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超氧化物歧化酶在鸡白痢沙门氏菌耐受环丙沙星中的作用分析

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中国家禽 2024年

作者：李艳莉程伊洛罗青平杨玉莹张腾飞湖北省农业科学院畜牧兽医研究所农业农村部畜禽细菌病防治制剂创制重点实验室畜禽病原微生物学湖北省重点实验室长江大学动物科学学院

为研究超氧化物歧化酶对鸡白痢沙门氏菌耐受环丙沙星的影响，试验利用λ-Red同源重组系统构建鸡白痢沙门氏菌C79-3的sod1、sod2、sod3和sod4的单基因缺失株和同为Cu/Zn家族的sod1与sod3、Fe/Mn家族的sod2与sod4的双基因缺失株及其互补... 详细信息

为研究超氧化物歧化酶对鸡白痢沙门氏菌耐受环丙沙星的影响，试验利用λ-Red同源重组系统构建鸡白痢沙门氏菌C79-3的sod1、sod2、sod3和sod4的单基因缺失株和同为Cu/Zn家族的sod1与sod3、Fe/Mn家族的sod2与sod4的双基因缺失株及其互补株，比较分析亲本株、基因缺失株与互补株的生长曲线、生物被膜形成能力、过氧化氢和抗生素耐受能力的差异。结果显示：6个基因缺失株与亲本株的生长曲线无明显差别，但双基因缺失株Δsod1Δsod3和Δsod2Δsod4生物被膜形成能力显著下降（P研究鸡白痢沙门氏菌耐药机制奠定理论基础。

关键词：鸡白痢沙门氏菌超氧化物歧化酶过氧化氢耐受环丙沙星耐受

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鸡滑液囊支原体的分离鉴定及药敏试验

动物医学进展 2024年第1期45卷 130-135页

作者：殷梦玉张腾飞张文婷胡巧卢琴郭云清罗青平湖北省农业科学院畜牧兽医研究所/农业农村部畜禽细菌病防治制剂创制重点实验室/畜禽病原微生物学湖北省重点实验室湖北武汉430064 湖北洪山实验室湖北武汉430064

为弄清湖北省某蛋鸡场180日龄鸡群出现呼吸道症状和产蛋率下降的病原,采集病料进行病原的分离鉴定与药敏试验,用形态学观察方法和分子生物学方法对分离株进行了形态学观察和16S rRNA基因鉴定,并用鸡胚感染试验对分离株进行致病性试验。... 详细信息

为弄清湖北省某蛋鸡场180日龄鸡群出现呼吸道症状和产蛋率下降的病原,采集病料进行病原的分离鉴定与药敏试验,用形态学观察方法和分子生物学方法对分离株进行了形态学观察和16S rRNA基因鉴定,并用鸡胚感染试验对分离株进行致病性试验。结果显示,病原分离鉴定结果仅滑液囊支原体阳性,镜检观察到典型的“煎蛋样”菌落;16S rRNA序列与已报道的滑液囊支原体的具有高度同源性;鸡胚感染试验显示,分离株导致鸡胚发育迟缓,胚体弱小,从弱小胚体内可再次分离出滑液囊支原体;药敏试验结果显示滑液囊支原体分离株对泰妙菌素、四环素和盐酸克林霉素敏感。结果表明,从产蛋下降的鸡群中成功分离到1株滑液囊支原体,为临床该病的防治提供了科学依据。

关键词：鸡滑液囊支原体分离鉴定药敏试验

血清4型禽腺病毒抗体间接ELISA检测方法的建立与应用

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中国动物传染病学报 2024年

作者：杨宏春金梦云汪宏才冯贺龙姚伦曾哲张腾飞商雨罗青平欧长波温国元湖北省农业科学院畜牧兽医研究所农业农村部畜禽细菌病防治制剂创制重点实验室&畜禽病原微生物学湖北重点实验室湖北洪山实验室广西大学动物科学技术学院

自2015年以来，由血清4型禽腺病毒（Fowl Adenovirus serotype 4， FAdV-4）引起的鸡心包积液-肝炎综合征(HHS)给全球家禽业造成了巨大的经济损失。简便、快捷的抗体检测方法对于疾病的预防和疫苗的免疫评估至关重要。为了建立一种快速... 详细信息

自2015年以来，由血清4型禽腺病毒（Fowl Adenovirus serotype 4， FAdV-4）引起的鸡心包积液-肝炎综合征(HHS)给全球家禽业造成了巨大的经济损失。简便、快捷的抗体检测方法对于疾病的预防和疫苗的免疫评估至关重要。为了建立一种快速检测FAdV-4特异性抗体的方法，本研究利用原核表达系统表达了FAdV-4 HB1510株Fiber2蛋白的头节区(Knob)（847bp～1407bp）；以纯化的Konb蛋白作为包被抗原，经过对反应条件优化后，建立了一种快速检测FAdV-4抗体的间接ELISA方法。性能测试结果表明该间接ELISA方法具有敏感性高、特异性强和重复性优良的特点。用研究建立的方法与琼脂凝胶扩散试验（APG）分别检测200份湖北不同鸡场临床血清样品，间接ELISA检测阳性率为66.5%，APG检测阳性率为54%，两者符合率为87.5%。上述结果表明，本试验建立的间接ELISA检测方法可快速有效检测FAdV-4抗体水平，并且可以为FAdV-4血清流行病学调查以及疫苗的研发和免疫评估提供一定技术支撑。

关键词：血清4型禽腺病毒 Fiber2蛋白抗体检测间接ELISA

鸡胚免疫新城疫疫苗后宿主法氏囊转录组学分析

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中国畜牧兽医 2024年第4期51卷 1632-1641页

作者：蒋立人冯贺龙姜鑫瑞王梓晨张高峰商雨曾哲姚伦汪宏才罗青平田光明温国元长江大学动物科学技术学院荆州434025 湖北省农业科学院畜牧兽医研究所农业农村部畜禽细菌病防治制剂创制重点实验室&畜禽病原微生物学湖北重点实验室武汉430064 湖北洪山实验室武汉430070

【目的】通过转录组学分析鸡胚免疫新城疫病毒(Newcastle disease virus,NDV)TS09-C株后宿主法氏囊内免疫关键基因及信号通路分子转录差异,探究免疫后宿主法氏囊内免疫相关分子的调控反应。【方法】将60只18胚龄SPF鸡胚随机分为免疫组... 详细信息

【目的】通过转录组学分析鸡胚免疫新城疫病毒(Newcastle disease virus,NDV)TS09-C株后宿主法氏囊内免疫关键基因及信号通路分子转录差异,探究免疫后宿主法氏囊内免疫相关分子的调控反应。【方法】将60只18胚龄SPF鸡胚随机分为免疫组和对照组,30枚/组,免疫组将NDV TS09-C株通过羊膜腔接种鸡胚,剂量为103.0 EID 50/枚,注射体积为0.1 mL,对照组以同样的方法接种等体积PBS。检测免疫后不同时间点肺脏、胸腺、脾脏和法氏囊组织的病毒载量。选取病毒载量最高的法氏囊组织进行转录组学测序后,筛选免疫相关差异表达基因并分析其参与的主要功能及通路。【结果】免疫后1 d法氏囊组织中即可监测到病毒,免疫后3 d病毒载量达到最高。将免疫后3 d的法氏囊进行转录组学分析,与对照组相比,免疫组有453个基因上调、98个基因下调,其中免疫相关基因有36个上调、10个下调。免疫相关差异表达基因主要富集于自噬和细胞因子-细胞因子受体相互作用的免疫相关通路。差异表达基因蛋白互作分析显示,自噬通路中富集的BCL2与其他免疫相关基因有较多互作关系,且在B细胞活化、分化、免疫系统发育等功能注释中均有参与。【结论】本研究结果揭示了鸡胚免疫NDV TS09-C株后法氏囊内调控B细胞活化、分化的潜在靶向基因及通路,为进一步研究该毒株鸡胚免疫后B淋巴细胞调控的分子机制提供新的信息。

关键词：新城疫病毒(NDV) TS09-C株鸡胚免疫法氏囊转录组分析

生物矿化对新城疫病毒LaSota株生物学特性及免疫原性的影响

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畜牧兽医学报 2024年

作者：张高峰魏家阳冯贺龙李丽曾哲田光明聂仁锋罗青平温国元魏红波商雨长江大学动物科学技术学院湖北省农业科学院畜牧兽医研究所农业农村部畜禽细菌病防治制剂创制重点实验室畜禽病原微生物学湖北重点实验室山南市藏鸡产业研究院汉川市农业农村局湖北洪山实验室

(目的)研究生物矿化对新城疫病毒（NDV）LaSota株生物学特性及免疫原性的影响，为耐热活疫苗研发提供新思路。（方法）通过测定不同矿化条件下病毒粒径、血凝效价和斑点印记，确定NDV的最佳生物矿化条件；将矿化后病毒接种BHK-21细胞，... 详细信息

(目的)研究生物矿化对新城疫病毒（NDV）LaSota株生物学特性及免疫原性的影响，为耐热活疫苗研发提供新思路。（方法）通过测定不同矿化条件下病毒粒径、血凝效价和斑点印记，确定NDV的最佳生物矿化条件；将矿化后病毒接种BHK-21细胞，检测矿化对病毒增殖的影响，同时比较热处理后的矿化病毒在BHK-21细胞中的滴度变化情况；利用抗体中和实验检测矿化病毒的免疫原性；最后通过饮水免疫的方式评估矿化病毒在SPF雏鸡上的免疫效果。（结果）生物矿化条件经优化后，LaSota株在4 mmol·L-1Na2HPO4和3 mmol·L-1CaCl2条件下矿化效果最好，此时矿化病毒粒径最大，血凝效价最低，矿化率高达98.25%。矿化的LaSota株在BHK-21细胞上增殖起始时间迟于未矿化病毒，但两者的最终增殖滴度没有显著差异。经NDV抗体中和后，矿化病毒滴度的下降值为103.0TCID50·mL-1，显著低于未矿化组。在56 ℃水浴中孵育15 min后，矿化的LaSota株病毒滴度仅下降103.5TCID50·mL-1，与TS09-C耐热株的耐热特性相当。矿化的LaSota株免疫SPF雏鸡14天后，抗体水平均高于未矿化LaSota株免疫鸡群。免疫后42天和78天进行攻毒实验，矿化LaSota株免疫鸡群的存活率分别为100%和60%。（结论）综上所述，本研究优化了NDV LaSota株的最佳矿化条件，矿化会延缓病毒的增殖速度，但不影响病毒的增殖滴度。经矿化后，能降低病毒与抗体的中和反应并提升其热稳定性，并可通过饮水免疫的方式对SPF雏鸡提供较好的保护效果。本研究证实通过生物矿化开发新城疫耐热活疫苗是一条切实可行的思路，也为开发其他病毒耐热活疫苗提供参考和借鉴。

关键词：新城疫病毒LaSota株生物矿化生物学特性热稳定性免疫原性

蛋鸡输卵管内鸭源鸡杆菌的分离鉴定与生物学特性分析

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中国动物传染病学报 2024年

作者：张政钢金鑫鑫梁睿钦蔡梦雷赵东旭刘建钗罗青平崔国林河北工程大学生命科学与食品工程学院湖北省农业科学院畜牧兽医研究所农业农村部畜禽细菌病防治制剂创制重点实验室畜禽病原微生物学湖北省重点实验室湖北洪山实验室

2023年9月湖北省武汉市某鸡场23周龄开产初期海兰褐蛋种鸡出现产蛋率和产蛋质量下降的现象，并伴随鸡只持续死亡，对蛋鸡养殖户造成了较大的经济损失。为探究该病例发生原因，本研究采集发病蛋鸡输卵管，采用7%绵羊血琼脂培养基进行细... 详细信息

2023年9月湖北省武汉市某鸡场23周龄开产初期海兰褐蛋种鸡出现产蛋率和产蛋质量下降的现象，并伴随鸡只持续死亡，对蛋鸡养殖户造成了较大的经济损失。为探究该病例发生原因，本研究采集发病蛋鸡输卵管，采用7%绵羊血琼脂培养基进行细菌分离和纯化，挑选出强溶血性的分离菌株进行鸭源鸡杆菌（***）特异性PCR检测；对分离菌株进行16S rRNA基因测序，并进行系统进化分析；采用药敏纸片法检测分离菌株药敏性质，并采用PCR测定相应耐药基因；将分离菌株采用腹腔注射途径攻毒雏鸡，6×105-6×107CFU/只，测定分离株致病力。结果显示本研究共分离到1株强溶血性细菌，分离菌株与已报道的*** 16S rRNA基因核苷酸同源性均大于99%；且具有***特异性基因序列；分离菌株对四环素、阿米卡星和环丙沙星等13种抗生素耐药，与PCR检测到的耐药基因blaTEM、StrA、sul2等结果一致；动物感染试验结果表明，分离株对雏鸡的LD50为3.16×107，同居组雏鸡在同居2d后咽拭子检测到***，结果表明分离菌株为***，其具有多重耐药性和耐药基因，对雏鸡致病力较强，且具有较强的水平传播能力。

关键词：鸭源鸡杆菌 16S rRNA 耐药性致病性

基于基因组信息的大蒲莲猪遗传多样性和群体结构变化分析

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农业生物技术学报 2024年第5期32卷 1093-1101页

作者：张鑫张婷王怀中杨晴高世超王彦平王继英济宁市畜牧兽医事业发展中心山东省农业科学院畜牧兽医研究所/畜禽疫病防治与繁育重点实验室农业农村部畜禽生物组学重点实验室

由于系谱错误、留种不均衡和杂种个体混入等原因，地方猪保种过程中可能会出现群体近交系数增速过快、个体间亲缘关系不明等问题。为分析大蒲莲猪(Sus scrofa)保种群的遗传多样性和群体结构，监测保种群2017～2022年期间基因组信息变化... 详细信息

由于系谱错误、留种不均衡和杂种个体混入等原因，地方猪保种过程中可能会出现群体近交系数增速过快、个体间亲缘关系不明等问题。为分析大蒲莲猪(Sus scrofa)保种群的遗传多样性和群体结构，监测保种群2017～2022年期间基因组信息变化情况，本研究利用高密度SNP芯片对110头大蒲莲猪全基因组SNP进行扫描，对比分析了2017年和2022年大蒲莲猪保种核心群样本的遗传多样性、近交系数、系统发生树以及与引进猪的关系。结果表明：1) 2022年大蒲莲猪样本的观察杂合度(observe heterozygosity, HO)(0.356 vs 0.292)、期望杂合度(expected heterozygosity, HE)(0.342 vs 0.285)和遗传距离(0.270 vs 0.233)均高于2017年样本，血缘同源(identity by descent, IBD)比例(0.108 vs 0.127)和基于纯合性片段(runs of homozygosity, ROH)计算的基因组近交系数FROH(0.108 vs. 0.163)低于2017年样本，系统发生树结构与2017年样本相似但家系间的均衡性增加，说明2022年核心群的遗传多样性比2017年有所提高，群体结构有所改善。2) 2022年样本的HO和HE比值(1.041 vs. 1.025)高于2017年样本，与引进品种的主成分分析(PCA)中，2022年样本比2017年样本更偏向于引进品种猪，说明大蒲莲猪中混有一定的其他群体血缘，且2022年大蒲莲猪群体中其他品种的血缘比2017年有所增加。本研究分析了大蒲莲猪群体变化趋势，为大蒲莲猪进一步的保种与科学利用提供参考依据。

关键词：大蒲莲猪高密度SNP芯片遗传多样性群体结构

湖北省2个规模化蛋鸡养殖场环境细菌监测分析

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中国家禽 2024年第7期46卷 113-118页

作者：廖卫东张文婷刘廷江姜博达郭云清张腾飞卢琴汪最程伊洛罗青平姚敏长江大学动物科学学院湖北荆州434025 湖北省农业科学院畜牧兽医研究所农业农村部畜禽细菌病防治制剂创制重点实验室畜禽病原微生物学湖北省重点实验室湖北武汉430064 湖北洪山实验室湖北武汉430070

为了解蛋鸡养殖场环境中病原菌流行情况,试验采集湖北省不同地区2个规模化蛋鸡养殖场不同位置的空气、水线和饲料样品进行病原菌检测,并采用16S rDNA测序分析样品中的优势病原菌。结果显示:饲料样品中细菌总数符合《GB 13078—2017饲料... 详细信息

为了解蛋鸡养殖场环境中病原菌流行情况,试验采集湖北省不同地区2个规模化蛋鸡养殖场不同位置的空气、水线和饲料样品进行病原菌检测,并采用16S rDNA测序分析样品中的优势病原菌。结果显示:饲料样品中细菌总数符合《GB 13078—2017饲料卫生标准》,而鸡舍风机附近空气及水线中细菌总数均较高;空气中优势病原菌是芽孢杆菌和葡萄球菌,饲料和水线优势菌为芽孢杆菌。结果表明,规模化蛋鸡养殖场饲料中的芽孢杆菌易污染水线和空气,风机附近是细菌污染重点区域,应定期消毒。

关键词：规模化蛋鸡养殖场环境监测细菌总数优势病原菌

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血清4型禽腺病毒的分离鉴定及致病性分析

畜牧与兽医 2024年第9期56卷 75-83页

作者：田光明张高峰杨俊杰杨宏春蒋立人王鑫陈俊池商雨温国元罗青平长江大学动物科学技术学院湖北荆州444100 湖北省农业科学院畜牧兽医研究所/农业农村部畜禽细菌病防治制剂创制重点实验室/畜禽病原微生物学湖北重点实验室湖北武汉430064 湖北洪山实验室湖北武汉430070

旨在从送检的病鸡中分离鉴定出禽腺病毒(fowl adenovirus,FAdV),为临床诊断和疫病防控提供参考依据。本研究将阳性样品接种SPF鸡胚并传代,利用PCR检测、基因序列分析、动物回归试验等方法鉴定病毒。结果:经过鸡胚传代及病毒特异性检测... 详细信息

旨在从送检的病鸡中分离鉴定出禽腺病毒(fowl adenovirus,FAdV),为临床诊断和疫病防控提供参考依据。本研究将阳性样品接种SPF鸡胚并传代,利用PCR检测、基因序列分析、动物回归试验等方法鉴定病毒。结果:经过鸡胚传代及病毒特异性检测获得了纯净的FAdV,命名为HB2306;分析Hexon基因序列可知,HB2306株属于血清4型分支,与国内外分离的FAdV-4毒株核苷酸序列同源性为98.2%~99.9%,HB2306株与国内外的4型高致病性毒株氨基酸序列相似性在97.9%~99.8%;受试动物临床病理变化显示,HB2306株以104.5EID50/只的剂量经胸部肌肉注射后,引起宿主心包积液,肝脏变黄肿胀、淤血出血,肾出血、肿胀等典型的病理变化,与流行的高致病性毒株所致临床症状相似,且死亡率为100%。综上,本研究成功分离并鉴定出一株FAdV-4高致病力毒株,丰富了毒种库,为该病毒感染的流行情况调查和综合防控奠定了基础。

关键词：禽腺病毒4型致病性 Hexon基因遗传进化