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猪流行性腹泻病毒、猪传染性胃肠炎病毒和猪δ冠状病毒三重RT-qPCR检测方法的建立

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中国兽医学报 2025年

作者：陈千林李绍梅张邑帆牟豪刘明妮杨柳郭庆勇付利芝国家生猪技术创新中心疫病防控研究院新疆农业大学动物医学学院重庆市畜牧科学院兽医兽药研究所

猪肠道冠状病毒（swine enteric coronaviruses， SeCoV），如猪流行性腹泻病毒（porcine epidemic diarrhea virus， PEDV）、传染性胃肠炎病毒（transmissible gastroenteritis virus， TGEV）和猪德尔塔冠状病毒（porcine delta coronavirus， PDCoV），会引发仔猪严重腹泻，给养猪业造成了巨大的损失。本研究中，我们建立了一种三重实时荧光定量反转录PCR（reverse transcription-quantitative PCR， RT-qPCR）方法，用于同时检测PEDV、TGEV和PDCoV。首先根据PEDV M基因、TGEV ORF 1b基因和PDCoV ORF 1b基因的保守序列分别设计每种病毒的特异性检测引物和探针。优化反应条件后，成功建立了一种能同时检测PEDV、TGEV和PDCoV的三重RT-qPCR方法。该方法对这三种病毒具有良好的特异性，与猪场常见的CSFV、PCV2、PoRVA、PRV和PRRSV等均无交叉反应。对重组质粒pTOPO-PEDV 128、pTOPO-TGEV 116和pTOPO-PDCoV 125线性模板的检测极限分别为16.835、17.61和17.02拷贝/μL。组内、组间变异系数均小于5%，组间差异不显著（P>0.05）。此外，还比较了三重RT-qPCR与标准方法的符合性，结果显示符合率为100%，检测35份组织样本，17份呈PEDV阳性，阳性率为48.57%（17/35），TGEV和PDCoV检测结果均为阴性，未检测到混合感染。综上结果，建立的三重RT-qPCR方法特异、灵敏、稳定、快捷，可同时用于PEDV、TGEV和PDCoV的临床检测和鉴别诊断，为猪腹泻冠状病毒的检测和流行病学调查提供了一种检测方法。

关键词：猪流行性腹泻病毒传染性胃肠炎病毒猪δ冠状病毒 RT-qPCR 检测方法

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鲍曼不动杆菌相关耐药机制及新型治疗手段

西南医科大学学报 2025年第01期 97-104页

作者：史欣玥张定宇华中科技大学同济医学院附属武汉金银潭医院湖北省传染病临床医学研究中心中国医学科学院武汉传染性疾病诊治研究中心中国科学院武汉病毒研究所&武汉市金银潭医院感染性疾病与健康联合实验室华中科技大学同济医学院附属协和医院重症医学科

鲍曼不动杆菌在重症监护病房中是一种常见的多重耐药病原体,对危重患者构成显著威胁。面对有限的有效抗生素选择,鲍曼不动杆菌感染治疗面临诸多挑战,导致较高的感染率和死亡率。其耐药性归因于多种机制,包括外排泵作用、靶点突变、抗生... 详细信息

鲍曼不动杆菌在重症监护病房中是一种常见的多重耐药病原体,对危重患者构成显著威胁。面对有限的有效抗生素选择,鲍曼不动杆菌感染治疗面临诸多挑战,导致较高的感染率和死亡率。其耐药性归因于多种机制,包括外排泵作用、靶点突变、抗生素修饰酶的活化、生物膜形成及群体感应系统的调控。随着世界卫生组织将不动杆菌列为优先研发抗生素病原体,开发新抗生素的紧迫性显而易见。本文主要关注当前新型抗生素的开发、非传统抗菌药物的研究、潜在的疫苗以及多模式感染控制策略的推进。这些方法既是预防措施,也是应对抗生素耐药性不断升级挑战的替代治疗手段。

关键词：鲍曼不动杆菌耐药机制多模式感控

结合Udwadia-Kalaba控制理论的下肢外骨骼步态轨迹跟踪控制

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西安交通大学学报 2025年第1期59卷 148-158页

作者：肖志毅沙连森邹学坤黄锟李永斌刘斌中国科学技术大学生物医学工程学院(苏州) 江苏苏州215000 中国科学院苏州生物医学工程技术研究所江苏苏州215000

针对现有轨迹跟踪控制方法较难兼顾控制精度与稳定性的问题,提出一种基于Udwadia-Kalaba(U-K)控制理论的鲁棒控制方法。基于拉格朗日法建立机器人动力学模型,将动力学参数分为确定的名义部分与不确定部分;结合U-K理论与系统名义部分参... 详细信息

针对现有轨迹跟踪控制方法较难兼顾控制精度与稳定性的问题,提出一种基于Udwadia-Kalaba(U-K)控制理论的鲁棒控制方法。基于拉格朗日法建立机器人动力学模型,将动力学参数分为确定的名义部分与不确定部分;结合U-K理论与系统名义部分参数确定外骨骼机器人系统理想运动轨迹约束下的名义部分控制力矩;为消除机器人系统不确定部分的影响,引入鲁棒控制器,通过划分不确定性边界确定其应输出的额外控制力矩。仿真结果表明:相较于传统PID算法,基于U-K控制理论的鲁棒控制的外骨骼机器人髋关节、膝关节角度的轨迹跟踪控制精度分别提高了76.4%和96.8%。基于设计的下肢外骨骼机器人样机进行轨迹跟踪对比实验,实验结果表明:基于该方法的下肢外骨骼髋关节、膝关节角度的轨迹跟踪精度为0.467 0°和0.114 1°,相比作为对照的PID算法,分别提高了82.6%和86.8%,同时系统整体控制周期缩短了56.6%,该控制方法具有更高的同步性、控制精度与稳定性。

关键词：下肢外骨骼机器人 Udwadia-Kalaba控制理论鲁棒控制轨迹跟踪控制

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基于非洲猪瘟病毒D250R蛋白间接ELISA抗体检测方法的建立

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中国兽医科学 2025年

作者：朱文青徐丽华刘佳畦邬雨倩金子安吴旭琪袁秀芳周继勇郑肖娟浙江大学动物医学中心农业农村部动物病毒学重点实验室浙江省农业科学院畜牧兽医研究所

D250R是非洲猪瘟病毒(African swine fever virus，ASFV)感染早期表达的具有脱帽酶活性的非结构蛋白。本研究构建了pET-32a-D250R重组原核表达质粒，经IPTG诱导和镍亲和纯化成功获得原核细胞表达的重组蛋白His-D250R，该蛋白和真核细胞... 详细信息

D250R是非洲猪瘟病毒(African swine fever virus，ASFV)感染早期表达的具有脱帽酶活性的非结构蛋白。本研究构建了pET-32a-D250R重组原核表达质粒，经IPTG诱导和镍亲和纯化成功获得原核细胞表达的重组蛋白His-D250R，该蛋白和真核细胞表达的重组蛋白Flag-D250R均能被ASFV标准阳性血清识别，证明D250R蛋白是ELISA抗体检测方法的潜在靶标。在此基础上，以纯化的重组蛋白为免疫原制备鼠源多克隆抗体，该抗体ELISA效价大于1∶409 600。Western-blot试验表明该抗体与Flag-D250R和His-D250R均具有良好的反应性，证明His-D250R蛋白具有良好的抗原性。进一步以His-D250R蛋白为包被抗原，通过对抗原包被、封闭、抗体孵育、底物反应等条件的优化，建立间接ELISA抗体检测方法。其阴阳性临界值为0.359，检测PRV、PRRSV、PCV2、CSFV等阳性血清结果均呈阴性反应，灵敏度达1∶3 200，批内和批间重复性试验的变异系数均小于10%，与商品化试剂盒符合率达98.8%。上述结果表明，基于His-D250R蛋白建立的间接ELISA抗体检测方法特异性、敏感性、重复性良好，具备一定临床应用价值，可以为非洲猪瘟诊断方法开发提供重要支持。

关键词：非洲猪瘟病毒 D250R蛋白原核表达多克隆抗体间接ELISA

雷公藤T_4单体的免疫调节作用——Ⅰ.T_4对小鼠脾细胞NK活性的调节

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中国医学科学院学报 1990年第2期12卷 115-120页

作者：骆丹徐文严中国医学科学院皮肤病研究所

本文采用^(125)碘-脱氧尿嘧啶核苷(^(125)I-UdR)释放试验,观察从雷公藤中提取的活性T_4单体在体内体外对小鼠脾细胞NK活性的影响。结果发现,T_4单体并非完全表现抑制效应,而呈剂量依赖性的双向调节作用。即小剂量增强NK细胞毒百分比,提... 详细信息

本文采用^(125)碘-脱氧尿嘧啶核苷(^(125)I-UdR)释放试验,观察从雷公藤中提取的活性T_4单体在体内体外对小鼠脾细胞NK活性的影响。结果发现,T_4单体并非完全表现抑制效应,而呈剂量依赖性的双向调节作用。即小剂量增强NK细胞毒百分比,提高小鼠脾细胞群的溶解单位数(LU)及相对细胞毒活性(RCA);而较大剂量则具有抑制作用,剂量越大,抑制越明显。T_4单体的双向调节作用为重新评价雷公藤的药用价值及今后的临床应用提供了新的、有意义的实验依据。

关键词：雷公藤T4单体 NK细胞毒活性小鼠

雷公藤抗炎免疫及抗生育活性成份的筛选——Ⅲ.7个环氧二萜内酯化合物体内抗炎免疫活性的比较

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中国医学科学院学报 1991年第6期13卷 391-397页

作者：郑家润顾克显徐兰芳高纪伟余艳华唐美玉中国医学科学院皮肤病研究所

用巴豆油诱发的小鼠耳炎症模型及小鼠溶血素抗体生成模型作指标,测定从雷公藤中分离的7个环氧二萜内酯化合物的抗炎及免疫抑制活性的半数有效剂量(ED_(50))、治疗指数(TI)和可靠安全系(CSF)。结果表明:雷藤内酯醇(T10)、雷藤氯内酯醇(T4... 详细信息

用巴豆油诱发的小鼠耳炎症模型及小鼠溶血素抗体生成模型作指标,测定从雷公藤中分离的7个环氧二萜内酯化合物的抗炎及免疫抑制活性的半数有效剂量(ED_(50))、治疗指数(TI)和可靠安全系(CSF)。结果表明:雷藤内酯醇(T10)、雷藤氯内酯醇(T4)、雷藤内酯酮(T7)、雷藤内酯二醇(T8)、雷醇内醋(T9)和16-羟基内酪醇(L2)兼有抗炎、免疫抑制活性;而雷藤内酯三醇(T11)仅具抗炎活性。7个合物抗炎作用的TI由大至小依序为:T11(>19)、T10(17)、T9(9.6)、T4(9.0)、T8(7.3)、L2(6.6)、T7(5.9);6个化合物免疫抑制作用的TI依序为:T9(30.7)、T4(16.7)、L2(15.8)、T10(13.7)、T8(8.8)、T7(7.5)。全部化合物的抗炎、免疫抑制作用的CSF都大于1,其中T9、T4、L2免疫抑制作用的CSF分别为7.1、5.1和3.6。这显示雷公藤抗炎免疫有效成份是多元的。这些差别可作为化合物药用评价和选择的依据之一。然而,这些化合物的实用价值还取决于它们在药材中的含量和得率,合成和衍生物制备的难易以及遗传毒性检测的结果。

关键词：雷公藤环氧二萜内酯抗炎抗生育

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雷醇内酯的抗炎作用

中国药理学通报 1994年第1期10卷 54-59页

作者：顾克显郑家润高纪伟徐兰芳余艳华唐美玉中国医学科学院皮肤病研究所

雷醇内酯（Ｔ９）能抑制角叉菜胶、巴豆油和Ｆｒｅｕｎｄ完全佐剂引起的炎性水肿。减少急性胸膜炎渗液量．抑制白细胞游走和棉球肉芽增生。可降低血浆中ＰＧＥ２含量．对肾上腺重量及肾上腺ＶｉｔＣ含量无影响。其抗炎作用的治疗指数为... 详细信息

雷醇内酯（Ｔ９）能抑制角叉菜胶、巴豆油和Ｆｒｅｕｎｄ完全佐剂引起的炎性水肿。减少急性胸膜炎渗液量．抑制白细胞游走和棉球肉芽增生。可降低血浆中ＰＧＥ２含量．对肾上腺重量及肾上腺ＶｉｔＣ含量无影响。其抗炎作用的治疗指数为９．８６。结果与雷公藤其它抗炎免疫活性成分的结果相似，证明其为有效成分之一。Ｐ＜０．０１２．３对佐剂致大鼠原发性关节肿胀的影响［６］大鼠随机分为４组，每组８只。分别ｉｐＴ９１．０、０．５ｍｇ·ｋｇ－１，强的松龙１０ｍｇ·ｋｇ－１及等量生理盐水。给药后０．５ｈ，大鼠有足跖ｓｃＦｒｅｕｎｄ完全佐剂０．１ｍｌ致炎，测量致炎前及致炎后１８ｈ的关节周长（ｃｍ），以周长差作为肿胀度指标。结果显示，Ｔ９１．０、０．５ｍｇ·ｋｇ－１均能明显抑制大鼠佐剂性关节肿胀，有量效关系（表３）。表１Ｔ９对角叉菜致大鼠关节肿胀的影响与对照组比较．＊Ｐ＜０．０５．Ｐ＜０．０１表３Ｔ９对大鼠１８ｈ佐剂关节肿胀的影响与对照组比较．＊Ｐ＜０．０５，Ｐ＜０．０１２．４对大鼠急性胸膜炎的影响［７］大鼠随机分为４组，分别ｉｐＴ９０．８、０．４ｍｇ·ｋｇ－１等量生理盐水及ｐｏ阿斯匹林３００ｍｇ·ｋｇ－１。ｉｐ后０．５ｈ或ｐｏ后１ｈ，在乙醚麻?

关键词：雷公藤雷醇内酯抗炎作用

椎间盘退行性变与473种肠道菌群的关系:芬兰数据库大数据信息可借鉴的意义

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中国组织工程研究 2025年第20期29卷 4369-4378页

作者：王梓焜李树栋高泷范书豪李城孟纯阳山东第一医科大学(山东省医学科学院) 山东省济南市250117 山东中医药大学第一临床医学院山东省济南市250355 济宁医学院临床医学院山东省济宁市272067 济宁医学院附属医院脊柱外科山东省济宁市272000

背景:有研究表明,调节肠道菌群可能会影响椎间盘退变的进程。然而,肠道菌群与椎间盘退变的因果关系尚不清楚。目的:采用孟德尔随机化方法来评估肠道菌群与椎间盘退变之间的潜在因果关系。方法:应用公开发表最新的473种肠道菌群的全基因... 详细信息

背景:有研究表明,调节肠道菌群可能会影响椎间盘退变的进程。然而,肠道菌群与椎间盘退变的因果关系尚不清楚。目的:采用孟德尔随机化方法来评估肠道菌群与椎间盘退变之间的潜在因果关系。方法:应用公开发表最新的473种肠道菌群的全基因组关联分析汇总统计数据和芬兰数据库R11中的椎间盘退变的全基因组关联分析汇总数据(椎间盘退变病例46 205例和对照组322 314例)。采用逆方差加权法、MR-Egger回归法、加权中位数法、加权模型法和简单模型法来研究肠道菌群与椎间盘退变之间的因果关系。敏感性分析用于检验孟德尔随机化分析结果是否可靠。反向孟德尔随机化以全部肠道菌群作为结局进行效应分析和敏感性分析。结果与结论:(1)正向孟德尔随机化的逆方差加权法结果显示,毛螺菌目,UBA-6960科、嗜热厌氧杆菌科、盐单胞菌科、丛毛单菌属、戈登氏菌属和欧陆森氏菌属与椎间盘退变呈现正相关。短螺旋体目、假单胞菌目、短螺旋菌科、CAG-776属、螺杆菌属、CAG-448种sp003150135、CAG-776种sp000438195、布劳特氏菌种-A sp000285855和汉逊布劳氏菌种与椎间盘退变呈现负相关。(2)反向孟德尔随机化结果显示,椎间盘退变与玫瑰巴氏菌属、地电细菌属C、弗氏埃希菌种、弗氏丙酸杆菌种、UBA-1777种sp900319835、铜绿假单胞菌种和韦氏芽孢杆菌种呈正相关,与明串珠菌属、普雷沃氏菌种sp000434975、布劳特氏菌种-A sp000285855、CAG-194种sp002441865和CAG-590种sp000431135呈负相关。(3)双向敏感性分析均未发现存在异质性或水平多效性。(4)上述结果说明,基于芬兰数据库探究肠道菌群与椎间盘退变的因果关系,为临床上椎间盘退变的早期预测及治疗探索了新的生物标志物。另外,对于中国生物医学研究,可以借鉴建立大型数据库,整合多中心的医疗数据,为肠道菌群与椎间盘退变关系的研究提供坚实基础,与其他国家的科研团队加强交流与合作,共同推动肠道菌群与疾病关系的研究,为全球医学发展作出贡献。

关键词：孟德尔随机化椎间盘退变肠道菌群全基因组关联分析单核苷酸多态性逆方差加权法水平多效性敏感性分析

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以胶乳颗粒凝集试验检测278例麻风血清的结果

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中国麻风杂志 1997年第4期13卷 195-196页

作者：赵赣兰吴隆艾何锐湖北省医学科学院湖北省皮肤病研究所

用ＭＬＰＡ对２７８例麻风患者进行血清学检测，其阳性率分别为：ＬＬ６２．４％、ＢＬ５６．２％、ＢＢ６６．７％、ＢＴ３１．２％、ＴＴ２２．２％；现症病例的阳性率为６５．１％，单用ＤＤＳ后复发者为６３．２％，治愈者为３９．... 详细信息

用ＭＬＰＡ对２７８例麻风患者进行血清学检测，其阳性率分别为：ＬＬ６２．４％、ＢＬ５６．２％、ＢＢ６６．７％、ＢＴ３１．２％、ＴＴ２２．２％；现症病例的阳性率为６５．１％，单用ＤＤＳ后复发者为６３．２％，治愈者为３９．８％；查菌阳性者中为３６．５％；有麻风反应者中的阳性率为２７．６％。

关键词：麻风 MLPA 血清