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基于转录组和单细胞测序探讨扶正化瘀片抗肝纤维化的作用机制

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中国中药杂志 2024年第10期49卷 2597-2606页

作者：陆华冠彭望霞江丽红姚强谢新雷昌黄丹刘建军湖南中医药大学科技创新中心/中药粉体与创新药物省部共建国家重点实验室培育基地湖南长沙410208

旨在通过单细胞、转录组学测序和体内外实验,探讨巨噬细胞极化在扶正化瘀片(FZHY)治疗肝纤维化中的作用。从GEO数据库中获取肝纤维化相关芯片、转录组数据集及单细胞测序数据集,筛选差异基因;运用GeneCards、DisGeNET、NCBI、PharmgKB、... 详细信息

旨在通过单细胞、转录组学测序和体内外实验,探讨巨噬细胞极化在扶正化瘀片(FZHY)治疗肝纤维化中的作用。从GEO数据库中获取肝纤维化相关芯片、转录组数据集及单细胞测序数据集,筛选差异基因;运用GeneCards、DisGeNET、NCBI、PharmgKB、TTD和OMIM 6个数据库获取肝纤维化相关基因;从GeneCards数据库中获取巨噬细胞极化相关基因;将上述3个基因集取交集,构建蛋白-蛋白互作(protein-protein interaction,PPI)网络,使用Cytoscape软件筛选核心蛋白,并通过单细胞测序对核心蛋白的表达模式进行可视化。使用四氯化碳(carbon tetrachloride,CCl_(4))构建的肝纤维化小鼠模型,采用苏木精-伊红(hematoxylin-eosin,HE)染色、马松(Masson)染色对肝组织病理形态学进行观察;免疫组织化学染色检测α-平滑肌肌动蛋白(alpha-smooth muscle actin,α-SMA)和转化生长因子(transforming growth factor,TGF)-β1蛋白的表达;比色法检测血清丙氨酸转氨酶(alanine aminotransferase,ALT)、天冬氨酸转氨酶(aspartate aminotransferase,AST);酶联免疫吸附测定(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)检测血清中炎症因子水平;蛋白质印记(Western blot,WB)检测肝组织中α-SMA、TGF-β1、CD86、血小板反应蛋白(thrombospondin,THBS)1的表达情况。使用LPS刺激RAW264.7细胞构建M1巨噬细胞极化模型,通过CCK-8法检测细胞活力,WB检测细胞中CD86、THBS1的蛋白表达情况和实时荧光定量逆转录聚合酶链反应(real-time fluorescent quantitative reverse transcription polymerase chain reaction,RT-qPCR)法检测肿瘤坏死因子(tumor necrosis factor,TNF)-α、白细胞介素(interleukin,IL)-1β的mRNA表达水平。结果显示,共获得26个潜在调节肝纤维化巨噬细胞极化相关的基因,并筛选出THBS1、LUM、FBLN5等10个肝纤维化巨噬细胞极化相关的核心蛋白。单细胞数据分析,显示排名最靠前的THBS1可能由M1巨噬细胞表达。动物实验表明,FZHY可以减少CCl_(4)诱导的小鼠肝脏中的炎性细胞浸润以及胶原沉积;缓解肝损伤和炎症水平,抑制α-SMA、TGF-β1、CD86和THBS1蛋白的表达。细胞实验结果显示,FZHY能显著减少细胞内CD86和THBS1蛋白表达以及TNF-α、IL-1β的mRNA水平。结果表明,扶正化瘀片改善肝纤维化的机制,可能与抑制THBS1蛋白的表达,减少巨噬细胞M1极化,降低炎症反应有关。

关键词：肝纤维化扶正化瘀片单细胞测序转录组学血小板反应蛋白1

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加味百合地黄汤通过调控SDF-1/CXCR4轴对围绝经期抑郁症大鼠下丘脑炎性损伤的改善作用

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中成药 2024年第1期46卷 250-255页

作者：刘洋李翎熙周密吴敏学王宇红赵洪庆湖南中医药大学科技创新中心/中药粉体与创新药物国家重点实验室培育基地湖南长沙410208

目的探究加味百合地黄汤对围绝经期抑郁症(PDD)大鼠下丘脑神经炎性损伤的作用。方法大鼠随机分为正常组、模型组、阳性药组(氟哌噻吨美利曲辛片,1.89 mg/kg)和加味百合地黄汤高、中、低剂量组(16.2、8.1、4.05 g/kg),每组10只,除正常组... 详细信息

目的探究加味百合地黄汤对围绝经期抑郁症(PDD)大鼠下丘脑神经炎性损伤的作用。方法大鼠随机分为正常组、模型组、阳性药组(氟哌噻吨美利曲辛片,1.89 mg/kg)和加味百合地黄汤高、中、低剂量组(16.2、8.1、4.05 g/kg),每组10只,除正常组外,其余各组均通过卵巢摘除(OVX)联合慢性不可预见性应激(CUS)建立PDD模型,给予相应剂量药物干预21 d。采用糖水偏好实验和旷场实验评价抑郁样行为,酶联免疫吸附法检测脑脊液炎症因子水平,HE染色观察下丘脑组织结构变化,免疫荧光染色、RT-qPCR、Western blot检测小胶质细胞Iba-1及SDF-1/CXCR4轴相关因子的表达。结果与模型组比较,加味百合地黄汤高剂量组抑郁样行为改善(P<0.01);下丘脑胞体肿胀、间隙增加、炎性浸润等病理损伤缓解;脑脊液中促炎因子IL-1β、IL-6水平降低(P<0.05),抗炎因子IL-4、IL-10、IGF-1水平升高(P<0.01),Iba-1、SDF-1、CXCR4表达降低(P<0.05),PSD-95、BDNF、NGF表达升高(P<0.05)。结论加味百合地黄汤抗PDD的作用可能与其抑制SDF-1/CXCR4轴进而改善下丘脑神经炎性损伤有关。

关键词：加味百合地黄汤围绝经期抑郁症(PDD) SDF-1/CXCR4轴小胶质细胞下丘脑脑脊液

柴金解郁安神片调控CaMKII和Cofilin双信号通路改善抑郁症海马谷氨酸能神经元突触重塑

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中国药理学通报 2024年第8期40卷 1523-1532页

作者：刘检唐林赵洪庆刘林杨蕙李薇孟盼王宇红湖南中医药大学第一附属医院医学创新实验中心湖南长沙410007 抑郁类疾病中医药防治湖南省重点实验室中药粉体与创新药物省部共建国家重点实验室培育基地湖南中医药大学科技创新中心湖南长沙410208

目的探讨柴金解郁安神片调控钙/钙调蛋白依赖性蛋白激酶Ⅱ(CaMKII)和Cofilin双信号通路,改善抑郁症海马谷氨酸能神经元突触重塑的分子机制。方法皮质酮联合脂多糖建立抑郁症体外细胞模型,实验设正常组、模型组、GR阻断剂组、GR激动剂组... 详细信息

目的探讨柴金解郁安神片调控钙/钙调蛋白依赖性蛋白激酶Ⅱ(CaMKII)和Cofilin双信号通路,改善抑郁症海马谷氨酸能神经元突触重塑的分子机制。方法皮质酮联合脂多糖建立抑郁症体外细胞模型,实验设正常组、模型组、GR阻断剂组、GR激动剂组、CX3CR1阻断剂组、CX3CR1激动剂组、柴金解郁安神片组、柴金解郁安神片联合GR激动剂组、柴金解郁安神片联合CX3CR1激动剂组,观察星形胶质细胞、小胶质细胞、前扣带皮层(anterior cingulate cortex,ACC)和海马神经元形态结构变化;检测ACC和海马谷氨酸能神经元激活及突触重塑情况;免疫荧光、Western blot分别检测海马谷氨酸能神经元内突触重塑相关谷氨酸受体2A(GRIN2A)、GRIN2B、CaMKII、MK2、Cofilin蛋白表达水平。结果柴金解郁安神片能明显改善胶质细胞、ACC和海马神经元损伤,并抑制ACC和海马谷氨酸能神经元异常激活,同时下调GRIN2A、GRIN2B、MK2蛋白,上调CaMKII、Cofilin蛋白,继而改善海马谷氨酸能神经元突触可塑性损伤和突触重塑。结论柴金解郁安神片能有效改善抑郁症海马谷氨酸能神经元突触重塑,其分子机制与调节突触重塑相关NR/CaMKII、MK2/Cofilin信号通路有关。

关键词：抑郁症谷氨酸能神经元突触重塑 NR/CaMKII MK2/Cofilin 柴金解郁安神片

柴金解郁安神片调控ACC-vHPC谷氨酸能神经环路异常改善抑郁症大鼠腹侧海马神经元突触重塑的机制研究

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中国中药杂志 2024年第9期49卷 2489-2500页

作者：刘检刘林唐林赵洪庆杨蕙李薇孟盼王宇红湖南中医药大学第一附属医院医学创新实验中心湖南长沙410007 抑郁类疾病中医药防治湖南省重点实验室湖南长沙410208 中药粉体与创新药物省部共建国家重点实验室培育基地湖南长沙410208 湖南中医药大学科技创新中心湖南长沙410208

探讨柴金解郁安神片调控前扣带皮层(ACC)-腹侧海马(vHPC)谷氨酸能神经环路异常改善抑郁症大鼠腹侧海马神经元突触重塑的分子机制。首先运用化学遗传将谷氨酸能腺相关病毒(AAV)定位注射至大鼠ACC脑区,并通过慢性温和不可预知性应激(CUMS... 详细信息

探讨柴金解郁安神片调控前扣带皮层(ACC)-腹侧海马(vHPC)谷氨酸能神经环路异常改善抑郁症大鼠腹侧海马神经元突触重塑的分子机制。首先运用化学遗传将谷氨酸能腺相关病毒(AAV)定位注射至大鼠ACC脑区,并通过慢性温和不可预知性应激(CUMS)联合孤笼饲养复制大鼠抑郁模型,实验设正常组、模型组、AAV空载组、AAV病毒组、AAV病毒+糖皮质激素受体(GR)阻断剂组、AAV病毒+趋化因子受体1(CX3CR1)阻断剂组、AAV病毒+柴金解郁安神片组,采用水迷宫(Morris water maze)、旷场(open-field)和强迫游泳(forced-swimming)实验联合动物行为分析系统评估大鼠抑郁样行为;苏木素-伊红(HE)染色检测大鼠ACC及vHPC脑区神经元形态结构变化;免疫荧光及核磷酸蛋白(c-Fos)检测大鼠ACC-vHPC谷氨酸能神经环路激活情况;高尔基染色和透射电镜检测大鼠vHPC神经元树突、树突棘及突触亚微结构变化;免疫荧光、Western blot分别检测大鼠vHPC谷氨酸能神经元细胞内突触重塑相关蛋白谷氨酸受体2A(GRIN2A)、谷氨酸受体2B(GRIN2B)、Ca^(2+)/钙调蛋白依赖性蛋白激酶Ⅱ(CaMKⅡ)、丝裂原激活蛋白激酶激活蛋白激酶2(MK2)、丝切蛋白(cofilin)表达水平。结果表明,谷氨酸能AAV病毒激活后模型组大鼠抑郁样行为表型、ACC及vHPC神经元形态结构、突触超微结构损伤更加加重,而GR、CX3CR1阻断剂均能不同程度逆转其异常改变,提示ACC脑区内胶质细胞GR/CX3CR1双信号介导的ACC-vHPC谷氨酸能神经环路异常激活可能与抑郁的发生发展密切相关。有趣的是,柴金解郁安神片也能显著抑制AAV病毒诱导的ACC-vHPC神经环路激活及Glu含量异常升高,同时有效逆转模型组大鼠进一步加重的抑郁样行为和vHPC谷氨酸能神经元突触重塑,并揭示其改善腹侧海马神经元突触损伤的分子机制可能与调控突触重塑相关信号NR/CaMKⅡ、MK2/cofilin有关。综上,该文证实了柴金解郁安神片能有效调控ACC-vHPC谷氨酸能神经环路异常进而改善抑郁症大鼠腹侧海马谷氨酸能神经元突触重塑,其分子机制可能与调节突触相关NR/CaMKⅡ、MK2/cofilin信号通路有关,这可能是其发挥抗抑郁作用的重要机制。

关键词：柴金解郁安神片抑郁症 ACC-vHPC神经环路突触重塑 NR/CaMKⅡ MK2/cofilin

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北柴胡质量控制研究

中成药 2024年第7期46卷 2129-2133页

作者：于静波韩越艾启迪孙洋周梓洋刘赛虎张子浩舒慧王宇红湖南中医药大学科技创新中心/中药粉体与创新药物省部共建国家重点实验室培育基地湖南长沙410208 湖南中医药大学药学院湖南长沙410208

目的对北柴胡质量进行控制。方法分析采用VenusilXBPC_(18)色谱柱(250mm×4.6mm,5μm);流动相乙腈-水,梯度洗脱;体积流量1.0mL/min;柱温35℃;检测波长210nm。建立HPLC指纹图谱,测定柴胡皂苷A、柴胡皂苷B2、柴胡皂苷C、柴胡皂苷D、柴胡皂... 详细信息

目的对北柴胡质量进行控制。方法分析采用VenusilXBPC_(18)色谱柱(250mm×4.6mm,5μm);流动相乙腈-水,梯度洗脱;体积流量1.0mL/min;柱温35℃;检测波长210nm。建立HPLC指纹图谱,测定柴胡皂苷A、柴胡皂苷B2、柴胡皂苷C、柴胡皂苷D、柴胡皂苷E、柴胡皂苷F、6″-O-乙酰基柴胡皂苷A的含量,进行主成分分析。结果12批药材指纹图谱中有13个共有峰,相似度0.970~0.995。7种成分在各自范围内线性关系良好(R^(2)≥0.9998),平均加样回收率90.75%~100.91%,RSD1.6%~4.0%。内蒙古、山西产药材中各成分含量接近。结论该方法精密、准确、稳定,可用于北柴胡质量评价。

关键词：北柴胡质量控制 HPLC指纹图谱含量测定主成分分析

柴金解郁安神片调控CaMKⅡ和Cofilin双信号通路改善抑郁症海马谷氨酸能神经元突触重塑

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中国药理学通报 2024年 1523-1532页

作者：刘检唐林赵洪庆刘林杨蕙李薇孟盼王宇红湖南中医药大学第一附属医院医学创新实验中心抑郁类疾病中医药防治湖南省重点实验室湖南中医药大学科技创新中心中药粉体与创新药物省部共建国家重点实验室培育基地湖南中医药大学科技创新中心

目的探讨柴金解郁安神片调控钙/钙调蛋白依赖性蛋白激酶Ⅱ(CaMKⅡ)和Cofilin双信号通路,改善抑郁症海马谷氨酸能神经元突触重塑的分子机制。方法皮质酮联合脂多糖建立抑郁症体外细胞模型,实验设正常组、模型组、GR阻断剂组、GR激动剂... 详细信息

目的探讨柴金解郁安神片调控钙/钙调蛋白依赖性蛋白激酶Ⅱ(CaMKⅡ)和Cofilin双信号通路,改善抑郁症海马谷氨酸能神经元突触重塑的分子机制。方法皮质酮联合脂多糖建立抑郁症体外细胞模型,实验设正常组、模型组、GR阻断剂组、GR激动剂组、CX3CR1阻断剂组、CX3CR1激动剂组、柴金解郁安神片组、柴金解郁安神片联合GR激动剂组、柴金解郁安神片联合CX3CR1激动剂组,观察星形胶质细胞、小胶质细胞、前扣带皮层(anterior cingulate cortex,ACC)和海马神经元形态结构变化;检测ACC和海马谷氨酸能神经元激活及突触重塑情况;免疫荧光、Western blot分别检测海马谷氨酸能神经元内突触重塑相关谷氨酸受体2A(GRIN2A)、GRIN2B、CaMKII、MK2、Cofilin蛋白表达水平。结果柴金解郁安神片能明显改善胶质细胞、ACC和海马神经元损伤,并抑制ACC和海马谷氨酸能神经元异常激活,同时下调GRIN2A、GRIN2B、MK2蛋白,上调CaMKII、Cofilin蛋白,继而改善海马谷氨酸能神经元突触可塑性损伤和突触重塑。结论柴金解郁安神片能有效改善抑郁症海马谷氨酸能神经元突触重塑,其分子机制与调节突触重塑相关NR/CaMKII、MK2/Cofilin信号通路有关。

关键词：抑郁症谷氨酸能神经元突触重塑 NR/CaMKⅡ MK2/Cofilin 柴金解郁安神片

基于CiteSpace的陈皮知识图谱可视化分析

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中草药 2024年第14期55卷 4836-4848页

作者：刘晓爽唐占明李慧君张文生北京师范大学天然药物教育部工程研究中心北京100088 北京师范大学中药资源保护与利用北京市重点实验室北京100875 北京师范大学地表过程与资源生态国家重点实验室珠海基地广东珠海519087

目的通过文献计量学软件CiteSpace对陈皮的研究现状及热点进行可视化分析,探索近年来全球学者在陈皮研究领域的科研协作态势,梳理其研究热点的动态变化,为未来的研究方向提供参考。方法系统检索中国知网(CNKI)和Web of Science数据库关... 详细信息

目的通过文献计量学软件CiteSpace对陈皮的研究现状及热点进行可视化分析,探索近年来全球学者在陈皮研究领域的科研协作态势,梳理其研究热点的动态变化,为未来的研究方向提供参考。方法系统检索中国知网(CNKI)和Web of Science数据库关于陈皮的相关文献,使用CiteSpace软件对研究作者、研究机构及关键词等方面进行可视化展示,对陈皮的研究现状及发展趋势进行分析。结果经过筛选,最终纳入与陈皮相关的中文文献497篇,其中关注广陈皮的文献123篇;与陈皮相关的英文文献276篇。文献作者分析显示成都中医药大学刘友平是陈皮研究发文量最多的作者,研究机构发文量最多的是成都中医药大学,存在以成都中医药大学、无限极(中国)有限公司-华南农业大学、中山大学等机构为核心的3大机构合作群,对广陈皮的研究合作关系密切;文献关键词分析显示陈皮的研究内容主要集中在化学成分、药理作用和质量评价等方面,其中如何保证陈皮的品质和安全是目前的研究热点。结论陈皮研究目前仍在持续发展阶段,广陈皮作为道地药材其重要性不可忽视,未来相关领域的研究可围绕陈皮道地性研究、产地溯源研究和功效物质基础研究。此外,陈皮的陈化研究对于实现陈皮产业的高质量发展也具有重要的研究价值。

关键词：陈皮广陈皮 CiteSpace 文献计量学可视化分析

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黄芪及活性成分治疗肺癌的研究进展

中国中药杂志 2024年第2期49卷 294-303页

作者：马定财王哲王毛毛张育贵王彦钧刘婷张转红高飞云李越峰甘肃中医药大学甘肃兰州730000 甘肃省中药质量与标准研究重点实验室甘肃兰州730000

肺癌是癌症死亡原因居于首位的恶性肿瘤,其有效治疗是现代医学难题。肺癌属于中医“肺积”“息贲”“劳嗽”等范畴,中医药在治疗肺癌方面已积累大量理论基础和实践经验。黄芪是补气药代表之一,黄芪治疗肺癌以“气虚邪滞”为主要证型,“... 详细信息

肺癌是癌症死亡原因居于首位的恶性肿瘤,其有效治疗是现代医学难题。肺癌属于中医“肺积”“息贲”“劳嗽”等范畴,中医药在治疗肺癌方面已积累大量理论基础和实践经验。黄芪是补气药代表之一,黄芪治疗肺癌以“气虚邪滞”为主要证型,“扶正祛邪”为其基本治则。黄芪治疗肺癌的作用机制有抑制肿瘤细胞增殖及促进凋亡、抑制肿瘤侵袭和迁移、调控肿瘤微环境、抗肿瘤血管生成、调节自噬、诱导巨噬细胞极化、增强机体免疫和抑制免疫逃逸、逆转顺铂耐药等。黄芪治疗肺癌的活性成分有多糖类、皂苷类、黄酮类等。该研究从黄芪治疗肺癌的作用机制以及药物成分基础治疗肺癌两大方面进行综述,为黄芪资源及其活性成分的开发利用提供依据,并为抗肿瘤新药研发提供参考。

关键词：黄芪活性成分肺癌药理活性调节自噬调控肿瘤微环境逆转顺铂耐药

生理病理状态下大鼠体内荭草花抗心肌缺血再灌注损伤活性成分筛选

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中国药房 2024年第16期35卷 1957-1963页

作者：仁莎莎胡建春张元现陈轻轻刘春花郑林巩仔鹏黄勇金阳李月婷贵州省药物制剂重点实验室/贵州医科大学省部共建药用植物功效与利用国家重点实验室贵州医科大学药学院贵州工业职业技术学院化学与环境工程系贵州医科大学民族药与中药开发应用教育部工程研究中心

目的基于生理病理状态筛选大鼠体内荭草花抗心肌缺血再灌注损伤（MIRI）的潜在活性成分。方法将SD大鼠分为正常对照组、正常给药组、MIRI对照组和MIRI给药组，每组5只。经药物干预或造模、药物干预后，收集各组大鼠的血浆样品，使用... 详细信息

目的基于生理病理状态筛选大鼠体内荭草花抗心肌缺血再灌注损伤（MIRI）的潜在活性成分。方法将SD大鼠分为正常对照组、正常给药组、MIRI对照组和MIRI给药组，每组5只。经药物干预或造模、药物干预后，收集各组大鼠的血浆样品，使用超高效液相色谱-四极杆-飞行时间质谱联用技术进行色谱分离和质谱数据采集，经比对对照品图谱、各血浆样品图谱并参考相关文献后，对原型入血成分和代谢产物进行分析；同时，确定正常给药组和MIRI给药组大鼠血浆样品中的共有峰，结合主成分分析和“有监督”的正交偏最小二乘法-判别分析，以变量重要性投影（VIP）值>1为标准，筛选差异移行成分，并推测生理病理状态下荭草花抗MIRI的潜在活性成分。将SD大鼠分为对照组、MIRI组、阳性对照组（复方丹参片0.2 g/kg，每天3次）、各潜在活性成分组（各潜在活性成分均为10 mg/kg，每天2次），每组5只。各药物组大鼠灌胃相应药液，连续3 d。末次给药后，对各组大鼠血浆中超氧化物歧化酶（SOD）活性和乳酸脱氢酶（LDH）、肌酸激酶同工酶MB(CK-MB)、心肌肌钙蛋白Ⅰ（cTnⅠ）泄漏量进行检测、比较。结果从荭草花提取物总离子流图中获取主要色谱峰26个，确定了其中14个色谱峰，包括没食子酸、儿茶素、原儿茶酸等。从正常大鼠血浆样品中检测到移行成分15个，其中原型入血成分6个、代谢产物9个；从MIRI大鼠血浆样品中检测到移行成分19个，其中原型入血成分6个、代谢产物13个。两者共有移行成分8个，其中山柰酚的葡萄糖醛酸化代谢产物、槲皮素的羰基化代谢产物和N-p-香豆酰酪胺对应色谱峰的VIP值均大于1。与MIRI组比较，各潜在活性成分组大鼠血浆SOD活性均显著升高（P<0.01）,LDH、CK-MB、cTnⅠ泄漏量均显著降低（P<0.01）。结论 N-p-香豆酰酪胺、槲皮素、山柰酚和山柰素-3-O-β-D-葡萄糖苷可能是荭草花提取物抗MIRI的潜在活性成分。

关键词：荭草花心肌缺血再灌注损伤活性成分血浆药物化学