汤可通过抑制p38 MAPK/NF-κB信号通路,降低GAD大鼠下丘脑内小胶质细胞活化度、下调促炎因子水平,发挥改善大鼠焦虑样行为、缓解大鼠焦虑状态的作用。

关键词：广泛性焦虑症柴胡加龙骨牡蛎汤炎症反应 p38丝裂原活化蛋白激酶/核转录因子-κB(p38 MAPK/NF-κB)信号通路小胶质细胞

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黑逍遥散调控p38MAPK/ATF2/COX-2信号通路对阿尔茨海默病大鼠神经炎症的影响

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中成药 2024年第2期46卷 590-595页

作者：米彩云彭超周君李明成王虎平甘肃中医药大学甘肃省方药挖掘与创新转化重点实验室甘肃兰州730000

目的观察黑逍遥散对Aβ_(1-42)所致阿尔茨海默病(AD)大鼠学习记忆能力的影响,并从p38MAPK/ATF2/COX-2信号通路介导的炎症级联反应探讨其作用机制。方法双侧海马注射1μL Aβ_(1-42)溶液复刻AD大鼠模型。筛选造模成功的大鼠50只,随机... 详细信息

目的观察黑逍遥散对Aβ_(1-42)所致阿尔茨海默病(AD)大鼠学习记忆能力的影响,并从p38MAPK/ATF2/COX-2信号通路介导的炎症级联反应探讨其作用机制。方法双侧海马注射1μL Aβ_(1-42)溶液复刻AD大鼠模型。筛选造模成功的大鼠50只,随机分为模型组、盐酸多奈哌齐组(0.5 mg/kg)和黑逍遥散低、中、高剂量组(4.25、8.5、17 g/kg),连续给药42 d。Morris水迷宫实验检测定位航行与空间探索能力,HE染色观察海马神经元病理结构改变,ELISA法检测海马组织Aβ_(1-42)、iNOS、PGE_(2)表达,RT-qPCR法检测海马组织p38、ATF2、COX-2 mRNA表达,Western blot法检测海马组织p-p38、p-ATF2、COX-2蛋白表达。结果与模型组比较,黑逍遥散中、高剂量组和盐酸多奈哌齐组逃避潜伏期缩短(P<0.01),有效区域运动距离、目标象限滞留时间百分比增加(P<0.01),海马CA1区神经元排列有序,胞体清晰,凋亡细胞减少,海马组织Aβ_(1-42)、iNOS、PGE_(2)水平降低(P<0.05,P<0.01),p38、COX-2 mRNA表达降低(P<0.05,P<0.01),p38、p-p38、p-ATF2、COX-2蛋白表达降低(P<0.01)。结论黑逍遥散可改善Aβ_(1-42)所致AD大鼠的认知能力,其机制可能与阻断p38MAPK/ATF2/COX-2信号通路传导,进而减轻炎症反应有关。

关键词：黑逍遥散阿尔茨海默病神经炎症 p38MAPK/ATF2/COX-2信号通路

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基于cAMP/PKA信号通路探讨红芪多糖影响糖尿病胃轻瘫大鼠钙稳态和能量代谢的作用机制

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中药药理与临床 2024年

作者：安惠朱小利魏昭晖李荣科张磊苗琳琳万生芳甘肃省中医方药挖掘与创新转化重点实验室甘肃中医药大学

目的：探究红芪多糖对糖尿病胃轻瘫(Diabetic gastroparesis，DGP)大鼠钙稳态和能量代谢的作用机制。方法：62只雄性Wistar大鼠随机分为正常对照组12只和造模组50只，采用小剂量多次注射链脲佐菌素+不规则饮食复制DGP模型。将成模大鼠... 详细信息

目的：探究红芪多糖对糖尿病胃轻瘫(Diabetic gastroparesis，DGP)大鼠钙稳态和能量代谢的作用机制。方法：62只雄性Wistar大鼠随机分为正常对照组12只和造模组50只，采用小剂量多次注射链脲佐菌素+不规则饮食复制DGP模型。将成模大鼠随机分为模型对照组、莫沙必利1.35 mg/kg组和红芪多糖200、100、50 mg/kg组，各灌胃组给予相应药物灌胃，正常对照组和模型对照组予等体积纯净水灌胃。观察大鼠一般情况，检测其体质量、随机血糖、胃排空率；HE染色观察大鼠胃窦组织病理改变；Elisa法检测胃窦组织中ATP、Na+-K+ATP酶、Ca2+-Mg2+ATP酶、钙离子(Ca2+)浓度；免疫组化和Western blot法分别检测胃窦组织中环磷酸腺苷(Cyclic adenosine monophosphate，cAMP)、蛋白激酶A(protein kinase A，PKA)、钙调蛋白依赖蛋白激酶Ⅱ(Calmodulin-dependent protein kinase Ⅱ，CaMKⅡ)及其磷酸化的分布、含量和蛋白表达。结果：与正常对照组相比，模型对照组大鼠体质量、胃排空率和胃窦组织中ATP、Na+-K+ATP酶和Ca2+-Mg2+ATP酶浓度、cAMP和PKA蛋白表达均显著降低(P＜0.01)，血糖、胃窦组织中Ca2+浓度和CaMKII及其磷酸化蛋白表达升高(P＜0.01)；与模型组对照相比，各给药组大鼠的体质量、胃排空率，胃窦组织中ATP、Na+-K+ATP酶和Ca2+-Mg2+ATP酶浓度、cAMP、PKA蛋白表达均显著升高(P＜0.05或P＜0.01)，血糖、胃窦组织中Ca2+浓度和CaMKII及其磷酸化蛋白表达均显著降低(P＜0.05或P＜0.01)。结论：HPS可以调节DGP大鼠钙稳态促进能量代谢，其机制可能与上调cAMP/PKA信号通路的表达，抑制CaMKII活性有关。

关键词：红芪多糖糖尿病胃轻瘫环磷酸腺苷/蛋白激酶A信号通路钙稳态能量代谢

基于RAS/RAF/MEK/ERK信号通路探讨黑逍遥散干预AD模型大鼠氧化应激的作用机制

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中国实验方剂学杂志 2024年

作者：王虎平吕育洁胡韵韵孟志鹏杨娇陈怡琴甘肃省中医方药挖掘与创新转化重点实验室甘肃省中药新产品创制工程实验室甘肃中医药大学

目的：探讨黑逍遥散调控RAS/RAF/MEK/ERK信号通路干预阿尔茨海默病(AD)大鼠氧化应激的作用及其机制。方法：4月龄SPF级Wistar雄性大鼠100只，随机选取10只作为空白组，10只作为假手术组(双侧海马注射1μl生理盐水)，其余80只双侧海马注... 详细信息

目的：探讨黑逍遥散调控RAS/RAF/MEK/ERK信号通路干预阿尔茨海默病(AD)大鼠氧化应激的作用及其机制。方法：4月龄SPF级Wistar雄性大鼠100只，随机选取10只作为空白组，10只作为假手术组(双侧海马注射1μl生理盐水)，其余80只双侧海马注射1μL 淀粉样蛋白(Aβ1-42)溶液复制AD模型。遴选造模合格大鼠50只，随机分为模型组、盐酸多奈哌齐组(0.5mg·kg-1)及黑逍遥散高、中、低剂量组(15.30、7.65、3.82 g·kg-1)。连续灌胃42 d，每天一次。灌胃结束后，Morris水迷宫试验测试大鼠学习记忆能力，尼式染色法检测海马CA3区神经元病理结构改变，免疫荧光观察Aβ沉积和tau蛋白磷酸化水平，蛋白免疫印迹法(Western blot)法检测海马组织RAS蛋白(RAS)、RAF激酶(RAF)、p-RAF、有丝分裂原活化蛋白激酶激酶(MEK)、p-MEK、细胞外信号调节激酶(ERK)、p-ERK蛋白表达，生化法检测海马组织活性氧(ROS)、丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)含量。结果：与假手术组比较，模型组大鼠第5天逃避潜伏期明显延长(P<0.01)，目标象限游泳距离明显缩短(P<0.01)；尼氏小体数量减少，染色不均；Aβ、p-tau荧光强度显著增强(P＜0.01)，海马组织中RAS、p-RAF、p-MEK、p-ERK蛋白表达量明显增高(P＜0.01)，ROS和MDA含量明显增高(P<0.01)，SOD活力明显降低(P<0.01)。与模型组比较，盐酸多奈哌齐组和黑逍遥散高、中、低剂量组大鼠第5天逃避潜伏期显著缩短(P<0.01)，目标象限游泳距离明显增加(P<0.01)；尼氏染色显示神经元排列整齐，细胞形态、结构完整，尼氏小体清晰可见；盐酸多奈哌齐组和黑逍遥散高、中、低剂量组Aβ、p-tau荧光强度明显下调(P＜0.01)，RAS、p-RAF、p-MEK、p-ERK蛋白表达量明显增高(P＜0.05，P＜0.01)；ROS、MDA含量明显降低(P<0.01)，SOD活力明显增高(P<0.01)。结论：黑逍遥散可能通过RAS/RAF/MEK/ERK信号通路干预氧化应激，降低Aβ和p-tau水平，抑制海马神经元损伤，从而改善学习记忆能力。

关键词：黑逍遥散阿尔茨海默病 RAS/RAF/MEK/ERK信号通路氧化应激

大补肝汤通过调控ROS/Nrf2/HO-1通路对广泛性焦虑症大鼠的改善作用

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中成药 2024年第7期 2202-2210页

作者：黄仕琦谭国伟李艳明安耀荣甘肃中医药大学甘肃省中医方药挖掘与创新转化重点实验室甘肃省中药新产品创制工程实验室

目的探讨大补肝汤对广泛性焦虑症(GAD)模型大鼠的作用机制。方法大鼠采用慢性不可预知温和应激法(CUMS)造模21 d,随机分为模型组、帕罗西汀组(1.8 mg/kg)和大补肝汤高、中、低剂量组(13.2、6.6、3.3 g/kg),另设空白组，各组给予相应... 详细信息

目的探讨大补肝汤对广泛性焦虑症(GAD)模型大鼠的作用机制。方法大鼠采用慢性不可预知温和应激法(CUMS)造模21 d,随机分为模型组、帕罗西汀组(1.8 mg/kg)和大补肝汤高、中、低剂量组(13.2、6.6、3.3 g/kg),另设空白组，各组给予相应药物灌胃，持续28 d。干预结束后，检测行为学以分析大鼠焦虑状态，HE染色和尼氏染色观察海马组织病理变化及尼氏体变化，免疫荧光法检测脑组织ROS活性，试剂盒检测海马组织SOD、CAT活性和MDA、GSH水平，RT-qPCR法和Western blot法检测海马组织Nrf2、Keap1、HO-1、NQO1、BDNF、5-HT1A、caspase-3、p62 mRNA和蛋白表达。结果与模型组比较，大补肝汤各剂量组大鼠焦虑行为得到改善，大鼠在高架十字迷宫中开臂端运动距离及总距离、进入明箱次数及停留时间、进入旷场中央时间及次数增加(P<0.05,P<0.01),海马神经细胞数量增加，排列紧密，细胞体损坏改善，细胞中尼氏体增加，海马组织中ROS活性和MDA水平降低(P<0.05,P<0.01),SOD、CAT活性和GSH水平均升高(P<0.05,P<0.01),海马组织Nrf2、HO-1、NQO1、BDNF、5-HT1A mRNA及蛋白表达均升高(P<0.05,P<0.01),p62、Keap1、caspase-3 mRNA及蛋白表达均降低(P<0.05,P<0.01)。结论大补肝汤可有效改善GAD大鼠焦虑状态，其机制可能与调控ROS/Nrf2/HO-1信号通路、改善海马神经元氧化应激损伤有关。

关键词：大补肝汤广泛性焦虑症氧化应激 ROS/Nrf2/HO-1信号通路海马

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黑逍遥散干预阿尔茨海默病的述评与展望

中国实验方剂学杂志 2024年

作者：吕育洁胡韵韵孟志鹏陈怡琴杨娇王虎平甘肃中医药大学甘肃省中医方药挖掘与创新转化重点实验室甘肃省中药新产品创制工程实验室

阿尔茨海默病（AD）是一种多发于老年人群体的神经退行性疾病，中医将其归为“痴呆”“呆病”的范畴，其发生发展与肾、肝、脾三脏的功能密切相关。肝脾肾“三阴并调”经典名方——黑逍遥散，在治疗神经退行性疾病方面具有广阔前景。本... 详细信息

阿尔茨海默病（AD）是一种多发于老年人群体的神经退行性疾病，中医将其归为“痴呆”“呆病”的范畴，其发生发展与肾、肝、脾三脏的功能密切相关。肝脾肾“三阴并调”经典名方——黑逍遥散，在治疗神经退行性疾病方面具有广阔前景。本文将综合近10年文献资料，从实验研究出发，归纳总结黑逍遥散方药及其有效成分干预AD的作用机制，发现黑逍遥散具有多靶点、多层次、多环节综合调控AD的协同干预优势。结合临床研究，我们可以发现黑逍遥散（或联合其他疗法）治疗AD疗效确切，可有效改善AD患者的认知障碍，降低氧化应激水平和抑制可溶性凋亡因子过度表达。本文基于现代医学背景和常用实验方法，旨在为黑逍遥散治疗AD提供理论依据并探索新的研究方向。甚至为其临床应用和药食同源产品的研发提供新思路。

关键词：阿尔茨海默病黑逍遥散方药机制三阴并调

基于cAMP/PKA/NMDAR信号通路探讨黑逍遥散对APP/PS1双转基因AD小鼠海马神经元突触可塑性的影响

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中国实验方剂学杂志 2024年

作者：胡韵韵吕育洁孟志鹏杨娇陈怡琴王虎平甘肃中医药大学甘肃省中医方药挖掘与创新转化重点实验室甘肃省中药新产品创制工程实验室

目的：探究黑逍遥散通过调控环磷酸腺苷（cAMP）/蛋白激酶A（PKA）/N-甲基-D-天冬氨酸受体（NMDAR）信号通路干预APP/PS1小鼠突触可塑性的作用及其机制。方法：选取4月龄雄性C57BL/6J小鼠12只作空白组，同月龄雄性APP/PS1双转基因小鼠6... 详细信息

目的：探究黑逍遥散通过调控环磷酸腺苷（cAMP）/蛋白激酶A（PKA）/N-甲基-D-天冬氨酸受体（NMDAR）信号通路干预APP/PS1小鼠突触可塑性的作用及其机制。方法：选取4月龄雄性C57BL/6J小鼠12只作空白组，同月龄雄性APP/PS1双转基因小鼠60只，随机分为模型组、KW-6002（腺苷受体的拮抗剂）组(3 mg·kg-1)及黑逍遥散高、中、低剂量组(22.10、11.05、5.53 g·kg-1)，每组12只，对应药物连续干预90 d。透射电镜观察海马神经元突触超微结构，高尔基染色观察海马CA1区神经元树突棘密度，蛋白免疫印迹法（Western blot）法检测cAMP、PKA、N-甲基-D-天冬氨酸受体1（NR1）、N-甲基-D-天冬氨酸受体2A（NR2A）、N-甲基-D-天冬氨酸受体2B（NR2B）、突触后致密物质95（PSD95）、突触蛋白1（SYN1）的蛋白表达，实时荧光定量聚合酶链式反应（Real-time PCR）检测cAMP、PKA、NR1的mRNA表达，酶联免疫吸附试验（ELISA）检测小鼠海马白细胞介素-12（IL-12）、白细胞介素-4（IL-4）含量。结果：与空白组比较，模型组小鼠海马CA1区突触前膜与突触后膜分界线清晰程度欠佳，突触囊泡明显减少且分布散乱，突触后膜密度降低，海马CA1区神经元树突棘形态欠规整，排列不连续、密度减少（P＜0.01），海马cAMP、PKA、NR1、NR2A、NR2B、PSD95、SYN1的蛋白表达降低（P＜0.01），cAMP、PKA、NR1的mRNA表达下调（P＜0.01），海马IL-12含量增多、IL-4含量减少（P＜0.01）。与模型组比较，各用药组小鼠海马CA1区突触前膜与后膜分界线清晰明了且结构完整，突触囊泡增多，排列密集，突触后膜密度增加，神经元树突棘形态较为规则，排列连续，成熟型树突棘密度增多（P＜0.05，P＜0.01），海马cAMP、PKA、NR1、NR2A、NR2B、PSD95、SYN1的蛋白表达增加（P＜0.05，P＜0.01），cAMP、PKA、NR1的mRNA表达提高（P＜0.01），海马IL-12含量降低（P＜0.01）、IL-4含量增加（P＜0.01）。结论：黑逍遥散能改善APP/PS1小鼠海马神经元结构形态，其作用机制可能与激活cAMP/PKA/NMDAR信号通路、修复突触可塑性有关。

关键词：黑逍遥散阿尔茨海默病突触可塑性 cAMP/PKA/NMDAR信号通路

黑逍遥散调控Fas/FasL/Caspase-8/Caspase-3信号通路对AD大鼠神经元细胞凋亡的影响

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中国实验方剂学杂志 2024年

作者：王虎平陈怡琴杨娇胡韵韵吕育洁孟志鹏甘肃中医药大学甘肃省中医方药挖掘与创新转化重点实验室甘肃省中药新产品创制工程实验室

目的：探究黑逍遥散调控肿瘤坏死因子受体超家族成员6（Fas）/Fas配体（FasL）/胱天蛋白酶-8（Caspase-8）/胱天蛋白酶-3（Caspase-3）信号通路干预神经元细胞凋亡防治阿尔茨海默病（AD）的作用及机制。方法：选用4月龄SPF级SD雄性大鼠9... 详细信息

目的：探究黑逍遥散调控肿瘤坏死因子受体超家族成员6（Fas）/Fas配体（FasL）/胱天蛋白酶-8（Caspase-8）/胱天蛋白酶-3（Caspase-3）信号通路干预神经元细胞凋亡防治阿尔茨海默病（AD）的作用及机制。方法：选用4月龄SPF级SD雄性大鼠90只，随机选取10只作为空白组，10只作为假手术组（双侧海马各注射生理盐水1 μL），其余70只双侧海马各注射淀粉样蛋白(Aβ1-42)1 μL溶液复制AD模型。筛选出造模成功的大鼠50只，随机分为模型组、盐酸多奈哌齐组(0.45 mg·kg-1)及黑逍遥散高、中、低剂量组(15.30、7.65、3.82 g·kg-1)。连续灌胃42 d，1次/d。原位末端标记法（TUNEL）染色观察大鼠皮层和海马神经元细胞凋亡情况，免疫组化法（IHC）检测大鼠海马组织B细胞淋巴瘤-2（Bcl-2）、Bcl-2相关X蛋白（Bax）表达，实时荧光定量聚合酶链式反应（Real-time PCR）检测Fas、FasL、Fas相关死亡结构域蛋白（Fadd） mRNA的表达，蛋白免疫印迹法（Western blot）检测Fas、FasL、Fadd、Caspase-3、激活型胱天蛋白酶-3（cleaved Caspase-3）、Caspase-8、激活型半胱氨酸蛋白酶-8（cleaved Caspase-8）相关蛋白的表达。结果：与空白组比较，模型组大鼠皮层和海马区细胞凋亡率显著升高（P<0.01），Bax水平显著增高（P<0.01），Bcl-2水平显著下调（P<0.01），海马组织Fas、FasL、Fadd mRNA表达显著提高（P<0.01），Fas、FasL、Fadd、cleaved Caspase-3、cleaved Caspase-8蛋白表达显著增高（P<0.01）。与模型组比较，盐酸多奈哌齐组及黑逍遥散高、中剂量组大鼠皮层和海马区细胞凋亡率明显下降（P<0.05，P<0.01），Bax水平显著降低（P<0.01），Bcl-2水平显著提高（P<0.01），Fas、FasL、Fadd mRNA表达明显下调（P<0.05，P<0.01），海马组织Fas、FasL、Fadd、cleaved Caspase-3、cleaved Caspase-8蛋白表达明显下调（P<0.05，P<0.01）；黑逍遥散低剂量组大鼠皮层和海马区细胞凋亡率明显下降（P<0.05，P<0.01），Bcl-2表达水平显著降低（P<0.01），海马组织FasL、Fadd mRNA表达明显下调（P<0.05），Fas、FasL、Fadd、cleaved Caspase-3、cleaved Caspase-8蛋白表达明显下调（P<0.05）。结论：黑逍遥散可保护AD大鼠皮层和海马区神经元细胞凋亡，其作用机制可能与抑制Fas/FasL/Caspase-8/Caspase-3信号通路介导的细胞凋亡有关。

关键词：黑逍遥散阿尔茨海默病肿瘤坏死因子受体超家族成员6(Fas)/Fas配体(FasL)/胱天蛋白酶-8(Caspase-8)/胱天蛋白酶-3(Caspase-3)信号通路细胞凋亡