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鲟致病性类志贺邻单胞菌的鉴定及药物敏感性

微生物学报 2013年第7期53卷 723-729页

作者：王小亮徐立蒲曹欢王静波王姝北京市水产技术推广站北京100021

【目的】2012年夏季北京地区多地养殖的鲟鱼发病,主要临床症状为肛门红肿、伴有黄色分泌物,腹腔内有大量腹水,腹腔内壁有出血点,肝脏点状出血,脾脏肿大等,累计死亡率达60%。本文目的为研究其病原。【方法】从具有临床症状的濒死鱼中分... 详细信息

【目的】2012年夏季北京地区多地养殖的鲟鱼发病,主要临床症状为肛门红肿、伴有黄色分泌物,腹腔内有大量腹水,腹腔内壁有出血点,肝脏点状出血,脾脏肿大等,累计死亡率达60%。本文目的为研究其病原。【方法】从具有临床症状的濒死鱼中分离病原菌,分析病原菌的形态特征、理化特性、分类地位及药物敏感性等特性,经过人工感染及引起的组织病理确认致病性。【结果】结果显示病原菌的16S rDNA序列构建的进化树,与类志贺邻单胞菌同源性最高,在99%以上;结合其生理生化特征和API细菌鉴定系统的结果,确认为类志贺邻单胞菌。该菌对鲟鱼的半致死量LD50为1.0×105.8CFU/mL,引起肝、肾和脾组织病变。胞外产物不具有淀粉酶、蛋白酶、脂肪酶和明胶酶活性,也无溶血性,推测其毒性可能来源于内毒素。该菌对恩诺沙星、盐酸多西环素、氟苯尼考和甲枫霉素敏感,药物敏感浓度均小于2μg/mL;而对试验的其它抗菌药物不敏感。【结论】确认类志贺邻单胞菌是引起北京地区鲟鱼发生上述临床症状疾病的主要致病菌,可优选盐酸多西环素、氟苯尼考和恩诺沙星进行防治。

关键词：鲟鱼类志贺邻单胞菌致病性药敏

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我国北方地区鲤浮肿病毒的流行情况调查与监测分析

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水生生物学报 2018年第5期42卷 935-941页

作者：徐立蒲王小亮李清王立新曹欢王姝张文潘勇王静波北京市水产技术推广站北京100176 全国水产技术推广总站北京100125

为进一步确认及掌握鲤浮肿病毒(Carp Edema Virus,CEV)目前的流行现状和流行特点,于2017年重点调查了我国北方地区5省市26个正发生或曾经发生"鲤急性烂鳃病"的养殖场,随机监测了9个省市的97家鲤和锦鲤养殖场。样品采用实时荧光定量PCR(Q... 详细信息

为进一步确认及掌握鲤浮肿病毒(Carp Edema Virus,CEV)目前的流行现状和流行特点,于2017年重点调查了我国北方地区5省市26个正发生或曾经发生"鲤急性烂鳃病"的养殖场,随机监测了9个省市的97家鲤和锦鲤养殖场。样品采用实时荧光定量PCR(Quantitative real time PCR,q PCR)法和套式PCR(Nest PCR)方法进行检测,nest PCR法扩增出的产物进行测序和基因分析。结果重点调查的26家养殖场中有20个为CEV阳性,1个为锦鲤疱疹病毒(Koi Herpes Virus,KHV)阳性,1个为孢子虫感染。随机调查的97家养殖场中有50家为CEV检测阳性,阳性率高达52%;可测序的CEV毒株均属于GenogroupⅡa型;样品按不同地区、不同采样水温、不同品种、不同规格鱼等划分,各组均有CEV阳性检出,但检出率均无显著差异。以上结果表明CEV感染是多省市"鲤急性烂鳃病"暴发的主要病因。另外,该病毒病的流行水温在12—27℃。

关键词：鲤锦鲤鲤浮肿病毒流行情况监测

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山瑞鳖细菌性败血症病原菌的分离鉴定及其毒力基因检测

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水产学报 2017年第9期41卷 1443-1454页

作者：韩书煜梁静真覃志彪黄艳华韦慕兰蒙兰丽黄维胡大胜黄钧广西水产技术推广总站广西大学动物科学技术学院钦州市水产技术推广站广西水生动物病害诊断实验室都安瑶族自治县水产技术推广站田东县水产技术推广站

查明广西南宁、贵港和桂平养殖山瑞鳖细菌性败血症的病原菌及其6种毒力基因的携带情况,为有效防控山瑞鳖细菌性败血症提供参考。本研究以常规方法从患病山瑞鳖的心脏和肝脏取样、分离细菌,人工感染方法确定分离菌株的致病性,细菌鉴定采... 详细信息

查明广西南宁、贵港和桂平养殖山瑞鳖细菌性败血症的病原菌及其6种毒力基因的携带情况,为有效防控山瑞鳖细菌性败血症提供参考。本研究以常规方法从患病山瑞鳖的心脏和肝脏取样、分离细菌,人工感染方法确定分离菌株的致病性,细菌鉴定采用API 20NE生化鉴定和16S rRNA分子鉴定相结合的方法进行,PCR扩增法对菌株的溶血素基因(hemolysin gene,hly)、气溶素基因(aerolysin gene,Aer)、细胞兴奋性肠毒素基因(cytotonic enterotoxin gene,Alt)、细胞毒性肠毒素基因(cytotoxic enterotoxin gene,Act)、黏附素基因(major adhesin gene,ahal)和丝氨酸蛋白酶基因(serine protease gene,ahp)6种毒力基因进行检测。结果显示,从患病山瑞鳖心脏和肝脏中共分离到4株优势菌SRB125、SRB142、SRB143和SRB345,对健康山瑞鳖的平均致死率为97.50%~100.00%,是引起山瑞鳖细菌性败血症的病原菌;生化和分子鉴定结果显示,4株分离菌均为嗜水气单胞菌(Aeromonas hydrophila),与*** L3-5(KP716701)菌株的亲缘关系最近,同源相似性均达到99.9%;6种毒力基因共包含2种毒力基因型,在4株菌株中的分布为hly~+Aer~+Alt~+Act~+ahal~+ahp~+和hly~+Aer~+Alt~+Act~+ahal~+ahp~–各2株,来源于南宁的SRB143和桂平的SRB345菌株均缺失ahp基因。

关键词：山瑞鳖细菌性败血症嗜水气单胞菌毒力基因

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海水鱼刺激隐核虫病防治一例

科学养鱼 2012年第10期34卷 62-63页

作者：车南青简贺君杨健广东茂名市水产技术推广中心站肇庆市水产技术推广中心电白县水产技术推广站 525000

2012年7月6日上午,茂名市水东湾鱼排一张姓养殖户所养海水鱼暴发病害。7日,茂名市水产技术推广中心站组织技术员抵达现场,了解情况,解剖病鱼并调查取样。

关键词：刺激隐核虫病海水鱼防治水产技术推广调查取样茂名市养殖户水东湾

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鲤浮肿病毒和锦鲤疱疹病毒双重实时荧光定量PCR检测方法的建立

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病毒学报 2018年第6期34卷 889-895页

作者：张文徐立蒲吕晓楠王小亮曹欢王姝王静波北京市水产技术推广站

为了建立可同时检测鲤浮肿病毒(Carp edema virus,CEV)和锦鲤疱疹病毒(Kio herpesvirus,KHV)的检测方法,本研究根据CEV P4a基因保守序列,对英国环境、渔业水产养殖研究中心(Center for Environment,Fisheries and Aquaculture Science,CEFAS)设计合成的引物序列进行优化,合成1对特异性引物和1条用FAM荧光基团标记的TaqMan探针;根据KHV ORF7基因保守序列,设计筛选1对特异性引物和1条用VIC荧光基团标记的TaqMan探针。优化反应条件,建立了CEV和KHV双重实时荧光定量PCR检测方法。结果显示该方法特异性强,与其它水生动物病毒无交叉反应;灵敏度高,对CEV和KHV的检测限均为15拷贝数/μL;组内重复与组间重复的平均变异系数小于3%。本研究建立的方法具有快速、特异、敏感等优点,可用于CEV和KHV的快速检测。

关键词：鲤浮肿病毒(CEV) 锦鲤疱疹病毒(KHV) 双重实时荧光定量PCR

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