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食品中99种兽药的一步式提取净化体系

色谱 2018年第6期36卷 506-517页

作者：李双陈树兵李露青徐旭文陈先锋钟莺莺张雅珩王传现宁波出入境检验检疫局检验检疫技术中心浙江宁波315211 宁波大学应用海洋生物技术教育部重点实验室浙江宁波315211 甘肃出入境检验检疫局综合技术中心甘肃兰州730010 上海出入境检验检疫局上海200135

建立了99种禁限用兽药的一步式提取净化体系,并通过高效液相色谱-四极杆/静电场轨道阱高分辨质谱(UHPLC-Q-Orbitrap HRMS)对其效果进行了评价。该提取净化体系基于载体辅助液液萃取技术,通过一次性前处理,完成常见的理化性质差异很大的... 详细信息

建立了99种禁限用兽药的一步式提取净化体系,并通过高效液相色谱-四极杆/静电场轨道阱高分辨质谱(UHPLC-Q-Orbitrap HRMS)对其效果进行了评价。该提取净化体系基于载体辅助液液萃取技术,通过一次性前处理,完成常见的理化性质差异很大的8大类共计99种兽药残留的提取、净化工作,同时结合四极杆静电场轨道阱高分辨质谱实现了99种兽药残留的一步式多残留筛查。采用此体系对样品禁限用兽药进行测定分析,结果表明,该方法对液态乳、猪肉、鱼类等食品基质具有较强的适用性,检测的99种兽药线性范围为0.001~0.1μg/m L,定量限为0.5~20.0μg/kg,加标回收率为60%~120%,相对标准偏差小于15%。该方法的前处理和仪器分析过程对不同理化性质的化合物的兼容性强,检测效率高,可操作性强,检出限能满足所有受试的目标物,并且大大降低了检测成本。

关键词：载体辅助液液萃取超高效液相色谱-四极杆/静电场轨道阱高分辨质谱兽药食品

微滴数字PCR(ddPCR)检测马铃薯S病毒(PVS)

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农业生物技术学报 2017年第10期25卷 1721-1728页

作者：张永江黄洁芳王溪桥周慧李晓宇付伟朱鹏宇王晨光中国检验检疫科学研究院吴江出入境检验检疫局甘肃出入境检验检疫局综合技术中心海南出入境检验检疫局热带植物隔离中心

马铃薯(Solanum tuberosum)为世界重要农作物之一,受马铃薯S病毒(Potato virus S,PVS)侵染会导致其品质下降,产量降低;灵敏准确的检测技术将有助于提高PVS的检出率,进而防止其传播扩散危害马铃薯生产,保护马铃薯产业发展。为了建立PVS... 详细信息

马铃薯(Solanum tuberosum)为世界重要农作物之一,受马铃薯S病毒(Potato virus S,PVS)侵染会导致其品质下降,产量降低;灵敏准确的检测技术将有助于提高PVS的检出率,进而防止其传播扩散危害马铃薯生产,保护马铃薯产业发展。为了建立PVS灵敏准确的检测技术,本研究根据其外壳蛋白(coat protein,CP)基因保守序列设计了微滴数字PCR(droplet digital PCR,ddPCR)的引物探针,并进行了特异性、灵敏度及重复性验证。结果表明,所建立的方法对PVS具有良好的特异性,能够有效区分对照病毒马铃薯X病毒(Potato virus X,PVX)、马铃薯Y病毒(Potato virus Y,PVY)、黄瓜花叶病毒(Cucumber mosaic virus,CMV)和烟草花叶病毒(Tobacco mosaic virus,TMV),与传统qRT-PCR结果一致;检测灵敏度可达20拷贝/μL的RNA,比qRT-PCR灵敏度高10倍;3次重复实验微滴数的标准误差小于总微滴数的1.5%,表明所建立的ddPCR方法具有良好的重复性。本研究建立的ddPCR方法可用于PVS的准确检测,也为其他植物病毒的准确检测提供了借鉴。

关键词：马铃薯S病毒(PVS) 微滴数字PCR(ddPCR) 检测鉴定特异性灵敏度

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番茄溃疡病一步法快速超灵敏检测技术研究

检验检疫科学 2006年第B12期16卷 35-37页

作者：王欢刘箐刘芳陈洁黄国银王军平赵生国朱蕴智刘志杰侯建雄甘肃出入境检验检疫局国家级外繁种子检疫重点实验室

对种子携带的番茄细菌性溃疡病菌（Clavibactermichiganensissubsp，michiganensis）进行简单抽提和纯化，不经过DNA提取而以病原菌为模板直接进行一步法PCR检测，对纯菌液Direct—PCR最低检出限为2600个细菌／mL，而Nested-PCR最低检... 详细信息

对种子携带的番茄细菌性溃疡病菌（Clavibactermichiganensissubsp，michiganensis）进行简单抽提和纯化，不经过DNA提取而以病原菌为模板直接进行一步法PCR检测，对纯菌液Direct—PCR最低检出限为2600个细菌／mL，而Nested-PCR最低检出限可达到13个细菌／mL；对种子提取液，Direct-PCR不能检出，而Nested—PCR最低检出限可达到3×10^5个细菌／mL,一步法Nested-PCR可在12h内对番茄种子携带的番茄溃疡病菌进行准确的定性鉴定。并且方法方便快速，成本低，灵敏度高，适用于种子携带番茄溃疡病菌的快速鉴定。

关键词：番茄溃疡病 Nested—PCR 快速检测

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加拿大进境大豆上检出菜豆荚斑驳病毒

植物保护 2009年第6期35卷 127-129页

作者：沈建国王念武翁瑞泉黄可辉郭琼霞福建出入境检验检疫局福建省检验检疫技术研究重点实验室福州350001

本研究采用DAS-ELISA、IC-RT-PCR及序列测定方法,对加拿大进境大豆种子进行菜豆荚斑驳病毒(Beanpod mottle virus,BPMV)和大豆花叶病毒(Soybean mosaic virus,SMV)检测,结果表明,BPMV的DAS-ELISA和IC-RT-PCR检测结果均为阳性,且PCR扩增产物序列与已报道的BPMV基因序列相似性达97%以上,而SMV的DAS-ELISA和IC-RT-PCR检测结果都为阴性。综合血清学、分子生物学检测结果,确认该批大豆携带有菜豆荚斑驳病毒。

关键词：菜豆英斑驳病毒检测 DAS-EUSA IC-RT-PCR

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食用油中三种辣椒素类物质的快速筛查

分析试验室 2019年第2期38卷 191-195页

作者：徐旭文李双陈树兵方科益刘忠义李露青周虹玲张雅珩王传现宁波出入境检验检疫局检验检疫技术中心宁波315211 宁波大学应用海洋生物技术教育部重点实验室宁波315211 甘肃出入境检验检疫局综合技术中心兰州730010 上海出入境检验检疫局上海200135

采用稳定同位素内标与高效液相色谱-串联质谱联用技术,对食用油和地沟油中天然辣椒素、二氢辣椒素和合成辣椒素进行快速筛查。前处理采用基质分散固相萃取技术:联合了低温和中性氧化铝粉除油,除油率高达91%,大大降低了前处理时间和油脂... 详细信息

采用稳定同位素内标与高效液相色谱-串联质谱联用技术,对食用油和地沟油中天然辣椒素、二氢辣椒素和合成辣椒素进行快速筛查。前处理采用基质分散固相萃取技术:联合了低温和中性氧化铝粉除油,除油率高达91%,大大降低了前处理时间和油脂的离子化抑制效应;并结合各自同位素内标进行定量,通过比较其保留时间,避免了假阳性结果的产生。以上3种目标物在0. 1～10 ng/mL范围内线性关系良好(r^2> 0. 995),检出限均低至0. 1μg/kg,平均回收率在88. 6%～108. 1%,相对标准偏差(RSD)均小于11%。

关键词：高效液相色谱-串联质谱法基质分散固相萃取技术食用油辣椒素类

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蛋白粉保健品中激素含量的快速筛查

环境化学 2018年第7期37卷 1675-1677页

作者：李双李露青王春芳徐旭文钟莺莺张雅珩王传现陈树兵宁波出入境检验检疫局检验检疫技术中心宁波315211 宁波大学应用海洋生物技术教育部重点实验室宁波315211 甘肃出入境检验检疫局综合技术中心兰州730010 上海出入境检验检疫局上海200135

本文通过超高效液相色谱-四极杆/静电场轨道阱高分辨质谱,利用建立的激素质谱信息数据库,对6种市售蛋白粉中28种激素进行进行快速筛查.前处理技术基于载体辅助液液萃取,通过一次性提取和净化,完成涵盖了理化性质差异很大的28种激素的监... 详细信息

本文通过超高效液相色谱-四极杆/静电场轨道阱高分辨质谱,利用建立的激素质谱信息数据库,对6种市售蛋白粉中28种激素进行进行快速筛查.前处理技术基于载体辅助液液萃取,通过一次性提取和净化,完成涵盖了理化性质差异很大的28种激素的监测工作,通过比较其保留时间、质荷比、同位素丰度比、以及二级碎裂片段,极大地避免了假阳性结果的产生.结果表明,有3种蛋白粉中检测到诺龙激素,含量高达5.916—11.052 mg·kg^(-1);1种蛋白粉中检出甲睾酮,含量为0.206 mg·kg^(-1);此外,4种蛋白粉中还有检出雌性激素炔雌醇,含量范围0.194—0.942 mg·kg^(-1);1种检出雌三醇,含量为0.110 mg·kg^(-1).其他兽药均未检出.目前蛋白粉等保健品行业缺乏有效监管,对禁止添加的营养强化剂没有明确规定,在6种国内外不同厂家的蛋白粉中,仅有2种未检出上述激素,为合格产品.

关键词：超高效液相色谱-四极杆/静电场轨道阱高分辨质谱载体辅助液液萃取蛋白粉激素

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蛋白质芯片技术及其在医学诊断中的应用

临床检验杂志 2011年第1期29卷 63-65页

作者：熊亮斌刘箐高丽萍刘姝彤宋蕤施颖波王军平文朝慧甘肃省出入境检验检疫局国家级外繁种子检疫重点实验室兰州730020 兰州大学基础医学院兰州730000 兰州慧盟生物科技有限公司兰州730010

在蛋白质组学研究中,由于基因转录、翻译后合成的大部分多肽链经加工修饰后才具有生物学活性,仅凭基因转录水平并不能准确反映和预测蛋白质表达量,需通过直接研究目标蛋白质,并配合相应mRNA转录水平,才能全面获取特定蛋白质的生物信息。

关键词：蛋白质芯片蛋白质微阵列检测诊断

7种不同药剂对番茄种子除害处理效果评价与研究

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种子 2016年第4期35卷 68-72,76页

作者：王溪桥李春雷尤佳左佳妮文朝慧王军平甘肃出入境检验检疫局检验检疫综合技术中心兰州730010

通过对模拟带菌种子进行除害处理及处理后种子发芽率测定等一系列实验,使用7种不同除害药剂处理带菌番茄种子,并对模拟携带的有害微生物(番茄细菌性叶斑病菌Pseudomonas syringae ***,PST)的除害效果进行评价,综合除害效果以及除害药剂... 详细信息

通过对模拟带菌种子进行除害处理及处理后种子发芽率测定等一系列实验,使用7种不同除害药剂处理带菌番茄种子,并对模拟携带的有害微生物(番茄细菌性叶斑病菌Pseudomonas syringae ***,PST)的除害效果进行评价,综合除害效果以及除害药剂对种子发芽率的影响2种因素,摸索出7种不同除害药剂对番茄细菌性叶斑病菌的最佳处理浓度与时间。结果表明,本实验所筛选的药剂以及建立的除害技术为今后相关研究奠定了实验基础,可作为参考应用于实践。

关键词：番茄种子番茄细菌性叶斑病菌除害处理效果评价

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微量病原富集技术研究进展

中国公共卫生 2010年第8期26卷 1066-1069页

作者：闵现华韩跃武刘箐兰州大学基础医学院医学生物化学与分子生物学研究所甘肃兰州730000 甘肃出入境检验检疫局国家级外繁种子检疫重点实验室

传统的微量病原检测主要有直接检测法和培养基富集后检测法,前者由于病原含量低、样品杂质存留多等问题,检测灵敏度较低; 后者流程繁琐、耗时费力,不能用于快速检测.而在常规PCR和ELISA基础上衍生出的新技术已广泛应用于各个领域,但这... 详细信息

传统的微量病原检测主要有直接检测法和培养基富集后检测法,前者由于病原含量低、样品杂质存留多等问题,检测灵敏度较低; 后者流程繁琐、耗时费力,不能用于快速检测.而在常规PCR和ELISA基础上衍生出的新技术已广泛应用于各个领域,但这些技术几乎都集中在病原的检测部分而忽略了检测之前的富集过程,造成许多微量病原的漏检.病原富集技术就是将大体积样品中含量很低的病原通过增菌、分离、浓缩等方法全部富集到可供检测的小体积样品中,从而增加单位体积样品中的病原数量,除去了某些干扰检测的成分,提高检测灵敏度~[1].本研究就近年来新发展的微量病原富集技术研究进展作一综述

关键词：微量病原富集技术微生物检验.