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不同静电纺丝膜上骨髓间充质干细胞的黏附、增殖与成血管平滑肌分化

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中国组织工程研究 2025年第4期29卷 661-669页

作者：孙现娟王秋花张锦艺杨杨杨王文双张晓晴滨州医学院基础医学院人体解剖与组织胚胎学教研室生物材料与组织再生国际合作联合实验室山东省烟台市264003 烟台毓璜顶医院妇科山东省烟台市264000

背景:临床上迫切需要小口径人工血管来治疗冠状动脉和外周动脉疾病,目前,血管组织工程已成为制备小口径人工血管的主要方法,选择合适的生物材料和细胞来源是小口径组织工程血管构建成功的关键因素。目的:观察4种静电纺丝膜材料对骨髓间... 详细信息

背景:临床上迫切需要小口径人工血管来治疗冠状动脉和外周动脉疾病,目前,血管组织工程已成为制备小口径人工血管的主要方法,选择合适的生物材料和细胞来源是小口径组织工程血管构建成功的关键因素。目的:观察4种静电纺丝膜材料对骨髓间充质干细胞增殖、黏附及分化为血管平滑肌细胞的影响。方法:分离提取SD大鼠骨髓间充质干细胞。将骨髓间充质干细胞分别接种于聚己内酯(PCL)、聚己内酯-透明质酸(PCL-HA)、聚己内酯-丝素蛋白(PCL-SF)、聚己内酯-明胶(PCL-GEL)静电纺丝膜材料上,培养1,3,7 d后,扫描电镜下观察材料上的细胞排布,鬼笔环肽染色观察材料上的细胞增殖与黏附,qRT-PCR检测材料上细胞分泌的CD90、Meflin、转化生长因子βmRNA表达;向血管平滑肌细胞诱导分化7 d后,qRT-PCR检测材料上细胞ɑ-平滑肌肌动蛋白mRNA表达。结果与结论:①扫描电镜下可见骨髓间充质干细胞在4种静电纺丝膜上均沿着静电纺丝膜的纤维走向排列;②鬼笔环肽染色显示,骨髓间充质干细胞在4种静电纺丝膜上分布规律,均沿着纤维走向呈现平行分布,并且PCL-HA、PCL-SF、PCL-GEL静电纺丝膜较PCL静电纺丝膜更有利于骨髓间充质干细胞的增殖、黏附,PCL-SF静电纺丝膜相较于PCL-HA、PCL-GEL静电纺丝膜更有利于骨髓间充质干细胞的增殖、黏附;③qRT-PCR检测显示,4种静电纺丝膜材料均可维持骨髓间充质干细胞CD90和Meflin的mRNA表达,组间比较差异无显著性意义(P>0.05);PCL-HA、PCL-SF、PCL-GEL组培养1,7 d的转化生长因子βmRNA表达高于PCL组(P工程血管。

关键词：骨髓间充质干细胞小口径组织工程血管静电纺丝聚己内酯聚己内酯-透明质酸聚己内酯-丝素蛋白聚己内酯-明胶

红景天苷促进MC3T3-E1细胞成骨分化能力的体外实验

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中国组织工程研究 2025年第2期29卷 231-237页

作者：刘朝辉韩晓谦段昕郭鹏达张云涛滨州医学院附属医院口腔科山东省滨州市256600 山东省临沭县妇幼保健院山东省临沂市276700

背景:骨缺损可直接影响牙齿种植的成功率及种植体的长期稳定性。研究显示红景天苷可促进成骨细胞增殖、分化,但对于其成骨分化相关通路具体研究不多。目的:体外细胞实验研究红景天苷对MC3T3-E1细胞增殖和分化的影响,并探究其对相关基因... 详细信息

背景:骨缺损可直接影响牙齿种植的成功率及种植体的长期稳定性。研究显示红景天苷可促进成骨细胞增殖、分化,但对于其成骨分化相关通路具体研究不多。目的:体外细胞实验研究红景天苷对MC3T3-E1细胞增殖和分化的影响,并探究其对相关基因和蛋白表达的影响。方法:采用CCK-8实验和碱性磷酸酶实验筛选红景天苷(0.5,1,5,10,50μmol/L)促进MC3T3-E1细胞增殖和分化的最佳浓度。实验分为4组:对照组、红景天苷组、红景天苷+LY294002组、LY294002组,分别用成骨诱导液、含10μmol/L红景天苷、10μmol/L红景天苷+10μmol/L LY294002、10μmol/L LY294002的成骨诱导液进行培养,观察红景天苷及PI3K/Akt信号通路抑制剂LY294002对成骨相关基因和蛋白表达的影响。结果与结论:①CCK-8实验和碱性磷酸酶实验显示:红景天苷促进MC3T3-E1细胞增殖的作用在10μmol/L时最显著;②与对照组相比,红景天苷可以促进矿化、促进细胞黏附、减少细胞死亡,提高Runx-2、骨钙素、骨桥蛋白的mRNA表达(P基因、蛋白的表达,这可能与PI3K/Akt信号通路的激活有关。

关键词：红景天苷 MC3T3-E1细胞细胞分化成骨矿化 LY294002 PI3K/Akt信号通路

紫杉醇诱导HepG2肝癌细胞凋亡中miR-224沉默凋亡抑制因子5基因的作用

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解剖学报 2015年第4期46卷 521-527页

作者：单长民孙业盈李娟王东姚庆收谭秀华刘向勇滨州医学院医学遗传学教研室滨州医学院附属医院药剂科滨州医学院组织学与胚胎学教研室滨州医学院基因工程教研室滨州医学院细胞生物学教研室山东滨州256603

目的探讨紫杉醇诱导肝癌HepG2细胞凋亡时miRNA对基因的沉默的作用。方法用不同浓度紫杉醇处理肝癌HepG2细胞后,流式细胞术检测其细胞凋亡;通过实时定量PCR(Real-time PCR)测定miR-224和凋亡抑制因子5(api-5)mRNA的表达;用免疫组织化学... 详细信息

目的探讨紫杉醇诱导肝癌HepG2细胞凋亡时miRNA对基因的沉默的作用。方法用不同浓度紫杉醇处理肝癌HepG2细胞后,流式细胞术检测其细胞凋亡;通过实时定量PCR(Real-time PCR)测定miR-224和凋亡抑制因子5(api-5)mRNA的表达;用免疫组织化学二步法和免疫印迹法(Western blotting)检测API-5蛋白的表达。结果紫杉醇诱导HepG2细胞凋亡时,通过2-ΔΔCT法分析发现,除了0.5mg/L、1mg/L紫杉醇培养HepG2肝癌细胞24h miR-224不升反降外,其他浓度和处理时间miR-224表达均显示上调;0.5mg/L、1mg/L紫杉醇培养HepG2肝癌细胞24h api-5 mRNA表达稍微降低,0.5mg/L紫杉醇处理48h无增长,其他浓度和处理时间api-5 mRNA表达均上调;应用IPP v 5.1图像分析软件处理,经t检验分析发现,紫杉醇处理后API-5蛋白表达均下调(P基因api-5的表达,通过与api-5 mRNA的3’UTR结合阻止翻译的完成,从而对肝癌细胞的凋亡途径产生影响。

关键词：紫杉醇肝癌细胞HepG2 微小RNA-224 凋亡抑制因子5 实时定量聚合酶链反应免疫印迹法

二阶非线性Volterra型积分微分方程周期边值问题的最大、最小解

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工程数学学报 1998年第3期15卷 57-62页

作者：祁爱琴滨州医学院数学教研室

考虑了二阶非线性Ｖｏｌｔｅｒｒａ型积分微分方程的周期边值题：“－ｕ″＝ｆ（ｔ，ｕ，Ｔｕ，ｕ′），ｕ（０）＝ｕ（２π），ｕ′（０）＝ｕ′（２π）”。应用上下解方法及单调迭代技巧得到了上述问题的最大、最小解。

关键词：最小解 Volterra型积分微分方程周期边值问题单调迭代上下解方法最大技巧

培养基种类对花生毛状根株系生物量和白藜芦醇含量的影响

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生物技术通报 2014年第5期30卷 174-178页

作者：姚庆收姜吉刚武玉永梁乘榜滨州医学院药学院基因工程教研室烟台264003 滨州医学院药学院化学教研室烟台264003

旨在研究不同培养基对花生毛状根株系生物量和白藜芦醇含量的影响。利用发根农杆菌R1601侵染花生的叶片,诱导毛状根,利用PCR技术检测毛状根。使用5种培养基(1/2MS、MS、MS+500 mg/L羧苄西林钠、B5和N6)分别培养同一个株系的花生毛状根,... 详细信息

旨在研究不同培养基对花生毛状根株系生物量和白藜芦醇含量的影响。利用发根农杆菌R1601侵染花生的叶片,诱导毛状根,利用PCR技术检测毛状根。使用5种培养基(1/2MS、MS、MS+500 mg/L羧苄西林钠、B5和N6)分别培养同一个株系的花生毛状根,4周后利用高效液相色谱法(HPLC)测量毛状根生物量和白藜芦醇含量。结果显示,不同培养基对花生毛状根株系生物量的积累有显著差异,1/2MS培养基和MS培养基有利于花生毛状根株系生物量的积累。不同培养基对花生毛状根株系中白藜芦醇的含量有显著差异,B5培养基和N6培养基有利于花生毛状根株系中白藜芦醇的积累。

关键词：发根农杆菌花生毛状根白藜芦醇生物量

花生毛状根的高频诱导及NAA和2,4-D对花生毛状根生长和白藜芦醇含量的影响

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药物生物技术 2012年第6期19卷 507-511页

作者：姚庆收姜吉刚单长民武玉永于敏滨州医学院药学院基因工程教研室山东烟台264003 滨州医学院药学院化学教研室山东烟台264003

为获得高诱导率的花生毛状根诱导条件,同时探究不同浓度的萘乙酸(NAA)和2,4二氯苯氧乙酸(2,4-D)对花生毛状根生长和白藜芦醇含量的影响。研究了不同发根农杆菌菌株和不同乙酰丁香酮浓度对花生毛状根诱导率的影响;以固体MS培养基为对照,... 详细信息

为获得高诱导率的花生毛状根诱导条件,同时探究不同浓度的萘乙酸(NAA)和2,4二氯苯氧乙酸(2,4-D)对花生毛状根生长和白藜芦醇含量的影响。研究了不同发根农杆菌菌株和不同乙酰丁香酮浓度对花生毛状根诱导率的影响;以固体MS培养基为对照,分别添加不同浓度的NAA和2,4-D,培养花生毛状根,探究对毛状根生长和白藜芦醇含量的影响。实验显示花生毛状根诱导率可达到92.3%。花生毛状根随着NAA的浓度升高,生物量同对照相比较无显著差异,各浓度的NAA之间也无明显差异;与对照相比较,白藜芦醇含量显著增高,呈显著差异,但各浓度的NAA之间白藜芦醇的含量无明显差异。添加2,4-D形成的生物量明显偏低,白藜芦醇含量与添加NAA组无差别。以A600为0.8的发根农杆菌R1601菌液侵染花生叶片,在含50μmol/L乙酰丁香酮的MS培养基培养时,可以高效的诱导得到花生毛状根;NAA可以作为一种外源激素提高花生毛状根中白藜芦醇的含量。

关键词：发根农杆菌花生毛状根萘乙酸白藜芦醇生物量

非编码区基因突变对Tn＋肿瘤细胞Cosmc mRNA的影响

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中华微生物学和免疫学杂志 2011年第4期31卷 294-298页

作者：胡涛刘希伟董孟华滨州医学院免疫学教研室烟台264003 滨州医学院解剖学教研室烟台264003

目的探讨Tn＋肿瘤细胞分子伴侣（Cosmc）非编码区基因突变的方式及其对Cosmc转录水平的影响。方法免疫磁珠分选肿瘤组织中Tn＋、Tn-细胞，提取基因组DNA（gDNA）和总RNA；RT-PCR检测T-synthase及CosmcmRNA转录水平的表达状况；PCR扩增Co... 详细信息

目的探讨Tn＋肿瘤细胞分子伴侣（Cosmc）非编码区基因突变的方式及其对Cosmc转录水平的影响。方法免疫磁珠分选肿瘤组织中Tn＋、Tn-细胞，提取基因组DNA（gDNA）和总RNA；RT-PCR检测T-synthase及CosmcmRNA转录水平的表达状况；PCR扩增Cosmc非编码区基因，基因测序寻找突变位点。结果Tn-细胞中未发现基因突变，但部分病人肿瘤组织Tn-细胞存在等位基因嵌合体。Tn＋肿瘤细胞均可见基因突变，但突变方式和位点并不完全一致。部分病人表现为杂合缺失，部分病人表现为点突变。Tn＋、Tn-细胞T—synthasemRNA转录水平无明显差异，Tn＋细胞CosmcmRNA转录水平明显降低。结论Tn＋肿瘤细胞Cosmc非编码区存在基因突变，可能影响Cosmc基因转录导致肿瘤细胞表达Tn抗原。

关键词：肿瘤 Tn抗原 Cosmc 基因突变杂合缺失

慢性阻塞性肺病纵隔应变对“小心脏”形成的力学分析

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中国生物医学工程学报 1991年第4期10卷 265-269页

作者：刘元发滨州医学院内科教研室

本文通过对COPD病人纵隔及心包膜壁层(下简称心包)的应力—应变分析,认为COPD病人纵隔应变程度已不容忽视,将导致其应力增加并在心包处集中而影响心包。按心包的平衡方程,心包应力增加导致其曲率减小,中点挠度减小,心包移向纵隔中位。同... 详细信息

本文通过对COPD病人纵隔及心包膜壁层(下简称心包)的应力—应变分析,认为COPD病人纵隔应变程度已不容忽视,将导致其应力增加并在心包处集中而影响心包。按心包的平衡方程,心包应力增加导致其曲率减小,中点挠度减小,心包移向纵隔中位。同时,心脏舒张期充盈阻力增加、充盈量减少,因而心搏量减少而次数增加。提出COPD病人纵隔应变也是其“小心脏”发生的原因之一。

关键词：慢性阻塞性肺病纵隔应变 “小心脏” 生物力学病理生理学

高活性脐带间充质干细胞干预老年树鼩衰老脾脏的作用与机制

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中国组织工程研究 2025年第19期29卷 4000-4010页

作者：叶丽田川赵晓娟陈梦蝶叶倩倩李强廖珠银李晔朱向情阮光萍何志旭舒莉萍潘兴华贵州医科大学基础医学院免疫学教研室组织工程与干细胞实验中心贵州省贵阳市550004 中国人民解放军联勤保障部队第九二〇医院干细胞与免疫细胞生物医药技术国家地方联合工程实验室云南省细胞治疗技术转化医学重点实验室昆明市干细胞与再生医学重点实验室基础医学实验室云南省昆明市650032 遵义医科大学附属医院儿科学教研室贵州省遵义市563100

背景:脾脏具有储血、造血和免疫功能,随着年龄增长,脾脏结构退变、功能衰退引起免疫系统功能受损,进而加速机体衰老进程,而高活性脐带间充质干细胞治疗树鼩脾脏衰老尚未见报道。目的:探讨高活性脐带间充质干细胞对树鼩脾脏衰老的干预作... 详细信息

背景:脾脏具有储血、造血和免疫功能,随着年龄增长,脾脏结构退变、功能衰退引起免疫系统功能受损,进而加速机体衰老进程,而高活性脐带间充质干细胞治疗树鼩脾脏衰老尚未见报道。目的:探讨高活性脐带间充质干细胞对树鼩脾脏衰老的干预作用及机制。方法:从剖腹产的新生树鼩脐带组织中分离、培养和获得高活性脐带间充质干细胞,三系分化试剂盒检测成脂、成骨、成软骨分化能力,流式细胞术检测细胞周期和表面标志物。以感染复数值分别为100,120,140,160,180,200的吉凯基因绿色荧光蛋白转染第2代高活性脐带间充质干细胞,筛选最佳转染条件;转染后的第4代高活性脐带间充质干细胞尾静脉输注给老年治疗组树鼩,青年对照组和老年模型组不予特殊处理,治疗4个月时取脾脏组织,苏木精-伊红染色观察脾脏组织结构;β-半乳糖苷酶染色检测衰老相关半乳糖苷酶活性;免疫组织化学染色检测p21和p53蛋白表达水平;Ki67和PCNA免疫荧光染色检测细胞增殖活性;免疫荧光染色检测脾脏自噬蛋白分子Beclin1和APG5L/ATG5表达水平;活性氧荧光染色检测脾脏组织的活性氧含量;CD3免疫荧光染色检测总T淋巴细胞比例变化;酶联免疫吸附实验检测脾脏组织白细胞介素1β和转化生长因子β1分泌水平;DAPI复染细胞核观察绿色荧光蛋白标记的高活性脐带间充质干细胞在脾脏组织的分布情况。结果与结论:①高活性脐带间充质干细胞呈核小短梭形、鱼群样生长,G_(0)/G_(1)期占比大,具有向成脂、成骨和成软骨分化潜能。②感染复数为140且转染72 h为吉凯基因绿色荧光蛋白标记树鼩高活性脐带间充质干细胞的最佳条件。③与老年模型组相比,老年治疗组树鼩脾脏组织细胞排列紧密,白髓面积增加(P0.05),脾脏组织衰老相关半乳糖苷酶活性水平降低(P0.05)。与青年对照组相比,以上检测指标在老年治疗组中均有显著差异(P<0.05)。④冰冻组织切片观察可见老年治疗组树鼩脾脏组织中有绿色荧光蛋白标记的绿色荧光细胞。结果表明:静脉输注高活性脐带间充质干细胞可迁移至脾脏组织,抑制活性氧产生,下调衰老相关蛋白分子表达,诱导细胞自噬,促进细胞增殖,降低慢性炎症,进而改善脾脏组织结构和功能。

关键词：高活性脐带间充质干细胞树鼩脾脏衰老免疫自噬炎症