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神经肌肉电刺激通过调控白细胞介素6/信号转导子及转录激活子3信号通路促进脊髓损伤后小鼠运动功能恢复

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解剖学报 2024年第3期55卷 260-267页

作者：覃建锋宋海旺孙宝飞吉杨丹龙思方杨丹黔南民族医学高等专科学校基础医学部贵州都匀558003 贵州医科大学基础医学院人体解剖学教研室贵州贵安新区561113

目的观察神经肌肉电刺激(NMES)对脊髓损伤后小鼠白细胞介素6(IL-6)/STAT3信号通路的影响,探讨其对运动功能恢复的机制。方法选取SPF级小鼠72只随机分成假手术(sham)组、脊髓损伤组(SCI)和NMES组。利用BMS评分、斜坡实验与电生理(EMG)评... 详细信息

目的观察神经肌肉电刺激(NMES)对脊髓损伤后小鼠白细胞介素6(IL-6)/STAT3信号通路的影响,探讨其对运动功能恢复的机制。方法选取SPF级小鼠72只随机分成假手术(sham)组、脊髓损伤组(SCI)和NMES组。利用BMS评分、斜坡实验与电生理(EMG)评估小鼠脊髓损伤后肢体运动恢复情况。Western blotting和Real-time PCR检测各组小鼠脊髓组织中相关炎症因子、IL-6/STAT3信号通路与胶质纤维酸性蛋白(GFAP)和脑源性神经营养因子(BDNF)的表达。HE染色观察各组小鼠脊髓形态结构。结果NMES组BMS评分和小鼠斜坡实验均高于SCI组(P<0.05);NMES组小鼠运动诱发电位(MEP)最大振幅高于SCI组(P<0.05);NMES组脊髓组织TNF-α、IL-12A与GFAP表达量均低于SCI组(P<0.05),TGF-β、IL-10与BDNF表达量均高于SCI组(P<0.05);与SCI组相比,NMES组小鼠脊髓空洞较少,脊髓形态修复较好;与SCI组相比,NMES组IL-6/STAT3信号通路蛋白表达均低于SCI组(P<0.05)。结论神经肌肉电刺激通过抑制IL-6/STAT3信号通路发挥抗炎作用,从而促进脊髓损伤后小鼠后肢运动功能的恢复。

关键词：脊髓损伤炎症反应白细胞介素6/信号转导子及转录激活子3信号通路神经肌肉电刺激免疫印迹法小鼠

重复性经脊髓磁刺激促进脊髓损伤小鼠运动功能恢复

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中国组织工程研究 2024年

作者：宋海旺姜冠华穆盈盈付善羽孙宝飞李玉美余资江杨丹 1.贵州医科大学,基础医学院人体解剖学教研室 2.贵州医科大学,基础医学院贵州医科大学基础医学院人体解剖学教研室贵州医科大学基础医学院

背景：研究表明重复性经脊髓磁刺激能够抑制脊髓损伤炎症反应，在脊髓区域施加磁场刺激，以调节神经元的兴奋性和突触传递，从而促进神经系统的可塑性和修复。目的：观察重复性经脊髓磁刺激对脊髓损伤后小鼠Toll样受体4/核因子κB/NLRP... 详细信息

背景：研究表明重复性经脊髓磁刺激能够抑制脊髓损伤炎症反应，在脊髓区域施加磁场刺激，以调节神经元的兴奋性和突触传递，从而促进神经系统的可塑性和修复。目的：观察重复性经脊髓磁刺激对脊髓损伤后小鼠Toll样受体4/核因子κB/NLRP3信号通路的影响，探讨其对运动功能恢复的机制。方法：将SPF级雄性C57BL/6J小鼠随机分为假手术组、脊髓损伤组、重复性经脊髓磁刺激组，后2组小鼠麻醉后采用咬骨钳剔除T9椎板，暴露脊髓，使用小型动脉瘤夹夹持脊髓20 s建立脊髓损伤模型。重复性经脊髓磁刺激组小鼠脊髓损伤的第1天开始进行为期21 d的重复性经脊髓磁刺激干预。每天持续10 min，每周刺激5 d，休息2 d。于脊髓损伤后1,3,7,14,21 d进行小鼠运动功能BMS评分，利用Western Blot检测脊髓损伤处的水通道蛋白AQP4、凋亡因子Bax、Bcl-2、CL-Caspase-3、炎症因子肿瘤坏死因子α、干扰素γ、白细胞介素6、白细胞介素4和Toll样受体4/核因子κB/NLRP3信号通路相关蛋白的表达，氧化应激试剂盒检测脊髓损伤处超氧化物歧化酶、谷胱甘肽过氧化物酶的活性及丙二醛浓度，免疫荧光染色法检测神经元核抗原的表达。结果与结论：(1)重复性经脊髓磁刺激组小鼠的BMS评分高于脊髓损伤组(P <0.05)；(2)与脊髓损伤组相比，重复性经脊髓磁刺激组脊髓含水量降低、AQP4蛋白表达降低；丙二醛浓度、Bax、CL-Caspase-3、肿瘤坏死因子α、干扰素γ、白细胞介素6与Toll样受体4/核因子κB/NLRP3信号通路相关蛋白的表达均降低(P <0.05)，而超氧化物歧化酶活性、谷胱甘肽过氧化物酶活性、Bcl-2、白细胞介素4与神经元核抗原的表达均升高(P <0.05)；(3)结果说明，重复性经脊髓磁刺激能下调Toll样受体4/核因子κB/NLRP3信号通路相关蛋白的表达，缓解脊髓损伤后的脊髓水肿、氧化应激、凋亡反应和炎症反应等，发挥神经保护作用，从而促进脊髓损伤后小鼠后肢运动功能的恢复。

关键词：脊髓损伤重复性经脊髓磁刺激 TLR4/NF-κB/NLRP3信号通路脊髓水肿氧化应激凋亡反应炎症反应神经保护运动功能

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丘脑中央内侧核的形态及功能研究进展

中华神经医学杂志 2024年第5期23卷 494-499页

作者：任肖叶笑妮张明明张潜李云庆遵义医科大学基础医学院人体解剖学教研室遵义空军军医大学人体解剖与组织学胚胎学教研室暨梁銶琚脑研究中心西安

丘脑中央内侧核(CM)是位于丘脑中线的髓板内核团, 是丘脑中线核群中的一个重要部分, 同时也属于丘脑的非特异投射系统, 与脑内其他区域有着广泛的神经纤维联系, 发挥着中继传导和脑内整合中心的作用。近年来研究表明, CM参与机体多种行... 详细信息

丘脑中央内侧核(CM)是位于丘脑中线的髓板内核团, 是丘脑中线核群中的一个重要部分, 同时也属于丘脑的非特异投射系统, 与脑内其他区域有着广泛的神经纤维联系, 发挥着中继传导和脑内整合中心的作用。近年来研究表明, CM参与机体多种行为的产生和调节, 包括全身麻醉与唤醒、疼痛、痒觉、情绪和认知等方面。本文现围绕CM的解剖结构及细胞类型、神经纤维联系、电生理特性及其相关功能进行综述, 以期为进一步的相关研究提供参考依据。

关键词：丘脑中央内侧核神经纤维联系电生理特性疼痛痒觉认知

脱细胞异体神经移植物联合电针对坐骨神经损伤大鼠脊神经节的保护作用及机制

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解剖学报 2024年第2期55卷 143-149页

作者：周泽宇马蕴涵李佳瑞胡余梦袁博张银娟于晓敏付秀美承德医学院基础医学院人体解剖学教研室河北承德067000 承德医学院中医系针灸推拿教研室河北承德067000 承德医学院教务处河北承德067000 河北省神经损伤与修复重点实验室河北承德067000

目的探讨脱细胞异体神经移植物(ANA)联合电针对坐骨神经损伤(SNI)大鼠脊神经节的保护作用及机制。方法选取50只雄性SD大鼠,10只制备ANA;40只随机分为正常组、模型组、ANA组和联合组,每组10只。分离右侧坐骨神经,于梨状肌下缘5 mm处去除1... 详细信息

目的探讨脱细胞异体神经移植物(ANA)联合电针对坐骨神经损伤(SNI)大鼠脊神经节的保护作用及机制。方法选取50只雄性SD大鼠,10只制备ANA;40只随机分为正常组、模型组、ANA组和联合组,每组10只。分离右侧坐骨神经,于梨状肌下缘5 mm处去除10 mm制备SNI模型。ANA组将制备好的ANA连接在损伤神经的两断端处。联合组于ANA连接术后2 d采用电子针疗仪电针“环跳穴”和“阳陵泉穴”,15 min/d,7 d为1个疗程,共4个疗程。电生理检测各组大鼠坐骨神经传导速度,评估受损轴突再生情况;尼氏染色观察脊神经节中神经元的形态结构;Western blotting和免疫荧光法检测脊神经节中神经生长因子(NGF)和脑源性神经营养因子(BDNF)的表达。结果与正常组比较,模型组大鼠坐骨神经传导速度明显降低(P<0.01);神经节神经元中的尼氏体因肿胀、溶解导致结构不完整,数量显著减少(P<0.01);NGF和BDNF蛋白表达量明显降低(P<0.01)。与模型组比较,ANA组和联合组大鼠坐骨神经传导速度明显增加(P<0.01);神经节神经元中尼氏体损伤减弱,数量明显增加(P<0.01);NGF和BDNF蛋白表达量显著升高(P<0.01)。与ANA组比较,联合组大鼠坐骨神经传导速度显著增加(P<0.01);神经节神经元中尼氏体形态较规则,数量明显增加(P<0.01);NGF蛋白表达量显著升高(P<0.01)。结论ANA联合电针可提高大鼠坐骨神经传导速度,改善神经节中神经元的形态结构,发挥对脊神经节神经元的保护作用,其机制可能与提高神经元中NGF和BDNF蛋白的表达,尤其是NGF蛋白的表达相关。

关键词：脱细胞异体神经移植物电针脊神经节神经生长因子脑源性神经营养因子坐骨神经损伤免疫印迹法大鼠

过表达TLR2分子的B淋巴细胞系模型的建立

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生物学杂志 2024年

作者：徐菁何柳周芳婷潘勤陈姗罗靓湖北中医药大学药学院药物分析教研室武汉大学泰康医学院(基础医学院)人体解剖学与组织胚胎学系武汉市蔡甸区人民医院检验科

为构建稳定表达人源TLR2分子的B淋巴细胞系模型,将编码人TLR1、TLR2和TLR6的基因分别克隆到p CDH-CMV-MCS-EF1-GFP-puro慢病毒载体上,测序正确后经293T细胞包装成完整具备感染性的病毒颗粒,转染Nalm-6细胞（TLR2-）,嘌呤霉素筛选获得稳... 详细信息

为构建稳定表达人源TLR2分子的B淋巴细胞系模型,将编码人TLR1、TLR2和TLR6的基因分别克隆到p CDH-CMV-MCS-EF1-GFP-puro慢病毒载体上,测序正确后经293T细胞包装成完整具备感染性的病毒颗粒,转染Nalm-6细胞（TLR2-）,嘌呤霉素筛选获得稳定表达TLR2分子的Nalm-6细胞（TLR2+）。利用倒置荧光显微镜观察细胞状态和绿色荧光表达情况,通过蛋白质免疫印迹法（Western Blot）检测相关蛋白表达水平,采用CCK-8以及流式细胞术检测细胞存活率和细胞增殖水平。结果显示:倒置荧光显微镜下可见成功转染慢病毒的Nalm-6细胞表达绿色荧光和嘌呤霉素抗性。Western Blot检测到TLR2在Nalm-6细胞中成功表达,且TLR2信号的激活明显增强PI3K-AKT信号轴分子的磷酸化水平。CCK-8和流式细胞术发现TLR2活化可提升细胞存活率,促进细胞增殖。研究成功构建了过表达TLR2分子的B淋巴细胞系模型,并在此基础上验证TLR2活化不仅能够增强B细胞PI3K-AKT信号通路传导,还可促细胞增殖。此模型为进一步探究TLR2通路对B细胞抗感染免疫功能的影响奠定基础。

关键词： TLR2 重组表达 B淋巴细胞 PI3K-AKT信号通路细胞增殖

外泌体移植治疗缓解神经病理性疼痛的研究进展

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南昌大学学报（医学版） 2024年第2期64卷 70-74页

作者：曾婧楠程惠刘曾旭南昌大学基础医学院人体解剖学教研室南昌330006

神经病理性疼痛(NPP)可在没有确切病因或组织损伤的情况下持续存在,目前病理生理学机制尚不清楚,多数患者的治疗效果不佳。外泌体为多囊泡胞内体与细胞膜融合释放到细胞外的脂质双分子层小囊泡,外泌体携带mRNA、microRNA、IncRNA、circ... 详细信息

神经病理性疼痛(NPP)可在没有确切病因或组织损伤的情况下持续存在,目前病理生理学机制尚不清楚,多数患者的治疗效果不佳。外泌体为多囊泡胞内体与细胞膜融合释放到细胞外的脂质双分子层小囊泡,外泌体携带mRNA、microRNA、IncRNA、circRNA和DNA等遗传物质,具有天然的靶向性,可以通过内吞作用被靶细胞吸收,参与免疫调节、炎症反应等过程,也可以参与各种慢性疼痛疾病的过程。文章对外泌体移植治疗对NPP的缓解作用及机制的研究进展进行综述,以此为临床应用外泌体无细胞治疗NPP提供新的思路。

关键词：神经病理性疼痛外泌体无细胞治疗

三维生物打印支架的拓扑结构介导的免疫反应对小鼠毛囊周期的影响

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中华烧伤与创面修复杂志 2024年第1期40卷 43-49页

作者：刘清华李曌恩和吉日嘎拉张超宋薇王玉振梁莉婷张孟德黄钰岩李筱贺黄沙内蒙古医科大学基础医学院呼和浩特010110 解放军总医院医学创新研究部创伤修复与组织再生研究中心北京100048 内蒙古医科大学基础医学院人体解剖学教研室呼和浩特010110

目的探讨具有不同拓扑结构的三维生物打印支架介导的免疫反应对小鼠毛囊周期的影响。方法该研究为实验研究。将海藻酸钠-明胶复合水凝胶用三维生物打印机打印成3种支架,并按照支架的3种拓扑结构(打印时打印喷头的旋转角度分别为45°、6... 详细信息

目的探讨具有不同拓扑结构的三维生物打印支架介导的免疫反应对小鼠毛囊周期的影响。方法该研究为实验研究。将海藻酸钠-明胶复合水凝胶用三维生物打印机打印成3种支架,并按照支架的3种拓扑结构(打印时打印喷头的旋转角度分别为45°、60°、90°),分别命名为T45支架、T60支架、T90支架,肉眼观察3种支架交联后的形态。取9只8周龄雌性C57BL/6J小鼠,按随机数字表法分为T45组、T60组、T90组,每组3只,分别于背部皮下埋植T45、T60、T90支架。于植入后7 d,观察小鼠背部脱毛区毛发生长情况,行苏木精-伊红染色观测支架周围的纤维囊厚度,行免疫荧光染色检测支架周围组织中CD68、骨形态发生蛋白2(BMP-2)、肿瘤坏死因子(TNF)蛋白的表达水平。以上实验样本数均为3。结果3种支架交联后均拓扑结构明显,保真度高。植入后7 d,T45组、T90组小鼠背部脱毛区毛发均生长明显;T60组小鼠支架植入区毛发生长缓慢,与未植入区差别明显。植入后7 d,与T90组[(18±4)μm]相比,T45组、T60组小鼠支架周围的纤维囊厚度[(39±4)、(55±8)μm]均明显增加(P<0.05);与T45组相比,T60组小鼠支架周围的纤维囊厚度明显增加(P<0.05)。植入后7 d,T60组小鼠支架周围组织中CD68蛋白的表达水平明显高于T45组和T90组(P值均<0.05);T60组小鼠支架周围组织中BMP-2蛋白的表达水平明显高于T45组、T90组(P值均<0.05),T45组小鼠支架周围组织中BMP-2蛋白的表达水平明显高于T90组(P<0.05);T60组小鼠支架周围组织中TNF蛋白的表达水平明显低于T45组和T90组(P值均<0.05)。结论具有不同拓扑结构的三维生物打印支架植入小鼠体内后会介导不同程度的免疫反应。适度的免疫反应可促进小鼠脱毛区毛发生长,过强的免疫反应抑制毛囊进入生长期。

关键词：组织工程打印,三维免疫组织支架毛囊拓扑

使用新型冻存保护剂进行人源脂肪组织冻存及移植的有效性评估

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中华整形外科杂志 2024年第2期40卷 202-211页

作者：赵润蕾王关卉儿安阳杨丹丽姚明解曹启龙初相伍李东北京大学第三医院成形外科北京100191 北京大学基础医学院病原生物学系北京100191 北京大学基础医学院人体解剖学与组织学胚胎学系北京100191 青岛海尔生物科技有限公司青岛266041

目的:探索使用新型冻存剂进行人源脂肪组织冻存及移植的有效性。方法:标本来源于2022年1至3月在北京大学第三医院成形外科进行吸脂术的健康成年女性,将获得的脂肪组织离心后随机分为9组,分别采用不同的冻存液[A组、B组、二甲基亚砜(DMSO... 详细信息

目的:探索使用新型冻存剂进行人源脂肪组织冻存及移植的有效性。方法:标本来源于2022年1至3月在北京大学第三医院成形外科进行吸脂术的健康成年女性,将获得的脂肪组织离心后随机分为9组,分别采用不同的冻存液[A组、B组、二甲基亚砜(DMSO)组]及冻存时长(1、2、3个月组)于液氮中冻存。A组冻存液组分为右旋糖苷40(DEX)+氨基酸+维生素+无机盐,B组冻存液组分为DMSO+DEX,DMSO组采用传统冻存液,组分及配比为10%DMSO+20%胎牛血清(FBS)+70%DMEM-12。采用5 ml冻存管,脂肪∶冻存液=3∶2,每组冻存6管。脂肪组织复温后,采用HE染色观察组织学形态,采用免疫组化染色进行脂滴包被蛋白(Perilipin)定量分析,通过阳性细胞数量与总细胞数量的比值计算Perilipin阳性率;采用CCK-8法测定脂肪细胞活性。选择健康无特定病原体级裸鼠38只,根据移植脂肪使用不同的冻存保护剂(A组、B组、DMSO组)分为3组,每组各12只,另外2只作为day 0对照组,各组脂肪冻存时间均为3个月。裸鼠腹腔麻醉后,每侧背部注射复温后的冻存脂肪各0.9 ml,分别于移植后1、2、3个月通过MRI扫描及三维软件计算脂肪组织存留率并进行组间比较;小鼠处死后取移植的脂肪组织,采用HE染色和免疫组化染色进行组织形态学观察及Perilipin定量分析。采用GraphPad Prism 8.0软件对数据进行统计学分析,符合正态分布的计量资料以x±s表示,整体多组间比较采用重复测量资料的方差分析,同一时间点组间数据比较采用Tukey多重检验。结果:在液氮中冻存1~3个月后不同冻存液组的脂肪组织形态接近正常新鲜脂肪组织,各组Perilipin阳性率差异无统计学意义(P>0.05);CCK-8法提示冻存1个月和3个月时DMSO组脂肪细胞活性优于A组和B组(P学意义(P>0.05),移植1~3个月后各组脂肪组织出现不同程度局部坏死伴炎症反应,Perilipin阳性率各组之间差异无统计学意义(P>0.05)。结论:使用新型冻存液冻存脂肪组织的效果与传统冻存液相比未见显著差异,且避免了使用DMSO或FBS作为冻存剂对人体潜在的不良作用,理论上更加安全。

关键词：脂肪组织冷冻保护剂二甲基亚砜胎牛血清右旋糖苷

远端脊髓节段星形胶质细胞活化介导神经损伤诱发的播散性疼痛

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解剖学报 2024年第2期55卷 167-173页

作者：金思璇于宁孙丰润马超中国医学科学院基础医学研究所北京协和医学院基础学院人体解剖学与组织学胚胎学系北京100005 重大疾病共性机制研究全国重点实验室北京100005

目的探讨中枢神经系统中远端脊髓节段胶质细胞活化与播散性疼痛的关系。方法50只雌性大鼠随机分为假手术(sham)组、眶下神经慢性压迫性损伤(CCI-ION)组、CCI-ION+米诺环素(Mino)组、CCI-ION+L-2-氨基己二酸(LAA)组和CCI-ION+生理盐水(NS... 详细信息

目的探讨中枢神经系统中远端脊髓节段胶质细胞活化与播散性疼痛的关系。方法50只雌性大鼠随机分为假手术(sham)组、眶下神经慢性压迫性损伤(CCI-ION)组、CCI-ION+米诺环素(Mino)组、CCI-ION+L-2-氨基己二酸(LAA)组和CCI-ION+生理盐水(NS)组,每组n=10。建立CCI-ION模型,鞘内注射Mino、LAA和生理盐水,利用免疫荧光染色分别检测延髓、颈段、胸段、腰段脊髓节段中活化的星形胶质细胞标记物自身免疫性胶质纤维酸性蛋白(GFAP)和小胶质细胞标记物离子钙结合衔接分子1(IBA1);在第7、14、21、28天,使用von Frey纤维丝评估大鼠触须垫机械痛阈值,并采用电子von Frey仪测量大鼠前足、胸部及后足机械痛阈值,用辐射热痛刺激仪测量大鼠后足热痛阈值。结果结果显示,鞘内注射Mino抑制小胶质细胞后,各脊髓节段活化的小胶质细胞减少,鞘内注射LAA抑制星形胶质细胞后,各脊髓节段活化的星形胶质细胞减少,且注射Mino和LAA后,模型组大鼠触须垫机械痛阈升高,损伤部位的神经病理性疼痛缓解。鞘内注射Mino后,模型组大鼠后足热痛阈和机械痛阈未发现明显变化;鞘内注射LAA后,后足热痛阈和机械痛阈显著升高,播散性疼痛缓解。结论远端脊髓节段星形胶质细胞活化介导外周神经损伤诱发的播散性疼痛。

关键词：慢性痛播散性疼痛小胶质细胞星形胶质细胞免疫荧光大鼠