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miR-362-3p调控垂体肿瘤转化基因1抑制口腔鳞状细胞癌侵袭及增殖的研究

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华西口腔医学杂志 2024年第1期42卷 46-55页

作者：丁啸陈嘉雯曲鹏宇孙晨雨李洪利胡温庭范欣潍坊医学院附属医院口腔科潍坊261000 潍坊医学院口腔医学院潍坊261053 潍坊医学院医学研究实验中心潍坊261053

目的探讨垂体肿瘤转化基因1(PTTG1)在miR-362-3p作用下对口腔鳞状细胞癌(OSCC)细胞Cal-27、HN-30侵袭以及增殖能力的影响。方法生物信息学在线数据库查询PTTG1在头颈部鳞状细胞癌(HNSCC)中的表达。蛋白质印迹法(Western blot)实验检测PT... 详细信息

目的探讨垂体肿瘤转化基因1(PTTG1)在miR-362-3p作用下对口腔鳞状细胞癌(OSCC)细胞Cal-27、HN-30侵袭以及增殖能力的影响。方法生物信息学在线数据库查询PTTG1在头颈部鳞状细胞癌(HNSCC)中的表达。蛋白质印迹法(Western blot)实验检测PTTG1在Cal-27、HN-30以及HOK细胞系中的表达。划痕愈合实验、Transwell侵袭实验及5-乙炔基-2’脱氧尿嘧啶核苷(EdU)细胞增殖实验检测PTTG1对Cal-27、HN-30细胞迁移、侵袭、增殖的影响。生物信息学在线数据库预测PTTG1的上游miRNA,双荧光素酶实验检测结合情况,实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测该miRNA在组织中的表达。结果ENCORI数据库结果显示PTTG1在OSCC组织中表达上调;Western blot实验显示Cal-27、HN-30细胞中PTTG1表达量较HOK细胞中高。转染Si-PTTG1质粒的Cal-27、HN-30细胞的迁移能力、侵袭能力和细胞增殖能力均较对照组降低(P<0.05)。通过网站预测出PTTG1的上游miRNA为miR-362-3p,双荧光素酶实验检测出PTTG1与miR-362-3p存在结合位点;qRT-PCR检测结果显示miR-362-3p在OSCC肿瘤组织中相对于正常组织表达下调(P<0.05);并且敲低miR-362-3p的表达后能够促进敲低PTTG1后的Cal-27、HN-30侵袭和增殖。结论miR-362-3p可通过靶向PTTG1抑制Cal-27、HN-30细胞侵袭、增殖。

关键词：口腔鳞状细胞癌垂体肿瘤转化基因1 微小RNA 侵袭增殖

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二氢槲皮素生物合成研究进展

中国生物工程杂志 2024年第9期44卷 126-140页

作者：廖凯张智萍丁笠陈玥柔张新跃扬州大学生物科学与技术学院扬州225009

二氢槲皮素(dihydroquercetin,DHQ),又名花旗松素,是一种天然二氢黄酮类化合物,因其具有高效抗氧化活性而受到密切关注,被广泛应用于医药、食品和保健品等领域。DHQ的传统生产方式是从植物组织中提取,但受制于原材料来源、生产工艺等因... 详细信息

二氢槲皮素(dihydroquercetin,DHQ),又名花旗松素,是一种天然二氢黄酮类化合物,因其具有高效抗氧化活性而受到密切关注,被广泛应用于医药、食品和保健品等领域。DHQ的传统生产方式是从植物组织中提取,但受制于原材料来源、生产工艺等因素,传统方法在制备DHQ上面临挑战。而以生物合成法为代表的新生产方式将是解决这一问题的关键。有鉴于此,全面总结了DHQ的主要生物合成途径,综述了近年来有关DHQ生物合成研究进展,以期为DHQ的应用开发以及其他类似天然产物的生物合成提供参考。

关键词：二氢榭皮素代谢途径制备方式生物合成生物活性

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藜麦麸皮黄酒和普通黄酒的品质比较

食品工业科技 2024年第6期45卷 254-264页

作者：姜学敏张虹高慧蔡雨情赵雷薛鹏潍坊医学院公共卫生学院山东潍坊261053 潍坊医学院公共卫生检测检验中心山东潍坊261053

为探究加入藜麦麸皮是否会对发酵黄酒的物质组成、风味及其生物活性产生影响。利用传统自制陈伏曲发酵黄酒,设置普通黄酒组和藜麦麸皮黄酒组,利用原子吸收分光光度计测定两组酒样当中的重金属含量,采用液相色谱-质谱联用技术(High-Perfo... 详细信息

为探究加入藜麦麸皮是否会对发酵黄酒的物质组成、风味及其生物活性产生影响。利用传统自制陈伏曲发酵黄酒,设置普通黄酒组和藜麦麸皮黄酒组,利用原子吸收分光光度计测定两组酒样当中的重金属含量,采用液相色谱-质谱联用技术(High-Performance Liquid Chromatography Mass Spectrometer,HPLC-MS)和气相色谱-质谱联用技术(Gas Chromatography-Mass Spectrometer,GC-MS)分析比较两组黄酒的基本理化指标、差异化合物和风味物质,并对黄酒的抗氧化活性进行分析。结果表明,藜麦麸皮黄酒中的总皂苷以及总酚酸含量明显优于普通黄酒,且铅含量低于普通黄酒,两组黄酒中均未检测到黄曲霉毒素B1。两种黄酒中共有48种差异化合物,其中数量最多的为醇类和酰胺类物质,均为10种,其次为酸类物质4种以及糖类物质2种。GC-MS测得挥发性物质共有19种,直接进样有12种,顶空进样有12种,利用外标法一共标定出四种物质,在普通黄酒中的物质为甲酸丁酯、乙酸和丁酸含量分别为5.10±1.10、4.40±1.70、10.80±2.20μg/mL。在藜麦麸皮黄酒中的物质为甲酸丁酯、正丁醇、乙酸和丁酸含量分别是9.00±1.80、7.40±2.10、4.50±1.00、9.50±2.10μg/mL。抗氧化活性方面,藜麦麸皮黄酒和普通黄酒的Fe2+螯合率分别为45.79%和6.51%,酪氨酸酶抑制率分别为94.84%和71.11%,藜麦麸皮黄酒要明显优于普通黄酒。自制藜麦麸皮黄酒和普通黄酒相比,酒体中非挥发性物质以及挥发性的风味物质含量上升,抗氧化性提高。

关键词：黄酒藜麦麸皮差异化合物挥发性风味物质抗氧化活性

基于TCGA数据挖掘及网络药理学探讨卤泛群治疗胶质母细胞瘤的潜在机制

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中国药理学通报 2024年第4期40卷 756-764页

作者：曹振程路畅秦祎雄郭勇韩标桂林医学院智能医学与生物技术学院广西桂林541199 桂林医学院生物化学与分子生物学重点实验室广西桂林541199

目的运用癌症基因图谱(the cancer genome atlas,TCGA)基因组学数据挖掘潜在治疗胶质母细胞瘤的药物卤泛群(halofantrine),通过网络药理学方法探讨卤泛群防治胶质母细胞瘤的作用机制,并结合细胞实验对卤泛群防治胶质母细胞瘤的机制进行... 详细信息

目的运用癌症基因图谱(the cancer genome atlas,TCGA)基因组学数据挖掘潜在治疗胶质母细胞瘤的药物卤泛群(halofantrine),通过网络药理学方法探讨卤泛群防治胶质母细胞瘤的作用机制,并结合细胞实验对卤泛群防治胶质母细胞瘤的机制进行验证。方法通过癌症临床公开数据库TCGA挖掘胶质母细胞瘤发生发展的关键基因,利用CMAP数据库寻找潜在治疗胶质母细胞瘤的药物,借助STITCH、Drug bank、Binding DB、BATMAN-TCM、TargetNet、SwissTarget、PubChem检索药物靶点信息,利用Drug bank、DisGeNET、GeneCards,TDD筛选胶质母细胞瘤靶点。通过Cytoscape构建“药物-活性成分-靶点”可视化网络图,通过进行GO、KEGG和分子对接分析,预测其作用机制。利用CCK-8及qPCR等方法验证卤泛群对胶质母细胞瘤细胞及治疗靶点的作用。结果筛选出潜在治疗胶质母细胞瘤的药物卤泛群,卤泛群有150个作用靶点,胶质母细胞瘤治疗靶点有173个,和药物交集靶点有12个,获得3个核心靶点:EGFR、MAPK14、IGF1R。分子对接结果显示,卤泛群与核心靶点结合的潜能和活性良好。CCK-8和qPCR实验结果表明卤泛群可通过EGFR、MAPK14、IGF1R靶点抑制胶质母细胞瘤细胞增殖。结论卤泛群通过EGFR、MAPK14、IGF1R靶点发挥治疗胶质母细胞瘤的作用。

关键词： TCGA数据库网络药理学胶质母细胞瘤卤泛群分子对接作用机制

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表观遗传调控在植物病原真菌发育和致病过程中的作用与分子机制

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浙江大学学报（农业与生命科学版） 2024年第3期50卷 469-480页

作者：孙子越陶增浙江大学农业与生物技术学院生物技术研究所浙江杭州310058

经过长期进化,植物病原真菌发展出多种复杂而精妙的侵染宿主策略。在植物与病原菌互作过程中,病原菌致病基因的精准表达与调控起至关重要的作用。表观遗传调控是指通过化学修饰改变染色体上的DNA和蛋白质,从而调控基因表达的过程,包括DN... 详细信息

经过长期进化,植物病原真菌发展出多种复杂而精妙的侵染宿主策略。在植物与病原菌互作过程中,病原菌致病基因的精准表达与调控起至关重要的作用。表观遗传调控是指通过化学修饰改变染色体上的DNA和蛋白质,从而调控基因表达的过程,包括DNA甲基化、组蛋白甲基化、组蛋白乙酰化以及染色质重塑等。越来越多的证据表明,表观遗传调控在植物病原真菌基因的转录重编程中发挥重要作用,进而影响其发育、环境应激反应、次生代谢物的生物合成和致病性等方面。本文综述了近年来表观遗传调控因子方面的研究进展,包括组蛋白修饰、染色质重塑等在植物病原真菌发育和致病性中的作用,并对当前的研究进行了展望,以期为未来的病害防治研究奠定坚实的理论基础。

关键词：植物病原真菌组蛋白修饰染色质重塑 DNA/RNA甲基化真菌致病性

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BnaNF-YA2增强甘蓝型油菜渗透胁迫抗性的功能鉴定

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中国油料作物学报 2024年

作者：王高升王佩瑶孙念礼王幼平方玉洁扬州大学生物科学与技术学院

甘蓝型油菜是我国主要的食用植物油来源之一。核因子Y(NF-Y)是植物中非常重要的一类转录因子，其关键组分NF-YA通常与NF-YB/NF-YC二聚体形成三聚体发挥功能，在植物的生长发育和胁迫响应方面都有重要作用。对BnaNF-YA家族成员在甘蓝型... 详细信息

甘蓝型油菜是我国主要的食用植物油来源之一。核因子Y(NF-Y)是植物中非常重要的一类转录因子，其关键组分NF-YA通常与NF-YB/NF-YC二聚体形成三聚体发挥功能，在植物的生长发育和胁迫响应方面都有重要作用。对BnaNF-YA家族成员在甘蓝型油菜响应逆境胁迫中的功能进行分析，可以为培育具有优良抗逆性的油菜新材料提供理论依据。通过对BnaNF-YA2进行生物信息学分析和表达模式分析，创建过表达BnaNF-YA2的甘蓝型油菜，并对过表达植株进行逆境表型鉴定等方法分析BnaNF-YA2在参与油菜非生物胁迫应答中的功能。顺式元件分析结果表明，BnaNF-YA2启动子包含多个胁迫响应元件；表达分析结果显示，BnaNF-YA2受PEG、高温、低温处理诱导表达；过表达BnaNF-YA2改善了甘蓝型油菜在PEG和甘露醇处理条件下的生长状况。BnaNF-YA2正调控甘蓝型油菜对渗透胁迫的耐受性。

关键词：甘蓝型油菜转录因子 NF-YA 渗透胁迫表型鉴定

丹参SmCYP76S7基因的克隆、亚细胞定位和表达分析

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中草药 2024年第13期55卷 4500-4507页

作者：张顺仓刘肖宇邱琳程琪茗马喆晨符婷扬州大学生物科学与技术学院江苏扬州225009

目的克隆获得丹参SmCYP76S7基因序列,并对其进行生物信息学和表达特性分析。方法克隆获得SmCYP76S7的c DNA及基因组DNA序列,运用生物信息学软件对该基因及其编码蛋白进行结构和理化性质分析。构建融合表达载体pEGAD-SmCYP76S7-eGFP,转... 详细信息

目的克隆获得丹参SmCYP76S7基因序列,并对其进行生物信息学和表达特性分析。方法克隆获得SmCYP76S7的c DNA及基因组DNA序列,运用生物信息学软件对该基因及其编码蛋白进行结构和理化性质分析。构建融合表达载体pEGAD-SmCYP76S7-eGFP,转化烟草后分析SmCYP76S7蛋白的亚细胞定位。利用qRT-PCR测定SmCYP76S7基因在各器官中的表达量,同时分别利用不同光质和茉莉酸甲酯(methyl jasmonate,MeJA)处理丹参幼苗和丹参毛状根,探究SmCYP76S7基因对光质和MeJA的响应。结果SmCYP76S7基因包含2个外显子和1个1506 bp的开放阅读框,编码501个氨基酸。该基因在根、茎、叶和花中均有表达,其中花中表达量最低。SmCYP76S7蛋白除定位于内质网外,还分布于多个细胞结构。SmCYP76S7基因的表达在红光处理和MeJA处理样品中显著上调,是典型的光和MeJA诱导基因。结论SmCYP76S7基因是CYP76家族成员,结合其表达特性和同家族其他成员的催化活性,该蛋白很可能参与丹参酮类成分的生物合成,其具体的生物学作用值得进一步深入挖掘。

关键词：丹参细胞色素P450 基因克隆亚细胞定位表达分析

两种根癌农杆菌储铁蛋白功能的鉴定和体外自组装

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微生物学报 2024年

作者：周琴高苗苗潘晓玥王浩徐楠郭敏亮扬州大学生物科学与技术学院

【目的】验证根癌农杆菌（Agrobacterium fabrum，以前也叫Agrobacterium tumefaciens）两种储铁蛋白：来自饥饿细胞的DNA结合蛋白（DNA-binding protein from starved cell， Dps）和细菌铁蛋白（bacterioferritin， Bfr）的编码基因atu2477和atu2771的功能。确定Bfr编码基因的开放阅读框。研究末端融合、血红素和个别关键氨基酸突变对Bfr功能和体外自组装的影响。探讨两种储铁蛋白的可能应用潜力。【方法】通过质粒将编码储铁蛋白的基因重新引入根癌农杆菌储铁蛋白缺失突变体中，回补储铁蛋白，验证回补的储铁蛋白编码基因是否能表达出具有储铁能力的储铁蛋白。用非变性凝胶电泳分离细胞粗提液中的蛋白质，铁特异性染色的方法鉴定电泳分离的蛋白质中是否有储铁蛋白。将不同的肽或蛋白质融合到储铁蛋白的末端，通过异源过量表达和纯化储铁蛋白的重组蛋白，用非变性凝胶电泳分析这些重组蛋白在体外的自组装。用血红素重构处理和氨基酸定点突变的方法研究血红素和个别关键氨基酸对Bfr功能和体外自组装的影响。【结果】非变性凝胶电泳和铁特异性染色结果显示，不管是根癌农杆菌的野生菌株，还是相关的突变体或者是对应的回补菌株，都只能检测到Bfr，检测不到Dps。分别回补能编码161个和169个氨基酸Bfr的基因，发现，野生型菌株中的Bfr与回补编码161个氨基酸Bfr的回补菌株一样大。多肽和蛋白质的末端融合对Bfr的功能和自组装有一定影响，但不会使Bfr完全失去功能和自组装能力。结果还表明，血红素和预测可络合血红素铁的Met60的替换也只会影响Bfr的功能和自组装，不会使Bfr完全丧失功能。【结论】根癌农杆菌是以Bfr存储铁，bfr基因的开放阅读框（open reading frame， ORF）是以少用的UUG为起始密码子，编码的是161个氨基酸，而不是169个氨基酸的蛋白质。根癌农杆菌的dps基因在大多数情况下可能不表达。根癌农杆菌的Bfr和Dps蛋白均比较稳定，能够承受末端的多肽或蛋白质融合，不会使蛋白质的结构完全破坏，因此，经适当改造后具有开发应用的潜力。

关键词：根癌农杆菌储铁蛋白细菌铁蛋白Bfr 来自饥饿细胞的DNA结合蛋白Dps 蛋白质纳米笼蛋白质自组装

ZntR调控副溶血弧菌锌稳态、氧化应激抗性和毒力

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微生物学报 2024年

作者：王梦娴翟怡梦邱军徐正中陈祥郑成坤焦新安扬州大学生物科学与技术学院

【目的】探究金属调节因子ZntR对副溶血弧菌金属稳态的调控作用，明确其对细菌氧化应激抗性和毒力的影响。【方法】通过生长曲线分析和菌体内金属含量测定探究ZntR对副溶血弧菌金属稳态的调控作用；通过生长曲线分析探究ZntR对副溶血弧... 详细信息

【目的】探究金属调节因子ZntR对副溶血弧菌金属稳态的调控作用，明确其对细菌氧化应激抗性和毒力的影响。【方法】通过生长曲线分析和菌体内金属含量测定探究ZntR对副溶血弧菌金属稳态的调控作用；通过生长曲线分析探究ZntR对副溶血弧菌氧化应激抗性的影响；通过斑马鱼竞争感染实验评估ZntR对副溶血弧菌毒力的影响；通过转录组测序鉴定ZntR调控的基因。【结果】zntR基因缺失株（ΔzntR）在锌、镍过量和铁限制条件下表现出生长缺陷，其生长缺陷均与锌稳态紊乱有关；在ΔzntR中超表达zntA促进其在锌、镍过量和铁限制条件下的生长；在锌过量的情况下，ΔzntR对H2O2诱导氧化应激的抗性减弱；在斑马鱼竞争感染实验中，ΔzntR的毒力下降；转录组测序结果显示，ZntR调控一些毒力相关基因的表达。【结论】ZntR调控副溶血弧菌锌稳态，并促进细菌氧化应激抗性和毒力。

关键词： ZntR 副溶血弧菌锌稳态氧化应激抗性毒力