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基于代谢组学研究葫芦素B诱导人肝内胆管癌HuCCT1细胞凋亡的作用机制

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世界科学技术-中医药现代化 2024年第2期26卷 302-310页

作者：杜思宇王楚婷李励陈新郑国华王桂红胡俊杰湖北中医药大学药学院武汉430065 湖北中医药大学/中药资源与中药复方教育部重点实验室武汉430065

目的探究葫芦素B(CuB)诱导人肝内胆管癌HuCCT1细胞凋亡的作用及机制。方法将HuCCT1细胞分为对照组,CuB给药低(50 nmol·L^(-1))、中(100 nmol·L^(-1))、高(200 nmol·L^(-1))剂量组,给予药物干预24 h,采用Annexin V/PI双染法和Hoechst染色法检测细胞凋亡情况。采用超高效液相色谱/四极杆飞行时间质谱(UHPLC-Q/TOF-MS)检测其主要差异代谢物,并分析其相关代谢通路。结果Annexin V/PI双染结果发现,与对照组相比,经CuB给予处理后HuCCT1细胞的凋亡比例从7.86%±0.73%增加到16.53%±0.27%,P<0.0001;Hoechst染色结果发现,与对照组相比,经200 nmol·L^(-1)CuB给予处理24 h后细胞结构被破坏,细胞破碎,边缘轮廓不规则,出现大量核固缩现象;代谢组学分析筛选出了20个显著的差异代谢物,主要涉及的代谢通路包括TCA循环、能量代谢、氨基酸代谢和脂质代谢等。结论CuB具有较好的抗肿瘤作用,可能是通过干扰HuCCT1细胞的多条代谢通路,引起细胞快速增殖的物质缺乏,最终导致细胞凋亡,而发挥药理作用。

关键词：超高效液相色谱/四极杆飞行时间质谱葫芦素B 细胞代谢组学肝内胆管癌

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寡聚透明质酸修饰的鞣花酸脂质体的制备及体外透皮效果和美白活性的研究

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世界科学技术-中医药现代化 2024年 1-10页

作者：杨晓婧陈赤清苗开元胡俊杰郑国华陈欣妍石召华湖北时珍实验室湖北中医药大学中药资源与中药复方教育部重点实验室湖北中医药大学药学院五峰赤诚生物科技有限公司

目的构建寡聚透明质酸(5 KDa)修饰的鞣花酸脂质体(EA-HA-L)以提高鞣花酸的水溶性、体外透皮效果和美白活性。方法采用酯化反应制备寡聚透明质酸修饰的胆固醇(HA-Chol)，通过FTIR和1H NMR进行结构表征；采用薄膜分散-超声法制备寡聚透... 详细信息

目的构建寡聚透明质酸(5 KDa)修饰的鞣花酸脂质体(EA-HA-L)以提高鞣花酸的水溶性、体外透皮效果和美白活性。方法采用酯化反应制备寡聚透明质酸修饰的胆固醇(HA-Chol)，通过FTIR和1H NMR进行结构表征；采用薄膜分散-超声法制备寡聚透明质酸修饰的鞣花酸脂质体，通过BoxBehnken设计-响应面法优化处方工艺，测定最优处方工艺下脂质体的粒径、多分散指数(PDI)、Zeta电位及包封率；比较EA-HA-L和游离EA溶解度的差异；采用大鼠腹部皮肤考察其离体透皮效果；采用多巴氧化法评价其对酪氨酸酶及小鼠黑色素瘤细胞(B16-F10)内酪氨酸酶的抑制作用。结果合成并表征了HAChol；优化后的处方工艺为磷脂与HA-Chol的质量比为10∶1、脂药比为40∶1、水化温度为30℃、水化时间为60 min、超声强度为35%、超声时间为20 min，在最优处方工艺下制得的EA-HA-L粒径为(140.30±1.30)nm,PDI为(0.29±0.01)，包封率为91.16%±3.06%,Zeta电位为(-5.67±0.09)mV;EA被脂质体包覆后，在水中的溶解度提高了约40多倍；EA-HA-L在24 h内的累积透皮量为46.98±2.17μg·cm-2,24 h后皮肤内滞留量为66.15±0.61μg·cm-2，是游离EA的1.72倍(P<0.0001)，普通脂质体(EA-L)的1.23倍(P<0.01)；在50-400μg·mL-1浓度范围内，EA-HA-L抑制酪氨酸酶的活性均高于游离EA和EA-L。结论利用寡聚透明质酸修饰的胆固醇和大豆磷脂成功制备了粒径小、包封率高的鞣花酸脂质体，该脂质体显著提高了鞣花酸的水溶性，并具有比游离EA和EA-L更好的透皮效果和更强的美白活性。

关键词：鞣花酸寡聚透明质酸脂质体离体透皮美白

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酸枣仁炮制前后镇静催眠作用比较研究

中国药理学通报 2024年第5期40卷 984-991页

作者：蔡铭陈林霖徐波谢光璟夏婧湖北中医药老年脑健康中医药防护技术与新产品研发教育部工程研究中心湖北武汉430065 湖北中医药大学教育部中药资源与复方重点实验室湖北武汉430065

目的基于网络药理学和动物实验探讨中药酸枣仁(Semen Ziziphi Spinosae,SZS)炮制前后镇静催眠作用差异。方法通过相关平台和数据库收集SZS的化学成分,检索失眠和睡眠障碍的靶点进行检索,构建蛋白质相互作用关系,绘制出中药-成分-靶点-... 详细信息

目的基于网络药理学和动物实验探讨中药酸枣仁(Semen Ziziphi Spinosae,SZS)炮制前后镇静催眠作用差异。方法通过相关平台和数据库收集SZS的化学成分,检索失眠和睡眠障碍的靶点进行检索,构建蛋白质相互作用关系,绘制出中药-成分-靶点-通路网络,并进行富集分析。结合预测结果,通过戊巴比妥诱导睡眠试验、行为学分析、脑组织相关基因mRNA水平和血浆神经递质评价SZS不同制品对昆明小鼠的影响。结果SZS与失眠相关的靶点基因共有22个,包括乙酰胆碱酯酶(acetylcholinesterase,ACHE)、α-1B肾上腺素能受体(alpha-1B adrenergic receptor,ADRA1B)、钠依赖性5-羟色胺转运蛋白[solute carrier family 6(neurotransmitter transporter,serotonin),member 4,SLC6A4]等,它们可能通过9个相关途径和69个生物学过程发挥作用,其中包括钙信号通路、唾液分泌等。体内实验发现,SZS生用、炒用及生炒合用均能减少小鼠活动性,增强戊巴比妥钠催眠效果,降低皮质及海马中ACHE、ADRA1B和SLC6A4 mRNA水平,调节血浆中乙酰胆碱、肾上腺素等含量,且效果与药物剂量呈正比。结论SZS具有镇静催眠作用,以高剂量的生炒SZS合煎液效果更佳,这种作用可能是由影响神经递质及其相关受体水平,介导中枢神经系统导致的。

关键词：酸枣仁炮制网络药理学失眠镇静催眠

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五倍子水提物对UVB诱导光老化成纤维细胞的保护作用

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中国皮肤性病学杂志 2024年

作者：陈志伟周磊王殷杰陈赤清向杰石召华胡俊杰湖北中医药大学药学院五峰赤诚生物科技有限公司湖北本草时代大健康产业有限公司湖北中医药大学中药资源与中药复方教育部重点实验室

目的探究五倍子水提取物(galla chinensis extract GCE)对中波长紫外线（UVB）诱导的人真皮成纤维细胞（HSF）光老化的保护作用及机制。方法通过自由基清除实验、弹性蛋白酶抑制实验评价五倍子水提物的抗衰老能力；建立UVB诱导的细胞... 详细信息

目的探究五倍子水提取物(galla chinensis extract GCE)对中波长紫外线（UVB）诱导的人真皮成纤维细胞（HSF）光老化的保护作用及机制。方法通过自由基清除实验、弹性蛋白酶抑制实验评价五倍子水提物的抗衰老能力；建立UVB诱导的细胞光老化模型，给予五倍子水提物干预，通过CCK-8法检测细胞存活率，β-半乳糖苷酶染色法检测细胞衰老水平，细胞流式仪检测活性氧（ROS），试剂盒检测细胞中超氧化物歧化酶（SOD）、过氧化氢酶（CAT）、丙二醛（MDA）的活性；通过酶联免疫吸附试验（ELISA）检测基质金属蛋白酶-1（MMP-1）、白细胞介素-6（IL-6）、I型胶原蛋白（COL-1）含量。蛋白免疫印迹法（western blot）检测相关蛋白表达水平。结果五倍子水提物具有清除自由基、抑制弹性蛋白酶活性、提高UVB诱导的HSF细胞存活率、COL-1含量、抗氧化物酶活性（CAT、SOD）等作用；还可以抑制UVB诱导的HSF细胞衰老、ROS、IL-6、MMP-1和MDA生成以及抑制丝裂原活化蛋白激酶（MAPK）信号通路中p-ERK1/2、p-JNK、p-p38蛋白的表达水平。结论五倍子水提物通过提高抗氧化酶活力以及抑制MAPK信号通路的激活，发挥抗光老化作用。

关键词：五倍子水提物光老化人真皮成纤维细胞

葛根芩连汤成分间自组装纳米粒改善伊立替康所致肠毒性作用研究

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中草药 2024年第12期55卷 3987-3997页

作者：吴淑洋杨晓琴成威键李敏李楠章津铭吴亿晗成都中医药大学药学院西南特色中药资源国家重点实验室中药材标准化教育部重点实验室四川成都611137

目的基于中药经典复方葛根芩连汤(Gegen Qinlian decoction,GQD)合煎过程中成分间相互作用,探讨其代表性成分葛根素、小檗碱、汉黄芩苷、黄芩苷、甘草酸、巴马汀体外结合形成自组装纳米粒的性能及改善伊立替康(CPT-11)所致肠毒性作用的... 详细信息

目的基于中药经典复方葛根芩连汤(Gegen Qinlian decoction,GQD)合煎过程中成分间相互作用,探讨其代表性成分葛根素、小檗碱、汉黄芩苷、黄芩苷、甘草酸、巴马汀体外结合形成自组装纳米粒的性能及改善伊立替康(CPT-11)所致肠毒性作用的药理活性,为来源于中药汤剂的活性成分间的自组装纳米粒提供参考。方法采用溶剂挥发法分别制备小檗碱-汉黄芩苷自组装纳米粒(berberine-wogonoside nanoparticles,Ber-Wog NPs)、小檗碱-葛根素自组装纳米粒(berberine-puerarin nanoparticles,Ber-Pue NPs)、黄芩苷-葛根素自组装纳米粒(baicalin-puerarin nanoparticles,Bai-Pue NPs)、黄芩苷-巴马汀自组装纳米粒(baicalin-palmatine nanoparticles,Bai-Pal NPs)、黄芩苷-甘草酸自组装纳米粒(baicalin-glycyrrhizic acid nanoparticles,Bai-GA NPs)5种组分自组装纳米粒,测定其粒径分布、多分散指数(polydispersity index,PDI)、包封率、载药量,采用透射电子显微镜(transmission electron microscope,TEM)观察其微观形貌,紫外光谱和傅里叶红外光谱考察成分间相互作用;考察5种组分自组装纳米粒缓解CPT-11致小鼠迟发性腹泻的药理作用。结果组分间按1∶1投药比,制备所得Ber-Wog NPs、Ber-Pue NPs、Bai-Pue NPs、Bai-Pal NPs、Bai-GA NPs的平均粒径分别为(198.09±4.64)、(216.29±5.31)、(173.53±5.46)、(185.75±3.38)、(242.10±12.30)nm;PDI分别为0.14±0.06、0.13±0.06、0.19±0.03、0.19±0.01、0.21±0.05,TEM观察均为球状纳米粒,除Ber-Wog NPs外,其余4种纳米粒包封率均较高。紫外可见吸收光谱和红外光谱提示,5种纳米粒的组装均是通过分子间非共价键作用形成;分子对接模型进一步提示,其形成机制与分子间静电相互作用或氢键相关。药效试验结果显示,制剂组可缓解小鼠体质量降低,腹泻指数降低,结肠组织炎症因子肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)、白细胞介素-1β(interleukin,IL-1β)含量降低,IL-10含量升高;苏木精-伊红染色(hematoxylin-eosin staining,HE染色)显示结肠黏膜组织病变显著缓解。结论GQD来源的几种代表性成分可高效自组装形成纳米粒,且具有类似GQD缓解CPT-11所致肠毒性作用,为研究传统中药汤剂药效物质基础形态与药效的相关性提供了新思路。

关键词：葛根芩连汤自组装纳米粒肠毒性成分互作葛根素小檗碱汉黄芩苷黄芩苷甘草酸巴马汀溶剂挥发法腹泻

天然5α-还原酶抑制剂用于改善良性前列腺增生的研究进展

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中国中药杂志 2024年第4期49卷 858-867页

作者：郑瑞蓉欧阳倩兮刘子瑶李林楠杨莉王峥涛上海中医药大学中药研究所中药标准化教育部重点实验室国家中医药管理局中药新资源与质量评价重点实验室上海市复方中药重点实验室上海201203 厦门医学院药学系福建厦门361023

良性前列腺增生是一种常见的男性泌尿系统疾病,其发病率在我国呈逐年上升的趋势。目前针对该疾病的发病机制尚未十分明确,有研究认为其发病机制与类固醇激素水平变化有关。当体内二氢睾酮的含量过高,会引起前列腺增生等相关疾病。二氢... 详细信息

良性前列腺增生是一种常见的男性泌尿系统疾病,其发病率在我国呈逐年上升的趋势。目前针对该疾病的发病机制尚未十分明确,有研究认为其发病机制与类固醇激素水平变化有关。当体内二氢睾酮的含量过高,会引起前列腺增生等相关疾病。二氢睾酮由睾酮在5α-还原酶的作用下转化而成,因而通过抑制该酶活性,可减少二氢睾酮的生成量,进而达到减轻前列腺增生的效果。从天然药物中筛选和发现新的、有效和安全的5α-还原酶抑制剂,应用于防治前列腺增生,但又不影响男性的生理功能,成为该领域研究的热点话题。该文总结了5α-还原酶的作用特点及组织分布,临床常用的5α-还原酶抑制剂及其副作用,并整理了中药和天然药物中5α-还原酶抑制剂的筛选和发现,概括了前列腺增生实验动物模型和常用检测指标,为良性前列腺增生发病机制及防治药物的研发提供参考依据。

关键词：良性前列腺增生 5α-还原酶 5α-还原酶抑制剂中药材天然药物动物模型

复方高滋斑片对抑郁大鼠海马NLRP3炎症小体的影响

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中国医院药学杂志 2024年

作者：肖敏韩正茹游秋云昝俊峰石雷尤朋涛湖北中医药大学药学院中药资源与中药化学省级重点实验

目的研究复方高滋斑片（CGZBT）对抑郁大鼠的缓解作用和海马NLRP3炎症小体的潜在影响。方法适应性喂养1周后根据0 weeks糖水偏好率将大鼠随机分为Control组、CUMS组、LCGZBT组(0.4g·kg-1)、MCGZBT组(0.8g·kg-1)、HCGZBT组(1.6g·kg... 详细信息

目的研究复方高滋斑片（CGZBT）对抑郁大鼠的缓解作用和海马NLRP3炎症小体的潜在影响。方法适应性喂养1周后根据0 weeks糖水偏好率将大鼠随机分为Control组、CUMS组、LCGZBT组(0.4g·kg-1)、MCGZBT组(0.8g·kg-1)、HCGZBT组(1.6g·kg-1)、Fluoxetine组，每组12只。SD大鼠造模6周建立慢性不可预知轻度应激（CUMS）抑郁模型，从第五周开始在CUMS造模同时给予相应药物干预2周。最后一天对大鼠进行糖水偏好实验，旷场实验，强迫游泳实验。麻醉后对大鼠海马体、血清进行取材，苏木精-伊红染色法观察海马体CA1区神经元细胞的变化。用酶联免疫吸附法检测血清中肿瘤坏死因子α（TNF-α）、白介素-1β（IL-1β）表达水平。蛋白免疫印迹法检测海马体中核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3（NLRP3）、凋亡相关斑点样蛋白（ASC）、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-1（Caspase-1）、白细胞介素-1β前体（pro-IL-1β）、IL-1β、白介素-18（IL-18）的表达水平。结果与CUMS组相比，CGZBT各剂量组旷场移动总距离显著增加（P<0.01），强迫游泳不动时间减少（P<0.01或P<0.05）；MCGZBT组和HCGZBT组大鼠的糖水偏好率显著增加（P<0.01）。CGZBT可缓解CUMS大鼠海马体CA1区神经元细胞的损伤和降低血清中TNF-α、IL-1β的含量（P<0.01或P<0.05）。与CUMS组相比，CGZBT各剂量组大鼠海马中ASC、Caspase-1、IL-1β、的蛋白表达显著下调（P<0.01或P<0.05）；MCGZBT组和HCGZBT组大鼠NLRP3、IL-18蛋白表达显著下调（P<0.01或P<0.05）。结论CGZBT可缓解抑郁大鼠的抑郁症状并抑制海马体中NLRP3炎性小体的表达。

关键词：复方高滋斑片抑郁症炎症小体海马

五味子甲素调控FXR信号通路改善DSS诱导的小鼠急性溃疡性结肠炎

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药学学报 2024年第5期59卷 1261-1270页

作者：蒋嘉瑞董跨金玉春杨心茹罗亦轩徐书扬王汛江谷丽华石燕红杨莉王峥涛王旭丁丽丽上海中医药大学中药研究所上海市复方中药重点实验室中药标准化教育部重点实验室暨国家中医药管理局中药新资源与质量评价重点实验室上海201203 上海中药标准化研究中心上海201203 复旦大学附属妇产科医院乳腺科上海200011

炎症性肠病(inflammatory bowel disease,IBD)以慢性复发性肠道炎症为特征,包括溃疡性结肠炎(ulcerative colitis,UC)和克罗恩病(Crohn’s disease,CD)。IBD已成为全球性的医疗保健问题。临床上尚缺乏有效治疗药物。本研究聚焦于UC模型... 详细信息

炎症性肠病(inflammatory bowel disease,IBD)以慢性复发性肠道炎症为特征,包括溃疡性结肠炎(ulcerative colitis,UC)和克罗恩病(Crohn’s disease,CD)。IBD已成为全球性的医疗保健问题。临床上尚缺乏有效治疗药物。本研究聚焦于UC模型,旨在寻找新的治疗策略。前期研究发现,五味子甲素(schisandrin A,SchA)体外具有抗炎作用,并促进法尼醇X受体(farnesoid X receptor,FXR)的转录活性。FXR反向调控NF-κB的转录活性,在调节炎症反应中具有重要作用。因此,本研究主要探讨SchA对UC的保护作用及其通过FXR信号通路调控的机制。在RAW264.7细胞上评价SchA对炎症因子mRNA水平的影响。用双荧光素酶报告基因实验验证SchA与FXR靶向关系。动物实验遵循上海中医药大学动物伦理委员会规定(批准号:PZSHUTCM2304250005)。野生型或FXR敲除的C57BL/6小鼠自由饮用3%右旋葡聚糖硫酸钠(dextran sodium sulfate,DSS)7天诱导小鼠急性UC,并灌胃给药SchA连续7天。实验期间每日监测小鼠体重及粪便情况。采用RT-qPCR方法检测结肠组织炎症因子、FXR靶基因的mRNA水平。结果显示:体外SchA抑制脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)诱导的炎症因子mRNA水平的增加。同时,SchA可以增加FXR的转录活性。在野生型小鼠中,SchA能明显改善急性UC小鼠的体重下降、结肠缩短、稀便和便血;SchA显著降低结肠组织中促炎因子基因的表达、增加FXR靶基因的表达。在FXR敲除小鼠中,SchA对小鼠急性UC的缓解作用消失。综上,SchA可通过FXR信号通路降低肠道炎症,缓解DSS诱导的小鼠急性UC,提示五味子木脂素类化合物可能是IBD药物开发的先导化合物。

关键词：五味子甲素结肠炎葡聚糖硫酸钠法尼醇X受体抗炎

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大黄素甲醚改善小鼠非酒精性脂肪性肝病的研究

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药学学报 2024年第4期59卷 939-947页

作者：张进宇张少波徐红欧阳豪季莉莉上海中医药大学中药研究所中药标准化教育部重点实验室中药新资源与质量标准综合评价国家中医药管理局重点研究室上海市复方中药重点实验室上海201203 上海中医药大学附属岳阳中西医结合医院肝病科上海201203

大黄素甲醚(physcion,PHY)是一种来源于大黄等中药的蒽醌类化合物。本实验旨在探究PHY对非酒精性脂肪性肝病(non-alcoholic fatty liver disease,NAFLD)的改善作用及其机制。采用蛋氨酸胆碱缺乏饲料(methionine-and choline-deficient diet,MCD)喂养6周诱导小鼠NAFLD疾病模型(本实验获得上海中医药大学实验动物伦理委员会批准,批准号:PZSHUTCM190705019)。结果显示,PHY(5和20 mg·kg^(-1))能改善MCD诱导NAFLD小鼠的肝损伤,减轻肝脏脂肪累积,降低升高的NAFLD活动性评分(NAFLD activity score,NAS)。Western blot及酶活力实验结果提示,PHY能提升肝脏及L-02细胞中肉毒碱棕榈酰基转移酶1A(carnitine palmitoyltransferase 1A,CPT1A)蛋白表达及酶活力,但real-time PCR结果显示PHY不影响Cpt1a mRNA表达。免疫荧光结果提示,PHY(10和25μmol·L^(-1))能缓解游离脂肪酸(non-esterified fatty acids,NEFA)诱导的人正常肝L-02细胞中的线粒体损伤。Seahorse实验结果提示,PHY给药后能提升L-02细胞内线粒体基础呼吸能力、最大呼吸能力、ATP合成和储备呼吸能力,但不影响线粒体质子漏。以上研究表明,PHY可能通过改善线粒体功能,促进脂肪酸β氧化,减少肝脏中脂肪的堆积,发挥改善NAFLD的药效。

关键词：大黄素甲醚非酒精性脂肪性肝病肉毒碱棕榈酰基转移酶1A β氧化线粒体损伤

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