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24份紫石英样品的XRD谱分析

中药材 2016年第1期39卷 42-47页

作者：陈龙明晶曹艳黄必胜陈科力教育部中药资源和中药复方重点实验室/湖北中医药大学湖北武汉430065

目的：利用X-射线衍射（XRD）技术对不同形态特点的紫石英进行分析,为紫石英的鉴别提供参考依据。方法：根据2010年版中国药典方法对24批市售紫石英样品进行性状鉴别和含量测定,并结合X衍射分析法对上述样品进行物相和半定量分析,确定... 详细信息

目的：利用X-射线衍射（XRD）技术对不同形态特点的紫石英进行分析,为紫石英的鉴别提供参考依据。方法：根据2010年版中国药典方法对24批市售紫石英样品进行性状鉴别和含量测定,并结合X衍射分析法对上述样品进行物相和半定量分析,确定各药材品质优劣,总结紫石英性状特征与其品质的相关性。结果：样品1～7和13为正品紫石英,8～12为掺杂的劣质紫石英,14～24为伪品紫石英。正品紫石英中萤石为主要物相,常伴生少量石英。伪品紫石英物相组成复杂,杂质含量多而萤石含量远低于中国药典标准。正品紫石英易粉碎成细小沙粒状粉末,颜色变浅,主要为绿色或紫色透明、具玻璃样光泽的细小颗粒。结论：掺伪的劣质块状药材,经挑选,去除杂质后可药用;伪品紫石英杂质过多,且难去除,不宜药用。粉末特点可作为紫石英性状鉴别的补充。XRD技术用于紫石英分析,可准确鉴别紫石英非典型正品性状特点的药材及粉末药材。

关键词：紫石英 XRD 真伪鉴别性状鉴别粉末特征

矿物药青礞石、金礞石和金精石XRD图谱鉴别

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中药材 2016年第1期39卷 48-52页

作者：明晶曹艳雷咪陈龙陈科力黄必胜教育部中药资源和中药复方重点实验室/湖北中医药大学湖北武汉430065

目的：利用粉末X-射线衍射（X-ray diffraction,XRD）技术对矿物药青礞石、金礞石和金精石进行分析,用于三者鉴别及质量评价。方法：采集青礞石、金礞石和金精石共20批样品的XRD图谱,对图谱进行物相检索,解析各样品的物相组成,并与性状... 详细信息

目的：利用粉末X-射线衍射（X-ray diffraction,XRD）技术对矿物药青礞石、金礞石和金精石进行分析,用于三者鉴别及质量评价。方法：采集青礞石、金礞石和金精石共20批样品的XRD图谱,对图谱进行物相检索,解析各样品的物相组成,并与性状特点进行对比分析,确定青礞石、金礞石和金精石三者矿物基原,指导鉴别。优选特征谱段为d（晶面间距,10-10m）=6.8～17.7,采用一阶求导＋矢量归一化法、21点平滑对该谱段内图谱进行预处理,并做聚类分析。结果：所考察7批青礞石样品均为变质岩类黑云母片岩,3批优质金礞石为蛭石化黑云母片岩,3批金精石主要含金云母及水化金云母,其他样品物相组成复杂;对特征谱段进行聚类分析可将青礞石、金礞石及金精石区分开,并可区分不同品质的金礞石。结论：XRD图谱分析法适用于青礞石、金礞石和金精石三者的鉴别及质量评价,该方法快速准确。

关键词：青礞石金礞石金精石 XRD 基原鉴别质量评价

基于ITS2序列鉴别木槿及其混伪品基原植物

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中药材 2014年第3期37卷 408-410页

作者：刘义梅靳李娜熊永兴邬兰陈科力教育部中药资源和中药复方重点实验室/湖北中医药大学湖北武汉430065

目的：利用ITS2序列鉴别木槿及其常见混伪品基原植物。方法：提取木槿及其混伪品共9个样本DNA、PCR扩增和测序,得到ITS2序列,结合GenBank下载的12条ITS2序列,计算种内种间Kimura 2-parameter（K2P）遗传距离并构建NJ系统聚类树。结果：... 详细信息

目的：利用ITS2序列鉴别木槿及其常见混伪品基原植物。方法：提取木槿及其混伪品共9个样本DNA、PCR扩增和测序,得到ITS2序列,结合GenBank下载的12条ITS2序列,计算种内种间Kimura 2-parameter（K2P）遗传距离并构建NJ系统聚类树。结果：木槿与其混伪品之间的K2P遗传距离为0.236-0.301,远大于木槿种内K2P遗传距离（0.009-0.056）;木槿种内序列变异位点为2-9个,远少于与混伪品的变异位点（45-52个）;NJ系统聚类树显示木槿种内不同个体聚在一起,与其混伪品明显分开。结论：ITS2条形码可准确鉴别木槿及其混伪品基原植物,为木槿及其混伪品鉴定提供了分子依据。

关键词： ITS2 木槿分子鉴定

黑木耳β-葡聚糖/纳米硒复合物(DNT-Se)的制备工艺优化及活性评价

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食品工业科技 2023年第21期44卷 162-170页

作者：胡程宋浩颖常聪邱振鹏郑国华孟燕湖北中医药大学药学院湖北武汉432500 湖北中医药大学中药资源与中药复方教育部重点实验室湖北武汉432500

探索黑木耳β-葡聚糖/纳米硒复合物(DNT-Se)的最佳制备条件,并探究其安全性。以多糖(DNTs)浓度、维生素C(V_(C))与亚硒酸钠配比、亚硒酸钠浓度、反应时间、反应温度作为实验因素,采用双波长比色法及马尔文粒径测定法表征DNT-Se中Se NPs... 详细信息

探索黑木耳β-葡聚糖/纳米硒复合物(DNT-Se)的最佳制备条件,并探究其安全性。以多糖(DNTs)浓度、维生素C(V_(C))与亚硒酸钠配比、亚硒酸钠浓度、反应时间、反应温度作为实验因素,采用双波长比色法及马尔文粒径测定法表征DNT-Se中Se NPs的粒径变化,以Se NPs的粒径大小为评价指标,采用单因素及正交试验设计的方法考察DNT-Se的制备工艺,并采用CCK-8法评价DNT-Se对293T人胚胎肾细胞和AML-12小鼠正常肝细胞的毒性。DNTs浓度1.0 mg/mL,维生素C与亚硒酸钠配比为6:1,亚硒酸钠浓度为1.0 mg/mL、反应时间12 h、反应温度25℃为制备DNT-Se的最佳条件。该条件下制备的DNT-Se中Se NPs的粒径大小均值为34.50 nm,细胞增殖实验结果表明,DNT-Se对293T人胚胎肾细胞和AML-12小鼠正常肝细胞在200μg/mL时细胞存活率仍高于82%,同时DNT-Se能够抑制HepG2细胞的增殖,在72 h时对HepG2细胞的IC_(50)值为42.54μg/mL。本研究成功确定了DNT-Se的最优制备工艺,所得纳米硒粒径较小、分散均匀,对肝癌细胞HepG2有抑制增殖的效果,对正常细胞无毒性,具有良好的生物安全性。

关键词：纳米硒黑木耳 β-葡聚糖工艺考察

葫芦素B调控糖酵解抑制HuCCT1细胞增殖的作用机制

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中国实验方剂学杂志 2022年第16期28卷 74-81页

作者：李励邓冬杰谈相云孙懿王楚婷郑国华胡俊杰湖北中医药大学药学院武汉430065 湖北中医药大学中药资源与中药复方教育部重点实验室武汉430065

目的:探究葫芦素B(CuB)抑制细胞增殖和糖酵解的作用机制。方法:采用细胞增殖与活性检测-8(CCK-8)法检测CuB(0、40、80、120、160、200、400、800 nmol·L^(-1))对HuCCT1细胞增殖的影响;采用平板克隆实验检测CuB(50、100、200 nmol·L^(-... 详细信息

目的:探究葫芦素B(CuB)抑制细胞增殖和糖酵解的作用机制。方法:采用细胞增殖与活性检测-8(CCK-8)法检测CuB(0、40、80、120、160、200、400、800 nmol·L^(-1))对HuCCT1细胞增殖的影响;采用平板克隆实验检测CuB(50、100、200 nmol·L^(-1))对HuCCT1细胞集落形成能力的影响;采用流式细胞术检测CuB(50、100、200 nmol·L^(-1))对HuCCT1细胞周期的影响;采用可见分光光度法检测CuB(50、100、200 nmol·L^(-1))给药后HuCCT1细胞中糖酵解关键酶己糖激酶(HK)、丙酮酸激酶(PK)活性,及葡萄糖消耗量、乳酸生成量和三磷酸腺苷(ATP)生成量的变化;采用蛋白免疫印迹法(Western blot)检测CuB对细胞周期相关蛋白、增殖相关蛋白、糖酵解关键蛋白及蛋白激酶B/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(Akt/mTOR)通路相关蛋白表达情况的影响。结果:与空白组比较,给药24 h,160~800 nmol·L^(-1)CuB,给药48 h后80~800 nmol·L^(-1)可以抑制HuCCT1细胞增殖(P<0.05,P<0.01),并呈时间和浓度依赖性,给药48 h半数抑制浓度为200 nmol·L^(-1);CuB可以呈浓度依赖性的抑制HuCCT1细胞集落形成能力(P<0.01);CuB能够将HuCCT1细胞周期阻滞在G2期(P<0.05,P<0.01);CuB(100、200 nmol·L^(-1))可以抑制糖酵解关键酶HK、PK的活性,并降低细胞葡萄糖消耗量及乳酸和ATP的生成量(P<0.05,P<0.01)。Western blot结果显示,CuB(100、200 nmol·L^(-1))可以抑制周期相关蛋白Cyclin B1、增殖细胞核抗原(PCNA)、己糖激酶1(HK1)、己糖激酶2(HK2)、丙酮酸激酶1(PKM1)、丙酮酸激酶2(PKM2)、磷酸化蛋白激酶B(p-Akt)、磷酸化mTOR(p-mTOR)及磷酸化核糖体蛋白(p-RPS6)的蛋白表达水平(P<0.05,P<0.01)。结论:CuB可能通过调控Akt/mTOR通路抑制HuCCT1细胞糖酵解进而影响细胞增殖。

关键词：葫芦素B 肝内胆管癌蛋白激酶B/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(Akt/mTOR)通路糖酵解 HuCCT1细胞增殖

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雷公藤红素长循环脂质体的制备和体外性质初步研究

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中国新药杂志 2019年第4期28卷 485-491页

作者：陈欣妍李歆王皓南胡俊杰郑国华湖北中医药大学药学院武汉430065 湖北中医药大学中药资源与中药复方教育部重点实验室武汉430065

目的:制备雷公藤红素长循环脂质体,筛选合适的冻干保护剂,并对其体外性质进行初步研究。方法:采用薄膜分散法制备雷公藤红素长循环脂质体,以粒径和包封率为考察指标,优化制备处方并筛选合适的冻干保护剂;采用透析法考察体外释放行为; H... 详细信息

目的:制备雷公藤红素长循环脂质体,筛选合适的冻干保护剂,并对其体外性质进行初步研究。方法:采用薄膜分散法制备雷公藤红素长循环脂质体,以粒径和包封率为考察指标,优化制备处方并筛选合适的冻干保护剂;采用透析法考察体外释放行为; HPLC法测定HepG2细胞的雷公藤红素细胞摄取量;MTT法评价细胞毒性。结果:最优处方为超声强度15%(10 min);磷脂与胆固醇质量比10∶1;药物与脂质质量比1∶30; DSPE-PEG摩尔百分比5. 4%。制得雷公藤红素长循环脂质体粒径为(143. 2±2. 4) nm,包封率为(97. 3±1. 4)%,形态较均一且在4℃可稳定放置20 d。蔗糖相比于海藻糖和甘露醇具有更好的冻干保护作用,其与总脂质量比为1∶1时,冻干复溶后雷公藤红素的包封率在90%以上。在37℃、pH 7. 4的释放介质中,雷公藤红素长循环脂质体36 h的累积释放率只有30%左右,约为游离雷公藤红素组的一半;与Hep G2细胞孵育4 h后,雷公藤红素长循环脂质体组的细胞摄取量为34. 5 ng·μg^(-1),是游离组的5. 3倍;与HepG2细胞孵育24 h后,测得雷公藤红素长循环脂质体IC_(50)值为0. 83μg·mL^(-1),降低到游离组的1/3。结论:本研究成功制备了一种稳定、形态均一、分散较好、包封率高的长循环雷公藤红素脂质体,该脂质体在体外可以延缓药物释放,提高细胞摄取量,增强细胞毒性。

关键词：雷公藤红素长循环脂质体薄膜分散法体外释放细胞摄取细胞毒性

蛇床子素对人肝内胆管癌HuCCT1细胞增殖与凋亡的影响及其机制

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中国实验方剂学杂志 2023年第20期29卷 54-60页

作者：邓冬杰李励王楚婷孙懿孟燕王桂红郑国华胡俊杰湖北中医药大学药学院武汉430065 湖北中医药大学中药资源与中药复方教育部重点实验室武汉430065

目的:观察蛇床子素对人肝内胆管癌HuCCT1细胞增殖与凋亡的影响及其作用机制。方法:采用细胞增殖与活性检测-8(CCK-8)法检测10、20、40、80、120μmol·L^(-1)蛇床子素对HuCCT1细胞增殖的影响;分别设置空白组、蛇床子素低、中、高浓度组... 详细信息

目的:观察蛇床子素对人肝内胆管癌HuCCT1细胞增殖与凋亡的影响及其作用机制。方法:采用细胞增殖与活性检测-8(CCK-8)法检测10、20、40、80、120μmol·L^(-1)蛇床子素对HuCCT1细胞增殖的影响;分别设置空白组、蛇床子素低、中、高浓度组(16、32、64μmol·L^(-1));采用平板克隆实验检测蛇床子素对细胞克隆形成率的影响;采用流式细胞术检测蛇床子素对细胞周期与凋亡的影响;采用Hoechst33342荧光染色实验检测蛇床子素对细胞凋亡形态的影响;采用蛋白免疫印迹法(Western blot)检测蛇床子素对细胞周期蛋白B1(cyclin B1)、增殖细胞核抗原(PCNA)、胱天蛋白酶-9(Caspase-9)、胱天蛋白酶-3(Caspase-3)、剪切的Caspase-9(cleaved Caspase-9)、剪切的Caspase-3(cleaved Caspase-3)、剪切的多聚(ADP-核糖)聚合酶PARP(cleaved PARP)、B细胞淋巴瘤-2(Bcl-2)、磷酸化蛋白激酶B(p-Akt)、磷酸化哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(p-mTOR)、磷酸化核糖体蛋白(p-RPS6)表达水平的影响。结果:与空白组比较,蛇床子素组(40、80、120μmol·L^(-1))细胞存活率明显降低(P<0.05,P<0.01),其半数抑制浓度(IC50)为63.8μmol·L^(-1);与空白组比较,蛇床子素组(32、64μmol·L^(-1))细胞的克隆形成率显著降低(P<0.01),蛇床子素组(32、64μmol·L^(-1))细胞G2期细胞数量增加(P<0.05,P<0.01),蛇床子素组(32、64μmol·L^(-1))细胞数量明显减少,核固缩、碎裂增多,细胞凋亡率增加(P<0.05,P<0.01),蛇床子素组(32、64μmol·L^(-1))细胞中cyclin B1、PCNA、Bcl-2、Caspase-3、Caspase-9、p-Akt、p-mTOR、p-RPS6表达降低(P<0.05,P<0.01),cleaved Caspase-3、cleaved Caspase-9、cleaved PARP表达升高(P<0.05,P<0.01)。结论:蛇床子素可抑制HuCCT1细胞增殖,促进其凋亡,其机制可能与Akt/mTOR信号通路有关。

关键词：蛇床子素肝内胆管癌增殖凋亡蛋白激酶B/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白

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表没食子儿茶素没食子酸酯通过AKT/SREBP-1/FASN信号通路调节HepG2细胞脂代谢的作用

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中国现代应用药学 2021年第18期38卷 2200-2207页

作者：宋莹莹孙懿张聪谈相云郑国华邱振鹏湖北中医药大学药学院武汉430065 湖北中医药大学中药资源与中药复方教育部重点实验室武汉430065

目的研究表没食子儿茶素没食子酸酯(epigallocatechin gallate,EGCG)通过AKT/SREBP-1/FASN信号通路抑制脂肪酸从头合成,调节肝癌HepG2细胞脂代谢的作用。方法运用CCK-8法检测不同浓度EGCG对HepG2细胞的细胞毒性;采用油酸诱导建立HepG2... 详细信息

目的研究表没食子儿茶素没食子酸酯(epigallocatechin gallate,EGCG)通过AKT/SREBP-1/FASN信号通路抑制脂肪酸从头合成,调节肝癌HepG2细胞脂代谢的作用。方法运用CCK-8法检测不同浓度EGCG对HepG2细胞的细胞毒性;采用油酸诱导建立HepG2细胞脂肪变性模型,运用油红O染色法观察EGCG对油酸诱导HepG2细胞脂肪变性的改善作用,测定细胞内甘油三酯(triglycerides,TG)的含量;运用实时荧光定量PCR检测胆固醇调节元件结合蛋白1(sterol regulatory element binding protein-1,SREBP-1)、脂肪酸合成酶(fatty acid synthase,FASN)mRNA的表达水平;Western blotting检测p-AKTThr308、SREBP-1、FASN蛋白的表达水平;运用AKT质粒瞬时转染进一步确证EGCG对p-AKTThr308、SREBP-1、FASN蛋白表达水平的影响。结果油酸诱导后,运用油红O染色可见HepG2细胞内具有大量脂质累积,TG含量显著升高(P<0.05),FASN、SREBP-1 mRNA表达水平升高,p-AKTThr308、SREBP-1、FASN蛋白表达水平升高,AKT质粒转染后p-AKTThr308、SREBP-1、FASN蛋白表达水平升高(P<0.05);给予EGCG(20,40μmolL^(‒1))作用后,细胞内脂质累积明显减少,TG含量显著降低(P<0.05),FASN、SREBP-1的mRNA表达降低,p-AKTThr308、SREBP-1、FASN蛋白表达水平降低(P<0.05)。结论EGCG可能通过调控AKT/SREBP-1/FASN信号通路抑制脂肪酸从头合成,发挥调节HepG2细胞脂代谢的作用。

关键词：表没食子儿茶素没食子酸酯 HepG2 脂代谢脂肪酸从头合成

基于网络药理学和实验验证探讨石榴皮对非酒精性脂肪性肝炎的作用机制

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中国现代应用药学 2023年第17期40卷 2384-2392页

作者：孙懿黄鑫宇屈雅琴郑国华田先翔邱振鹏湖北中医药大学药学院武汉430065 湖北中医药大学中药资源与中药复方教育部重点实验室武汉430065

目的基于网络药理学和细胞实验验证的方法探讨石榴皮改善非酒精性脂肪性肝炎(non-alcoholic steatohepatitis,NASH)作用机制。方法利用中药系统药理学数据库(TCMSP)进行条件检索,获取石榴皮的活性成分及其对应的作用靶点。利用人类基因... 详细信息

目的基于网络药理学和细胞实验验证的方法探讨石榴皮改善非酒精性脂肪性肝炎(non-alcoholic steatohepatitis,NASH)作用机制。方法利用中药系统药理学数据库(TCMSP)进行条件检索,获取石榴皮的活性成分及其对应的作用靶点。利用人类基因数据库(GeneCards)等5个数据库获取NASH相关的靶点。将获得的石榴皮和NASH靶点进行筛选,通过韦恩图得到共同靶点。使用蛋白相互作用数据库(STRING)构建蛋白质-蛋白质相互作用网络,并用Cytoscape 3.7.1建立“石榴皮-成分-靶点-NASH”网络。利用Metascape软件进行基因本体(gene ontology,GO)富集分析和京都基因与基因组百科全书(Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes,KEGG)通路分析。最后借助人肝癌细胞HepG2观察石榴皮中主要活性成分对NASH的影响。结果石榴皮活性成分有7个,获得靶点基因191个,NASH靶点1818个,两者交集靶点98个,拓扑学分析显示,石榴皮治疗NASH的核心成分为槲皮素、山奈酚和木犀草素,核心靶点为蛋白激酶B(protein kinase B,Akt1)、白细胞介素-1β(interleukin 1β,IL-1β)、白细胞介素-6(interleukin 6,IL-6)、肿瘤坏死因子(tumor necrosis factor,TNF)等。KEGG通路分析结果显示石榴皮治疗NASH主要涉及磷脂酰肌醇-3-激酶(phosphatidylinositol 3 kinase,PI3K)/Akt、核因子κB(nuclear factor kappa-B,NF-κB)等信号通路。体外细胞试验结果显示,与对照组相比,模型组磷酸化蛋白激酶B(phosphorylated-Akt^(Thr308),p-Akt^(Thr308))、IL-6等蛋白表达水平升高(P<0.05);与模型组相比,石榴皮活性成分可显著降低p-AktThr308、IL-6等蛋白的表达水平(P<0.05),也能够降低IL-6、TNF-α基因的mRNA表达水平(P<0.05)。结论石榴皮可通过多成分、多靶点、多通路发挥抗NASH的作用,其机制可能与石榴皮中活性成分槲皮素、山奈酚和木犀草素影响Akt1等核心靶点及调控PI3K/Akt、NF-κB等信号通路,进而抑制相关炎症因子表达有关。

关键词：石榴皮网络药理学非酒精性脂肪性肝炎细胞实验分子机制