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PERK信号通路对实验性绝经后骨质疏松雌性大鼠成骨细胞分化的影响

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吉林大学学报（医学版） 2018年第2期44卷 260-264页

作者：李希宁陈晓春朱云飞曹泾楠邹忆婷杜霄王旗春湖州师范学院医学院病理学教研室浙江湖州313000

目的:探讨实验性雌性大鼠绝经后骨质疏松(PMOP)治疗前后骨组织中PERK、ATF4、Runx2、osterix、RANKL和OPG的变化,阐明PERK信号通路在PMOP发生中的作用。方法:复制雌性大鼠卵巢去势骨质疏松模型。45只大鼠分为正常对照组(大鼠不做处理,15... 详细信息

目的:探讨实验性雌性大鼠绝经后骨质疏松(PMOP)治疗前后骨组织中PERK、ATF4、Runx2、osterix、RANKL和OPG的变化,阐明PERK信号通路在PMOP发生中的作用。方法:复制雌性大鼠卵巢去势骨质疏松模型。45只大鼠分为正常对照组(大鼠不做处理,15只)、骨质疏松组(雌性大鼠卵巢摘除,15只)和骨质疏松治疗组(大鼠卵巢摘除后尾静脉注射雌激素,15只)。观察各组大鼠血清中Ⅰ型胶原(ColⅠ)、碱性磷酸酶(ALP)和骨钙素(OCN)水平。饲养3个月后取各组大鼠股骨骨干做病理切片,RT-PCR法检测各组大鼠骨组织中PERK、ATF4、Runx2、osterix、RANKL和OPG基因表达水平,Western blotting法分析PERK、ATF4、Runx2、osterix、RANKL和OPG蛋白表达水平。结果:与对照组比较,骨质疏松组大鼠血清中ColⅠ、ALP和OCN水平明显降低(P<0.05或P<0.01);与骨质疏松组比较,骨质疏松治疗组大鼠血清中ColⅠ、ALP和OCN水平明显升高(P<0.01)。与对照组比较,骨质疏松组大鼠骨组织中PERK、ATF4、Runx2和osterix基因表达水平明显下降(P<0.05或P<0.01),RANKL基因表达水平明显升高(P<0.01);与骨质疏松组比较,骨质疏松治疗组大鼠骨组织中PERK、ATF4、Runx2和osterix基因表达水平明显升高(P<0.05或P<0.01),RANKL基因表达水平明显降低(P<0.01)。与对照组比较,骨质疏松组大鼠骨组织中PERK、Runx2和osterix蛋白表达水平明显下降(P<0.05或P<0.01),RANKL蛋白表达水平明显升高(P<0.05或P<0.01);与骨质疏松组比较,骨质疏松治疗组大鼠骨组织中PERK、Runx2和osterix蛋白表达水平明显上升(P<0.05或P<0.01),RANKL蛋白表达水平明显降低(P<0.01)。HE染色,与对照组比较,骨质疏松组大鼠骨组织中骨吸收陷窝变大,骨吸收增强,导致骨质流失;与骨质疏松组比较,骨质疏松治疗组大鼠骨质吸收减弱,骨骼恢复正常结构。结论:雌性大鼠卵巢切除及注射雌激素治疗后,其骨组织中PERK表达趋势与成骨细胞转录因子Runx2和osterix变化一致,与破骨细胞转录因子RANKL表达相反,提示PMOP发病时成骨细胞功能减弱与PERK表达下降有关。

关键词：绝经后骨质疏松 PERK 成骨细胞破骨细胞转录因子

百令胶囊联合肺康复医疗体操对缓解期COPD的疗效观察

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中国中药杂志 2008年第8期33卷 942-944页

作者：沈志坤湖州师范学院医学院临床医学教研室浙江湖州313000

目的:探讨百令胶囊与肺康复医疗体操联合治疗对缓解期慢性阻塞性肺疾病的影响。方法:采用前瞻性研究方法将50例缓解期慢性阻塞性肺疾病患者随机分成2组,对照组(25例)单用常规西药治疗;治疗组(25例)加服百令胶囊并联合肺康复医疗体操治疗... 详细信息

目的:探讨百令胶囊与肺康复医疗体操联合治疗对缓解期慢性阻塞性肺疾病的影响。方法:采用前瞻性研究方法将50例缓解期慢性阻塞性肺疾病患者随机分成2组,对照组(25例)单用常规西药治疗;治疗组(25例)加服百令胶囊并联合肺康复医疗体操治疗;疗程均为6个月,观察患者肺通气、呼吸困难、抗病能力的改善状况。结果:治疗组疗效明显优于对照组,患者呼吸困难状况改善,呼吸困难分级的平均级数的下降率:治疗组为24.53%,对照组仅3.7%;各项肺通气指标均明显升高(P<0.05或P<0.01);治疗组治疗前后免疫功能提高(P<0.01)。结论:中药百令胶囊结合肺康复医疗体操是缓解期慢性阻塞性肺疾病患者,尤其是肺肾气虚者提高免疫力,改善肺功能的良好方案。

关键词：百令胶囊医疗体操慢性阻塞性肺疾病疗效观察

高血糖状态结直肠癌相关基因的验证及其诊疗效能评估

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中国医学科学院学报 2018年第6期40卷 769-777页

作者：崔戈冯文明张婷朱国良石麒麟张晓岚夏慧湖州师范学院附属第一医院病理科浙江湖州313000 湖州师范学院附属第一医院外科浙江湖州313000 湖州师范学院医学院病理教研室浙江湖州313000

目的验证高血糖状态结直肠癌相关基因表达并评估其诊断价值。方法收集109例结直肠癌患者肿瘤组织、远端正常肠黏膜组织及外周血样本、30例糖尿病患者及30名健康志愿者外周血样本,采用实时荧光定量PCR法检测上述样本葡萄糖调节蛋白78 (GR... 详细信息

目的验证高血糖状态结直肠癌相关基因表达并评估其诊断价值。方法收集109例结直肠癌患者肿瘤组织、远端正常肠黏膜组织及外周血样本、30例糖尿病患者及30名健康志愿者外周血样本,采用实时荧光定量PCR法检测上述样本葡萄糖调节蛋白78 (GRP78)、尼克酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸氧化酶1 (NOX1)、癌胚抗原相关的细胞黏附分子5(CEACAM5)、热休克蛋白60 (HSP60)、组蛋白去乙酰化酶1 (HDAC1)基因mRNA表达,采用Pearson相关性分析基因表达与临床病理参数的关联;采用诊断试验方法计算上述基因在结直肠癌患者血清中表达的灵敏度、特异度、准确度、预测性、正确指数、似然比,绘制受试者工作特征曲线,并计算受试者工作特征曲线下面积,评价多基因联合检测的诊断效能。结果 GRP78 (P=0. 001)、NOX1 (P=0. 022)、CEACAM5 (P=0. 000)、HSP60 (P=0. 044)、HDAC1 (P=0. 047)基因mRNA表达分别与空腹血糖状态呈显著正相关;与正常血糖状态结直肠癌肿瘤组织及血清相比,高血糖状态结直肠癌肿瘤组织及血清中的NOX1 (P=0. 000,P=0. 008)及HDAC1 (P=0. 000,P=0. 037) mRNA表达均显著增高; NOX1mRNA表达与结直肠癌肿瘤直径呈显著正相关(P=0. 013),HDAC1 mRNA表达与结直肠癌发病部位(P=0. 049)、原发灶浸润深度(P=0. 025)、TNM分期(P=0. 042)均呈显著正相关; NOX1、CEACAM5、HDAC1的受试者工作特征曲线下面积分别为0. 931、0. 852、0. 860 (P均=0. 000); NOX1、HDAC1 mRNA在高血糖状态结直肠癌患者血清中表达的特异度、准确度及阴性预测值均在90%以上。联合检测NOX1、CEACAM5、HDAC1表达的灵敏度为98. 82%,特异度为99. 93%。结论联合检测高血糖状态结直肠癌相关基因可提高高血糖人群早期筛查结直肠癌的诊断效能。

关键词：高血糖状态结直肠癌相关基因葡萄糖调节蛋白78 NADPH氧化酶-1 癌胚抗原相关细胞黏附分子5 热休克蛋白60 组蛋白去乙酰化酶1

1,25二羟维生素D3通过抑制mTOR通路而激活自噬以促进大鼠成骨细胞增殖和分化

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营养学报 2021年第1期43卷 71-78,85,96页

作者：李希宁刘重斌高喜仁赵宇王旗春翁伟湖州师范学院医学院病理学教研室湖州313000 湖州师范学院附属第一医院骨科湖州313000

目的探讨1,25二羟维生素D3[1,25(OH)2D3]对大鼠原代成骨细胞培养的第4代细胞中哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)的作用及其对成骨的影响。方法由新生SD大鼠颅骨获取原代成骨细胞,用培养的第4代细胞进行研究,分为对照组(control)、雷帕霉素... 详细信息

目的探讨1,25二羟维生素D3[1,25(OH)2D3]对大鼠原代成骨细胞培养的第4代细胞中哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)的作用及其对成骨的影响。方法由新生SD大鼠颅骨获取原代成骨细胞,用培养的第4代细胞进行研究,分为对照组(control)、雷帕霉素组(rapamycin,RAPA)(20nmol/L)、MHY1485组(2nmol/L)、1,25(OH)2D3组(5nmol/L)和MHY1485+1,25(OH)2D3组,作用0、12、24、36、48、60、72、84、96、108和120h后,以CCK8检测成骨细胞增殖活性。Western blot和RT-PCR检测mTOR及下游因子真核翻译起始因子4E结合蛋白1(4E-BP1)和核糖体S6激酶1(S6K1)、自噬标志物Beclin-1、微管相关蛋白1轻链3(LC3)和成骨细胞分化相关因子碱性磷酸酶(ALP)、成骨相关转录因子(Osterix)和Runt相关转录因子2(Runx2)的表达,ALP染色观察各组细胞内ALP含量变化。以上分组条件作用21d后茜素红染色检测各组矿化情况。结果与对照组比较,1,25(OH)2D3明显促进成骨细胞增殖,逆转MHY1485抑制的成骨细胞增殖活性。Western blot和RT-PCR结果显示1,25(OH)2D3抑制mTOR、4E-BP1和S6K1的蛋白磷酸化,并使自噬标志物Beclin-1和LC3-Ⅱ、分化标志物ALP、Osterix和Runx2表达显著增加。ALP染色和茜素红染色结果显示,1,25(OH)2D3早期促进ALP的分泌,晚期促进矿化结节形成。结论 1,25(OH)2D3可以促进大鼠成骨细胞的增殖、分化与矿化,其可能与其通过抑制mTOR信号通路而激活自噬有关。[营养学报,2021,43(1):71-78,85,96]

关键词：成骨细胞 1,25(OH)2D3 mTOR 自噬分化

雌二醇联合1,25-二羟维生素D3对绝经后骨质疏松症大鼠的治疗作用

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吉林大学学报（医学版） 2021年第4期47卷 857-864页

作者：李希宁翁伟沈哲源豆晓杰闵继康湖州师范学院医学院病理学教研室浙江湖州313000 湖州师范学院附属第一医院骨科浙江湖州313000

目的:探讨雌二醇联合1,25-二羟维生素D3[1,25(OH)2D3]对绝经后骨质疏松症(PMOP)大鼠的治疗作用,并阐明其作用机制。方法:40只雌性SD大鼠随机分为对照组、骨质疏松症模型组(模型组)、卵巢去势后雌二醇干预组(雌二醇组)和卵巢去势后雌二... 详细信息

目的:探讨雌二醇联合1,25-二羟维生素D3[1,25(OH)2D3]对绝经后骨质疏松症(PMOP)大鼠的治疗作用,并阐明其作用机制。方法:40只雌性SD大鼠随机分为对照组、骨质疏松症模型组(模型组)、卵巢去势后雌二醇干预组(雌二醇组)和卵巢去势后雌二醇联合1,25(OH)2D3组[雌二醇联合1,25(OH)2D3组],每组10只,连续喂养24周后取大鼠血清,采用酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测各组大鼠血清中成骨标志物碱性磷酸酶(ALP)、骨钙素(OC)、骨保护素(OPG)、Ⅰ型前胶原氨基端原肽(PINP)、抗酒石酸酸性磷酸酶(TRACP)和骨吸收标志物核因子κB受体活化因子配体(RANKL)水平。取大鼠双侧股骨,采用HE和TRAP染色观察大鼠骨组织形态表现,采用骨密度仪和力学生物仪检测各组大鼠股骨骨密度(BMD)和骨组织弹性模量、刚度、最大应力及最大承受力。取大鼠双侧胫骨,采用逆转录PCR(RT-PCR)法和Western blotting法检测各组大鼠骨组织中ALP、OC、OPG及RANKL mRNA和蛋白表达水平。结果:与对照组比较,模型组大鼠血清中ALP、OC、OPG、PINP、TRACP和RANKL水平明显升高(P<0.01);大鼠骨膜厚度明显增加,破骨细胞数量增多且骨外膜下可见少许点状虫蚀状缺损,呈现典型骨质疏松特点;大鼠股骨BMD和生物力学指标明显降低(P<0.01),骨组织中ALP、OC、OPG及RANKL mRNA和蛋白表达水平均明显升高(P<0.01)。与模型组比较,雌二醇联合1,25(OH)2D3组大鼠血清中ALP、PINP、TRACP和RANKL水平明显降低(P<0.01),OPG/RANKL比值明显升高(P<0.01);骨膜内成骨细胞增生活跃,且骨膜下无虫蚀状缺损;大鼠股骨BMD和生物力学指标明显升高(P<0.01),骨组织中ALP、OC及RANKL mRNA和蛋白表达水平明显降低(P<0.01)。与雌二醇组比较,雌二醇联合1,25(OH)2D3组大鼠血清中OC和OPG水平及OPG/RANKL比值明显升高(P<0.01),TRACP和RANKL水平明显降低(P<0.01),大鼠股骨BMD和生物力学指标中弹性模量及最大应力明显升高(P<0.01),骨组织中OPG mRNA和蛋白表达水平明显升高(P<0.01),RANKL mRNA和蛋白表达水平明显降低(P<0.01)。结论:雌二醇联合1,25(OH)2D3能更有效地促进大鼠成骨细胞的增殖和分化,二者联合应用可在治疗PMOP的同时降低过量激素替代导致的不良反应发生率。

关键词：绝经后骨质疏松症成骨细胞雌二醇 1,25-二羟维生素D3 骨密度

mTOR磷酸化水平对成骨MC3T3E1细胞增殖、自噬和分化的作用及其机制

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吉林大学学报（医学版） 2021年第3期47卷 575-586页

作者：李希宁翁伟沈哲源豆晓杰赵宇闵继康湖州师范学院医学院病理学教研室浙江湖州313000 湖州师范学院附属第一医院骨科浙江湖州313000

目的:通过雷帕霉素(RAPA)和MHY1485抑制和激活哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)的磷酸化,探讨磷酸化mTOR(p-mTOR)水平变化对成骨细胞增殖、自噬和分化的作用及其机制。方法:小鼠成骨MC3T3-E1细胞分为对照组、20 nmol·L^(-1)RAPA组、60 nmo... 详细信息

目的:通过雷帕霉素(RAPA)和MHY1485抑制和激活哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)的磷酸化,探讨磷酸化mTOR(p-mTOR)水平变化对成骨细胞增殖、自噬和分化的作用及其机制。方法:小鼠成骨MC3T3-E1细胞分为对照组、20 nmol·L^(-1)RAPA组、60 nmol·L^(-1)RAPA组、160 nmol·L^(-1)RAPA组和2.0μmol·L^(-1)MHY1485组。流式细胞术检测各组不同细胞周期MC3T3-E1细胞百分率,Western blotting和实时荧光定量PCR(RT-qPCR)法检测各组细胞中mTOR及下游真核翻译起始因子4E结合蛋白1(4E-BP1)和核糖体S6激酶1(S6K1)、B淋巴细胞瘤2(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)和Caspase-3、碱性磷酸酶(ALP)、Runt相关转录因子2(Runx2)和成骨相关转录因子Osterix的表达水平,茜素红染色观察各组成骨MC3T3-E1细胞矿化能力。结果:与对照组比较,20和60 nmol·L^(-1)RAPA组细胞增殖活性升高(P<0.05或P<0.01),G1期细胞百分率降低(P<0.05或P<0.01),S期细胞百分率升高(P<0.05或P<0.01),细胞中p-mTOR及其下游通路磷酸化4E-BP1(p-4E-BP1)、磷酸化S6K1(p-S6K1)水平和p62、Bax、Cleaved-Caspase-3表达水平降低(P<0.05或P<0.01)、LC3-Ⅱ、Bcl-2、ALP和Runx2表达水平升高(P<0.05或P<0.01);与对照组比较,160 nmol·L^(-1)RAPA组细胞增殖活性降低(P<0.01)、细胞中p-mTOR、p-4E-BP1和p-S6K1水平明显降低(P<0.05或P<0.01),2.0μmol·L^(-1)MHY1485组细胞增殖活性明显降低(P<0.01),细胞中p-mTOR、p-4E-BP1和p-S6K1水平明显升高(P<0.01),160 nmol·L^(-1)RAPA和2μmol·L^(-1)MHY1485组细胞中Bax和Cleaved-Caspase-3表达水平升高(P<0.05或P<0.01),Bcl-2、ALP、Runx2和Osterix表达水平降低(P<0.05或P<0.01);作用12 d后,20和60 nmol·L^(-1)RAPA组细胞中可见明显矿化结节,160 nmol·L^(-1)RAPA和2.0μmol·L^(-1)MHY1485组成骨细胞中见极少数钙盐结晶。结论:轻中度抑制mTOR的磷酸化可促进成骨细胞增殖、自噬和分化,而过度抑制和增强mTOR磷酸化则具有相反作用。

关键词：哺乳动物雷帕霉素靶蛋白成骨细胞细胞增殖自噬分化

胃癌患者糖脂代谢指标与临床病理学特征的相关性分析

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中华医学杂志 2016年第32期96卷 2545-2547页

作者：张婷崔戈冯文明石麒麟崔杰李希宁王旗春沈洪湖州师范学院医学院病理学教研室浙江省湖州313000 湖州师范学院医学院药理学教研室浙江省湖州313000 湖州师范学院附属第一医院病理科湖州师范学院附属第一医院外科山东省淄博市中医医院内二科

目的探讨胃癌患者糖脂代谢水平与临床病理学特征的相关性。方法收集443例人住湖州师范学院附属第一医院的胃癌患者临床病理参数，统计胃癌患者初入院空腹糖脂代谢指标水平及所占百分比，分析糖脂代谢指标水平与临床病理参数的相关性。... 详细信息

目的探讨胃癌患者糖脂代谢水平与临床病理学特征的相关性。方法收集443例人住湖州师范学院附属第一医院的胃癌患者临床病理参数，统计胃癌患者初入院空腹糖脂代谢指标水平及所占百分比，分析糖脂代谢指标水平与临床病理参数的相关性。结果与糖脂代谢指标正常水平的胃癌患者相比，血清低水平总胆固醇（X^2=7．676）男性胃癌患者显著较少（P〈0．05），低水平高密度脂蛋白（X^2=7．520）、低水平载脂蛋白A1（X^2=6．253）男性胃癌患者均显著较多（P〈0．05）。血清总胆固醇水平与患者年龄（r=-0．116）、肿瘤直径（r=-0．117）及TNM分期（r=-0．111）均呈负相关（P〈0．05）；HDL与肿瘤直径（r=-0．094）、转移淋巴结数量（r=-0．106）、原发灶浸润深度（r=-0．112）、淋巴结转移分级（r=-0．102）及TNM分期（r=-0．107）均呈负相关（P〈0．05）；低密度脂蛋白水平与患者年龄（r=-0．116）呈负相关（P〈0．05）；血清脂蛋白a与肿瘤直径（r=0．170）、转移淋巴结数量（r=0．151）、原发灶浸润深度（r=0．160）、淋巴结转移分级（r=0．153）及TNM分期（r=0．115）均呈正相关（P〈0．05）；载脂蛋白A1与远处转移（r=-0．168）、TNM分期（r=-0．120）均呈负相关（P〈0．05）；载脂蛋白B与远处转移（r=-0．132）呈负相关（P〈0．05）。血糖及三酰甘油水平与胃癌患者临床病理特征无明显关联（P〉0．05）。结论低脂代谢水平、高脂蛋白A血症可能是胃癌恶性程度及进展的代谢特征，监测血脂指标变化可能对胃癌患者病程评估有一定参考价值。

关键词：胃肿瘤糖代谢脂质代谢病理过程相关性研究

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锌/番茄红素对糖尿病小鼠心肌的保护作用

营养学报 2016年第3期38卷 261-266页

作者：陈露赵熙杰汤佳佳戴航栋俞露刘重斌湖州师范学院医学院生理与药理学教研室湖州313000

目的探究锌/番茄红素对链脲佐菌素(STZ)诱导糖尿病心肌病小鼠的保护作用。方法 60只健康成年小鼠随机分为空白对照、空白对照+锌、空白对照+锌+番茄红素、模型、模型+锌和模型+锌+番茄红素组,共6组。模型组小鼠腹腔注射STZ,连续5 d,空... 详细信息

目的探究锌/番茄红素对链脲佐菌素(STZ)诱导糖尿病心肌病小鼠的保护作用。方法 60只健康成年小鼠随机分为空白对照、空白对照+锌、空白对照+锌+番茄红素、模型、模型+锌和模型+锌+番茄红素组,共6组。模型组小鼠腹腔注射STZ,连续5 d,空白对照组小鼠腹腔注射等体积柠檬酸缓冲液,实验连续3月。每周检测小鼠体质量,每2 w检测小鼠血糖。实验结束后,取动物心肌组织,光镜下观察心肌组织,实时免疫荧光定量PCR检测组织中丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶(Akt2)、金属硫蛋白(MT)、葡萄糖转运体4(GLUT4)的表达变化。结果与空白对照组比较,模型组小鼠出现明显多饮、多食、多尿及体质量下降(三多一少),血糖明显增高(P0.05)。结论锌/番茄红素对实验性糖尿病小鼠心肌具有一定的保护作用。

关键词：番茄红素锌糖尿病心肌病氧化应激

番茄红素对β-淀粉样蛋白诱导的脉络丛上皮细胞Aβ转运相关蛋白表达及海马氧化损伤的影响

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营养学报 2020年第3期42卷 270-274页

作者：张镇涛周海城顾凌飞王萍王瑞刘重斌湖州师范学院医学院生理与药理学教研室湖州313000

目的探究番茄红素对β-淀粉样蛋白诱导的阿尔茨海默病(AD)模型大鼠脉络丛上皮细胞Aβ转运体表达及海马氧化损伤的影响。方法成年健康清洁级雄性SD大鼠32只,体质量(248±16.2)g,随机分为空白对照、AD模型、AD+番茄红素[ig.10 mg/(kg·d)... 详细信息

目的探究番茄红素对β-淀粉样蛋白诱导的阿尔茨海默病(AD)模型大鼠脉络丛上皮细胞Aβ转运体表达及海马氧化损伤的影响。方法成年健康清洁级雄性SD大鼠32只,体质量(248±16.2)g,随机分为空白对照、AD模型、AD+番茄红素[ig.10 mg/(kg·d)]、番茄红素[ig.10 mg/(kg·d)]4组,每组8只。动物适应性饲养1w后,采用脑立体定位仪将8μg凝聚态Aβ1-42注入双侧大鼠海马区,构建AD动物模型,番茄红素干预组连续灌胃番茄红素40 d,每天一次。实验结束后,处死动物取海马及脉络丛上皮组织,实时定量RT-PCR法检测脉络丛上皮细胞Aβ转运相关蛋白[低密度脂蛋白受体相关蛋白(LRP)-1、LRP-2、P-糖蛋白(P-gp)和晚期糖基化终产物受体(RAGE)]和海马氧化应激损伤及凋亡相关蛋白[血红蛋白氧化酶-1 (HO-1)和caspase-3]的mRNA表达水平。结果脉络丛上皮组织Aβ转运体mRNA水平测定显示:与对照组相比,AD组LPR-1 mRNA表达水平显著升高(P=0.0030.05, P=0.230>0.05)。经番茄红素干预后,LPR-1、LPR-2及P-gp mRNA水平显著升高(P病理进程。[营养学报,2020,42(3):270-274]

关键词：番茄红素转运体脉络丛上皮阿尔茨海默病 Aβ清除氧化应激