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扁桃体间充质干细胞免疫学特性的初步研究

中华整形外科杂志 2015年第1期31卷 43-48页

作者：丁刚魏立梅孙伟元张丽潍坊医学院附属益都中心医院口腔科青州262500 潍坊医学院附属益都中心医院耳鼻咽喉科青州262500

目的探讨扁桃体间充质干细胞（tonsil mesenchymal stem cells,TMSCs）的免疫学特性及机制.方法取慢性扁桃体炎患儿的扁桃体组织,分离、培养TMSCs,通过流式细胞术检测HLA-Ⅰ、HLA-Ⅱ、CD80、CD86等免疫分子的表达情况.以牙周膜干细胞... 详细信息

目的探讨扁桃体间充质干细胞（tonsil mesenchymal stem cells,TMSCs）的免疫学特性及机制.方法取慢性扁桃体炎患儿的扁桃体组织,分离、培养TMSCs,通过流式细胞术检测HLA-Ⅰ、HLA-Ⅱ、CD80、CD86等免疫分子的表达情况.以牙周膜干细胞作为对照,观察TMSCs能否引起同种异体外周血单个核细胞（peripheral blood mononuclear cells,PBMCs）的增殖,以及TMSCs对混合淋巴细胞反应（mixed lymphocyte reaction,MLR）和植物血凝素（phytohemagglutinin,PHA）引起的淋巴细胞增殖的影响.建立TMSCs＋PHA＋异体PBMCs、TMSCs＋MLR的培养体系,测定细胞上清液中的犬尿氨酸浓度.在上述反应体系进行中和实验,观察被TMSCs抑制了的淋巴细胞重新发生增殖的情况.每个实验重复3次,每组6个佯本.统计学方法采用方差分析,P ＜0.05为差异有统计学意义.结果 TMSCs表达HLA-Ⅰ,但不表达HLA-Ⅱ和共刺激分子CD80、CD86.TMSCs与异体PBMCs共培养5d后,刺激指数为1.38±0.26,而单纯PBMCs培养5d后的刺激指数为1.22±0.28,2组差异无统计学意义（P＞0.05）,证实TMSCs不会引起异体PBMCs增殖.TMSCs与异体PBMCs、PHA共培养5d后,刺激指数分别为1.49±0.29（TMSCs∶ PBMCs为0.5∶1）和1.23±0.22（TMSCs∶ PBMCs为1∶1）,而PBMCs＋PHA组培养5d后的刺激指数为4.60±0.81,2组之间的差异均有统计学意义（P＜0.05）,说明TMSCs能够抑制PHA引起的淋巴细胞增殖.TMSCs与MLR共培养5d后,刺激指数分别为1.29±0.23（TMSCs∶ PBMCs为0.5∶1）和1.26±0.27（TMSCs∶ PBMCs为1∶1）,而MLR培养5d后的刺激指数为3.04±0.66,2组之间的差异均有统计学意义（P＜0.05）,说明TMSCs能够抑制MLR引起的淋巴细胞增殖.在TMSCs＋PHA＋异体PBMCs、TMSCs＋MLR的培养体系中,犬尿氨酸浓度显著升高,分别为（26.0±2.3） μmol/L和（23.5±4.5）μmol/L.中和实验发现,1-甲基-L-色氨酸基本恢复了被TMSCs抑制的淋巴细胞增殖.结论 TMSCs具有低免疫原性和免疫抑制特性,有望进行同种异体移植.

关键词：扁桃体间质干细胞免疫

染色质解旋酶DNA结合蛋白对舌鳞状细胞癌CAL27细胞侵袭和转移影响的研究

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华西口腔医学杂志 2021年第1期39卷 81-87页

作者：胡凯莉范欣胡温庭李洪利唐清华孙学辉潍坊医学院口腔医学院潍坊261053 潍坊医学院附属医院口腔科潍坊261000 潍坊医学院附属医院口腔颌面外科潍坊261000 潍坊医学院医学研究实验中心潍坊261053

目的探讨染色质解旋酶DNA结合蛋白(CHD1L)影响舌鳞状细胞癌侵袭和转移的分子机制,为临床抑制舌鳞状细胞癌的侵袭和转移提供新的靶点。方法运用Ualcan网站分析CHD1L在正常上皮组织和原发性头颈鳞状细胞癌组织中的表达情况,分析有无淋巴... 详细信息

目的探讨染色质解旋酶DNA结合蛋白(CHD1L)影响舌鳞状细胞癌侵袭和转移的分子机制,为临床抑制舌鳞状细胞癌的侵袭和转移提供新的靶点。方法运用Ualcan网站分析CHD1L在正常上皮组织和原发性头颈鳞状细胞癌组织中的表达情况,分析有无淋巴结转移对头颈鳞状细胞癌组织中CHD1L表达情况的影响;通过GEPIA网站分析CHD1L在头颈鳞状细胞癌中的表达与生存率的关系;蛋白质印迹法检测人舌鳞状细胞癌细胞CAL27和人正常皮肤细胞HaCaT中CHD1L蛋白的表达水平;用RNA干扰质粒敲低人舌鳞状细胞癌细胞CAL27中的CHD1L后,将细胞分别命名为SiCHD1L/CAL27及Scr/CAL27;蛋白质印迹法检测CHD1L在每组细胞中的表达情况;EdU增殖实验检测每组细胞增殖能力的改变;伤口愈合实验检测每组细胞迁移能力的改变;蛋白质印迹法检测上皮间质转化(EMT)标志物上皮钙黏着蛋白和波形蛋白的表达水平。结果Ualcan数据库显示:CHD1L在原发头颈鳞状细胞癌组织中表达高于正常上皮组织中的表达,在出现淋巴结转移的头颈鳞状细胞癌组织中表达更高。GEPIA网站分析显示:CHD1L表达量高的头颈鳞状细胞癌患者总生存率较表达量低的患者明显降低。蛋白质印迹结果显示:人舌鳞状细胞癌细胞CAL27中CHD1L表达高于人正常皮肤细胞HaCaT中CHD1L的表达,敲低CHD1L以后CAL27细胞中CHD1L的表达量明显低于Scr/CAL27组细胞。EdU增殖实验结果显示:SiCHD1L/CAL27组细胞增殖能力明显降低。伤口愈合实验显示:SiCHD1L/CAL27组迁移能力降低,SiCHD1L/CAL27组细胞上皮钙黏着蛋白表达量增加而波形蛋白表达量降低。结论CHD1L促进舌鳞状细胞癌细胞的EMT,促进舌鳞状细胞癌细胞的增殖、迁移侵袭能力。

关键词：舌鳞状细胞癌染色质解旋酶DNA结合蛋白上皮间质转化增殖侵袭

经口间歇管饲联合自拟宣窍利咽汤治疗脑卒中后吞咽障碍的临床疗效

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中华危重病急救医学 2021年第5期33卷 552-556页

作者：潘海英张楠赵晶张军玲李晓云孙锡波潍坊医学院附属益都中心医院神经康复科山东青州262500 潍坊医学院附属益都中心医院神经内科山东青州262500

目的观察经口间歇管饲(IOE)联合宣窍利咽汤治疗脑卒中后吞咽障碍的临床疗效。方法采用前瞻性研究方法,选择2018年1月至2019年12月潍坊医学院附属益都中心医院收治的脑卒中后吞咽障碍患者。按照简单随机法将患者分为对照组和观察组,每组5... 详细信息

目的观察经口间歇管饲(IOE)联合宣窍利咽汤治疗脑卒中后吞咽障碍的临床疗效。方法采用前瞻性研究方法,选择2018年1月至2019年12月潍坊医学院附属益都中心医院收治的脑卒中后吞咽障碍患者。按照简单随机法将患者分为对照组和观察组,每组50例。对照组采用常规吞咽功能训练,包括低频脉冲电刺激、吞咽功能训练及针灸治疗;观察组在对照组基础上加用IOE及自拟宣窍利咽汤加减治疗(方药组成:石菖蒲15 g,远志10 g,天麻15 g,胆南星6 g,白附子6 g,全蝎6 g,僵蚕6 g,苏子10 g,姜半夏10 g,陈皮10 g,生姜3片,水煎服200 mL,早晚分2次服用或鼻饲);两组疗程均为14 d。治疗前后采用标准吞咽功能评定法(SSA)及洼田饮水试验评估患者吞咽功能。观察两组患者吞咽功能改善时间、总住院时间、治疗效果,并进行安全性评估。结果两组患者性别、年龄、病程、脑卒中位置和卒中次数比较差异均无统计学意义,具有可比性。两组治疗后SSA评分均有降低,洼田饮水试验分级有所改善,且观察组SSA评分显著低于对照组(分:19.8±1.8比23.2±3.2,P<0.05),洼田饮水试验恢复程度优于对照组〔完全恢复(例):18比13,基本恢复(例):23比18,有效(例):9比19,χ^(2)=-2.107,P=0.008〕。观察组治疗总有效率显著高于对照组(94.0%比80.0%,Z=4.684,P=0.012),吞咽功能改善时间(d:12.8±2.6比16.9±4.3,t=11.628,P=0.008)和总住院时间(d:20.8±4.2比33.5±5.6,t=10.924,P=0.015)均较对照组明显缩短。观察组IOE操作过程中出现咽喉部不适症状1例,操作结束后症状即消失;丙氨酸转氨酶(ALT)、血尿素氮(BUN)轻度升高各1例,治疗结束后复查肝肾功能各指标均恢复正常。对照组患者无不良症状及肝肾功能受损事件出现。结论IOE联合宣窍利咽汤能够显著改善脑卒中后吞咽障碍患者的吞咽功能,缩短住院时间,提高治疗疗效及生活质量。

关键词：经口间歇管饲宣窍利咽汤吞咽功能障碍脑卒中

甲状旁腺激素受体1在大鼠颞下颌关节炎髁突软骨中的表达变化研究

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中国实用口腔科杂志 2023年第6期16卷 706-712页

作者：杨杰庄欠志于洋王艳霞潍坊医学院附属医院口腔科山东潍坊261000 潍坊市中医院口腔科山东潍坊261000 潍坊医学院口腔医学院山东潍坊261000

目的研究甲状旁腺激素受体1(parathyroid hormone receptor 1,PTH1R)在大鼠颞下颌关节骨关节炎(temporomandibular joint osteoarthritis,TMJOA)髁突软骨中的表达变化。方法研究于2022年7月至2023年1月在潍坊医学院动物实验中心和潍... 详细信息

目的研究甲状旁腺激素受体1(parathyroid hormone receptor 1,PTH1R)在大鼠颞下颌关节骨关节炎(temporomandibular joint osteoarthritis,TMJOA)髁突软骨中的表达变化。方法研究于2022年7月至2023年1月在潍坊医学院动物实验中心和潍坊市口腔生物医学重点实验室进行。选取8周龄健康雄性SD大鼠48只,将大鼠随机分为实验组和对照组,每组各24只。实验组大鼠用咬合升高法构建TMJOA动物模型,并于造模后的第2、4、6、8周分别处死6只大鼠,解剖分离双侧髁突;对照组大鼠仅进行相同时长的张口动作,其余操作与实验组相同。通过苏木精-伊红和番红O-固绿染色,观察大鼠髁突软骨的组织学变化,按照改良Mankin评分系统对大鼠髁突软骨及软骨下骨拍照并评分;再应用实时定量PCR(quantitative real-time PCR,qRT-PCR)和免疫组化染色,检测大鼠髁突软骨内PTH1R mRNA和蛋白的表达情况。结果苏木精-伊红和番红O-固绿染色结果显示,所有时间点对照组髁突软骨的组织学形态具有一致性,而实验组颞下颌关节的炎性改变呈现时间依赖性,且Mankin评分随咬合升高时间的延长而增高;qRT-PCR结果显示,第2、4、6、8周,实验组大鼠髁突软骨中PTH1R mRNA的相对表达量均低于相应对照组,差异均有统计学意义(均P <0.001);免疫组化染色结果显示,随着咬合升高时间的延长,实验组大鼠髁突软骨PTH1R染色强度逐渐减弱;且第2、4、6、8周实验组髁突软骨中PTH1R的积分光密度值均低于相应对照组,差异均有统计学意义(均P <0.05);实验组Mankin评分与PTH1R mRNA相对表达量及积分光密度值均呈负相关关系(均P <0.05)。结论大鼠颞下颌关节炎进展过程中,PTH1R的表达量逐渐下降,与髁突软骨炎症程度呈负相关关系;PTH1R可能是评估炎症进展状态的指标或治疗TMJOA的重要靶点。

关键词：甲状旁腺激素受体1 颞下颌关节炎髁突软骨咬合升高

急性脑梗死患者发生阿司匹林抵抗相关危险因素分析

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临床医学进展 2024年第1期14卷 966-970页

作者：孙锡波高茜王明建刘洪欣李真陈传磊侯爱武潍坊医学院附属益都中心医院神经内科山东潍坊潍坊医学院附属益都中心医院功能检查科山东潍坊

目的:探讨急性脑梗死患者发生阿司匹林抵抗与相关危险因素的关系。方法:潍坊益都市中心医院2022年10月至2023年5月急性脑梗死患者共358名,患者于入院当日开始口服阿司匹林肠溶片100 mg/d,服用阿司匹林10 d后,根据血小板聚集实验结果将... 详细信息

目的:探讨急性脑梗死患者发生阿司匹林抵抗与相关危险因素的关系。方法:潍坊益都市中心医院2022年10月至2023年5月急性脑梗死患者共358名,患者于入院当日开始口服阿司匹林肠溶片100 mg/d,服用阿司匹林10 d后,根据血小板聚集实验结果将患者分为阿司匹林抵抗(Aspirin Resistance, AR)组和阿司匹林敏感(Aspirin sensitivity, AS)组,分别就AR组和AS组的血小板内皮聚集受体1 (Platelet-endothelial aggregation receptor 1, PEAR1)基因型的分布情况、高血压、2型糖尿病、性别、年龄、吸烟、饮酒等数据进行收集。结果:与AS组患者比较,AR组患者在性别、高血压、2型糖尿病、吸烟史等方面差异有统计学意义(P 0.05);AR组PEAR1野生型GG基因频率低于AS组,差异有统计学意义(P < 0.05);AR组PEAR1纯合突变型AA基因频率高于AS组,差异有统计学意义(P < 0.05)。结论:急性脑梗死患者发生阿司匹林抵抗与患者PEAR1基因的多态性、高血压、2型糖尿病、性别和吸烟等因素有关。

关键词：急性脑梗死阿司匹林抵抗 PEAR1基因

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扁桃体间充质干细胞的分离、培养和鉴定

中华创伤杂志 2014年第7期30卷 744-745页

作者：丁刚张丽方军孙伟元汤瑞玲孙婷潍坊医学院附属益都中心医院口腔科青州262500 潍坊医学院附属益都中心医院骨科青州262500 潍坊医学院附属益都中心医院耳鼻咽喉科青州262500

BMSC在体外能够分化为成骨细胞、脂肪细胞、软骨细胞、肌细胞等,是一种良好的种子细胞,在骨组织工程和再生医学中具有广阔的应用前景[1].但是,培养BMSC通常需要抽取骨髓,可引起局部疼痛不适等并发症,且获得的BMSC数量、增殖力、多向分... 详细信息

BMSC在体外能够分化为成骨细胞、脂肪细胞、软骨细胞、肌细胞等,是一种良好的种子细胞,在骨组织工程和再生医学中具有广阔的应用前景[1].但是,培养BMSC通常需要抽取骨髓,可引起局部疼痛不适等并发症,且获得的BMSC数量、增殖力、多向分化潜能随着供体年龄的增长而下降[2].因此,寻找一种取材方便、步骤简单、供者痛苦小的分离间充质干细胞的方法,日益引起研究者的重视.笔者探讨从扁桃体组织中分离、培养间充质干细胞的可行性及其生物学特性.

关键词：间充质干细胞扁桃体分离多向分化潜能鉴定养和 BMSC 骨组织工程

miR-362-3p调控垂体肿瘤转化基因1抑制口腔鳞状细胞癌侵袭及增殖的研究

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华西口腔医学杂志 2024年第1期42卷 46-55页

作者：丁啸陈嘉雯曲鹏宇孙晨雨李洪利胡温庭范欣潍坊医学院附属医院口腔科潍坊261000 潍坊医学院口腔医学院潍坊261053 潍坊医学院医学研究实验中心潍坊261053

目的探讨垂体肿瘤转化基因1(PTTG1)在miR-362-3p作用下对口腔鳞状细胞癌(OSCC)细胞Cal-27、HN-30侵袭以及增殖能力的影响。方法生物信息学在线数据库查询PTTG1在头颈部鳞状细胞癌(HNSCC)中的表达。蛋白质印迹法(Western blot)实验检测PT... 详细信息

目的探讨垂体肿瘤转化基因1(PTTG1)在miR-362-3p作用下对口腔鳞状细胞癌(OSCC)细胞Cal-27、HN-30侵袭以及增殖能力的影响。方法生物信息学在线数据库查询PTTG1在头颈部鳞状细胞癌(HNSCC)中的表达。蛋白质印迹法(Western blot)实验检测PTTG1在Cal-27、HN-30以及HOK细胞系中的表达。划痕愈合实验、Transwell侵袭实验及5-乙炔基-2’脱氧尿嘧啶核苷(EdU)细胞增殖实验检测PTTG1对Cal-27、HN-30细胞迁移、侵袭、增殖的影响。生物信息学在线数据库预测PTTG1的上游miRNA,双荧光素酶实验检测结合情况,实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测该miRNA在组织中的表达。结果ENCORI数据库结果显示PTTG1在OSCC组织中表达上调;Western blot实验显示Cal-27、HN-30细胞中PTTG1表达量较HOK细胞中高。转染Si-PTTG1质粒的Cal-27、HN-30细胞的迁移能力、侵袭能力和细胞增殖能力均较对照组降低(P<0.05)。通过网站预测出PTTG1的上游miRNA为miR-362-3p,双荧光素酶实验检测出PTTG1与miR-362-3p存在结合位点;qRT-PCR检测结果显示miR-362-3p在OSCC肿瘤组织中相对于正常组织表达下调(P<0.05);并且敲低miR-362-3p的表达后能够促进敲低PTTG1后的Cal-27、HN-30侵袭和增殖。结论miR-362-3p可通过靶向PTTG1抑制Cal-27、HN-30细胞侵袭、增殖。

关键词：口腔鳞状细胞癌垂体肿瘤转化基因1 微小RNA 侵袭增殖

牙周膜干细胞对口腔表皮样癌KB细胞增殖影响的研究

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中华肿瘤防治杂志 2015年第7期22卷 502-506页

作者：王建波丁刚王清魏立梅潍坊医学院附属益都中心医院药剂科山东青州262500 潍坊医学院附属益都中心医院口腔科山东青州262500 潍坊市人民医院牙科山东潍坊261041

目的探讨牙周膜干细胞(periodontal ligament stem cells,PDLSCs)对口腔表皮样癌细胞系KB细胞增殖的影响及其机制。方法取拔除的阻生第三磨牙和正畸减数牙,采用酶消化法分离PDLSCs。应用Transwell培养小室将PDLSCs和KB细胞以不同的比例... 详细信息

目的探讨牙周膜干细胞(periodontal ligament stem cells,PDLSCs)对口腔表皮样癌细胞系KB细胞增殖的影响及其机制。方法取拔除的阻生第三磨牙和正畸减数牙,采用酶消化法分离PDLSCs。应用Transwell培养小室将PDLSCs和KB细胞以不同的比例混合培养,建立共培养体系。48h后,应用MTT法观察KB细胞增殖情况。在部分实验的培养体系中加入抗IL-6抗体,同法观察KB细胞增殖。收集共培养48h的KB细胞,通过流式细胞术检测其凋亡情况,RT-PCR法检测其Caspase-3的表达,蛋白质印迹法检测其β-catenin表达情况。收集PDLSCs,采用RT-PCR法检测其IL-6的表达。结果 PDLSCs与KB细胞共培养48h,PDLSCs∶KB细胞数量比为1∶1时,吸光度值为1.33±0.18,与单独KB细胞组的2.65±0.33相比,差异有统计学意义,P=0.041;PDLSCs∶KB细胞数量比为5∶1时,吸光度值为1.06±0.18,与单独KB细胞组相比,差异有统计学意义,P=0.001。表明PDLSCs能够显著抑制KB细胞的增殖。PDLSCs∶KB细胞数量比为1∶1时,KB细胞的凋亡率为(39±5)%,与单独KB细胞组的(15±4)%相比,P=0.022;PDLSCs∶KB细胞数量比为5∶1时,KB细胞的凋亡率为(51±7)%,与单独KB细胞组相比,P=0.001。在PDLSCs与KB细胞的共培养体系中,加入抗IL-6抗体后,PDLSCs抑制KB细胞的增殖作用显著减轻。RT-PCR实验发现,共培养48h后的PDLSCs的IL-6表达升高。蛋白质印迹法检测结果发现,培养48h后的KB细胞β-catenin表达无明显变化。结论 PDLSCs能抑制口腔表皮样癌KB细胞的增殖和促进KB细胞凋亡。

关键词：牙周膜间充质干细胞口腔癌细胞增殖

Toll样受体4对牙周膜干细胞免疫学特性的影响

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中国组织工程研究 2014年第32期18卷 5178-5183页

作者：丁刚魏立梅张丽汤瑞玲潍坊医学院附属益都中心医院口腔科山东省青州市262500

背景:Toll样受体4及其配体脂多糖与牙周疾病的发生、发展密切相关,牙周膜干细胞的免疫学特性在牙周组织修复重建、牙周病的治疗中发挥重要作用,而Toll样受体4及其配体对牙周膜干细胞免疫学特性的影响还不清楚。目的:探讨Toll样受体4对... 详细信息

背景:Toll样受体4及其配体脂多糖与牙周疾病的发生、发展密切相关,牙周膜干细胞的免疫学特性在牙周组织修复重建、牙周病的治疗中发挥重要作用,而Toll样受体4及其配体对牙周膜干细胞免疫学特性的影响还不清楚。目的:探讨Toll样受体4对牙周膜干细胞免疫学特性的影响。方法:分离、培养牙周膜干细胞,与10 mg/L的Toll样受体4配体脂多糖共同培养3 d。以未经脂多糖处理的牙周膜干细胞作为对照,观察脂多糖处理的牙周膜干细胞能否引起同种异体淋巴细胞的增殖,以及对混合淋巴细胞反应和植物血凝素引起的淋巴细胞增殖的影响。通过建立Transwell培养系统建立牙周膜干细胞+植物血凝素+异体外周血单个核细胞的反应体系,测定细胞上清液中的前列腺素E2浓度。在上述反应体系进行中和实验,观察被牙周膜干细胞抑制了的淋巴细胞重新发生增殖的情况。结果与结论:无论是否与脂多糖共培养,牙周膜干细胞都没有引起等量异体外周血单个核细胞增殖,都能够抑制植物血凝素引起的淋巴细胞增殖和混合淋巴细胞反应,但是脂多糖预处理牙周膜干细胞的免疫抑制作用显著低于无脂多糖组。在牙周膜干细胞+植物血凝素+异体外周血单个核细胞的反应体系中,前列腺素E2浓度显著升高。中和实验发现,前列腺素E2的拮抗剂吲哚美辛基本恢复了被牙周膜干细胞抑制的淋巴细胞增殖。提示,脂多糖减弱了牙周膜干细胞的免疫抑制特性,该效应由前列腺素E2减少引起。

关键词：干细胞牙周膜 Toll样受体4 脂多糖类免疫耐受培养牙周膜干细胞 Toll样受体脂多糖免疫原性免疫抑制国家自然科学基金