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泛素连接酶CHIP调控核苷酸合成酶CAD的分子机制

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泛素连接酶CHIP调控核苷酸合成酶CAD的分子机制

作者：黄辉君湖南师范大学

学位级别：硕士

CAD是由天冬氨酸转氨甲酰酶(ATC)、二氢乳清酸酶(DHO)与氨甲酰磷酸合成酶2(CPS-2)形成的单一多酶蛋白,参与嘧啶核苷酸合成,CAD突变会导致神经系统疾病和遗传性代谢疾病的发生,而CAD的过度激活会诱发癌症。蛋白质的泛素化是一种常见的翻... 详细信息

CAD是由天冬氨酸转氨甲酰酶(ATC)、二氢乳清酸酶(DHO)与氨甲酰磷酸合成酶2(CPS-2)形成的单一多酶蛋白,参与嘧啶核苷酸合成,CAD突变会导致神经系统疾病和遗传性代谢疾病的发生,而CAD的过度激活会诱发癌症。蛋白质的泛素化是一种常见的翻译后修饰方式,几乎参与了一切生命活动的调控,它在蛋白质的降解、代谢和功能调节中不可或缺。CHIP作为一种E3泛素连接酶,可参与多种底物蛋白的泛素化修饰,并促进底物蛋白的降解。目前,关于CAD蛋白的泛素化修饰机制尚不清楚。本文旨在探究泛素连接酶CHIP调控CAD蛋白降解的分子机制,以及CHIP在结肠癌中的抑癌作用。本论文以HEK293T细胞和HCT116细胞作为研究材料,通过慢病毒包装的方法构建稳转细胞系。本研究通过免疫共沉淀实验(CO-IP)检测到CHIP蛋白与CAD蛋白有相互作用。通过构建CHIP及CAD的结构域载体以及CO-IP试验,实验结果表明CAD是通过GLN/CPSⅡ结构域、ATC结构域与CHIP的TPR结构域相互作用;我们进一步采用Denature IP实验方法,发现CHIP能显著促进CAD的泛素化;另外,蛋白免疫印迹实验表明CHIP能够通过蛋白酶体途径促进结肠癌细胞系HCT116中CAD蛋白的降解;已有研究表明,CHIP有两个功能位点,分别是K30(Hsc70相互作用位点)和H260(催化活性位点)。因此,我们构建了CHIP两个功能位点的突变体,发现CHIP两个功能位点对于CHIP调控CAD是必要的;研究证实,CAD的蛋白水平上调与癌症的发生密切相关,所以我们通过克隆形成实验、细胞增殖实验以及细胞划痕实验来检测CHIP对HCT116细胞的克隆形成、增殖和迁移的影响,实验结果表明CHIP抑制HCT116细胞的克隆形成和细胞增殖,但对HCT116细胞的细胞迁移无显著影响。综上所述,CHIP是CAD蛋白的E3泛素连接酶,在结肠癌细胞中通过蛋白酶体途径降解CAD,CHIP抑制结肠癌细胞的克隆形成和细胞增殖。本研究为进一步探究调控CAD的分子机制提供了一定的理论基础,为肿瘤治疗提供新的思路。

关键词： CAD CHIP HCT116细胞克隆形成细胞增殖

高校师范生的教育实习现状及专业成长策略探析——以湖南师范大学物理系师范生为例

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大学（研究） 2020年第8期 44-45页

作者：程兰宋善炎湖南师范大学湖南长沙410000

近年来,各国教师的教育理念发生了新的转变,即回归实践。在此思潮的影响下,教育实践越来越成为教师教育的重要组成部分,国内各大师范高校纷纷建立并完善有关教育实习的制度。高校师范生的教育实习活动是高校培养合格中小学教师非常关键... 详细信息

近年来,各国教师的教育理念发生了新的转变,即回归实践。在此思潮的影响下,教育实践越来越成为教师教育的重要组成部分,国内各大师范高校纷纷建立并完善有关教育实习的制度。高校师范生的教育实习活动是高校培养合格中小学教师非常关键的环节之一,师范生的实践本领是其入职后专业发展的关键本领。而教育实习.过程中,往往存在理论与实践相脱节、实践者教学本领薄弱等问题。本文以湖南师范大学物理系大四师范生教育实习为例,研究高校师范生的教育实习现状及目前的困境,综合多方建议,提出相应的符合高校师范生专业成长的策略。

关键词：高校师范生教育实习现状专业成长策略

SrfABC复合毒素酶活性组分及其作用机理研究

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SrfABC复合毒素酶活性组分及其作用机理研究

作者：杨曦湖南师范大学

学位级别：硕士

致病杆菌属(Xenorhabdus sp.)是一类与斯氏线虫(Steinernema sp.)互惠共生的昆虫病原共生菌,能够分泌多种杀虫、抑菌和抗肿瘤的活性代谢产物,干扰宿主的免疫反应,导致昆虫宿主死亡。课题组在前期研究中,通过对X.stockiae HNs01菌株进行F... 详细信息

致病杆菌属(Xenorhabdus sp.)是一类与斯氏线虫(Steinernema sp.)互惠共生的昆虫病原共生菌,能够分泌多种杀虫、抑菌和抗肿瘤的活性代谢产物,干扰宿主的免疫反应,导致昆虫宿主死亡。课题组在前期研究中,通过对X.stockiae HNs01菌株进行Fosmid基因组文库的构建,从中筛选出复合毒素SrfABC,对昆虫细胞和肿瘤细胞均具有明显毒性,并且发现三组分蛋白之间具有相互作用。本文对SrfABC复合毒素各组分的活性及其作用机理进行了研究,为该类毒素在致病杆菌对昆虫致病及抗肿瘤活性中的功能奠定了基础。本研究利用GST标签单独表达载体在大肠杆菌中表达SrfA、SrfB、SrfC蛋白,通过生测实验发现SrfA、SrfB、SrfC蛋白对棉铃虫均具有注射毒性,且三者混合时毒性最大。我们以枞色卷蛾中肠细胞系CF-203/2.5和人宫颈癌细胞系HeLa为作用靶标,利用倒置显微镜和MTT法发现SrfA、SrfB、SrfC蛋白均能导致肿瘤细胞和昆虫细胞皱缩死亡,具有明显细胞毒性,且三者混合作用时毒性最大。通过Hoechst/PI双染和流式细胞仪检测发现SrfA、SrfB、SrfC蛋白均能破坏CF-203/2.5细胞的细胞膜完整性,造成细胞凋亡,且三者混合作用时对细胞膜完整性破坏最大,凋亡率最高,并且三种蛋白均能将细胞周期阻滞在G2/M期。接下来,我们对SrfABC毒素各组分在细胞中的定位进行了研究。免疫荧光结果显示:CF203细胞中,SrfA、SrfB、SrfC蛋白单独或混合作用,均集中分布在细胞质;在HeLa细胞中,SrfA蛋白集中分布在细胞质,SrfB蛋白集中分布在细胞核,SrfC蛋白单独作用时分布在细胞质,混合作用时从细胞质转移至细胞核。通过Western blot验证了SrfA、SrfB、SrfC蛋白单独或混合作用,均能较高效率的、主动进入昆虫细胞和肿瘤细胞。为了研究SrfABC毒素各组分的作用机制,我们将SrfA,SrfB,SrfC分别转染至肿瘤细胞HeLa和昆虫细胞Sf9中。实验表明:SrfA,SrfB,SrfC蛋白均在HeLa细胞中成功表达;利用免疫沉淀及质谱技术筛选出其结合蛋白主要为骨架蛋白;Western Blot检测显示:SrfA蛋白转染进HeLa细胞后,除了目的条带外,还检测到分子量大于SrfA蛋白的条带,推测是SrfA蛋白在肿瘤细胞中的表达发生翻译后修饰,通过定点突变和糖苷酶处理,初步排除了糖基化修饰的可能性。本文探究了SrfABC毒素对人肿瘤细胞和昆虫细胞的细胞毒性,探明各组分的定位。初步分析了三元复合毒素的酶活性组分,初步研究了SrfABC类毒素在细胞内发挥毒性的作用机理,为该类毒素在致病杆菌对病原微生物抵抗宿主防御、毒力发挥及宿主定殖中的研究提供理论依据。

关键词：致病杆菌细胞毒性 SrfABC毒素酶活性组分翻译后修饰

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论“美译”——林语堂翻译研究

中国翻译 2005年第5期26卷 49-55页

作者：陆洋湖南师范大学外国语学院翻译系湖南长沙410081

作者从诗学的视角研究了林语堂翻译理论与实践中所表现出的“美译”思想、“美译”形式、以及“美译”价值与诗学传统之间的内在联系。作为中国历史上第一个从翻译的角度论“美”的翻译家,林语堂首次提出了翻译的美学思想。从翻译审美... 详细信息

作者从诗学的视角研究了林语堂翻译理论与实践中所表现出的“美译”思想、“美译”形式、以及“美译”价值与诗学传统之间的内在联系。作为中国历史上第一个从翻译的角度论“美”的翻译家,林语堂首次提出了翻译的美学思想。从翻译审美主体、审美客体、审美心理和审美效应等方面出发,林语堂提出了他的“忠实、通顺和美”的翻译观。本文认为,林语堂的翻译论,实际上是“美译”论。他借助不同层面的形式“越位”策略,来实现他的“美译”主张,并在此基础上创造出译文的新的形式美:浑整美、闲淡美与和谐美,从而建构起翻译的感性诗学。这种感性诗学与语言想象体现了现代知识分子对人类诗意的生存方式的关注。

关键词：形式诗学美译林语堂

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翻译“间性文化”论

中国翻译 2005年第3期26卷 20-26页

作者：杨柳湖南师范大学外国语学院翻译系湖南长沙410081

翻译的文化实践证明,翻译是多种文化之间的对话活动。在翻译过程中,译者通过多种“间性”即“多元对话性”的建立,来表达自己对于多元文化共存的世界的美好向往。在本文中,作者以著名翻译家林语堂的跨文化翻译实践为个案,从理论间性、... 详细信息

翻译的文化实践证明,翻译是多种文化之间的对话活动。在翻译过程中,译者通过多种“间性”即“多元对话性”的建立,来表达自己对于多元文化共存的世界的美好向往。在本文中,作者以著名翻译家林语堂的跨文化翻译实践为个案,从理论间性、话语间性、性别间性、主体间性和文化间性等层面分析了翻译“间性”凸现的轨迹,并从哲学的视角出发,深入追问了翻译“间性”与文化信仰和文化哲学之间的关系,从而说明,翻译文化实际上是一种“间性文化”。通过多种“间性”的建立,翻译使不同语言、不同性别、不同种族和不同文化之间达到相互对话、相互依存的目的。在这个层面上,翻译赋有更高层次的文化哲学意义:翻译是对人类生存方式的阐释与追求,它为差异共存、和谐共在的世界文化新秩序的重构提供了巨大的潜能。

关键词：间性文化翻译文化林语堂和谐世界哲学

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DAZL基因在肺癌中的作用及分子机制

DAZL基因在肺癌中的作用及分子机制

作者：杜炎湖南师范大学

学位级别：硕士

研究背景:一些基因在正常组织中仅表达于睾丸和/或卵巢的生殖细胞中,而在各种肿瘤组织中却被异常激活,这类基因被统称为癌-睾丸基因（cancer-testis genes）或癌-生殖系基因（cancer-germline genes）。DAZL是一个生殖细胞中特异表达的... 详细信息

研究背景:一些基因在正常组织中仅表达于睾丸和/或卵巢的生殖细胞中,而在各种肿瘤组织中却被异常激活,这类基因被统称为癌-睾丸基因（cancer-testis genes）或癌-生殖系基因（cancer-germline genes）。DAZL是一个生殖细胞中特异表达的基因,其蛋白通过与mRNA结合促进mRNA的翻译。许多研究表明DAZL基因在精子和卵子的发育过程中起到重要作用,但其在癌症中的作用尚无报道。方法:利用免疫组化方法检测DAZL和RRM2蛋白在肺癌组织芯片中的表达;利用慢病毒表达系统构建了过表达DAZL和干扰DAZL的稳定细胞系;利用腺病毒表达系统干扰RRM2基因的表达;采用MTT实验、克隆形成实验、EDU细胞增殖实验、流式细胞分析等分析了DAZL基因对肺癌细胞增殖的影响。结果:1)在正常肺组织中没有检测到DAZL蛋白的表达;而在肺癌组织中,DAZL的表达随肿瘤级别的升高而增多。2)干扰DAZL基因可以抑制肺癌细胞的活力、克隆形成和DNA合成,促使细胞分裂停留在S期。并且,干扰DAZL基因可以显著提高肺癌细胞对吉西他滨的敏感性。相反,过表达DAZL基因则促进细胞的活力、克隆形成和DNA合成,导致肺癌细胞对吉西他滨的敏感性降低。3)通过生物信息学分析发现RRM2的3′UTR区域中含有DAZ L蛋白的结合位点。荧光素酶分析和Western blotting结果表明,DA ZL蛋白促进RRM2的翻译,而RNA结合活性失活的突变体（R135G）则不能促进RRM2的翻译。免疫组化分析的结果表明DAZL与R RM2在肺癌组织中表达有显著正相关（Pearson相关系数=0.388、p值＜0.001）。4)根据以上结果,我们猜想DAZL可能通过调控RRM2的表达从而影响细胞的增殖和吉西他滨敏感性。为了验证我们的猜想,我们进行了rescue实验,在DAZL过表达细胞系中用RRM2干扰腺病毒抑制细胞内RRM2蛋白的表达,结果表明:在过表达DAZL的细胞中,干扰RRM2基因可以显著抑制细胞增殖、增加细胞对吉西他滨的敏感性。结论:1)DAZL是一个新的癌-睾丸抗原基因;2)DAZL通过促进RRM2的翻译,从而促进肺癌细胞增殖、降低肺癌细胞对吉西他滨的敏感性。

关键词：肺癌细胞增殖 DAZL RRM2 吉西他滨

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拟南芥镁营养与生物钟互馈调控的研究

拟南芥镁营养与生物钟互馈调控的研究

作者：吴晓琦湖南师范大学

学位级别：硕士

生物钟是生物响应外部环境的循环变化产生一定节律的新陈代谢,生理和行为的生物学现象。最近研究表明,在人类细胞系中,生物钟通过调控镁离子转运蛋白调节细胞内镁离子浓度,同时细胞内镁离子通过调节细胞代谢和翻译水平反馈调节生物钟。... 详细信息

生物钟是生物响应外部环境的循环变化产生一定节律的新陈代谢,生理和行为的生物学现象。最近研究表明,在人类细胞系中,生物钟通过调控镁离子转运蛋白调节细胞内镁离子浓度,同时细胞内镁离子通过调节细胞代谢和翻译水平反馈调节生物钟。植物中Mg参与一系列生理生化过程,在植物的生长发育中有着重要作用。到目前为止有关植物镁营养和生物钟的互馈调控还研究甚少。本论文以拟南芥野生型col,拟南芥昼夜节律核心基因单突变体cca1,lhy,toc1和过表达材料CCA1-OX为材料,对拟南芥生物钟与镁营养以及镁离子转运基因MGTs家族的表达规律进行关联研究,探讨拟南芥中生物钟和镁离子互馈调控的分子机制。主要研究结果如下:1.正常镁离子浓度下,拟南芥镁离子转运基因MGTs家族中MGT2和MGT10表达具有生物节律。2.拟南芥MGT2基因表达的生物节律受细胞外低镁和高镁的影响,而MGT10基因表达的生物节律不受细胞外低镁和高镁的影响。3.细胞外镁离子浓度的变化影响拟南芥生物钟核心振荡器基因CCA1、LHY、TOC1表达的生物节律。4.拟南芥生物钟核心振荡器基因CCA1、LHY、TOC1表达的改变引起MGT2和MGT10表达的生物节律的改变。综上所述,本研究首次发现植物细胞外镁离子浓度的变化影响镁离子转运基因MGT2和MGT10表达的生物节律以及生物钟核心基因CCA1、LHY、TOC1表达的生物节律,同时生物钟在输出途径调控镁离子转运基因MGT2和MGT10的表达,这暗示植物可能通过镁营养和生物钟核心基因的互馈调控来维持自身正常生长发育。该研究的结果将为植物生物钟和镁离子互馈调控的分子机制研究提供理论依据,在实践上为作物养分高效利用提供理论基础。

关键词：拟南芥镁离子镁离子转运基因生物钟互馈调控

韩少功《马桥词典》中湘方言英译多视角研究 ——以蓝诗玲译本为例

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韩少功《马桥词典》中湘方言英译多视角研究 ...

作者：王艺伟湖南师范大学

学位级别：硕士

本文采用描述翻译学的研究方法,旨在探讨蓝诗玲翻译韩少功《马桥词典》中的湘方言所采用的翻译方法,并从改写理论、风格标记理论及接受美学理论的视角对其合理性进行阐释。研究发现,蓝诗玲对同义词项复现和文化信息丰富的湘方言进行了... 详细信息

本文采用描述翻译学的研究方法,旨在探讨蓝诗玲翻译韩少功《马桥词典》中的湘方言所采用的翻译方法,并从改写理论、风格标记理论及接受美学理论的视角对其合理性进行阐释。研究发现,蓝诗玲对同义词项复现和文化信息丰富的湘方言进行了省略。从改写理论的视角来看,译者采取这样的翻译方法主要受到了其对中国文学边缘地位的认知以及倾向于忽视方言的态度的影响。作为一名西方译者,蓝诗玲把为读者提供一个流畅的译本置于首要地位来考虑,因此对构成阅读障碍的部分进行了省略处理。此外,蓝诗玲在对话和叙述语言的湘方言翻译中采用了通俗口语译法。从风格标记理论的视角来看,译者采用的英语口语体的不同的表现形式,从音系标记、词汇标记、句法标记三个方面传递了湘方言口语化的特点。译者采取这样的翻译方法淡化了方言的地域色彩,但实现了方言语言风格的传译。研究还发现,蓝诗玲采用仿造翻译对方言词条中的湘方言进行了语义仿造、直译仿造、指称仿造和语音仿造。从接受美学理论的视角来看,译者既翻译出方言的形式又翻译出方言的意义,保留了原作品最为新颖和最具独创性的特点。译者采取这样的翻译方法,增强了译文的美学效果,满足了读者的创新期待,拓展了读者的期待视野。

关键词：《马桥词典》湘方言翻译方法

远程服务模式下学籍材料翻译工作的现状及对策——以湖南师范大学档案馆为例

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黑龙江档案 2021年第1期 148-149页

作者：赵丽湖南师范大学档案馆

随着对外交流的增多,学籍材料翻译已经逐渐成为档案馆的一项重要利用工作。湖南师范大学档案馆为了解决学生异地办理翻译业务的难题,开通了集远程申请、信息录入、移动支付和邮寄查询一体的远程服务平台。本文以该远程服务平台翻译业务... 详细信息

随着对外交流的增多,学籍材料翻译已经逐渐成为档案馆的一项重要利用工作。湖南师范大学档案馆为了解决学生异地办理翻译业务的难题,开通了集远程申请、信息录入、移动支付和邮寄查询一体的远程服务平台。本文以该远程服务平台翻译业务办理的情况为基础,分析了远程服务的困境,提出加强信息化建设、完善远程咨询体系、完善远程信息安全保障体制的建议。

关键词：高校档案馆学籍材料翻译远程服务翻译系统