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不同静电纺丝膜上骨髓间充质干细胞的黏附、增殖与成血管平滑肌分化

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中国组织工程研究 2025年第4期29卷 661-669页

作者：孙现娟王秋花张锦艺杨杨杨王文双张晓晴滨州医学院基础医学院人体解剖与组织胚胎学教研室生物材料与组织再生国际合作联合实验室山东省烟台市264003 烟台毓璜顶医院妇科山东省烟台市264000

背景:临床上迫切需要小口径人工血管来治疗冠状动脉和外周动脉疾病,目前,血管组织工程已成为制备小口径人工血管的主要方法,选择合适的生物材料和细胞来源是小口径组织工程血管构建成功的关键因素。目的:观察4种静电纺丝膜材料对骨髓间... 详细信息

背景:临床上迫切需要小口径人工血管来治疗冠状动脉和外周动脉疾病,目前,血管组织工程已成为制备小口径人工血管的主要方法,选择合适的生物材料和细胞来源是小口径组织工程血管构建成功的关键因素。目的:观察4种静电纺丝膜材料对骨髓间充质干细胞增殖、黏附及分化为血管平滑肌细胞的影响。方法:分离提取SD大鼠骨髓间充质干细胞。将骨髓间充质干细胞分别接种于聚己内酯(PCL)、聚己内酯-透明质酸(PCL-HA)、聚己内酯-丝素蛋白(PCL-SF)、聚己内酯-明胶(PCL-GEL)静电纺丝膜材料上,培养1,3,7 d后,扫描电镜下观察材料上的细胞排布,鬼笔环肽染色观察材料上的细胞增殖与黏附,qRT-PCR检测材料上细胞分泌的CD90、Meflin、转化生长因子βmRNA表达;向血管平滑肌细胞诱导分化7 d后,qRT-PCR检测材料上细胞ɑ-平滑肌肌动蛋白mRNA表达。结果与结论:①扫描电镜下可见骨髓间充质干细胞在4种静电纺丝膜上均沿着静电纺丝膜的纤维走向排列;②鬼笔环肽染色显示,骨髓间充质干细胞在4种静电纺丝膜上分布规律,均沿着纤维走向呈现平行分布,并且PCL-HA、PCL-SF、PCL-GEL静电纺丝膜较PCL静电纺丝膜更有利于骨髓间充质干细胞的增殖、黏附,PCL-SF静电纺丝膜相较于PCL-HA、PCL-GEL静电纺丝膜更有利于骨髓间充质干细胞的增殖、黏附;③qRT-PCR检测显示,4种静电纺丝膜材料均可维持骨髓间充质干细胞CD90和Meflin的mRNA表达,组间比较差异无显著性意义(P>0.05);PCL-HA、PCL-SF、PCL-GEL组培养1,7 d的转化生长因子βmRNA表达高于PCL组(P<0.05),PCL-SF组培养3,7 d的转化生长因子βmRNA表达高于其他3组(P<0.05),PCL-HA组培养7 d的转化生长因子βmRNA表达高于PCL-GEL组(P<0.05);④qRT-PCR检测显示,PCL-SF组ɑ-平滑肌肌动蛋白mRNA表达高于其他3组(P<0.05),PCL-HA组ɑ-平滑肌肌动蛋白mRNA表达高于PCL组(P<0.05);⑤结果表明:相较于PCL、PCL-HA、PCL-GEL静电纺丝膜,PCL-SF静电纺丝膜与骨髓间充质干细胞结合更适合制备小口径组织工程血管。

关键词：骨髓间充质干细胞小口径组织工程血管静电纺丝聚己内酯聚己内酯-透明质酸聚己内酯-丝素蛋白聚己内酯-明胶

蛋白激酶对活性氧调节7721人肝癌细胞生长的影响

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Acta Biochimica et Biophysica Sinica 2002年第1期34卷 67-72页

作者：刘珊林刘冠中程建施冬云陈惠黎张亚东复旦大学医学院生物化学教研室上海200032 复旦大学医学院生物化学教研室

以有义和反义人锰型超氧化物歧化酶 (MnSOD)、蛋白激酶B (PKB)cDNA分别转染人 772 1肝癌细胞系建立高、低表达MnSOD和PKB的模型 ,通过改变细胞内、外源性活性氧和抗氧化水平及PKB的活性 ,研究活性氧调节肝癌细胞生长过程中与PKB信号转... 详细信息

以有义和反义人锰型超氧化物歧化酶 (MnSOD)、蛋白激酶B (PKB)cDNA分别转染人 772 1肝癌细胞系建立高、低表达MnSOD和PKB的模型 ,通过改变细胞内、外源性活性氧和抗氧化水平及PKB的活性 ,研究活性氧调节肝癌细胞生长过程中与PKB信号转导途径的关系。结果表明 ,低浓度外源性活性氧过氧化氢 (1～ 10μmol/L)应激及MnSOD低表达细胞中内源性活性氧水平升高 ,都可促进肝癌细胞增殖 ,而抗氧化剂丹参素 (4 0mg/L)干预及MnSOD高表达使细胞内源性活性氧水平相对下降 ,都可一定程度抑制细胞的生长。采用3 2 P参入法检测细胞PKB酶活性 ,发现细胞内、外源性活性氧均能激活PKB ,而采用抗氧化干预 ,能明显抑制PKB的酶活性。采用RT PCR法检测AP 1转录因子组成成员c fos和c jun基因的mRNA表达 ,发现与PKB活性呈正比。说明活性氧在特定细胞内氧化 /还原环境下可通过激活PKB途径传递信号、调控转录因子AP 1表达、促进肝癌细胞生长

关键词： PKB 活性氧抗氧化 AP-1 肝癌细胞

星形孢菌素诱导NG108-15细胞凋亡(英文)

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Acta Pharmacologica Sinica 2003年第7期24卷 41-47+103页

作者：张百芳彭芳芳章江洲武栋成武汉大学医学院生物化学教研室武汉大学医学院生物化学教研室武汉 430071 中国

目的:研究星形孢菌素是否能引起NG108-15细胞的凋亡及它对数种与凋亡相关基因蛋白表达水平的影响。方法:用相差显微镜、荧光显微镜和透射电镜观察形态学变化;琼脂糖凝胶电泳检测DNA梯带:免疫印迹法检测凋亡相关基因蛋白的表达水平。结果... 详细信息

目的:研究星形孢菌素是否能引起NG108-15细胞的凋亡及它对数种与凋亡相关基因蛋白表达水平的影响。方法:用相差显微镜、荧光显微镜和透射电镜观察形态学变化;琼脂糖凝胶电泳检测DNA梯带:免疫印迹法检测凋亡相关基因蛋白的表达水平。结果:经星形孢菌素0.1μmol/L处理后NG108-15细胞呈典型的凋亡形态学变化,星形孢菌素处理后6h即出现DNA凋亡梯带,可持续至24h,Bax蛋白表达在星形孢菌素处理后6h开始上升,12h至最高峰,24h后下降,Bcl-2蛋白表达在星形孢菌素处理后3h明显上升,随后逐渐下降,星形孢菌素处理后6h可见caspase-3切割产物出现,但Cdk5蛋白的表达水平未见明显变化,p53蛋白表达在星形孢菌素处理12h后下降。结论:星形孢菌素诱导了NG108-15细胞的凋亡,可能与Bax蛋白表达的增加及caspase-3切割有关,而与p53和Cdk5无明显相关性。

关键词：星形孢菌素 NG108-15细胞细胞凋亡 DNA断片 bax基因 bcl-2基因 p53基因细胞周期素依赖激酶

siRNA沉默G6PD表达对人皮肤黑色素瘤细胞生长及凋亡的影响

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生物化学与生物物理进展 2008年第3期35卷 327-334页

作者：朱月春吕会茹李丹怡童淑芬昆明医学院生物化学教研室昆明650031

研究表明,葡萄糖-6-磷酸脱氢酶(G6PD)与肿瘤的发生、发展、临床表型及治疗和预后有关.为阐明G6PD与肿瘤的关系及其机理,针对人G6PD基因设计3条siRNA和一条无关序列,再据每一序列,合成两条互补并含siRNA正反义链的DNA,退火后与含GFP的载... 详细信息

研究表明,葡萄糖-6-磷酸脱氢酶(G6PD)与肿瘤的发生、发展、临床表型及治疗和预后有关.为阐明G6PD与肿瘤的关系及其机理,针对人G6PD基因设计3条siRNA和一条无关序列,再据每一序列,合成两条互补并含siRNA正反义链的DNA,退火后与含GFP的载体pRNAT-U6.2/Lenti连接,转染人皮肤黑色素瘤A375细胞,Real-timePCR筛选有效的一条siRNA,经病毒颗粒包装和病毒生产并感染A375细胞,G418筛选后,挑取单个阳性克隆放大培养,Western blotting检测siRNA干扰G6PD效率为88.83%,构建成G6PD缺陷型A375稳转细胞(A375-G6PD!).与野生型A375细胞(A375-WT)比较,A375-G6PD!的G6PD活性仅为21.53%,细胞倍增时间延长,增殖被抑制,克隆形成率降低25%(P0.05),提示,G6PD缺陷可能通过下调P53蛋白表达和上调Caspase-3的表达,抑制G2/M期向G0/G1期转换的进程,促进A375的凋亡,机理有待于进一步探讨.

关键词： siRNA干扰葡萄糖-6-磷酸脱氢酶人皮肤黑色素瘤稳转细胞株细胞周期 P53 Caspase-3

小细胞肺癌中转录因子E2F1调控的靶基因（英文）

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生理学报 2016年第3期68卷 276-284页

作者：李尊岭焦飞马颖岳真孔丽君滨州医学院生物化学与分子生物学教研室烟台264003

本研究组前期研究结果表明,转录因子E2F1在大约95%的小细胞肺癌组织中表达上调,而且与其浸润、转移密切相关,但是E2F1在小细胞肺癌中调控的靶基因未见报道。本研究旨在探索E2F1在小细胞肺癌细胞株H1688中调控的靶基因。染色体免疫共沉... 详细信息

本研究组前期研究结果表明,转录因子E2F1在大约95%的小细胞肺癌组织中表达上调,而且与其浸润、转移密切相关,但是E2F1在小细胞肺癌中调控的靶基因未见报道。本研究旨在探索E2F1在小细胞肺癌细胞株H1688中调控的靶基因。染色体免疫共沉淀联合测序(chromatin immunoprecipitation sequencing,Ch IP-seq)结果显示,在小细胞肺癌H1688细胞中,E2F1能够调控5 326个靶基因的表达,其中4 700个是结构基因,626个基因编码长链非编码RNA。基因功能注释(gene ontology,GO)和基因富集图谱(enrichment map)分析显示,E2F1调控的靶基因功能主要集中在3个方面:细胞周期调控、染色体和组蛋白修饰以及蛋白转运。MEME4.7.0软件分析显示,E2F1通过结合6个序列调控相关靶基因和长链非编码序列的表达。以上结果阐明了E2F1在小细胞肺癌中调控的靶基因,为进一步研究E2F1在小细胞肺癌发生、发展、浸润与转移、复发和耐药中的作用提供了实验依据。

关键词： E2F1 小细胞肺癌染色体免疫共沉淀联合测序

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中性红染色后细胞对凝集素的反应性

生物化学与生物物理进展 1992年第4期19卷 288-290页

作者：许凤浩刘在贵滨州医学院生物化学教研室山东滨州256603

中性红染色后的小鼠胸腺细胞。肝、脾和肾细胞,人扁桃体细胞,以及体外培养的不同肿瘤细胞(HL60,K562,Molt-4,MLA和L1210)都能够被凝集素凝集。除小鼠肝细胞和肾细胞外,它们的凝集特征都与红细胞的凝集特征相同。不同来源的细胞,其对凝... 详细信息

中性红染色后的小鼠胸腺细胞。肝、脾和肾细胞,人扁桃体细胞,以及体外培养的不同肿瘤细胞(HL60,K562,Molt-4,MLA和L1210)都能够被凝集素凝集。除小鼠肝细胞和肾细胞外,它们的凝集特征都与红细胞的凝集特征相同。不同来源的细胞,其对凝集素的反应性不同,其中,以肿瘤细胞对凝集素的反应最敏感。结果说明,中性红染色法可以作为用凝集素初步检测一些无色细胞表面凝集素受体变化的一种简便方法。

关键词：凝集素凝集素检测法肿瘤细胞

醛糖还原酶基因 5′调控区新的点突变对基因表达调控的影响(英文)

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生物化学与生物物理学报 2003年第10期35卷 904-908页

作者：谢平李清解刘美莲黄建军曾卫民陈淑华宋惠萍中南大学湘雅医学院生物化学教研室中南大学湘雅医学院生物化学教研室长沙410078

为了进一步研究醛糖还原酶 (AR)基因 5′调控区存在的可引起蛋白质表达发生改变的遗传变异及其对糖尿病并发症的影响 ,应用PCR SSCP对中国人 2型糖尿病患者的AR基因 5′调控区进行筛选 ,在两名糖尿病患者中发现一新点突变C- 1 6 7→A ,... 详细信息

为了进一步研究醛糖还原酶 (AR)基因 5′调控区存在的可引起蛋白质表达发生改变的遗传变异及其对糖尿病并发症的影响 ,应用PCR SSCP对中国人 2型糖尿病患者的AR基因 5′调控区进行筛选 ,在两名糖尿病患者中发现一新点突变C- 1 6 7→A ,使AR基因 5′调控区产生一个新的CCAAT盒。含点突变的两名患者尽管患病多年 ,长期处于高血糖状态 ,但无糖尿病并发症发生。而且他们的红细胞中AR活性都很低 ,处于无视网膜病变患者组的下限范围。将含野生型和点突变DNA片段分别克隆至氯霉素乙酰转移酶报告基因载体 (pCAT) ,检测CAT的活性确定野生型和突变型序列的转录活性。同时进行凝胶滞留试验以观测DNA与蛋白质的相互作用。结果显示 :含C- 1 6 7→A的启动子相对转录活性 (5 .7% )明显低于野生型(15 .7% )。凝胶滞留试验中 ,突变序列迁移速率较野生型慢。以上结果说明 ,AR基因 5′调控区C- 1 6 7→A点突变干扰了启动子区顺式作用元件与反式作用因子的结合 ,导致AR基因转录活性降低 ,使患者组织中AR活性下降 ,从而阻止或减缓 2型糖尿病视网膜病变发生发展。

关键词：醛糖还原酶基因点突变糖尿病慢性并发症

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高苯丙氨酸血症大鼠脑内单胺类递质的研究

生物化学与生物物理进展 1995年第4期22卷 352-354,376页

作者：万福生南国华江西医学院生物化学教研室

以３ｄ龄Ｓｐｒａｇｕｅ－Ｄａｗｌｅｙ大鼠腹腔注射苯丙氨酸（Ｐｈｅ）诱导高苯丙氨酸血症，荧光法测定大脑皮层及其突触体中去甲肾上腺素（ＮＥ）、多巴胺（ＤＡ）和５－羟色胺（５－ＨＴ）含量；Ｙ型电迷宫法测其学习记忆能力．结果... 详细信息

以３ｄ龄Ｓｐｒａｇｕｅ－Ｄａｗｌｅｙ大鼠腹腔注射苯丙氨酸（Ｐｈｅ）诱导高苯丙氨酸血症，荧光法测定大脑皮层及其突触体中去甲肾上腺素（ＮＥ）、多巴胺（ＤＡ）和５－羟色胺（５－ＨＴ）含量；Ｙ型电迷宫法测其学习记忆能力．结果显示：高苯丙氨酸血症大鼠大脑皮层ＮＥ、ＤＡ及５－ＨＴ含量降低３８．６％～６７．４％，突触体中ＮＥ、ＤＡ和５－ＨＴ含量降低５１．９％～７０．２％，学习记忆能力明显低于对照组．结果提示，苯酮尿症智力障碍可能与大脑皮层及其突触体中某些单胺类递质含量降低相关．

关键词：高苯丙氨酸血症单胺类递质病理

催乳素对佐剂关节炎大鼠滑膜组织MMP-9表达的影响

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中国应用生理学杂志 2008年第1期24卷 95-98页

作者：巩永凤王桂兰刁汇玲李宝玉张慧滨州医学院生理学教研室生物化学与分子生物学教研室山东滨州256603

目的:探讨催乳素(PRL)对佐剂关节炎(AA)大鼠滑膜组织基质金属蛋白酶-9(MMP-9)表达的影响,为进一步阐明PRL在类风湿性关节炎(RA)发病过程中的作用机制及为RA的治疗提供实验依据。方法:雄性Wistar大鼠32只分为4组(n=10):①正常对照组(A组)... 详细信息

目的:探讨催乳素(PRL)对佐剂关节炎(AA)大鼠滑膜组织基质金属蛋白酶-9(MMP-9)表达的影响,为进一步阐明PRL在类风湿性关节炎(RA)发病过程中的作用机制及为RA的治疗提供实验依据。方法:雄性Wistar大鼠32只分为4组(n=10):①正常对照组(A组)(n=10);②佐剂关节炎对照组(B组)(n=10);③高催乳素血症佐剂关节炎组(C组)(n=10);④低催乳素血症佐剂关节炎组(D组)。放射免疫法测定各组血清PRL含量;明胶酶谱法测定MMP-9的活性;免疫组织化学方法检测各组滑膜组织MMP-9免疫反应变化;Western blot测定各组滑膜组织MMP-9的表达。结果:B组滑膜组织MMP-9的活性及表达明显高于A组,C组MMP-9的活性及表达最高,D组较B组有所减少,但仍高于A组。结论:PRL影响滑膜组织MMP-9分泌是其影响RA发病过程的一种作用机制。

关键词：催乳素类风湿性关节炎佐剂关节炎基质金属蛋白酶