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重组慢病毒转染兔骨髓间充质干细胞与脱钙骨基质构建转基因组织工程材料

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中国组织工程研究 2025年第23期29卷 4851-4858页

作者：宁寅宽刘林志周次腊隆宇斌邵阳市中心医院血管外科湖南省邵阳市422000 邵阳市中心医院内分泌科湖南省邵阳市422000 邵阳市中心医院脊柱外科湖南省邵阳市422000

背景:缺损组织的修复重建受限于自体或异体可替代移植材料的来源问题而导致临床应用受限,转基因干细胞和组织工程材料研究开辟了新的治疗思路。目的:探究增强型绿色荧光蛋白重组慢病毒转染兔骨髓间充质干细胞在体外的生物学特性以及与... 详细信息

背景:缺损组织的修复重建受限于自体或异体可替代移植材料的来源问题而导致临床应用受限,转基因干细胞和组织工程材料研究开辟了新的治疗思路。目的:探究增强型绿色荧光蛋白重组慢病毒转染兔骨髓间充质干细胞在体外的生物学特性以及与脱钙骨基质体外构建转基因组织工程材料的生物矿化特性。方法:细胞贴壁及密度离心法获得兔骨髓间充质干细胞,增强型绿色荧光蛋白重组慢病毒以感染复数为100转染第5代兔骨髓间充质干细胞,体外观察转染细胞与未转染细胞的增殖能力、细胞表型、细胞周期以及成骨诱导后碱性磷酸酶、Runx2、骨钙素表达的差异;增强型绿色荧光蛋白重组慢病毒转染骨髓间充质干细胞与脱钙骨基质在体外构建转基因组织工程材料,对其进行扫描电镜观察及元素能谱分析。结果与结论:增强型绿色荧光蛋白重组慢病毒成功转染骨髓间充质干细胞后,在转染24,48 h细胞增殖较未转染细胞缓慢(P 0.05);增强型绿色荧光蛋白标记的骨髓间充质干细胞在脱钙骨基质支架上有较好的生物相容性,根据荧光表达强度推测目的基因在2周左右发挥最大生物学功能,且出现了钙磷矿化物沉积,体现出优越的生物矿化特性。

关键词：重组慢病毒载体增强绿色荧光蛋白骨髓间充质干细胞基因治疗生物学特性

piR-7472影响电压调控钾离子通道促进小鼠成骨细胞分化的机制

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中国组织工程研究 2025年第14期29卷 2868-2874页

作者：隆宇斌王湘斌樊基耿杨厚志杨洋李勇邵阳市中心医院脊柱外科湖南省邵阳市422000 天津医科大学研究生院天津市300070 邵阳市中心医院肿瘤内科湖南省邵阳市422000

背景:现有研究在PIWI相互作用RNA(piRNA)抗骨质疏松方面取得了重大进展,但piRNA发挥功能的具体靶点和相关机制仍有待探索。目的:探讨piR-7472对小鼠成骨细胞(MC3T3-E1细胞)分化的影响及下游机制。方法:①12只C57/BL6J小鼠随机分为假手... 详细信息

背景:现有研究在PIWI相互作用RNA(piRNA)抗骨质疏松方面取得了重大进展,但piRNA发挥功能的具体靶点和相关机制仍有待探索。目的:探讨piR-7472对小鼠成骨细胞(MC3T3-E1细胞)分化的影响及下游机制。方法:①12只C57/BL6J小鼠随机分为假手术组和卵巢切除组,每组6只,术后8周通过Micro-CT检测小鼠的骨量,RT-qPCR检测piR-7472的表达;②将MC3T3-E1细胞分为NC mimics组、piR-7472 mimics组、NC inhibitor组与piR-7472 inhibitor组,转染后成骨诱导7 d采用RT-qPCR检测piR-7472、骨桥蛋白、胶原蛋白Ⅰ、Runt相关转录因子2、钾电压门控通道调节因子亚家族F成员1 mRNA的表达;成骨诱导7 d采用Western blot检测骨桥蛋白、Runt相关转录因子2、骨形态发生蛋白2、钾电压门控通道调节因子亚家族F成员1(KCNF1)蛋白表达;成骨诱导14 d通过碱性磷酸酶染色检测碱性磷酸酶的表达;成骨诱导21 d通过茜素红染色检测矿化结节数量;③双荧光素酶报告基因实验观察piR-7472是否能与钾电压门控通道调节因子亚家族F成员1相结合。结果与结论:①与假手术组相比,卵巢切除组小鼠骨密度、骨体积分数、骨小梁厚度、骨小梁数量明显下降,骨小梁分离度明显升高,并且骨组织中piR-7472 mRNA表达明显下调;②与NC组相比,piR-7472 mimics组骨桥蛋白、胶原蛋白Ⅰ、Runt相关转录因子2的mRNA表达明显升高,骨桥蛋白、Runt相关转录因子2、骨形态发生蛋白2的蛋白表达明显升高,矿化沉积与碱性磷酸酶表达增多;与NC inhibitor组相比,piR-7472 inhibitor组骨桥蛋白、胶原蛋白Ⅰ、Runt相关转录因子2的mRNA表达明显降低,骨桥蛋白、Runt相关转录因子2、骨形态发生蛋白2的蛋白表达明显降低,矿化沉积与碱性磷酸酶表达降低;③通过miRanda数据库预测发现piR-7472能与KCNF1相互作用;双荧光素酶报告基因实验发现piR-7472 mimcis能与钾电压门控通道调节因子亚家族F成员1结合并促进其表达。结果表明:piR-7472能够促进成骨前体细胞MC3T3-E1成骨分化,其发挥作用的机制可能是通过促进KCNF1表达实现的。

关键词：成骨细胞MC3T3-E1 PIWI相互作用RNA 成骨分化骨质疏松症电压调控的钾离子通道 KCNF1

miR-192-5p靶向CKIP-1促进骨质疏松患者骨髓间充质干细胞成骨分化

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中国组织工程研究 2025年第13期29卷 2641-2647页

作者：鄂正康辛红伟于清波张允帅开封市中心医院(河南大学附属人民医院)骨六科河南省开封市475000

背景:酪蛋白激酶2结合蛋白1(casein kinase 2-interaction protein-1,CKIP-1)是一种重要的骨形成负调控基因,其敲除鼠骨质显著增强、骨形成和骨密度也显著提高。而miRNA作为较早发现的小分子调控物,对大多数编码基因具有调控作用,在成... 详细信息

背景:酪蛋白激酶2结合蛋白1(casein kinase 2-interaction protein-1,CKIP-1)是一种重要的骨形成负调控基因,其敲除鼠骨质显著增强、骨形成和骨密度也显著提高。而miRNA作为较早发现的小分子调控物,对大多数编码基因具有调控作用,在成骨分化中发挥重要作用。目的:探讨miRNA/CKIP-1对骨质疏松患者骨髓间充质干细胞成骨分化的影响及其分子机制。方法:采用miRNA-Seq技术检测2022年3-6月在开封市中心医院骨外科就诊32例骨质疏松患者及同期体检中心健康人群骨髓间充质干细胞中miRNA的变化情况;利用Targetscan网站预测靶向调控CKIP-1的miRNA,利用荧光素酶报告基因实验检测miRNA与CKIP-1启动子区DNA的结合;在骨髓间充质干细胞中转染miR-192-5p类似物(miR-192-5p mimics)/阴性对照(NC mimics)或miR-192-5p抑制剂(miR-192-5p inhibitor)/阴性对照(NC inhibitor),成骨诱导后第7,14天,通过实时荧光定量PCR技术及茜素红染色检测成骨标志基因Runt相关转录因子2(Runx2)、骨钙素、抗骨桥蛋白、骨唾液蛋白及CKIP-1的表达水平和骨髓间充质干细胞向成骨细胞分化的情况;采用蛋白质免疫印迹实验及茜素红染色检测miR-192-5p/CKIP-1/轴对细胞成骨分化的的调控作用。结果与结论:与健康组相比,骨质疏松组有16个miRNA表达明显升高,53个miRNA表达明显降低(P<0.05);利用Targetscan网站预测,并通过荧光素酶报告基因实验验证,发现miR-192-5p与CKIP-1有互补的核苷酸序列(P<0.05);过表达miR-192-5p,Runx2、骨钙素、骨桥素和骨唾液蛋白的表达水平显著升高(P<0.05),抑制miR-192-5p,Runx2、骨钙素、骨桥素和骨唾液蛋白的表达水平显著降低(P<0.05),而沉默CKIP-1的表达后,Runx2、骨钙素及骨桥素的蛋白水平增加(P<0.05),逆转了敲低miR-192-5p对细胞成骨分化的抑制作用。上述结果证实,miR-192-5p在骨质疏松症中表达降低;miR-192-5p通过靶向抑制CKIP-1的表达,促进骨髓间充质干细胞成骨分化。

关键词：骨质疏松微小RNA miR-192-5p 酪蛋白激酶2结合蛋白1 骨髓间充质干细胞成骨分化 Runt相关转录因子2 骨唾液蛋白

康莱特注射液联合吉非替尼治疗晚期非小细胞肺癌78例临床观察

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肿瘤 2011年第1期31卷 89-90页

作者：张琦袁海湖北省襄樊市中心医院肿瘤科襄樊441021

肺癌是目前世界上最常见的恶性肿瘤之一,其中非小细胞肺癌（non-small cell lung cancer,NSCLC）约占80%,且发病率逐年上升,但治疗效果始终不甚理想。近年来,肿瘤靶向药物的临床应用日益普遍,中药联合靶向药物治疗成为研究热点之一。本... 详细信息

肺癌是目前世界上最常见的恶性肿瘤之一,其中非小细胞肺癌（non-small cell lung cancer,NSCLC）约占80%,且发病率逐年上升,但治疗效果始终不甚理想。近年来,肿瘤靶向药物的临床应用日益普遍,中药联合靶向药物治疗成为研究热点之一。本科采用表皮生长因子受体酪氨酸激酶抑制剂吉非替尼联合中药康莱特注射液治疗晚期NSCLC 78例，取得了一定的疗效，现报道如下。

关键词：癌非小细胞肺吉非替尼康莱特注射液

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先天性牙龈粘连1例

中华儿科杂志 2025年第1期63卷 84-86页

作者：陈冠初厚舒阳霍媛王建荣姚东刚杨婷易彬唐建明高红霞甘肃省妇幼保健院(甘肃省中心医院)新生儿科兰州甘肃省妇幼保健院(甘肃省中心医院)口腔科兰州

患儿, 女, 4小时龄, 因"张口困难4 h"入院。患儿双侧后牙区上下牙床牙龈粘连, 张口受限, 入院后下颌骨CT检查排除上下颌骨骨性融合, 诊断为先天性牙龈粘连。患儿5日龄, 纤维支气管镜可视化引导气管插管, 建立高级人工气道后行牙龈成形手...

患儿, 女, 4小时龄, 因"张口困难4 h"入院。患儿双侧后牙区上下牙床牙龈粘连, 张口受限, 入院后下颌骨CT检查排除上下颌骨骨性融合, 诊断为先天性牙龈粘连。患儿5日龄, 纤维支气管镜可视化引导气管插管, 建立高级人工气道后行牙龈成形手术, 分离粘连牙龈组织, 术后行口腔运动干预。患儿18日龄口腔创面愈合良好, 张口度正常, 吃奶佳。

关键词：

吉西他滨联合顺铂方案治疗局部晚期非小细胞肺癌近期疗效观察

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第三军医大学学报 2009年第7期31卷 588-588,591页

作者：王言襄樊市中心医院肿瘤科湖北襄樊441021

近年来,肺癌的发病率和病死率呈逐步上升趋势[1],其中80%为非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC).大多数患者就诊时已丧失手术机会,化疗则在NSCLC的综合治疗中占据重要地位.

关键词：吉西他滨顺铂肺肿瘤/化学疗法非小细胞肺癌

钛表面多酚介导铜离子涂层制备及抗菌抗氧化性能

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中国组织工程研究 2025年第10期29卷 1997-2005页

作者：官振菊谢永林向守刚张成栋李小龙李兴平蒲超张波罗栩伟肖东琴川北医学院第二临床学院·南充市中心医院组织工程与干细胞研究所四川省南充市637000 川北医学院第二临床学院·南充市中心医院口腔科四川省南充市637000 成飞医院骨科四川省成都市610031 川北医学院第二临床学院·南充市中心医院骨科四川省南充市637000

背景:钛植入体因比强度高及良好的生物相容性被广泛应用于临床,然而在植入手术过程中,细菌感染及组织受损环境产生大量活性氧物质易导致组织延迟愈合与手术失败,因此开发具有抗菌和抗氧化性能的钛植入体极为重要。目的:鉴于铜离子良好... 详细信息

背景:钛植入体因比强度高及良好的生物相容性被广泛应用于临床,然而在植入手术过程中,细菌感染及组织受损环境产生大量活性氧物质易导致组织延迟愈合与手术失败,因此开发具有抗菌和抗氧化性能的钛植入体极为重要。目的:鉴于铜离子良好的抗菌性能及多酚类物质优良的抗氧化性能,拟在钛表面制备多酚介导的铜离子涂层,评价其体外抗菌及抗氧化性能。方法:利用碱热法在钛表面制备纳米结构,然后将钛片置于单宁酸及铜离子溶液中,获得多酚介导的铜离子涂层,检测样品的表面形貌与水接触角,利用原子吸收光谱法检测铜离子的携载及释放。将金黄色葡萄球菌分别接种于纯钛片(空白组)、碱热处理钛片(对照组)、多酚介导的铜离子修饰钛片(实验组)表面,观察细菌存活状态。将成骨前体细胞MC3T3-E1分别接种于3组钛片表面,评价材料的抗氧化性能及生物活性。结果与结论:(1)扫描电镜下可见多酚介导的铜离子修饰钛片表面存在棒状纳米结构,并且涂层无裂纹;多酚介导的铜离子修饰钛片表面亲水性接近纯钛片;原子吸收光谱结果显示,多酚介导后钛片表面铜离子的携载量增加了51%,铜离子呈均匀释放。(2)空白组、对照组、实验组钛片的抗菌率为0%,21.65%,93.75%;活死染色与CTC染色显示,空白组钛片表面的活细菌最多,实验组钛片表面的活细菌最少。(3)活死染色与CCK-8检测结果显示,3组钛片均具有良好的细胞相容性,并且实验组钛片更有利于MC3T3-E1细胞增殖;活性氧荧光探针检测显示,相较于其他两组,实验组钛片表面活性氧荧光强度明显减弱;碱性磷酸酶与茜素红S染色结果显示,相较于其他两组,实验组钛片表面MC3T3-E1细胞的成骨分化与细胞外基质矿化能力更强。(4)结果表明,多酚介导的铜离子涂层具有较强的抗菌、抗氧化及促成骨分化性能。

关键词：钛植入体抗菌抗氧化多酚铜离子涂层

M2型巨噬细胞衍生外泌体促进小胶质细胞M2型极化

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中国组织工程研究 2025年第25期29卷 5320-5327页

作者：方俊魏伟薛亚婷崔臣龙卫嘉晟石筱杨丽娟杨保仲山西医科大学山西省太原市030032 太原市中心医院山西省太原市030009

背景:目前对于M2型巨噬细胞衍生外泌体的研究多集中于促进伤口愈合及成骨细胞的增殖和分化,而很少有研究关注其对小胶质细胞表型的调控作用。目的:探讨M2型巨噬细胞衍生外泌体对于小胶质细胞的表型调控作用及分子机制。方法:①提取骨髓... 详细信息

背景:目前对于M2型巨噬细胞衍生外泌体的研究多集中于促进伤口愈合及成骨细胞的增殖和分化,而很少有研究关注其对小胶质细胞表型的调控作用。目的:探讨M2型巨噬细胞衍生外泌体对于小胶质细胞的表型调控作用及分子机制。方法:①提取骨髓原代巨噬细胞,用50 ng/m L白细胞介素4刺激巨噬细胞24 h促进巨噬细胞M2型极化,流式细胞术和细胞免疫荧光鉴定M2型巨噬细胞标志物CD206;②提取和鉴定M2型巨噬细胞衍生外泌体;③将小胶质细胞BV2随机分为3组:对照组、脂多糖组、治疗组,对照组不做处理,脂多糖组加入500 ng/m L脂多糖干预24 h,治疗组同时加入500 ng/m L脂多糖和25μg/m L M2型巨噬细胞衍生外泌体干预24 h,ELISA检测培养上清中肿瘤坏死因子α和白细胞介素10的分泌量,q RT-PCR检测细胞中诱导型一氧化氮合酶、精氨酸酶1、白细胞介素1β和白细胞介素10的m RNA表达,Western blot检测诱导型一氧化氮合酶、精氨酸酶1的蛋白表达以及核因子κB信号通路相关蛋白表达。结果与结论:①ELISA结果显示,与对照组相比,脂多糖组肿瘤坏死因子α分泌明显增多;与脂多糖组相比,治疗组肿瘤坏死因子α的分泌减少而白细胞介素10的分泌增多;②q RT-PCR结果显示,与对照组相比,脂多糖组白细胞介素1β、诱导型一氧化氮合酶m RNA表达升高;与脂多糖组相比,治疗组白细胞介素1β、诱导型一氧化氮合酶m RNA表达降低,白细胞介素10、精氨酸酶1 m RNA表达升高;③Western blot结果显示,与对照组相比,脂多糖组诱导型一氧化氮合酶蛋白表达升高;与脂多糖组相比,治疗组诱导型一氧化氮合酶蛋白表达降低,而精氨酸酶1蛋白表达升高;(4)与对照组相比,脂多糖组核因子κB信号通路中P65、p-IκB-α蛋白表达降低;与脂多糖组相比,治疗组P65、p-IκB-α蛋白表达升高。结果表明:M2型巨噬细胞衍生外泌体可以显著抑制脂多糖诱导小胶质细胞的炎症反应,促进抗炎因子白细胞介素10的表达,抑制促炎因子肿瘤坏死因子α、白细胞介素1β的表达,促进小胶质细胞表型由M1型向M2型极化,其机制可能与M2型巨噬细胞衍生外泌体抑制核因子κB信号通路激活有关。

关键词： M2巨噬细胞外泌体小胶质细胞炎症 NF-κB信号通路神经病理性疼痛极化

2014—2023年湖南省0~14岁儿童肺结核流行特征及变化趋势

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中国防痨杂志 2025年第1期47卷 29-35页

作者：梁麟龙裴异周海依谢齐放张锋江杰刘富强南华大学附属长沙市中心医院儿科长沙410004 长沙市儿童结核病技术创新中心长沙410004 湖南省结核病诊疗临床医疗技术示范基地长沙410004 南华大学附属长沙市中心医院肺六科长沙410004 湖南省疾病预防控制中心科教科长沙410153

目的:分析2014—2023年湖南省0~14岁儿童肺结核发病的流行病学特征及变化趋势,为湖南省制定和调整0~14岁儿童肺结核疫情防控政策提供参考依据。方法:从“传染病监测系统”中收集2014—2023年湖南省0~14岁儿童肺结核的监测数据资料,分析... 详细信息

目的:分析2014—2023年湖南省0~14岁儿童肺结核发病的流行病学特征及变化趋势,为湖南省制定和调整0~14岁儿童肺结核疫情防控政策提供参考依据。方法:从“传染病监测系统”中收集2014—2023年湖南省0~14岁儿童肺结核的监测数据资料,分析研究期间0~14岁儿童肺结核的流行病学特征,并采用Joinpoint回归模型对发病趋势进行分析。结果:2014—2023年湖南省0~14岁儿童肺结核累计报告3350例,年均报告发病率为2.64/10万,报告发病率从2014年的1.80/10万(220例)上升到2023年的3.19/10万(384例),发病情况总体呈上升趋势(χ_(趋势)^(2)=82.928,P省0~14岁儿童肺结核报告发病率总体呈上升趋势,年均上升5.759%(AAPC=5.759%,95%CI:0.245%~11.577%;t=2.411,P=0.042);女童变化趋势与全部儿童相似,年均上升7.511%(AAPC=7.511%,95%CI:0.471%~15.044%;t=2.466,P=0.039);男童变化趋势差异无统计学意义(AAPC=4.066%,95%CI:―0.548%~8.893%;t=2.027,P=0.077)。病原学阳性患者累计报告1030例,占全部儿童肺结核报告患者的30.75%(1030/3350);病原学检查阳性患者的构成比从2014年的21.82%(48/220)上升到2023年的41.41%(159/384),呈现逐年上升的趋势(χ_(趋势)^(2)=139.436,P省0~14岁儿童肺结核报告发病率总体呈上升趋势,病原学阳性患者例数也在逐年上升。应继续加大主动监测力度,结合各地区儿童肺结核实际发病情况调整防控策略。

关键词：结核儿童流行病学研究模型,统计学