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重复性经脊髓磁刺激促进脊髓损伤小鼠运动功能恢复

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中国组织工程研究 2025年第11期29卷 2252-2260页

作者：宋海旺姜冠华穆盈盈付善羽孙宝飞李玉美余资江杨丹贵州医科大学基础医学院人体解剖学教研室贵州省贵安新区561113 贵州医科大学基础医学院贵州省贵安新区561113

背景:研究表明重复性经脊髓磁刺激能够抑制脊髓损伤炎症反应,在脊髓区域施加磁场刺激,以调节神经元的兴奋性和突触传递,从而促进神经系统的可塑性和修复。目的:观察重复性经脊髓磁刺激对脊髓损伤后小鼠Toll样受体4/核因子κB/NLRP3信号... 详细信息

背景:研究表明重复性经脊髓磁刺激能够抑制脊髓损伤炎症反应,在脊髓区域施加磁场刺激,以调节神经元的兴奋性和突触传递,从而促进神经系统的可塑性和修复。目的:观察重复性经脊髓磁刺激对脊髓损伤后小鼠Toll样受体4/核因子κB/NLRP3信号通路的影响,探讨其对运动功能恢复的机制。方法:将SPF级雄性C57BL/6J小鼠随机分为假手术组、脊髓损伤组、重复性经脊髓磁刺激组,后2组小鼠麻醉后采用咬骨钳剔除T9椎板,暴露脊髓,使用小型动脉瘤夹夹持脊髓20 s建立脊髓损伤模型。重复性经脊髓磁刺激组小鼠脊髓损伤的第1天开始进行为期21 d的重复性经脊髓磁刺激干预。每天持续10 min,每周刺激5 d,休息2 d。于脊髓损伤后1,3,7,14,21 d进行小鼠运动功能BMS评分,利用Western Blot检测脊髓损伤处的水通道蛋白AQP4、凋亡因子Bax、Bcl-2、CL-Caspase-3、炎症因子肿瘤坏死因子α、干扰素γ、白细胞介素6、白细胞介素4和Toll样受体4/核因子κB/NLRP3信号通路相关蛋白的表达,氧化应激试剂盒检测脊髓损伤处超氧化物歧化酶、谷胱甘肽过氧化物酶的活性及丙二醛浓度,免疫荧光染色法检测神经元核抗原的表达。结果与结论:(1)重复性经脊髓磁刺激组小鼠的BMS评分高于脊髓损伤组(P<0.05);(2)与脊髓损伤组相比,重复性经脊髓磁刺激组脊髓含水量降低、AQP4蛋白表达降低;丙二醛浓度、Bax、CL-Caspase-3、肿瘤坏死因子α、干扰素γ、白细胞介素6与Toll样受体4/核因子κB/NLRP3信号通路相关蛋白的表达均降低(P<0.05),而超氧化物歧化酶活性、谷胱甘肽过氧化物酶活性、Bcl-2、白细胞介素4与神经元核抗原的表达均升高(P<0.05);(3)结果说明,重复性经脊髓磁刺激能下调Toll样受体4/核因子κB/NLRP3信号通路相关蛋白的表达,缓解脊髓损伤后的脊髓水肿、氧化应激、凋亡反应和炎症反应等,发挥神经保护作用,从而促进脊髓损伤后小鼠后肢运动功能的恢复。

关键词：脊髓损伤重复性经脊髓磁刺激 TLR4/NF-κB/NLRP3信号通路脊髓水肿氧化应激凋亡反应炎症反应神经保护运动功能

聚己内酯-透明质酸静电纺丝膜联合间充质干细胞修复子宫内膜损伤

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中国组织工程研究 2025年第16期29卷 3369-3379页

作者：安江茹张锦艺王秋花杨杨杨王文双张晓晴滨州医学院基础医学院人体解剖与组织胚胎学教研室生物材料与组织再生国际合作联合实验室山东省烟台市264003 烟台毓璜顶医院妇科山东省烟台市264000

背景:人子宫内膜间充质干细胞能够直接修复受损的子宫内膜,促进血管生成、恢复子宫形态结构,然而将干细胞直接注入受损子宫内膜后的细胞存活率低、滞留时间短,修复效果有限。目的:观察聚己内酯-透明质酸静电纺丝膜复合人子宫内膜间充质... 详细信息

背景:人子宫内膜间充质干细胞能够直接修复受损的子宫内膜,促进血管生成、恢复子宫形态结构,然而将干细胞直接注入受损子宫内膜后的细胞存活率低、滞留时间短,修复效果有限。目的:观察聚己内酯-透明质酸静电纺丝膜复合人子宫内膜间充质干细胞修复大鼠子宫内膜损伤的效果。方法:①细胞实验:采用胶原酶消化法提取人子宫内膜间充质干细胞,静电纺丝技术制备聚己内酯-透明质酸静电纺丝膜。将人子宫内膜间充质干细胞分别接种于聚苯乙烯培养板与聚己内酯-透明质酸静电纺丝膜上,通过DNA定量分析、WST-1细胞活性实验、鬼笔环肽染色、扫描电镜观察细胞的增殖与黏附能力,qRT-PCR检测静电纺丝膜上细胞CD90、Meflin的mRNA表达。②动物实验:取27只处于动情期的雌性SD大鼠,通过机械搔刮法建立宫腔粘连模型后随机分为3组,每组9只:空白对照组不进行任何治疗,对照组将聚己内酯-透明质酸静电纺丝膜植入宫腔损伤部位,实验组将聚己内酯-透明质酸静电纺丝膜/人子宫内膜间充质干细胞补片植入宫腔损伤部位。术后第3,7,14天取材,采用苏木精-伊红染色观察子宫形态结构及腺体数量,qRT-PCR和免疫荧光染色观察子宫组织CD31、血管内皮生长因子的表达。结果与结论:①细胞实验:与聚苯乙烯培养板相比,聚己内酯-透明质酸静电纺丝膜可促进人子宫内膜间充质干细胞的增殖与黏附,并且聚己内酯-透明质酸静电纺丝膜支持人子宫内膜间充质干细胞基因CD90和Meflin的表达;②动物实验:苏木精-伊红染色显示,聚己内酯-透明质酸静电纺丝膜/人子宫内膜间充质干细胞补片可促进子宫内膜损伤后形态结构的恢复,术后第14天的内膜厚度与腺体数量均多于空白对照组、对照组(P<0.05);qRT-PCR和免疫荧光染色检测显示,实验组术后第7,14天的CD31、血管内皮生长因子mRNA与蛋白表达均高于空白对照组、对照组(P<0.05);③结果表明:聚己内酯-透明质酸静电纺丝膜可以提高干细胞的存活率、延长干细胞与受损组织的接触时间,二者复合移植可更好地修复受损子宫内膜组织。

关键词：子宫内膜宫腔粘连人子宫内膜间充质干细胞静电纺丝膜聚己内酯透明质酸

不同静电纺丝膜上骨髓间充质干细胞的黏附、增殖与成血管平滑肌分化

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中国组织工程研究 2025年第4期29卷 661-669页

作者：孙现娟王秋花张锦艺杨杨杨王文双张晓晴滨州医学院基础医学院人体解剖与组织胚胎学教研室生物材料与组织再生国际合作联合实验室山东省烟台市264003 烟台毓璜顶医院妇科山东省烟台市264000

背景:临床上迫切需要小口径人工血管来治疗冠状动脉和外周动脉疾病,目前,血管组织工程已成为制备小口径人工血管的主要方法,选择合适的生物材料和细胞来源是小口径组织工程血管构建成功的关键因素。目的:观察4种静电纺丝膜材料对骨髓间... 详细信息

背景:临床上迫切需要小口径人工血管来治疗冠状动脉和外周动脉疾病,目前,血管组织工程已成为制备小口径人工血管的主要方法,选择合适的生物材料和细胞来源是小口径组织工程血管构建成功的关键因素。目的:观察4种静电纺丝膜材料对骨髓间充质干细胞增殖、黏附及分化为血管平滑肌细胞的影响。方法:分离提取SD大鼠骨髓间充质干细胞。将骨髓间充质干细胞分别接种于聚己内酯(PCL)、聚己内酯-透明质酸(PCL-HA)、聚己内酯-丝素蛋白(PCL-SF)、聚己内酯-明胶(PCL-GEL)静电纺丝膜材料上,培养1,3,7 d后,扫描电镜下观察材料上的细胞排布,鬼笔环肽染色观察材料上的细胞增殖与黏附,qRT-PCR检测材料上细胞分泌的CD90、Meflin、转化生长因子βmRNA表达;向血管平滑肌细胞诱导分化7 d后,qRT-PCR检测材料上细胞ɑ-平滑肌肌动蛋白mRNA表达。结果与结论:①扫描电镜下可见骨髓间充质干细胞在4种静电纺丝膜上均沿着静电纺丝膜的纤维走向排列;②鬼笔环肽染色显示,骨髓间充质干细胞在4种静电纺丝膜上分布规律,均沿着纤维走向呈现平行分布,并且PCL-HA、PCL-SF、PCL-GEL静电纺丝膜较PCL静电纺丝膜更有利于骨髓间充质干细胞的增殖、黏附,PCL-SF静电纺丝膜相较于PCL-HA、PCL-GEL静电纺丝膜更有利于骨髓间充质干细胞的增殖、黏附;③qRT-PCR检测显示,4种静电纺丝膜材料均可维持骨髓间充质干细胞CD90和Meflin的mRNA表达,组间比较差异无显著性意义(P>0.05);PCL-HA、PCL-SF、PCL-GEL组培养1,7 d的转化生长因子βmRNA表达高于PCL组(P<0.05),PCL-SF组培养3,7 d的转化生长因子βmRNA表达高于其他3组(P<0.05),PCL-HA组培养7 d的转化生长因子βmRNA表达高于PCL-GEL组(P<0.05);④qRT-PCR检测显示,PCL-SF组ɑ-平滑肌肌动蛋白mRNA表达高于其他3组(P<0.05),PCL-HA组ɑ-平滑肌肌动蛋白mRNA表达高于PCL组(P<0.05);⑤结果表明:相较于PCL、PCL-HA、PCL-GEL静电纺丝膜,PCL-SF静电纺丝膜与骨髓间充质干细胞结合更适合制备小口径组织工程血管。

关键词：骨髓间充质干细胞小口径组织工程血管静电纺丝聚己内酯聚己内酯-透明质酸聚己内酯-丝素蛋白聚己内酯-明胶

稳定内皮和周细胞微管改善脊髓损伤中微循环障碍的作用及其机制

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解剖学报 2021年第1期52卷 21-29页

作者：段洋洋张雅群柴勇张璐萍赵冬梅杨成滨州医学院基础医学院人体解剖学教研室山东烟台264003

目的探讨稳定内皮细胞和周细胞微管改善脊髓损伤(SCI)中微循环障碍的作用及其机制。方法培养大鼠脑微血管内皮细胞和周细胞,建立糖氧剥夺(OGD)模型,采用CCK-8法检测细胞活力,采用免疫荧光和Western blotting分别检测α-微管蛋白(α-tubu... 详细信息

目的探讨稳定内皮细胞和周细胞微管改善脊髓损伤(SCI)中微循环障碍的作用及其机制。方法培养大鼠脑微血管内皮细胞和周细胞,建立糖氧剥夺(OGD)模型,采用CCK-8法检测细胞活力,采用免疫荧光和Western blotting分别检测α-微管蛋白(α-tubulin)表达;建立脊髓横断损伤模型(n=36),采用免疫荧光检测大鼠内皮细胞抗原1(RECA-1)及血小板衍生生长因子受体β(PDGFRβ)表达,采用Western blotting检测血管内皮生长因子A(VEGFA)、VEGF受体2(VEGFR2)、血小板衍生生长因子B(PDGFB)、PDGFRβ、血管生成素1(Ang-1)、特异性酪氨酸激酶受体2(Tie-2)等蛋白表达。结果OGD组细胞活性显著低于对照组,且具有时间依赖性;埃博霉素B(Epo B)组细胞活性显著高于OGD组;OGD致微管断裂,且随时间延长断裂愈加明显;Epo B组微管比OGD组趋于稳定,断裂减轻。SCI组RECA-1和PDGFRβ表达水平明显低于假手术组,Epo B治疗组RECA-1和PDGFRβ表达水平显著高于SCI组,VEGFA、VEGFR2、PDGFB、PDGFRβ、Ang-1表达水平明显高于SCI组。结论脊髓损伤可导致血管和周细胞减少及微循环障碍,这与细胞微管破坏相关;稳定微管治疗可保护周细胞和微血管,促进微循环重建,建立有利于脊髓损伤修复的微环境。

关键词：微管脊髓损伤微循环重建内皮细胞周细胞免疫荧光大鼠

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汉黄芩苷对大鼠脊髓损伤的修复效果

解剖学报 2022年第2期53卷 173-182页

作者：王笑刘卿谷成旭李希凯张璐萍滨州医学院基础医学院人体解剖学教研室山东烟台264003

目的通过观察不同剂量汉黄芩苷对大鼠脊髓损伤后介导的炎症反应的干预情况,探讨汉黄芩苷对脊髓损伤的影响。方法建立大鼠脊髓横断损伤模型(n=95),随机分成5组:正常组(N)、生理盐水组(NS)、汉黄芩苷低剂量组(WG12.5)、汉黄芩苷中剂量组... 详细信息

目的通过观察不同剂量汉黄芩苷对大鼠脊髓损伤后介导的炎症反应的干预情况,探讨汉黄芩苷对脊髓损伤的影响。方法建立大鼠脊髓横断损伤模型(n=95),随机分成5组:正常组(N)、生理盐水组(NS)、汉黄芩苷低剂量组(WG12.5)、汉黄芩苷中剂量组(WG25)及汉黄芩苷高剂量组(WG50)。采用ELISA检测炎性因子肿瘤坏死因子α(TNF-α)及白细胞介素1(IL-1)的表达水平;静态脚印分析脚趾扩张(TS)和中间脚趾扩张(ITS)的变化;HE染色观察脊髓损伤大鼠组织学情况;尼氏染色观察脊髓损伤大鼠神经元数目变化;透射电子显微镜观察轴突形态及再生现象;劳克坚牢蓝(LFB)髓鞘染色观察脱髓鞘现象;免疫组织化学观察胶质纤维酸性蛋白(GFAP)和神经生长相关蛋白43(GAP43)的表达变化。结果 NS组与N组相比,TNF-α及IL-1表达明显升高(P<0.01),TS和ITS明显减少(P<0.01),脊髓形态显著异常,神经元严重丢失,髓鞘形态异常,髓鞘严重脱色(P<0.01),GFAP表达明显增多,GAP43表达稍有增加;WG组与NS组相比,TNF-α和IL-1表达明显降低(P<0.01),TS和ITS增加(P<0.01),脊髓形态有所恢复,神经元丢失减少,髓鞘形态趋于正常且有新生轴突出现,髓鞘脱色减少(P<0.01),GFAP表达明显减少,GAP43表达明显增多,且呈现剂量依赖性。结论汉黄芩苷能改善脊髓损伤局部微环境,减少胶质瘢痕形成,促进轴突再生,减少局部神经元丢失、空洞形成等,进而促进脊髓损伤的修复。

关键词：汉黄芩苷脊髓损伤炎性反应胶质纤维酸性蛋白神经生长相关蛋白43 透射电子显微术免疫组织化学大鼠

斑点型锌指结构蛋白在体外负性调控HepG2细胞的转移

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解剖学报 2019年第3期50卷 304-309页

作者：梁少华王志强纪丕友滨州医学院人体解剖学教研室山东烟台264003

目的探索斑点型锌指结构蛋白(SPOP)在体外对HepG2细胞迁移和侵袭的影响。方法利用质粒过表达和shRNA技术构建稳定过表达和敲低SPOP的稳定转染细胞,Western blotting检测SPOP过表达和敲低效果,然后利用体外Transwell实验检测SPOP对HepG2... 详细信息

目的探索斑点型锌指结构蛋白(SPOP)在体外对HepG2细胞迁移和侵袭的影响。方法利用质粒过表达和shRNA技术构建稳定过表达和敲低SPOP的稳定转染细胞,Western blotting检测SPOP过表达和敲低效果,然后利用体外Transwell实验检测SPOP对HepG2细胞的迁移和侵袭能力的影响,最后利用划痕实验再次检测SPOP对HepG2细胞迁移能力的影响。结果稳定转染HepG2中SPOP过表达和敲低效果明显;Transwell实验结果显示,过表达SPOP后HepG2细胞的迁移和侵袭能力明显下降,敲低后其迁移和侵袭能力明显上升。划痕实验结果显示,SPOP对HepG2细胞的迁移能力影响与Transwell实验一致。结论 SPOP在体外可以负性调控HepG2细胞的转移能力。

关键词：斑点型锌指结构蛋白 HepG2细胞转移免疫印迹法划痕实验

大鼠脂肪间充质干细胞的分离、培养及其向少突胶质前体细胞的诱导分化

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解剖学报 2022年第5期53卷 557-562页

作者：张雅群付丽任译延乔妍梓赵冬梅滨州医学院人体解剖学教研室山东烟台264003

目的改良酶消化法提取脂肪间充质干细胞(ADSCs),并探讨诱导其分化为少突胶质前体细胞(OPCs)的可行性,为脱髓鞘疾病治疗种子细胞来源提供有效途径。方法取SD大鼠腹股沟区脂肪,Ⅰ型胶原酶和胰蛋白酶联合消化法分离培养ADSCs,Ⅰ型胶原酶组... 详细信息

目的改良酶消化法提取脂肪间充质干细胞(ADSCs),并探讨诱导其分化为少突胶质前体细胞(OPCs)的可行性,为脱髓鞘疾病治疗种子细胞来源提供有效途径。方法取SD大鼠腹股沟区脂肪,Ⅰ型胶原酶和胰蛋白酶联合消化法分离培养ADSCs,Ⅰ型胶原酶组作为对照,细胞计数,观察细胞形态。取第3代细胞,流式细胞术检测细胞的表面标志物CD29、CD90和CD45;成脂诱导,油红O染色;利用干细胞分化培养液及OPCs培养液将ADSCs诱导为OPCs,免疫荧光检测α-N-乙酰基神经氨酸α-2、8-唾液酸转移酶1(A2B5)、NG2;利用OPCs培养液继续培养OPCs分化为少突胶质细胞(OLs)。结果Ⅰ型胶原酶组分离的ADSCs为(9.143±0.5084)×10^(7)/L,联合酶组为(13.43±0.4809)×10^(7)/L,联合酶组较Ⅰ型胶原酶组ADSCs数量多,差异有统计学意义(P学显微镜下可见脂滴,油红O染色脂滴呈红染;ADSCs向OPCs诱导第16天,A2B5和NG2表达阳性,A2B5阳性率为(87.03±0.94)%,NG2阳性率为(90.07±0.96)%;继续培养OPCs 3 d,其分化为OLs,髓鞘碱性蛋白(MBP)表达阳性。结论联合酶消化较单独胶原酶消化获取的细胞数量多,分离培养的细胞符合ADSCs的特征,体外可诱导分化为OPCs。

关键词：脂肪间充质干细胞分离培养诱导分化少突胶质前体细胞神经脱髓鞘疾病流式细胞术大鼠

小RNA干扰联合电针治疗对脊髓损伤后结缔组织生长因子的沉默作用

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解剖学报 2016年第2期47卷 185-190页

作者：赵伟柴勇房清敏杨成滨州医学院附属医院脊柱外科滨州医学院人体解剖学教研室山东滨州256603

目的探讨结缔组织生长因子(CTGF)siRNA联合电针治疗对脊髓损伤(SCI)后CTGF阳性表达的沉默作用。方法将SD大鼠随机分为对照(control)组、脊髓损伤(SCI)组、电针(EA)组、CTGF干扰(CTGF)组、CTGF干扰联合电针(EA+CTGF)组。制备SCI模型,将含... 详细信息

目的探讨结缔组织生长因子(CTGF)siRNA联合电针治疗对脊髓损伤(SCI)后CTGF阳性表达的沉默作用。方法将SD大鼠随机分为对照(control)组、脊髓损伤(SCI)组、电针(EA)组、CTGF干扰(CTGF)组、CTGF干扰联合电针(EA+CTGF)组。制备SCI模型,将含有CTGF siRNA/invivofectamine的复合物植入CTGF、EA+CTGF组大鼠的脊髓(T10)损伤断端,SCI、EA组用invivofectamine转染试剂代替。EA、EA+CTGF组在模型制备后每天给予电针治疗。各组在3 d、7 d、14 d取损伤脊髓,应用Western blotting、RT-PCR测定CTGF、转化生长因子β-1(TGF-β1)及GFAP蛋白和mRNA表达变化,应用免疫荧光做形态学观察。结果与SCI组相比,CTGF组、EA+CTGF组的CTGF、TGF-β1、GFAP蛋白表达下调,联合治疗效果更明显(P<0.05);EA+CTGF组CTGF、TGF-β1、GFAP mRNA表达明显低于SCI组、EA组和CTGF组(P<0.01)。免疫荧光发现,SCI组CTGF阳性细胞反应性增生;CTGF组CTGF表达减弱,阳性细胞数减少;EA+CTGF组CTGF阳性细胞数明显减少。结论 CTGF siRNA联合电针治疗使损伤脊髓CTGF表达下调,胶质反应减轻,抑制瘢痕形成。

关键词：脊髓损伤结缔组织生长因子小RNA干扰电针胶质化免疫荧光大鼠

针灸效应学体外实验方法观察星形胶质细胞超微结构

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复旦学报（医学版） 2001年第6期28卷 505-508页

作者：朱政汪洋上海中医药大学基础医学院解剖学教研室复旦大学基础医学院人体解剖学教研室上海200032

目的　探讨电针治疗大鼠脊髓损伤 (spinalcordinjury ,SCI)血清对离体培养星形胶质细胞超微结构的影响。方法　采用针灸效应学体外实验方法对离体培养星形胶质细胞用透射电镜观察其超微结构的变化。结果　电针治疗组的星形胶质细胞其溶... 详细信息

目的　探讨电针治疗大鼠脊髓损伤 (spinalcordinjury ,SCI)血清对离体培养星形胶质细胞超微结构的影响。方法　采用针灸效应学体外实验方法对离体培养星形胶质细胞用透射电镜观察其超微结构的变化。结果　电针治疗组的星形胶质细胞其溶酶体较造模组少 ,而高尔基复合体、内质网、微管、微丝较造模组明显增多。结论　电针可减轻损伤对星形胶质细胞中溶酶体的刺激。

关键词：电针脊髓损伤星形胶质细胞超微结构