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马铃薯Y病毒两个黑龙江烟草分离物的全基因组序列分析

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中国烟草学报 2019年第3期25卷 67-75页

作者：姜瀚林程林发姜鹏超郭兆奎刘永中李向东山东农业大学植物保护学院 271018 山东潍坊烟草有限公司安丘分公司 262133 黑龙江省烟草科学研究所 150076

为明确黑龙江烟区马铃薯 Y 病毒(Potato virus Y,PVY)分子株系和进化特征,从哈尔滨和牡丹江感病烟草采集到Harbin 和 MDJ 两个样品,通过 RT-PCR 扩增了其全基因组序列,并进行了一致率、重组、系统发育和选择压力等分析。结果表明,2 个... 详细信息

为明确黑龙江烟区马铃薯 Y 病毒(Potato virus Y,PVY)分子株系和进化特征,从哈尔滨和牡丹江感病烟草采集到Harbin 和 MDJ 两个样品,通过 RT-PCR 扩增了其全基因组序列,并进行了一致率、重组、系统发育和选择压力等分析。结果表明,2 个分离物(GenBank 登录号分别为 MH933741 和 MH933742)基因组全长均为 9699 核苷酸。Harbin 与 MDJ 和比利时分离物 GBVC 26(JQ969039)一致率最高,为 98.5%;MDJ 与 Harbin 和 GBVC 26 一致率最高,为 98.5%。Harbin 是美国分离物 Oz和瑞士分离物 N-605 的重组体,MDJ 是美国分离物 CW 和 N-605 的重组体。利用全基因组序列构建的系统进化树显示,PVY 分离物分为 9 个组,Harbin 和 MDJ 均属 PVYN-Wi 组。PVY 的 11 个基因均处于负选择,其中 NIa 蛋白基因的选择压力最大。

关键词：马铃薯Y 病毒基因组全序列系统发育分析重组分析

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瑞氏木霉表达黑曲霉葡萄糖氧化酶

生物工程学报 2006年第1期22卷 82-86页

作者：母敬郁王峤杨纯中王恩思王清黄跃吉林大学药学院长春130021 微星生物技术公司

利用高表达分泌纤维素酶的真菌瑞氏木霉表达重组的黑曲霉葡萄糖氧化酶。在大肠杆菌DH5α中构建瑞氏木霉纤维素酶CBHI启动子和CBHI信号肽基因黑曲霉葡萄糖氧化酶基因瑞氏木霉纤维素酶CBHI终止子构巢曲霉的甘油醛3磷酸脱氢酶启动子大肠杆... 详细信息

利用高表达分泌纤维素酶的真菌瑞氏木霉表达重组的黑曲霉葡萄糖氧化酶。在大肠杆菌DH5α中构建瑞氏木霉纤维素酶CBHI启动子和CBHI信号肽基因黑曲霉葡萄糖氧化酶基因瑞氏木霉纤维素酶CBHI终止子构巢曲霉的甘油醛3磷酸脱氢酶启动子大肠杆菌抗潮霉素B磷酸转移酶基因构巢曲霉色氨酸C终止子pUC19(命名为pCBHGOD)质粒,线性化后用瑞氏木霉纤维素酶CBHI启动子和CBHI信号肽基因黑曲霉葡萄糖氧化酶基因瑞氏木霉纤维素酶CBHI终止子构巢曲霉的甘油醛3磷酸脱氢酶启动子大肠杆菌抗潮霉素B磷酸转移酶基因构巢曲霉色氨酸C终止子(命名为CBHGOD)核酸片段转化瑞氏木霉QM9414原生质体。用PCR扩增方法筛选出同源重组葡萄糖氧化酶基因的瑞士木霉突变株。用麦杆诱导瑞氏木霉突变株,生产黑曲霉葡萄糖氧化酶,Westernblot分析重组的葡萄糖氧化酶分子量与Sigma公司的天然黑曲霉葡萄糖氧化酶一致,生产的重组酶活性25umL,相当于Sigma公司葡萄糖氧化酶标准品的产量为0.5gL。瑞氏木霉可用于生产黑曲霉葡萄糖氧化酶。

关键词：瑞氏木霉黑曲霉葡萄糖氧化酶同源重组

肺腺癌组织EGFR外显子19基因突变的实时定量PCR检测

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肿瘤 2006年第7期26卷 596-601页

作者：董强刚刘刚黎飒李建璋苏建中贯剑上海奇诺肿瘤生物高新技术有限公司上海200032

目的:应用实时定量PCR技术建立上皮生长因子受体(EGFR)外显子19基因突变的检测新方法。方法:根据Taqman原理设计了外显子19特异性引物和探针,经过优化形成试剂盒后检测了61例肺腺癌组织中的EGFR外显子19基因突变,并将结果与基因测序进... 详细信息

目的:应用实时定量PCR技术建立上皮生长因子受体(EGFR)外显子19基因突变的检测新方法。方法:根据Taqman原理设计了外显子19特异性引物和探针,经过优化形成试剂盒后检测了61例肺腺癌组织中的EGFR外显子19基因突变,并将结果与基因测序进行对比分析。结果:本方法对22种EGFR外显子19基因突变均具有高度特异性,其最低检测限度为10个外显子19基因拷贝或3ng组织DNA,当突变型DNA占野生型DNA含量的20%或以上时,检测结果具有良好的分辨率。本诊断试剂在4℃保存4d仍性能稳定,批次间实验误差小于10%。在61例肺腺癌组织中,45例野生型组织的ABP/SYB比值为1.437±0.707,而16例突变型组织的比值为0.631±0.280,二组间差异具有统计学显著意义(P<0.001)。若以ABP/SYB比值<0.800作为外显子19基因突变的检测临界值,则定量PCR检测与基因测序结果完全相符。结论:实时定量PCR方法具有特异性好、敏感性高、简便易行等优点,有助于从肺癌患者中快速筛选EGFR抑制剂合适的治疗对象,便于合理用药。

关键词：肺肿瘤腺癌上皮生长因子受体基因突变诊断实时定量多聚酶链反应

乙脑/登革2型嵌合病毒的构建及其作为疫苗候选株的初步检定

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中国生物制品学杂志 2018年第12期31卷 1300-1304页

作者：牟建超范凤鸣陈智冯劲松何婷杨欢杨会强曾献武刘杰成都生物制品研究所有限责任公司

目的构建以乙脑疫苗株sa14-14-2为基因骨架的乙脑/登革2型嵌合病毒,并进行初步检定,分析其作为疫苗候选株的可行性。方法用登革病毒(dengue virus,DENV)减毒株PDK53 prME基因替换乙脑病毒疫苗株sa14-14-2的相应区域,构建乙脑/登革2型嵌... 详细信息

目的构建以乙脑疫苗株sa14-14-2为基因骨架的乙脑/登革2型嵌合病毒,并进行初步检定,分析其作为疫苗候选株的可行性。方法用登革病毒(dengue virus,DENV)减毒株PDK53 prME基因替换乙脑病毒疫苗株sa14-14-2的相应区域,构建乙脑/登革2型嵌合病毒全长克隆质粒,通过体外转录、转染原代地鼠肾(PHK)细胞,拯救出乙脑/登革2型嵌合病毒,并分析该嵌合病毒的蚀斑特征、增殖特征、神经毒力和神经侵袭力、免疫原性及免疫攻击保护作用。结果构建的嵌合病毒比乙脑疫苗株sa14-14-2具有更小的蚀斑,在PHK细胞上具有更低的增殖能力;对成鼠无神经毒力和神经侵袭力;可诱导小鼠产生较高的中和抗体效价,且免疫8周后,中和抗体滴度无明显下降(P> 0. 05);能保护小鼠免受致死剂量DENV的脑内攻击。结论本实验制备的嵌合病毒具有良好的安全性、免疫原性及免疫保护作用,有望作为登革疫苗候选株。

关键词：乙型脑炎病毒登革病毒嵌合疫苗神经毒力免疫原性免疫保护

小麦OXR基因家族全基因组生物信息学及表达分析

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分子植物育种 2022年

作者：李寒夏鹏亮唐艳红郑涛马东方李艳长江大学农学院湿地生态与农业利用教育部工程研究中心湖北省烟草公司恩施市分公司

为研究小麦（Triticum aestivum）抗氧化基因家族功能，本研究对普通小麦中的抗氧化基因OXR进行筛选和序列分析，并对其表达模式进行研究。结果表明，普通小麦含有15个OXR基因，根据基因保守基序可以分为4组；结构域分析表明，这15个OX...

为研究小麦（Triticum aestivum）抗氧化基因家族功能，本研究对普通小麦中的抗氧化基因OXR进行筛选和序列分析，并对其表达模式进行研究。结果表明，普通小麦含有15个OXR基因，根据基因保守基序可以分为4组；结构域分析表明，这15个OXR基因都含有TLDc保守结构域。蛋白质特征显示，15个TaOXRs为亲水性蛋白质，而且86%为不稳定蛋白质。亚细胞定位推测TaOXR主要存在于细胞核中。基因重复事件显示TaOXR全部为片段重复。转录组分析表明，TaOXR基因的表达量与过氧化氢(H;O;)密切相关。qRT-PCR结果显示TaOXR1.6A和TaOXR2.5D能够一定程度上响应氧化胁迫，并且通过调控水杨酸（salicylic acid， sa）途径增强植物的免疫力。本研究为揭示小麦OXR基因的进化机制及其调控功能提供了科学依据。

关键词：

上皮生长因子受体外显子21基因突变L858R的实时定量PCR检测

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肿瘤 2007年第2期27卷 150-154页

作者：董强刚李建璋黎飒刘刚苏建中贯剑上海交通大学肿瘤研究所上海奇诺肿瘤生物高新技术有限公司上海200032 上海奇诺肿瘤生物高新技术有限公司

目的应用实时定量PCR技术建立上皮生长因子受体(epidermal growth factor receptor,EGFR)外显子21基因突变L858R的检测新方法。方法根据Taqman-MGB原理设计野生型外显子21和L858R特异性探针,经过优化制备成试剂盒检测171例肺癌组织中的L... 详细信息

目的应用实时定量PCR技术建立上皮生长因子受体(epidermal growth factor receptor,EGFR)外显子21基因突变L858R的检测新方法。方法根据Taqman-MGB原理设计野生型外显子21和L858R特异性探针,经过优化制备成试剂盒检测171例肺癌组织中的L858R基因突变,并将结果与基因测序进行对比分析。结果171例肺癌组织经基因测序共检出L858R突变15例,突变率为8.8%。突变多见于女性、肺腺癌及腺鳞癌。定量PCR检测显示,15例突变型组织的R值平均为0.840±0.223,而156例野生型组织的R值平均为1.552±0.278,两组间差异具有统计学显著意义(P<0.001)。此外,以突变型为主的肺癌组织其R值(0.613±0.137)显著低于野生型占优势组织(0.992±0.103),两组间差异极为显著(P<0.001)。实验证明,定量PCR检测方法对L858R基因突变具有高度特异性,其最低检测限度为突变型DNA占野生型DNA含量的12.5%。结论本方法检测EGFR基因L858R突变具有敏感性高、特异性好、简便快速等优点,应用本方法不仅可以对野生型EGFR外显子21或突变型L858R进行诊断,而且还可以根据R值判断样本中突变型基因的比例。

关键词：肺肿瘤癌,非小细胞肺受体,表皮生长因子 DNA突变分析试剂盒,诊断分子诊断技术

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乙脑风疹联合减毒活疫苗病毒间的相容性

中国生物制品学杂志 2012年第10期25卷 1258-1260页

作者：吕文利王凌赵新华俞娟明平刚武汉生物制品研究所有限责任公司乙脑疫苗室武汉430060

目的研究乙脑风疹联合减毒活疫苗中乙脑病毒和风疹病毒的相容性。方法将乙脑病毒sa14-14-2疫苗株制备的乙脑减毒活疫苗原液与风疹病毒RA27/3疫苗株制备的风疹减毒活疫苗原液按体积比1∶1比例混合,加入保护剂,冻干制成乙脑风疹联合减毒... 详细信息

目的研究乙脑风疹联合减毒活疫苗中乙脑病毒和风疹病毒的相容性。方法将乙脑病毒sa14-14-2疫苗株制备的乙脑减毒活疫苗原液与风疹病毒RA27/3疫苗株制备的风疹减毒活疫苗原液按体积比1∶1比例混合,加入保护剂,冻干制成乙脑风疹联合减毒活疫苗。采用BHK21细胞蚀斑法测定联合疫苗中的乙脑病毒滴度,细胞病变法检测风疹病毒滴度;通过鉴别试验、热稳定性试验、乙脑疫苗免疫原性试验、安全性试验、异常毒性试验、无菌试验以及基因稳定性分析观察联合疫苗病毒间的相容性。结果联合疫苗的乙脑和风疹病毒滴度与单价疫苗的病毒滴度变化在检测误差的允许范围内;联合疫苗于37℃放置7 d,与放置前相比,风疹病毒和乙脑病毒的滴度值下降分别小于1.0 LgCCID50/ml和1.0 LgPFU/ml,符合《中国药典》三部(2010版)要求;联合疫苗中的风疹疫苗对乙脑疫苗的免疫原性无明显的干扰效应;鉴别试验、安全性试验、异常毒性试验、无菌试验结果均符合《中国药典》三部(2010版)要求;联合疫苗在BHK21细胞上传代5次后,乙脑和风疹病毒基因序列均未发生变化。结论乙脑风疹联合减毒活疫苗中的乙脑和风疹病毒具有较好的相容性,本实验为乙脑风疹联合疫苗的进一步研制奠定了基础。

关键词：风疹减毒活疫苗乙型脑炎减毒活疫苗联合疫苗免疫原性相容性

烟草HPL基因的生物信息学分析与抗逆功能分析

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河南农业科学 2021年第2期50卷 50-57页

作者：杨立均鲁雅雯丁超金维环郭红祥河南省烟草公司驻马店市公司河南驻马店463000 河南农业大学生命科学学院河南郑州450002

为了探究烟草脂氢过氧化物裂解酶(HPL)的功能,以烟草叶片cDNA为模板克隆HPL基因,获得过表达NtHPL转基因烟株进行抗逆性功能研究。结果表明,NtHPL基因包含1个内含子和2个外显子,其cDNA全长为1494 bp;NtHPL蛋白的C-端具有细胞色素P450蛋... 详细信息

为了探究烟草脂氢过氧化物裂解酶(HPL)的功能,以烟草叶片cDNA为模板克隆HPL基因,获得过表达NtHPL转基因烟株进行抗逆性功能研究。结果表明,NtHPL基因包含1个内含子和2个外显子,其cDNA全长为1494 bp;NtHPL蛋白的C-端具有细胞色素P450蛋白家族的保守序列,N-端含有叶绿体转运肽;NtHPL在根、茎、叶中均有表达,叶中的表达量最高;机械损伤、茉莉酸甲酯(MeJA)、水杨酸(sa)、乙烯、脱落酸(ABA)和干旱胁迫能不同程度地提高叶片NtHPL的表达水平;干旱处理后,NtHPL转基因烟株的脯氨酸含量明显高于野生型K326,丙二醛(MDA)含量、过氧化物酶(POD)和超氧化物歧化酶(SOD)活性低于野生型K326。以上结果表明,NtHPL能够提高烟株的抗旱能力,可用于烟草抗旱品种的培育。

关键词：烟草脂氢过氧化物裂解酶(HPL) 基因克隆生物信息学抗旱

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玉米ZmMYC2基因的克隆及功能分析

作物学报 2023年第12期49卷 3387-3398页

作者：杜明陈明超方玉武健东上海中科荃银分子育种技术有限公司上海200030 安徽荃银高科种业股份有限公司安徽合肥230088 安徽农业大学/作物抗逆育种与减灾国家地方联合工程实验室安徽合肥230036

植物在生长发育过程经常受到病原菌的侵害,严重影响作物产量。MYC2属于bHLH家族转录因子,在茉莉酸介导的信号途径中有着重要的调控作用。在前期工作中,通过对MYC家族进化树分析,找到了与拟南芥同源的玉米基因ZmMYC2。本研究克隆了ZmMYC2... 详细信息

植物在生长发育过程经常受到病原菌的侵害,严重影响作物产量。MYC2属于bHLH家族转录因子,在茉莉酸介导的信号途径中有着重要的调控作用。在前期工作中,通过对MYC家族进化树分析,找到了与拟南芥同源的玉米基因ZmMYC2。本研究克隆了ZmMYC2,该基因全长2118 bp,编码705个氨基酸残基,其编码蛋白定位于细胞核。RT-qPCR分析表明,ZmMYC2在玉米各个组织中均有表达,但在叶中的表达量最高。诱导表达模式分析表明,ZmMYC2可以响应茉莉酸(jasmonic acid,JA)、水杨酸(salicylic acid,sa)和乙烯(ethylene,ETH)的诱导。在50μmol L–1茉莉酸处理的培养基上,过表达拟南芥的根长显著短于野生型,突变体拟南芥的根长显著长于野生型,回补材料拟南芥根长与野生型无明显差异。对过表达ZmMYC2拟南芥材料接种丁香假单胞杆菌(psedumonas syrinage *** DC3000,Pst DC3000),野生型、突变体和回补拟南芥相对于过表达表现出较好的状态,推测ZmMYC2降低了拟南芥对病原菌侵害的防御能力。接种前,外源施加茉莉酸激素,过表达拟南芥叶片死亡面积和叶内含菌量均有所减少,茉莉酸激素增强了ZmMYC2对病原菌侵害的抵抗能力。亚细胞定位显示,ZmMYC2为核定位蛋白。酵母双杂交表明ZmMYC2可以与JAZ蛋白中的JAZ1和JAZ3相互作用。茉莉酸、水杨酸和防御基因以及细胞程序性死亡基因的表达量分析表明,ZmMYC2负调控PDF1.2的表达,正调控PR1、MED25、COI1以及细胞程序性死亡基因HIN1的表达。综上所述,ZmMYC2通过与JAZ1和JAZ3相互作用,参与茉莉酸信号的转导作用,降低了拟南芥对病原菌胁迫的抵抗能力。

关键词：玉米 ZmMYC2 病原菌防御茉莉酸