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归芪益元膏联合顺铂通过内质网应激途径和线粒体凋亡途径对Lewis肺癌小鼠的影响

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中国实验方剂学杂志 2024年

作者：孔思琪李金田李娟梁建庆张毅张悦袁超甘肃中医药大学中医临床学院甘肃中医药大学基础医学院敦煌医学与转化教育部重点实验室

目的：探讨归芪益元膏联合顺铂通过内质网应激途径和线粒体凋亡途径对Lewis肺癌小鼠的影响。方法：将50只SPF级雄性C57BL/6小鼠，随机分为模型组、顺铂组(0.005g·kg-1)、归芪益元膏联合顺铂低、中、高剂量组(0.005+1.6 g·kg-1、0.005+... 详细信息

目的：探讨归芪益元膏联合顺铂通过内质网应激途径和线粒体凋亡途径对Lewis肺癌小鼠的影响。方法：将50只SPF级雄性C57BL/6小鼠，随机分为模型组、顺铂组(0.005g·kg-1)、归芪益元膏联合顺铂低、中、高剂量组(0.005+1.6 g·kg-1、0.005+3.3 g·kg-1、0.005+6.6 g·kg-1)。各组小鼠腋下接种Lewis细胞悬液，构建Lewis肺癌移植瘤小鼠模型。连续给药14d后取材，称量小鼠体重，剥离瘤体称量瘤体重量，计算脏器指数和抑瘤率；苏木素-伊红(HE)染色观察肿瘤组织病理形态变化；流式细胞仪检测肿瘤细胞凋亡率和活性氧(ROS)比率；蛋白免疫印迹法(Western blot)检测内质网应激途径中葡萄糖调节蛋白78(GRP78)、磷酸化(p)的蛋白激酶R样内质网激酶(p-PERK)、活化转录因子4(ATF4)、凋亡蛋白C/EBP同源蛋白(CHOP)和线粒体凋亡途径中半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-9(Caspase-9)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、B细胞淋巴瘤-2(Bcl-2)蛋白表达情况。结果：与模型组比较，归芪益元膏联合顺铂各剂量组小鼠毛色较光泽，精神反应状态较好；各给药组肿瘤质量均降低(P<0.05)；各给药组抑瘤率均升高(P<0.05)；联合组胸腺、脾脏指数均升高(P<0.05)；各给药组肿瘤组织病理形态改变明显，异型性逐渐降低，联合高剂量组肿瘤组织被大量破坏；各给药组肿瘤细胞凋亡率及ROS生成率均升高(P<0.05)；各给药组肿瘤组织中Bcl-2蛋白表达水平逐渐降低(P<0.05)，而GRP78、p-PERK、ATF4、CHOP、Bax、Caspase-9蛋白表达水平显著升高(P<0.05)。与顺铂组比较，联合组肿瘤质量均降低(P<0.05)，联合中、高剂量组抑瘤率均升高(P<0.05)；联合组胸腺指数和脾脏指数、肿瘤细胞凋亡率、ROS比率明显升高(P<0.05)；联合中、高剂量组GRP78、p-PERK、Bax、Caspase-9蛋白表达水平升高(P<0.05)；联合组ATF4、CHOP蛋白表达水平升高(P<0.05)，Bcl-2蛋白表达水平逐渐降低(P<0.05)。结论：归芪益元膏联合顺铂可对Lewis肺癌小鼠产生抑瘤作用，降低肿瘤质量，提高抑瘤率，诱导肺癌细胞凋亡，其机制可能与调节内质网应激途径和线粒体凋亡途径相关。

关键词：归芪益元膏肺癌顺铂线粒体凋亡途径内质网应激途径

基于Bcl-2与mTOR蛋白“crosstalk”探究活血定眩胶囊对血管内皮细胞自噬的作用机制

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中国中药杂志 2024年

作者：巩彦龙王凯宋永嘉刘小钰宋敏甘肃中医药大学附属医院骨科甘肃省人民医院骨科甘肃中医药大学中医临床学院

基于B淋巴细胞瘤-2基因（Bcl-2）与雷帕霉素靶蛋白（mTOR）蛋白“crosstalk”探究活血定眩胶囊（HXDX）对血管内皮细胞自噬的作用机制。将bEnd.3细胞分为空白对照组、模型组、活血定眩胶囊组，（免疫共沉淀）CO-IP实验后蛋白免疫印迹法... 详细信息

基于B淋巴细胞瘤-2基因（Bcl-2）与雷帕霉素靶蛋白（mTOR）蛋白“crosstalk”探究活血定眩胶囊（HXDX）对血管内皮细胞自噬的作用机制。将bEnd.3细胞分为空白对照组、模型组、活血定眩胶囊组，（免疫共沉淀）CO-IP实验后蛋白免疫印迹法（WB）检测Bcl-2与mTOR的结合情况，染色后激光共聚焦显微镜观察Bcl-2与mTOR蛋白的共定位情况；构建bEnd.3细胞内Bcl-2 siRNA模型，将bEnd.3细胞分为5组，空白对照组、氧糖剥夺（OGD）组、转染Bcl-2 siRNA组、阴性对照（NC）组、HXDXC组；构建bEnd.3细胞内mTOR siRNA模型，将bEnd.3细胞分为5组，空白对照组、OGD组、转染mTOR siRNA组、NC组、HXDXC组，WB检测自噬相关蛋白的表达。CO-IP实验结果显示Bcl-2与mTOR蛋白在bEnd.3细胞可共定位表达，活血定眩胶囊含药血清干预后Bcl-2、mTOR蛋白的表达显著上升。筛选并转染Bcl-2-mus-384后诱导bEnd.3细胞自噬，Bcl-2 siRNA组中Bcl-2表达较空白对照组和模型组显著降低，mTOR蛋白的表达较OGD组显著降低、人微管相关蛋白轻链3Ⅱ/Ⅰ（LC3Ⅱ/LC3Ⅰ）表达较模型组显著升高，活血定眩胶囊含药血清干预后，HXDX组中Bcl-2、mTOR表达较Bcl-2 siRNA组显著升高，LC3Ⅱ/LC3Ⅰ、重组人自噬效应蛋白1（Beclin1）表达较Bcl-2 siRNA组显著降低；转染mTOR-mus-7061诱导bEnd.3细胞自噬后，在mTOR siRNA组中，mTOR蛋白表达较空白对照组和模型组显著降低，LC3Ⅱ/LC3Ⅰ、Beclin1蛋白表达较模型组明显升高；经活血定眩胶囊含药血清干预后HXDX组中Bcl-2、mTOR表达较mTOR siRNA组明显升高，LC3Ⅱ/LC3Ⅰ、Beclin1蛋白表达较mTOR siRNA组明显降低。该研究从细胞水平探讨了bEnd.3细胞自噬过程中Bcl-2与mTOR“crosstalk”，并说明了活血定眩胶囊含药血清对其的调节作用，为椎动脉型颈椎病的治疗提供基础。

关键词：椎动脉型颈椎病自噬 Bcl-2 mTOR “crosstalk” 活血定眩胶囊

红芪多糖对非酒精性脂肪肝病细胞模型FXR-SHP-SREBP-1c信号通路的影响

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中国临床药理学杂志 2024年第2期40卷 200-204页

作者：张磊金智生杨晓轶李佳蔚李亚玲金彩云陈彦旭甘肃中医药大学基础医学院甘肃兰州730000 甘肃中医药大学敦煌医学与转化教育部重点实验室甘肃兰州730000 甘肃中医药大学中医临床学院甘肃兰州730000 福建中医药大学中医证研究基地福建福州350122

目的研究红芪多糖(HPS)对非酒精性脂肪肝病细胞模型法尼醇X受体(FXR)-小异二聚体伴侣(SHP)-甾醇调节元件结合蛋白1c(SREBP-1c)信号通路的影响。方法用1.2 mmol·L^(-1)脂肪酸培养LO-2细胞复制非酒精性脂肪肝病细胞模型。将细胞分为正常... 详细信息

目的研究红芪多糖(HPS)对非酒精性脂肪肝病细胞模型法尼醇X受体(FXR)-小异二聚体伴侣(SHP)-甾醇调节元件结合蛋白1c(SREBP-1c)信号通路的影响。方法用1.2 mmol·L^(-1)脂肪酸培养LO-2细胞复制非酒精性脂肪肝病细胞模型。将细胞分为正常组(细胞正常培养)、模型组(建立非酒精性脂肪肝病细胞模型)、阳性对照组(造模后用50μmol·L^(-1)硫辛酸处理),实验组(造模后用80 mg·L^(-1)HPS处理),各组细胞均培养24 h。用GPO-PAP酶法检测细胞三酰甘油(TG)、胆固醇(TC)含量和谷草转氨酶(GOT)、谷丙转氨酶(GPT)活性,用蛋白质印迹(Western blot)法和逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测肝细胞FXR-SHP-SREBP-1c信号通路蛋白和mRNA的表达水平。结果正常组、模型组、对照组、实验组的肝细胞TG含量分别为(2.91±1.13)、(6.81±1.32)、(3.72±0.52)和(4.67±0.62)mmol·gprot^(-1),TC含量分别为(23.66±4.92)、(67.96±5.56)、(29.41±4.22)和(54.34±3.96)mmol·gprot^(-1),GOT活性分别为(249.10±11.59)、(322.63±28.81)、(288.89±19.14)和(266.91±8.77)U·gprot^(-1),GPT活性分别为(58.83±16.88)、(134.55±22.96)、(89.63±15.81)和(77.37±7.25)U·gprot^(-1),FXR mRNA表达水平分别为1.01±0.16、2.09±0.12、1.83±0.17和1.45±0.15,SHP mRNA表达水平分别为1.00±0.11、0.51±0.15、0.64±0.14和0.70±0.14,SREBP-1c mRNA表达水平分别为1.00±0.08、1.57±0.19、1.37±0.13和1.21±0.15,FXR蛋白表达水平分别为1.00±0.02、1.63±0.03、1.42±0.02和1.25±0.03,SHP蛋白表达水平分别为1.00±0.02、0.23±0.01、0.54±0.21和0.62±0.02,SREBP-1c蛋白表达水平分别为1.00±0.03、4.08±0.05、1.99±0.02和1.48±0.01。上述指标,模型组与正常组比较,实验组与模型组比较,在统计学上差异均有统计学意义(均P<0.05)。结论HPS可能通过调控FXR-SHP-SREBP-1c信号通路,减少肝细胞脂质合成,从而保护肝细胞。

关键词：红芪多糖非酒精性脂肪肝病法尼醇X受体脂肪变性信号通路

基于Notch信号通路探讨芪蛭皱肺颗粒对慢性阻塞性肺疾病大鼠Th1/Th2免疫平衡的调节机制

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世界科学技术-中医药现代化 2024年第1期26卷 179-189页

作者：马若飞苏苗李金田李娟张毅徐韦玮姜佳辰甘肃中医药大学中医临床学院兰州730101 敦煌医学与转化教育部重点实验室兰州730000 甘肃中医药大学基础医学院兰州730101

目的探讨果蝇双翅边缘缺刻同源基因(Notch)信号通路在慢性阻塞性肺疾病(COPD)辅助性T细胞1(Helper T cells 1,Th1)和辅助性T细胞2(Helper T cells 2,Th2)失衡中的作用及芪蛭皱肺颗粒的干预机制。方法70只Wistar大鼠随机挑选10只作为空... 详细信息

目的探讨果蝇双翅边缘缺刻同源基因(Notch)信号通路在慢性阻塞性肺疾病(COPD)辅助性T细胞1(Helper T cells 1,Th1)和辅助性T细胞2(Helper T cells 2,Th2)失衡中的作用及芪蛭皱肺颗粒的干预机制。方法70只Wistar大鼠随机挑选10只作为空白对照组,其余大鼠均采用香烟烟雾(CS)联合气管滴注脂多糖(Lipopolysaccharide,LPS)法建立COPD模型,空白对照组及造模组各随机挑选3只大鼠验证造模是否成功。造模结束进行灌胃给药干预,造模组大鼠随机分为模型对照组、阳性对照组(67.5μg·kg^(-1))及芪蛭皱肺颗粒高中低剂量组(3.24、1.62、0.81 g·kg^(-1)),分别给予生理盐水、醋酸地塞米松混悬液、芪蛭皱肺高、中、低剂量混悬液进行灌胃干预,空白对照组同模型对照组,灌胃等体积生理盐水。经28天造模及28天治疗后,采用动物肺功能测试系统检测吸气峰流速(Peak Inspiratory Flow,PIF)和呼气峰流速(Peak Expiratory Flow,PEF),处死大鼠提取肺脏、脾脏、血清及支气管肺泡灌洗液(BALF),苏木素-伊红(HE)染色评价肺组织病理变化,酶联免疫吸附实验法(ELISA)测定血清及BALF中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)含量,流式细胞仪检测脾脏Th1/Th2细胞水平,免疫组织化学法(Immunohistochemistry,IHC)及蛋白免疫印迹法(Western blot)检测肺组织Notch1、Hes家族发状分裂相关增强子1(Hes1)、Hey家族发状分裂相关增强子1(Hey1)蛋白水平,实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR,RT-PCR)检测肺组织Notch1、Hes1、Hey1基因表达水平。结果与空白对照组比较,模型对照组大鼠肺功能显著降低(P<0.05),肺组织出现炎性细胞浸润、支气管结构破坏等病变,血清及BALF中TNF-α含量显著升高(P<0.05),脾Th1细胞百分比显著降低(P<0.05),Th2细胞百分比显著升高(P<0.05),肺组织Notch1、Hes1、Hey1蛋白及mRNA表达显著升高(P<0.05),差异均具有统计学意义;与模型对照组比较,各给药组大鼠肺功能显著升高(P<0.05),肺组织病理损伤均有所减轻,血清及BALF中TNF-α含量显著降低(P<0.05),脾Th1细胞百分比显著升高(P<0.05),Th2细胞百分比显著降低(P<0.05),肺组织Notch1、Hes1、Hey1蛋白及mRNA表达显著降低(P<0.05),差异均具有统计学意义。结论芪蛭皱肺颗粒通过抑制Notch信号通路调节Th1/Th2平衡,从而改善COPD大鼠肺功能及病理损伤,影响其免疫功能。

关键词：芪蛭皱肺颗粒慢性阻塞性肺疾病(COPD) 果蝇双翅边缘缺刻同源基因(Notch)信号通路辅助性T细胞1(Th1)/辅助性T细胞2(Th2)免疫平衡

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形气神一体观在针刀治疗颈性眩晕中的应用探讨

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中国针灸 2024年第8期44卷 947-950页

作者：景骆羊李浩林程伟刚杨娟娟刘兆隆王海东甘肃中医药大学中医临床学院兰州730101 甘肃省中医院风湿骨病中心兰州730050

介绍王海东教授基于形气神一体观应用针刀治疗颈性眩晕的思路。王海东教授基于颈性眩晕的病因病机,从形气神一体观出发,以解剖结构为基础,采用“颈七刀”技术以改善局部血供而治形;以经筋理论为指导,采用“舒筋解结术”以散结缓筋、濡... 详细信息

介绍王海东教授基于形气神一体观应用针刀治疗颈性眩晕的思路。王海东教授基于颈性眩晕的病因病机,从形气神一体观出发,以解剖结构为基础,采用“颈七刀”技术以改善局部血供而治形;以经筋理论为指导,采用“舒筋解结术”以散结缓筋、濡润筋肉而调气;以督脉为总纲,采用“督脉刺骨术”以升举清阳、滋养脑窍而养神。

关键词：颈性眩晕针刀形气神一体观名医经验王海东

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中药干预JAK/STAT信号通路防治糖尿病及其慢性并发症的研究状况

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中国临床药理学杂志 2024年第5期40卷 754-758页

作者：李涛杨丽霞高博李钦宋爽甘肃中医药大学中医临床学院甘肃兰州730000 甘肃省中医药研究院中心实验室甘肃兰州730050 甘肃卫生职业学院中医药学院甘肃兰州730207

2型糖尿病(T2DM)及其慢性并发症,是引起糖尿病患者致残、致死的主要原因,中药治疗本病具有疗效显著、复发率低等优势。近年来运用中医药治疗T2DM的基础研究已取得显著进展,其作用机制可能与中医药调控了Janus激酶(JAK)/信号转导与转录... 详细信息

2型糖尿病(T2DM)及其慢性并发症,是引起糖尿病患者致残、致死的主要原因,中药治疗本病具有疗效显著、复发率低等优势。近年来运用中医药治疗T2DM的基础研究已取得显著进展,其作用机制可能与中医药调控了Janus激酶(JAK)/信号转导与转录激活因子(STAT)信号通路有关。本文通过阐述JAK/STAT信号通路与T2DM的联系,并归纳总结中药提取物及复方通过调节该信号通路干预T2DM的研究进展,以期为T2DM治疗药物的临床应用及新药物研发提供参考。

关键词： 2型糖尿病及其慢性并发症 Janus激酶/信号转导和转录激活因子信号通路中药

敦煌医方大泻肺汤对肺炎的体外活性及其作用机制的化学生物信息学分析

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中国现代应用药学 2024年第7期41卷 871-886页

作者：林佳靳晓杰李程豪王锐峰后叶虎张依茜刘昊张敏姚娟李金田刘永琦甘肃中医药大学药学院兰州730000 甘肃中医药大学西北中藏药省部共建协同创新中心兰州730000 甘肃中医药大学甘肃省高校重大疾病分子医学与中医药防治研究重点实验室兰州730000 甘肃中医药大学敦煌医学与转化教育部重点实验室兰州730000

目的利用化学生物信息学探讨敦煌医方大泻肺汤防治肺炎的有效性、作用机制及功效组配伍特点。方法通过细胞实验研究大泻肺汤冻干粉溶液对肺上皮细胞增殖活性的影响。根据药味功效将方子分为清热、化痰、养阴3个功效组。利用TCMSP数据库... 详细信息

目的利用化学生物信息学探讨敦煌医方大泻肺汤防治肺炎的有效性、作用机制及功效组配伍特点。方法通过细胞实验研究大泻肺汤冻干粉溶液对肺上皮细胞增殖活性的影响。根据药味功效将方子分为清热、化痰、养阴3个功效组。利用TCMSP数据库和文献检索获取大泻肺汤化学成分,并在Swiss Target Prediction数据库预测其作用靶点。借助DrugBank、TTD、Genecards及DisGeNET数据库检索肺炎疾病靶点。采用STRING数据库和Cytoscape构建交集靶点互作网络和“药味-成分-靶点-通路”网络,DAVID数据库进行KEGG通路富集分析,分析功效分组配伍规律的科学内涵。利用Schr?dinger软件进行分子对接评估靶点-化合物亲和力,分子动力学模拟探究动态分子机制。结果细胞实验显示大泻肺汤能够维持肺上皮细胞增殖、逆转LPS诱导的肺上皮细胞线粒体活性降低和减少细胞凋亡。复杂网络分析结果显示大泻肺汤3个功效组富集的通路主要分布于炎症调节和降低气道黏液高分泌2个模块,各模块间通过共有靶标基因联结又各有侧重。分子对接结果显示化合物槲皮素、黄芩素、异鼠李素等可能是大泻肺汤起效的多靶点成分,SRC、EGFR、PPARA等靶点与各个潜在活性化合物之间的亲和力较好,可能是大泻肺汤防治肺炎的潜在作用靶点。分子动力学模拟结果显示潜在活性化合物槲皮素与其靶蛋白SRC形成了稳定的分子间作用。结论本研究初步揭示了大泻肺汤防治肺炎的物质基础和分子机制,并探讨了大泻肺汤不同功效组协同防治肺炎的科学内涵,为其现代化开发和临床推广提供化学生物信息学参考。

关键词：敦煌医方大泻肺汤肺炎复杂网络分析化学生物信息学作用机制

槲皮素介导MAPK信号通路防治骨质疏松的研究现状

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中国临床药理学杂志 2024年第9期40卷 1375-1379页

作者：袁可馨谢兴文李鼎鹏景义生黄委委王薛涛杨浩东闫文马宏武甘肃中医药大学中医临床学院甘肃兰州730000 甘肃中医药大学附属医院老年骨科甘肃兰州730000 甘肃省第二人民医院骨科甘肃兰州730000

槲皮素可介导丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号通路防治骨质疏松(OP)。本文通过综合国内外最新研究,系统讨论了MAPK与骨质疏松相关细胞的相互关系,同时阐述了槲皮素介导MAPK信号通路防治OP的研究进展,以期能为OP临床防治及槲皮素的深度开... 详细信息

槲皮素可介导丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号通路防治骨质疏松(OP)。本文通过综合国内外最新研究,系统讨论了MAPK与骨质疏松相关细胞的相互关系,同时阐述了槲皮素介导MAPK信号通路防治OP的研究进展,以期能为OP临床防治及槲皮素的深度开发提供有效依据。

关键词：槲皮素骨质疏松裂原活化蛋白激酶信号通路成骨细胞破骨细胞

从下丘脑-垂体-性腺轴探析补肾法治疗2型糖尿病生精障碍的思路

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中国全科医学 2024年

作者：卢威杨云松林连美刘琼赵敏李佳梁凤霞吴松湖北中医药大学基础医学院湖北中医药大学中医临床学院针灸治未病湖北省协同创新中心湖北中医药大学针灸骨伤学院

糖尿病（DM）高血糖病理状态是导致男性生精障碍的重要因素之一，下丘脑-垂体-性腺（HPG轴是人体全身植物性功能、神经内分泌网络的重要枢纽，生理上主导人类生殖及生长发育，病理上又可受到DM高血糖病理状态的影响，是2型糖尿病（T2DM... 详细信息

糖尿病（DM）高血糖病理状态是导致男性生精障碍的重要因素之一，下丘脑-垂体-性腺（HPG轴是人体全身植物性功能、神经内分泌网络的重要枢纽，生理上主导人类生殖及生长发育，病理上又可受到DM高血糖病理状态的影响，是2型糖尿病（T2DM）生精障碍的发生发展过程中的关键机制之一，肾虚是生精障碍和T2DM共同的病因病机。肾藏精所体现的“主生殖、生髓充脑”功能与HPG轴功能相似，补肾法对HPG轴功能具有调节改善作用，为补肾法治疗T2DM生精障碍奠定理论基础。补肾经典方剂在治疗DM与生精障碍上相得益彰，为临床以补肾法防治T2DM生精障碍之不育症提供了思路和方法。

关键词：下丘脑-垂体系统糖尿病,2型生精障碍补肾理论探讨