检索结果-南通市图书馆

霍山石斛两个碳糖基转移酶基因的克隆及序列分析

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分子植物育种 2024年第7期22卷 2144-2153页

作者：陈畅蒲天珍李永华杨晓利张秀桥余坤龚玲湖北中医药大学药学院武汉430065

本研究以霍山石斛(Dendrobium houshanense)叶片为研究材料,利用聚合酶链式反应(polymerase chain reaction, PCR)获得两个UDP-葡萄糖:2-羟基黄烷酮C-糖基转移酶(2-hydroxyflavanone C-glucosyltransferase, UFCGT)全长基因,并对这两个基因编码的蛋白质进行分析和功能预测。结果表明,UFCGT1和UFCGT2基因序列长度分别为1 022和1 187 bp,开放阅读框(open reading frame, ORF)长度分别为966和933 bp,编码蛋白均为酸性、疏水性、非跨膜蛋白,与兰科(Orchidaceae)植物铁皮石斛(Dendrobium catenatum)、桃红蝴蝶兰(Phalaenopsis equestris)聚为一支,均无信号肽和跨膜域的存在。UFCGT1有27个潜在磷酸化位点和1个N-糖基化位点,定位于线粒体。UFCGT2有15个潜在的磷酸化位点而无糖基化位点,定位于细胞膜外。本研究为阐明黄酮碳苷类化合物生物合成途径提供一定的参考。

关键词：霍山石斛基因克隆序列分析

霍山石斛不同部位总黄酮的含量比较及黄酮类成分分析

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中药新药与临床药理 2023年第10期34卷 1426-1434页

作者：杨晓利蒲天珍李永华陈畅张秀桥龚玲湖北中医药大学药学院湖北武汉430065

目的比较霍山石斛不同部位的总黄酮含量,并对其叶中黄酮类成分进行定性鉴别,明确霍山石斛黄酮积累部位及黄酮化合物组成。方法采用AlCl3比色法测定霍山石斛不同部位的总黄酮含量;应用超高效液相色谱-四级杆/飞行时间串联质谱(UHPLC-Q-TO... 详细信息

目的比较霍山石斛不同部位的总黄酮含量,并对其叶中黄酮类成分进行定性鉴别,明确霍山石斛黄酮积累部位及黄酮化合物组成。方法采用AlCl3比色法测定霍山石斛不同部位的总黄酮含量;应用超高效液相色谱-四级杆/飞行时间串联质谱(UHPLC-Q-TOF-MS)技术鉴定其不同部位的黄酮类化合物,使用Altima UHPLC C_(18)色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm);以0.4%甲酸(A)-甲醇(B)为流动相进行梯度洗脱,流速0.9 mL·min^(-1),柱温35℃。采用加热电喷雾离子化源(H-ESI),负离子模式下采集数据,使用MassLynx V4.1软件处理数据。结果霍山石斛不同部位中总黄酮含量比较:叶>茎>根,分别为2.06、0.630、0.477 mg·g^(-1),三者存在显著性差异;在霍山石斛根、茎、叶中分别鉴定出53、61、68种黄酮类化合物。其化合物的类型主要以双碳糖苷为主,苷元主要是芹菜素。结论霍山石斛中黄酮类化合物主要在叶中积累,其化学组成类型丰富,该研究结果可为霍山石斛的进一步开发利用提供依据。

关键词：霍山石斛不同部位叶黄酮含量测定成分分析

蛇葡萄素通过PI3K/AKT/mTOR通路诱导人宫颈癌细胞SiHa自噬

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中国药理学通报 2023年第11期39卷 2121-2128页

作者：邹雪熊晓妹杨晓利廖思雨许诗怡张秀桥桂春湖北中医药大学药学院湖北武汉430065

目的研究蛇葡萄素(ampelopsin,AMP)诱导人宫颈癌细胞SiHa发生自噬及其可能的作用机制。方法单丹磺酰胺(monodansylcadaverine,MDC)染色法观察AMP对SiHa和C-33A细胞自噬的影响;透射电子显微镜(transmission electron microscope,TEM)观察经AMP干预的SiHa和C-33A细胞超微结构的变化;自噬双标腺病毒转染(mRFP-GFP-LC3)法检测SiHa细胞自噬流强度;Western blot法对SiHa细胞中自噬相关蛋白LC3Ⅱ/Ⅰ、P62、Beclin-1、Atg13及PI3K/AKT/mTOR信号通路蛋白的表达情况进行检测。结果MDC染色结果显示,随着AMP浓度的升高,代表自噬小体的亮绿色逐渐增多;TEM实验结果表明,与空白对照组相比,AMP组细胞线粒体嵴溶解消失,同时可见自噬小体和自噬溶酶体;mRFP-GFP-LC3实验结果提示,随着AMP浓度的升高,细胞内自噬小体和自噬溶酶体增多,提示自噬流增强;同时发现LC3Ⅱ/Ⅰ、Beclin-1、Atg13蛋白表达上调,P62、p-PI3K、p-AKT、p-mTOR蛋白表达下调,表明AMP可能通过抑制PI3K/AKT/mTOR信号通路诱导SiHa细胞发生自噬;加入3-MA后,与AMP组相比,3-MA和AMP联合组的p-PI3K、p-AKT、p-mTOR的表达水平上升,提示自噬被抑制后,PI3K/AKT/mTOR信号通路被逆转。结论AMP可诱导SiHa细胞发生自噬,其机制可能与抑制PI3K/AKT/mTOR信号通路的激活有关。

关键词：蛇葡萄素宫颈癌 SiHa细胞 C-33A细胞自噬 PI3K/AKT/mTOR

巴茅草水浸提液对3种作物种子萌发及幼苗生长的化感作用

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应用生态学报 2020年第7期31卷 2219-2226页

作者：李金鑫叶俊伟刘大会湖北中医药大学药学院武汉430065

本文以发芽率、发芽速度指数、发芽指数、根长、茎长和生物量为种子萌发和幼苗生长参数,研究不同生长时期巴茅草叶片和茎秆水浸提液对白菜、生菜、水稻的化感作用。结果表明:巴茅草叶水浸提液化感作用强于茎秆水浸提液,叶水浸提液处理... 详细信息

本文以发芽率、发芽速度指数、发芽指数、根长、茎长和生物量为种子萌发和幼苗生长参数,研究不同生长时期巴茅草叶片和茎秆水浸提液对白菜、生菜、水稻的化感作用。结果表明:巴茅草叶水浸提液化感作用强于茎秆水浸提液,叶水浸提液处理后受体植物的发芽指数和生物量均显著低于茎水浸提液。枯萎期巴茅草的化感作用强于生长旺盛期。不同浓度巴茅草叶水浸提液对3种作物的化感作用存在明显的量效关系,浸提液浓度越高,巴茅草的化感抑制作用越强。巴茅草叶水浸提液对白菜和生菜各萌发指标100%抑制的浓度分别为0.075和0.10 g·mL^-1;而0.10 g·mL^-1巴茅草叶水浸提液对水稻发芽率、发芽速度指数、发芽指数的抑制率分别为13.8%、27.2%、19.3%。巴茅草叶水浸提液对白菜和生菜各生长指标100%抑制的浓度分别为0.05和0.10 g·mL^-1;而0.10 g·mL^-1巴茅草叶水浸提液对水稻根长、茎长、生物量的抑制率分别为64.6%、92.9%、21.8%。结合种子萌发和幼苗生长的综合化感指数,3种供试作物对巴茅草化感作用的敏感程度为白菜>生菜>水稻。

关键词：巴茅草种子萌发幼苗生长抑制率化感响应指数

气候调控愈伤组织培养结合基因组分功效灰色关联分析鉴定人参属药用植物关键基因及抗炎活性成分

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Acupuncture and Herbal Medicine 2022年第4期2卷 261-273页

作者：艾娇任永申程龙刘新桥李艳秋焦马静汪迎洲邓鑫陈霖霖中南民族大学药学院湖北中医药大学药学院

[目的]建立人参属药用植物关键基因和抗炎活性成分的鉴定新方法。[方法]首先,选择2年生人参、三七、西洋参、日本参、大叶人参的新鲜根诱导愈伤组织形成。其次,采用HPLC-MS分析愈伤组织中的皂苷,以一氧化氮还原为功效进行“成分功效”... 详细信息

[目的]建立人参属药用植物关键基因和抗炎活性成分的鉴定新方法。[方法]首先,选择2年生人参、三七、西洋参、日本参、大叶人参的新鲜根诱导愈伤组织形成。其次,采用HPLC-MS分析愈伤组织中的皂苷,以一氧化氮还原为功效进行“成分功效”灰色关联分析,寻找抗炎活性成分,并采用qRT-PCR测定炎症因子,以验证活性成分的抗炎作用。最后,再次使用qRT-PCR检测愈伤组织中关键基因的表达,并使用“基因组分”灰色关联分析检查基因调控途径与组分之间的关系。[结果]在三个实验温度(17、24和30℃)中,低温(17℃)更适合人参愈伤组织的产生。与其他人参植物相比,低纬度天然三七在高温(24℃和30℃)下的适应性更强。相同气候条件下(17℃)三七和日本人参愈伤组织中人参皂苷含量最高。抗炎成分主要是包括G-Rh1、G-Rb1、G-Rg3和G-Rh6/GKa。CYP76A47对抗炎成分的积累贡献最大。[结论]本研究为同一属多组分、多功能和多用途植物的基因组分功效相关研究提供了策略。

关键词：抗炎活性基因-成分-功效灰色关联分析 HPLC-MS 人参属 qRT-PCR 愈伤组织

化痰活血通络方调节肠道菌群抑制脂多糖介导的炎症通路改善动脉粥样硬化小鼠血管损伤

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中华中医药学刊 2023年

作者：曾祥法王武胜程璇葛春蕾叶焰江晓翠萧闵湖北中医药大学药学院湖北中医药大学基础医学院

【目的】从肠道菌群探讨化痰活血通络方治疗动脉粥样硬化的机制，为化痰活血通络方临床应用提供依据。【方法】25只雄性ApoE-/-小鼠，高脂饲料喂养12周，制备AS模型；分为模型组（MX）、全方组（QF）、通络组（TL）、化痰组（HT）、阿... 详细信息

【目的】从肠道菌群探讨化痰活血通络方治疗动脉粥样硬化的机制，为化痰活血通络方临床应用提供依据。【方法】25只雄性ApoE-/-小鼠，高脂饲料喂养12周，制备AS模型；分为模型组（MX）、全方组（QF）、通络组（TL）、化痰组（HT）、阿托伐他汀组（XY）各5只，另设C57BL/6J雄性小鼠5只作为正常组（ZC），各组相应药物灌胃治疗12周。采用16S rRNA 扩增子测序检测肠道菌群；苏木素-伊红（HE）染色法观察小鼠主动脉及肠道的病理形态；酶联免疫吸附测定法（ELISA）检测小鼠血清中相关指标，Western blot法检测Toll样受体4（TLR4），NOD样受体热蛋白结构域相关蛋白3（NLRP3），核因子-κB（NF-κB），白介素-6（IL-6）蛋白含量。【结果】与空白组相比，模型组中物种丰富度及多样性下降明显，厚壁菌门（Firmicutes）与拟杆菌门（Bacteroidetes）的比例（F/B）显著上升，血清中脂多糖（LPS）、甘油三酯（TG）、总胆固醇（TC）和低密度脂蛋白胆固醇（LDL-C），主动脉中TLR4、NLRP3、NF-κB、IL-6蛋白含量显著上升（P<0.01），高密度脂蛋白胆固醇（HDL-C）含量显著下降（P<0.01），小鼠主动脉斑块面积显著增加（P<0.01）并伴有大量泡沫细胞及炎性浸润，肠内有大片绒毛脱落与固有层裸露，与模型组相比全方组可显著增加物种丰富度及多样性，降低（F/B）的比例（P<0.01），提高有益菌的相对丰度，降低有害菌的相对丰度，在全方组与阿托伐他汀组中LPS、TG、TC、LDL-C、TLR4、NLRP3、NF-κB、IL-6均显著下降（P<0.01），HDL-C显著上升（P<0.01）并且可明显缓解上述病理改变。【结论】化痰活血通络方可改善肠道菌群的组成及脂代谢，减少LPS的产生，并通过TLR4/NF-κB/NLRP3信号通路下调主动脉中炎性因子的表达，减少脂质的积累来缓解ApoE-/-小鼠的动脉粥样硬化。

关键词：化痰活血通络方动脉粥样硬化肠道菌群 LPS 脂代谢炎症

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中药中重金属检测方法的研究进展

沈阳药科大学学报 2022年第11期39卷 1399-1408页

作者：姚惠文湖北中医药大学药学院湖北武汉430065

目的综述中药中重金属检测方法的研究进展。方法通过检索近五年的相关文献,对用于中药中重金属检测的传统仪器方法和快速检测法进行归纳、总结和比较。结果原子吸收光谱法和电感耦合等离子体质谱法等传统仪器检测方法仍是中药中重金属... 详细信息

目的综述中药中重金属检测方法的研究进展。方法通过检索近五年的相关文献,对用于中药中重金属检测的传统仪器方法和快速检测法进行归纳、总结和比较。结果原子吸收光谱法和电感耦合等离子体质谱法等传统仪器检测方法仍是中药中重金属检测最普遍、最常用的方法,但由于仪器庞大、操作复杂,很难实现现场检测和快速筛查。快速检测方法如电化学分析法和免疫分析法等也有相关的研究,但是受限于方法的选择性、灵敏度等,应用还非常有限。结论市场对中药中重金属检测方法“现场实时、快速、简便”的需求越来越大,亟需开发灵敏度高、选择性好、适用于现场分析的快速检测方法。

关键词：重金属中药传统检测方法快速检测方法

茅苍术CYP736A12基因的克隆与生物信息学分析

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时珍国医国药 2022年第6期33卷 1467-1470页

作者：柴学丽孔雅婷李永华余坤龚玲湖北中医药大学药学院湖北武汉430065

目的为进一步阐明茅苍术抵御病原菌和病虫害入侵等方面的机制,从茅苍术叶片中克隆了CYP736A12基因。方法该研究根据课题组已有的茅苍术转录组测序数据筛选及克隆了茅苍术CYP736A12基因,并分析了CYP736A12基因编码蛋白质的性质及结构特... 详细信息

目的为进一步阐明茅苍术抵御病原菌和病虫害入侵等方面的机制,从茅苍术叶片中克隆了CYP736A12基因。方法该研究根据课题组已有的茅苍术转录组测序数据筛选及克隆了茅苍术CYP736A12基因,并分析了CYP736A12基因编码蛋白质的性质及结构特征。同时通过实时荧光定量技术(qRT-PCR)检测CYP736A12基因在茅苍术茎、叶、花、嫩根茎及老根茎中的表达情况。结果该基因的开放阅读框(ORF)长度为1518bp,编码505个氨基酸;拥有4个P450基因保守结构域;该基因与莴苣、洋蓟、向日葵有较近的亲缘关系。qPCR结果表明该基因在茅苍术茎中的表达量最高,且与其他部位表达量具有显著差异。结论成功克隆了CYP736A12茅苍术基因,为今后进一步研究CYP736A12基因在茅苍术抵御病虫害侵染方面的作用机制奠定基础。

关键词：茅苍术 CYP736A12基因克隆生物信息学分析防御病虫害

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基于TPGS的紫杉醇自微乳的制备及其评价

中国医院药学杂志 2023年第9期43卷 977-982页

作者：张璐茜朱睿孙懿常聪陈欣妍湖北中医药大学药学院湖北武汉430065

目的:制备基于P-糖蛋白抑制剂D-α-生育酚聚乙二醇琥珀酸酯(TPGS)的紫杉醇自微乳(PTX-T-SMEDDS),以增强耐药肿瘤细胞对PTX的敏感性。方法:采用伪三元相图法筛选TPGS自微乳(T-SME)的制备处方;以粒径、多分散指数(PDI)和PTX包封率为指标筛... 详细信息

目的:制备基于P-糖蛋白抑制剂D-α-生育酚聚乙二醇琥珀酸酯(TPGS)的紫杉醇自微乳(PTX-T-SMEDDS),以增强耐药肿瘤细胞对PTX的敏感性。方法:采用伪三元相图法筛选TPGS自微乳(T-SME)的制备处方;以粒径、多分散指数(PDI)和PTX包封率为指标筛选PTX-T-SMEDDS的制备条件;利用马尔文粒径仪和透射电镜表征PTX-T-SMEDDS乳化后的粒径、Zeta电位、PDI和形态,并利用高效液相色谱(HPLC)测定药物包封率,考察PTX-T-SMEDDS的体外释药行为和稳定性;以非小细胞肺癌紫杉醇耐药株A549/Taxol为模型,采用MTT法评价细胞毒性。结果:T-SME的最终处方为维生素E 20%,TPGS 40%,异丁醇40%。在PTX与维生素E/TPGS/异丁醇的质量比为1∶120时制得PTX-T-SMEDDS,其乳化后的粒径为(20.64±0.23) nm,乳滴形态为类圆形,PTX包封率为(85.10±3.05)%。相较于游离PTX,PTX-T-SMEDDS呈缓慢释药行为。PTX-T-SMEDDS具有较好的贮存稳定性、稀释稳定性和离心稳定性。PTX-T-SMEDDS对A549/Taxol的IC_(50)为7.33μg·mL^(-1),约为游离PTX的1/4。结论:成功制备了PTX-T-SMEDDS,该自微乳可缓慢释放PTX,且具有一定的稳定性,可提高耐药细胞A549/Taxol对PTX的敏感性。

关键词：紫杉醇 D-α-生育酚聚乙二醇琥珀酸酯自微乳体外释放稳定性