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基于p53/SLC7A11/GPX4信号轴探讨七叶内酯诱导小鼠乳腺癌4T1细胞铁死亡的作用机制

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中国病理生理杂志 2024年第2期40卷 282-290页

作者：何丹李琳霈谭小宁郜文辉田雪飞曾普华湖南省中医药研究院湖南长沙410006 湖南省中医药研究院附属医院湖南长沙410006 湖南中医药大学湖南长沙410208 湖南中医药大学中西医结合学院湖南长沙410208

目的:探讨七叶内酯对小鼠乳腺癌4T1细胞铁死亡的影响及其作用机制。方法:对七叶内酯与p53、溶质载体家族7成员11(SLC7A11)和谷胱甘肽过氧化物酶4(GPX4)进行分子对接,并绘制Kaplan-Meier和time ROC曲线。将4T1细胞分为对照组、1/2 IC_(50... 详细信息

目的:探讨七叶内酯对小鼠乳腺癌4T1细胞铁死亡的影响及其作用机制。方法:对七叶内酯与p53、溶质载体家族7成员11(SLC7A11)和谷胱甘肽过氧化物酶4(GPX4)进行分子对接,并绘制Kaplan-Meier和time ROC曲线。将4T1细胞分为对照组、1/2 IC_(50)组、IC_(50)组、2 IC_(50)组、erastin组和卡培他滨组。采用CCK-8法观察4T1细胞活力情况,筛选药物干预浓度;电镜观察4T1细胞线粒体形态,评估线粒体损伤情况;试剂盒检测4T1细胞活性氧(ROS)、Fe2+、丙二醛(MDA)、谷胱甘肽(GSH)和GPX4的水平;采用划痕和Transwell小室实验检测4T1细胞侵袭和迁移能力;Western blot检测p53、SLC7A11、GPX4和酰基辅酶A合成酶长链家族成员4(ACSL4)的表达水平。结果:与对照组相比,七叶内酯1/2 IC_(50)、IC_(50)和2 IC_(50)组细胞活力,GSH和GPX4表达水平,侵袭和迁移能力,以及SLC7A11和GPX4蛋白表达水平均降低,细胞线粒体变小,膜密度增高,嵴减少(P<0.05),Fe2+、ROS和MDA水平及p53和ACSL4蛋白表达水平升高(P<0.05)。结论:七叶内酯可促进4T1细胞铁死亡,其作用机制可能与p53/SLC7A11/GPX4信号通路相关。

关键词：乳腺癌七叶内酯铁死亡 p53/SLC7A11/GPX4信号通路

补阳还五汤通过小窝蛋白1调控Shh信号通路促进脑缺血后星形胶质细胞转分化

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中草药 2024年第3期55卷 811-821页

作者：陈博威欧阳银曾繁佐刘英飞田丰铭徐雅倩易健刘柏炎湖南中医药大学第一附属医院湖南长沙410007 湖南中医药大学湖南长沙410208 湖南省中医药研究院湖南长沙410006

目的基于小窝蛋白1(caveolin-1,Cav1)/音猬因子(sonic hedgehog,Shh)信号通路探讨补阳还五汤对脑缺血后星形胶质细胞转分化的作用机制。方法雄性C57BL/6小鼠随机分为假手术组、模型组及补阳还五汤低、中、高剂量(9.25、18.50、39.00 g/... 详细信息

目的基于小窝蛋白1(caveolin-1,Cav1)/音猬因子(sonic hedgehog,Shh)信号通路探讨补阳还五汤对脑缺血后星形胶质细胞转分化的作用机制。方法雄性C57BL/6小鼠随机分为假手术组、模型组及补阳还五汤低、中、高剂量(9.25、18.50、39.00 g/kg)组和丁苯酞(54 mg/kg)组,除假手术组外,其余各组采用大脑中动脉栓塞(middle cerebral artery occlusion,MCAO)法复制脑缺血模型,给予药物干预21 d后,采用神经行为学评分、苏木素-伊红染色及免疫组化评估补阳还五汤疗效。随后将雄性野生(WT)小鼠及Cav1−/−(KO)小鼠分别随机分为假手术组、模型组和补阳还五汤(18.5 g/kg)组,造模前7 d予以脑内注射GFAP-EGFP腺相关病毒,采用MCAO法制备脑缺血模型,给予药物干预21 d。采用免疫荧光检测缺血侧皮质区星形胶质细胞转分化情况,Western blotting法检测缺血侧皮质区Shh、平滑同源物(smootened,Smo)及神经胶质瘤关联癌基因同源物1(glioma associated oncogene homolog 1,Gli1)的蛋白表达,qRT-PCR法检测神经分化因子acoete-scute同系物1(achaete-scute complex homolog 1,Ascl1)、神经源性分化因子1(neurogenic differentiation 1,NeuroD1)、神经源性分化因子2(neurogenic differentiation 2,NeuroD2)、神经元素1(neurogenin-1,Ngn1)、神经元素2(neurogenin-2,Ngn2)及配对盒基因2(paired box gene 2,Pax2)的表达。结果与模型组比较,补阳还五汤各剂量组及丁苯酞组的神经行为学评分显著降低(P<0.05、0.01),缺血侧皮质区病理损伤明显改善,NeuN表达明显上升(P<0.05、0.01)。此外,补阳还五汤低剂量组和补阳还五汤中剂量组的神经行为学评分及NeuN的表达有显著差异(P<0.01),而补阳还五汤中、高剂量组及丁苯酞组之间无明显差异。与同基因型模型组比较,WT、KO补阳还五汤组小鼠缺血侧皮质区EGFP-NeuN共定位明显增加(P<0.01),Shh、Smo及Gli1蛋白表达明显上升(P<0.05、0.01),神经分化因子Ascl1、NeuroD1、NeuroD2、Ngn1、Ngn2及Pax2表达明显上升(P<0.05、0.01)。与WT模型组及WT补阳还五汤组比较,KO模型组及KO补阳还五汤组小鼠缺血侧皮质EGFP-NeuN共定位明显下降(P<0.01),Shh、Smo及Gli1蛋白表达明显下降(P<0.05),神经分化因子Ascl1、NeuroD1、NeuroD2、Ngn1、Ngn2及Pax2表达明显下降(P<0.05、0.01)。结论补阳还五汤能够促进脑缺血后星形胶质细胞向神经元转分化,其作用机制可能与通过Cav1调控Shh信号通路,上调各神经分化因子的表达有关。

关键词：补阳还五汤脑缺血星形胶质细胞转分化小窝蛋白1 Shh信号通路黄芪甲苷Ⅳ 芒柄花素阿魏酸芍药内酯苷

基于代谢组学与网络药理学的百合地黄汤抗抑郁作用机制研究

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中国中药杂志 2024年

作者：胡超杨蕙赵洪庆黄思琪刘红宇张水寒唐林湖南中医药大学第一附属医院湖南中医药大学湖南省中医药研究院

百合地黄汤是治疗抑郁症的经典名方，该研究采用代谢组学整合网络药理学探究其治疗抑郁症的作用机制。50只雄性SD大鼠随机分为正常对照组、模型组、氟西汀组、百合地黄汤高剂量组、百合地黄汤低剂量组。采用慢性不可预见性轻度应激（CUM... 详细信息

百合地黄汤是治疗抑郁症的经典名方，该研究采用代谢组学整合网络药理学探究其治疗抑郁症的作用机制。50只雄性SD大鼠随机分为正常对照组、模型组、氟西汀组、百合地黄汤高剂量组、百合地黄汤低剂量组。采用慢性不可预见性轻度应激（CUMS）的方法建立抑郁大鼠模型；通过旷场实验和强迫游泳实验检测行为学变化；利用代谢组学技术对血清及海马组织代谢谱进行分析，筛选差异代谢物及相关代谢通路；结合网络药理学及分子对接初步阐明百合地黄汤改善抑郁症代谢异常的关键靶点及核心有效成分，并构建“成分-靶点-代谢物-通路”调控网络。百合地黄汤可显著改善CUMS大鼠抑郁样行为，显著调节血清中12个差异代谢物与海马中27个差异代谢物，主要涉及色氨酸代谢，苯丙氨酸、酪氨酸和色氨酸生物合成，丙氨酸、天冬氨酸和谷氨酸代谢，酪氨酸代谢，嘌呤代谢等。毛蕊花糖苷、异毛蕊花糖苷、王百合苷B等为改善抑郁症代谢异常的关键有效成分，表皮生长因子受体（EGFR）、原癌基因酪氨酸蛋白激酶(SRC）、糖原合成酶激酶3β（GSK3β）、雄激素受体（AR）等为改善抑郁症代谢异常的关键核心靶点。该研究基于网络调控视角初步揭示了百合地黄汤改善抑郁症代谢异常的作用机制，为百合地黄汤的临床应用及后续研究提供了借鉴。

关键词：百合地黄汤抑郁症代谢组学网络药理学作用机制

疏肝健脾解毒方抑制性腺轴和PI3K/AKt/mTOR信号通路影响乳腺癌前病变

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中国中西医结合杂志 2024年

作者：李琳霈时健谭小宁柏正平何丹曾普华 1.湖南省中医药研究院附属医院肿瘤科 2.湖南中医药大学研究生院湖南省中医药研究院附属医院肿瘤科湖南中医药大学研究生院

目的研究疏肝健脾解毒方通过调节磷脂酰肌醇3-激酶（PI3K）/蛋白激酶B（Akt）/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白（m TOR）通路和性腺轴来逆转大鼠乳腺癌前病变的分子机制。方法将60只SD雌性大鼠随机分为6组：空白组，乳腺癌前病变模型组（模型... 详细信息

目的研究疏肝健脾解毒方通过调节磷脂酰肌醇3-激酶（PI3K）/蛋白激酶B（Akt）/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白（m TOR）通路和性腺轴来逆转大鼠乳腺癌前病变的分子机制。方法将60只SD雌性大鼠随机分为6组：空白组，乳腺癌前病变模型组（模型组），疏肝健脾解毒方低、中、高剂量组，他莫昔芬组，每组10只。采用二甲基苯蒽（DMBA）造模法造模。实验第1天用溶解有DMBA的芝麻油（10 mg/mL），按100 mg/kg给予大鼠一次性灌胃处理。ELISA检测卵泡刺激素（FSH）、黄体生成素（LH）、泌乳素（PRL）、孕酮（P）、睾酮（T）及雌二醇（E2）;RT-PCR检测雌激素受体（ER）、PI3K、Akt及m TOR的m RNA表达水平。结果与模型组比较，疏肝健脾解毒方各剂量组及他莫昔芬组体质量升高（P<0.05），卵巢和子宫系数均降低（P<0.05）,FSH、LH、PRL、P、T、E2、ER mRNA、PI3K mRNA、Akt mRNA及m TOR mRNA表达量均降低（P<0.05）。与疏肝健脾解毒方低剂量组比较，疏肝健脾解毒方中、高剂量组体质量升高（P<0.05），子宫与卵巢系数降低（P<0.05）；疏肝健脾解毒方高剂量组FSH、LH、PRL、P、T、E2降低（P<0.05）,ER、PI3K、Akt、m TOR mRNA表达量降低（P<0.05）。与他莫昔芬组比较，中药高剂量组子宫与卵巢系数小幅度升高（P<0.05）。结论疏肝健脾解毒方可能通过对性腺轴的抑制，使ER的表达下降，从而抑制PI3K/Akt/m TOR信号通路的表达，逆转了乳腺癌前病变，其作用效果随着中药剂量增高而加强。

关键词：疏肝健脾解毒方乳腺癌癌前病变性腺轴 PI3K/AKt/mTOR信号通路中药复方

基于气阳濡动学说的脑小血管病气虚血瘀证的病机与治疗

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中华中医药杂志 2024年第2期39卷 561-565页

作者：方锐周月李玉丽谢乐杜麒麟谢瑶葛金文湖南省中医药研究院中药临床药理研究所长沙410006 湖南省中西医结合医院(湖南省中医药研究院附属医院) 长沙410006 湖南省中医药研究院中医药文献信息研究所长沙410013 湖南中医药大学中西医结合学院长沙410208 湖南省中医药研究院长沙410013

脑小血管病(CSVD)即累及颅内小/微动脉、毛细血管、小/微静脉等引起的一系列临床常见的综合征,以卒中(深部小梗死、脑出血)、认知功能下降和情感障碍等为主要临床表现。围绕老年病及脑病的辨证论治方法,葛金文教授创新性提出气阳濡动学... 详细信息

脑小血管病(CSVD)即累及颅内小/微动脉、毛细血管、小/微静脉等引起的一系列临床常见的综合征,以卒中(深部小梗死、脑出血)、认知功能下降和情感障碍等为主要临床表现。围绕老年病及脑病的辨证论治方法,葛金文教授创新性提出气阳濡动学说,认为气阳不足,温化濡养或运动总摄失司,脑之元神失去濡养,总司五脏六腑、四肢百骸、气血精津、经脉血脉失常,故导致情感、记忆认知障碍,躯体功能异常等。气阳不足、血脉瘀滞为CSVD发生发展核心病机。文章从CSVD的发病机制出发,基于气阳濡动学说,提出CSVD气虚血瘀证的病机演变进程为气阳不足、阴津亏虚、气郁血瘀、痰湿内生、神明失养等,治疗当以益气(阳)活血为主要治则,灵活配伍益气(阳)养阴、调畅气机、温阳固摄、化痰袪湿、活血祛瘀、养魂安神等之品,为本病的临床辨证施治提供了不同视角的诊疗思路。

关键词：脑小血管病气阳濡动学说气虚血瘀证病机治则治法

补阳还五汤通过cAMP/PKA/PPARγ通路调控脂质代谢抗大鼠脑缺血再灌注损伤的作用

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中药新药与临床药理 2024年第5期35卷 667-673页

作者：欧阳银陈博威刘英飞曾繁佐易健田丰铭刘柏炎湖南中医药大学第一附属医院湖南长沙410000 湖南省中医药研究院湖南长沙410000

目的探究补阳还五汤通过cAMP/PKA/PPARγ通路调控脂质代谢抗大鼠脑缺血再灌注损伤的作用机理。方法将60只大鼠随机分为假手术组、模型组、丁苯酞组及补阳还五汤低、中、高剂量组。采用短暂性大脑中动脉栓塞法制备脑缺血再灌注模型,补阳... 详细信息

目的探究补阳还五汤通过cAMP/PKA/PPARγ通路调控脂质代谢抗大鼠脑缺血再灌注损伤的作用机理。方法将60只大鼠随机分为假手术组、模型组、丁苯酞组及补阳还五汤低、中、高剂量组。采用短暂性大脑中动脉栓塞法制备脑缺血再灌注模型,补阳还五汤低、中、高剂量组予不同剂量补阳还五汤灌胃(6.413、12.825、25.65 g·kg-1),丁苯酞(NBP)组予丁苯酞灌胃(54 mg·kg-1),假手术组和模型组予等体积蒸馏水灌胃,连续14 d。对大鼠进行神经行为学评分,HE染色观察大脑病理变化,试剂盒检测缺血侧磷酸胆碱(PC)、磷脂酰乙醇胺(PE)、甘油二酯(DAG)、游离脂肪酸(FFA)含量,RT-qPCR和WesternBlot法检测环磷酸腺苷(cAMP)、蛋白激酶A(PKA)、过氧化物酶体增殖物激活受体(PPARγ)中mRNA及蛋白表达。结果与假手术组比较,模型组神经功能缺损评分明显升高(P<0.01);缺血侧皮质出现病理形态损伤;PC、PE含量降低,DAG、FFA含量升高(P<0.01);cAMP的mRNA升高(P<0.05)。与模型组比较,补阳还五汤低剂量组神经功能缺损评分降低(P<0.05),补阳还五汤中、高剂量组和丁苯酞组神经功能缺损评分明显降低(P<0.01);各给药组细胞排列相对规整,细胞间隙减小,正常细胞增多;补阳还五汤中、高剂量组和丁苯酞组PC、PE明显升高,DAG、FFA明显降低(P<0.01);补阳还五汤低剂量组PC升高,FFA、DAG明显降低(P<0.05,P<0.01);补阳还五汤低剂量组PPARγ的mRNA表达升高(P<0.05),补阳还五汤中、高剂量组和丁苯酞组cAMP、PKA、PPARγ的mRNA及蛋白表达升高(P<0.05,P<0.01)。结论补阳还五汤对脑缺血再灌注损伤大鼠具有神经保护作用,其机制可能与调控cAMP/PKA/PPARγ信号通路关键因子的表达,调节脂质代谢有关。

关键词：补阳还五汤脑缺血再灌注 cAMP/PKA/PPARγ信号通路脂质代谢神经保护大鼠

中医药治疗慢性阻塞性肺疾病稳定期研究文献可视化分析

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中国中医药信息杂志 2024年第1期31卷 51-58页

作者：张真刘雨刘俊王慧柏正平湖南中医药大学湖南长沙410208 湖南省中医药研究院附属医院湖南长沙410006 湖南省中医药研究院湖南长沙410006

目的了解中医药治疗慢性阻塞性肺疾病(COPD)稳定期的研究现状和趋势,为相关研究提供参考。方法检索中国知识资源总库、万方数据知识服务平台、维普资讯中文期刊服务平台和中国生物医学文献服务系统建库至2022年9月1日收录的中医药治疗C... 详细信息

目的了解中医药治疗慢性阻塞性肺疾病(COPD)稳定期的研究现状和趋势,为相关研究提供参考。方法检索中国知识资源总库、万方数据知识服务平台、维普资讯中文期刊服务平台和中国生物医学文献服务系统建库至2022年9月1日收录的中医药治疗COPD稳定期研究文献。采用NoteExpress3.4软件统计文献基本信息,采用Excel2016统计第一作者、证型、方剂,绘制发文趋势图,根据布拉德福定律确定核心区域期刊数,根据普赖斯定律计算核心作者。采用VOSviewer1.6.18软件进行作者、关键词共现聚类分析,采用CiteSpace5.3.R4软件进行机构共现分析和关键词突现分析,绘制知识图谱。结果共纳入3360篇文献,涉及期刊445种、第一作者2691位。该领域发文量总体呈增长趋势,临床研究为主要研究类型。核心区期刊21种,发文最多的为《新中医》。核心作者125位,发文最多的是李竹英和李建生。作者合作网络分析得到10个主要研究团队,规模最大的为李建生团队。涉及研究机构1451个,多为中医药院校及其附属医院。COPD稳定期的证型共计62种,最常见的为肺脾气虚证,方剂共541种,最常用的为补肺汤。关键词共现分析得到8个主题,高频关键词为肺功能、临床疗效、生活质量、临床观察和中医药治疗。关键词突现分析得到22个突现词,布地奈德福莫特罗、六字诀、玉屏风散和炎性因子在当前关注度较高。结论中医药治疗COPD稳定期的研究热度呈增长趋势,临床研究占比最大,但普遍质量不高,基础研究较为缺乏。研究热点集中在抑制气道炎症和免疫调节方面,肺功能和生活质量是最常用的评估指标。

关键词：中医药慢性阻塞性肺疾病稳定期 CiteSpace VOSviewer 知识图谱文献计量学

实脾消积饮含药血清对肝癌HepG2细胞线粒体动力学平衡和铁死亡的影响

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中医杂志 2024年第6期65卷 609-617页

作者：翦慧颖李克雄曾普华湖南中医药大学湖南省长沙市410208 湖南省中西医结合医院/湖南省中医药研究院附属医院

目的从细胞线粒体动力学平衡和铁死亡角度探讨实脾消积饮治疗原发性肝癌的可能作用机制。方法制备实脾消积饮含药血清,体外培养肝癌HepG2细胞。设置空白组、对照组、顺铂组(10μg/ml)及5%、10%、15%含药血清组,每组设4个复孔。各组加入... 详细信息

目的从细胞线粒体动力学平衡和铁死亡角度探讨实脾消积饮治疗原发性肝癌的可能作用机制。方法制备实脾消积饮含药血清,体外培养肝癌HepG2细胞。设置空白组、对照组、顺铂组(10μg/ml)及5%、10%、15%含药血清组,每组设4个复孔。各组加入相应的药物,37℃、5%CO_(2)培养24 h后采用CCK-8实验计算细胞存活率,Transwell小室侵袭实验培养48 h后计算穿过基质胶到达上层小室膜的细胞数量,划痕实验培养24 h、48 h计算划痕迁移率,筛选含药血清浓度进行后续实验。实验设置对照组、10%含药血清组(筛选出的浓度)、10%含药血清+Mdivi-1组,培养24 h后检测线粒体、活性氧(ROS)平均荧光强度及三磷酸腺苷(ATP)含量,检测细胞胞浆和线粒体动力相关蛋白1(Drp1)、线粒体磷酸化动力相关蛋白1(p-Drp1)蛋白表达。实验设置对照组、10%含药血清组、铁死亡激活剂组(Erastin,10μmol/L)、10%含药血清+铁死亡抑制剂组(ferrostatin-1,10μmol/L),各组加入相应药物后培养24 h,检测细胞内谷胱甘肽(GSH)、丙二醛(MDA)含量以及亚铁离子水平,检测细胞中溶质载体家族7成员11(SLC7A11)、谷胱甘肽过氧化物酶4(GPX4)蛋白表达。结果与对照组比较,各浓度的含药血清组和顺铂组细胞存活率、侵袭个数及24 h、48 h划痕迁移率均降低(P<0.01);随着含药血清浓度的增加,含药血清组细胞存活率、侵袭个数及48 h划痕迁移率逐渐降低(P<0.01),最终筛选出10%实脾消积饮含药血清作为后续实验干预浓度。与对照组相比,10%含药血清组线粒体平均荧光强度及ATP含量降低,ROS平均荧光强度升高(P<0.05);与10%含药血清组比较,10%含药血清+Mdivi-1组线粒体平均荧光强度、ATP含量升高,ROS平均荧光强度降低(P<0.05或P<0.01)。与对照组比较,其余各组细胞中GSH含量及SLC7A11、GPX4蛋白表达降低,MDA含量及亚铁离子水平升高(P<0.05或P<0.01);与铁死亡激活剂组比较,10%含药血清组和10%含药血清+铁死亡抑制剂组MDA含量及亚铁离子水平降低,SLC7A11、GPX4蛋白表达升高(P<0.05或P<0.01);与10%含药血清组比较,10%含药血清+铁死亡抑制剂组GSH含量亦升高(P<0.01)。结论实脾消积饮含药血清可能通过引起线粒体动力学失衡及诱导铁死亡,抑制肝癌HepG2细胞的增殖、侵袭与迁移,从而发挥抗肝癌作用。

关键词：原发性肝癌实脾消积饮 HepG2细胞线粒体动力学铁死亡

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药食同源中药治疗胃癌癌因性疲乏的用药规律

世界中医药 2024年第6期19卷 850-855页

作者：陈红瑶杨仁义郜文辉曾普华湖南中医药大学长沙410208 湖南省中医药研究院附属医院长沙410006

目的:通过对文献的数据挖掘,初步探讨干预胃癌癌因性疲乏(CRF)的药食同源中药用药规律,并结合CRF中医病机及现代药理学研究进行分析。方法:检索国家知识基础设施数据库(CNKI)、中国学术期刊数据库(CSPD),筛选自建立数据库开始至2022年4... 详细信息

目的:通过对文献的数据挖掘,初步探讨干预胃癌癌因性疲乏(CRF)的药食同源中药用药规律,并结合CRF中医病机及现代药理学研究进行分析。方法:检索国家知识基础设施数据库(CNKI)、中国学术期刊数据库(CSPD),筛选自建立数据库开始至2022年4月10日期间治疗胃癌CRF的临床文献,借助Microsoft Excel 2021及SPSS Modeler 26.0统计软件,以2018年卫健委公布的110种药食同源中药为参考,对收集文献所涉及的药食同源中药进行频数频率、性味归经、药效分类、关联规则分析、聚类分析,根据统计结果探讨药食同源中药干预胃癌CRF的用药规律。结果:收集文献中共有药食同源中药43味(占2018年卫健委所公布110种药食同源中药的39.09%),出现频数376次(占文献全部165味中药出现频数的49.41%);频数≥10次的药食同源中药共14味,按频数降序排列依次为黄芪、茯苓、当归、甘草、党参等;干预胃癌CRF的药食同源中药四气以平、温为主,五味以甘味药为主,归经以归脾经最多;发掘出21组治疗胃癌CRF的药食同源中药组合,支持度最高的组合是黄芪-当归;聚类分析提取获得3个核心聚类群。结论:药食同源中药干预胃癌CRF以健脾和胃为基本治则,辅以补肺滋肾,养血生津,理气燥湿为法,常用药食同源中药为黄芪、茯苓、当归等,可将这些药食同源中药用于胃癌CRF的治疗及保健食品的开发中。

关键词：癌因性疲乏虚劳胃癌药食同源中药数据挖掘用药规律黄芪