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基于UHPLC-ELSD指纹图谱及多成分含量测定比较不同产地羊胆汁质量及抗氧化活性

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中国现代应用药学 2024年第8期41卷 1066-1074页

作者：周旭香朱芊芊张丹丹罗心遥刘丹章敏叶晓川湖北中医药大学药学院中药资源与中药化学湖北省重点实验室武汉430065 湖北中医药大学中医药实验中心武汉430065

目的建立UHPLC-ELSD指纹图谱与多成分含量测定方法,比较不同产地羊胆汁的差异,并进行抗氧化活性研究,为羊胆汁的深入开发利用提供依据。方法采用UHPLC-ELSD建立21批不同产地羊胆汁指纹图谱并进行相似度分析;测定6个成分含量、DPPH及A... 详细信息

目的建立UHPLC-ELSD指纹图谱与多成分含量测定方法,比较不同产地羊胆汁的差异,并进行抗氧化活性研究,为羊胆汁的深入开发利用提供依据。方法采用UHPLC-ELSD建立21批不同产地羊胆汁指纹图谱并进行相似度分析;测定6个成分含量、DPPH及ABTS自由基清除能力、铁离子还原能力,并进行熵权TOPSIS及灰色关联度分析。结果21批羊胆汁指纹图谱共确定11个共有峰,通过与对照品比对指认出牛磺胆酸(taurocholic acid,TCA)、甘氨胆酸(glycocholic acid,GCA)、牛磺鹅脱氧胆酸(taurochenodeoxycholic acid,TCDCA)、牛磺脱氧胆酸(tauroursodeoxycholic acid,TDCA)、甘氨脱氧胆酸(glycodeoxycholic acid,GDCA)、胆酸(cholic acid,CA) 6个成分,除4批样品外,指纹图谱相似度均>0.90, 21批羊胆汁冻干粉中6个成分的总含量范围为55.34%~86.08%,含量最高的TCA含量范围为34.74%~60.86%,显示6个成分含量在不同产地样品中存在较大差异;不同产地羊胆汁均具有抗氧化活性,同样也存在一定差异。以6个成分含量为变量的熵权TOPSIS分析结果显示,得分排名位于前十的为S2、S18、S16、S9、S8、S21、S1、S10、S20、S15,表明其质量较好,且来自北方地区绵羊的羊胆汁质量略优;对6个成分含量与3个抗氧化指标的灰色关联度分析结果显示,6个成分与各抗氧化指标均具有关联性,且TCA、TDCA、TCDCA关联度最高,可能是羊胆汁发挥抗氧化作用的重要成分。结论采用熵权TOPSIS及灰色关联度分析方法能有效分析不同产地羊胆汁的质量差异及抗氧化活性成分,为其质量评价提供科学依据。

关键词：羊胆汁指纹图谱含量测定抗氧化活性熵权TOPSIS 灰色关联度质量控制

基于UPLC-Q-TOF-MS/MS的疏肝和胃汤化学成分、HPLC指纹图谱、化学模式识别及含量测定研究

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中草药 2024年第7期55卷 2183-2196页

作者：袁传裕胡俊杰李娟刘焱文刘松林陈新湖北中医药大学中药资源与中药化学湖北省重点实验室湖北武汉430065

目的指认疏肝和胃汤(Shugan Hewei Decoction,SHD)主要化学成分,建立其HPLC指纹图谱,并结合化学模式识别评价其质量,同时确定9种成分含量测定方法。方法通过UPLC-Q-TOF-MS/MS对SHD中化学成分进行分析;HPLC建立SHD指纹图谱及含量测定方法... 详细信息

目的指认疏肝和胃汤(Shugan Hewei Decoction,SHD)主要化学成分,建立其HPLC指纹图谱,并结合化学模式识别评价其质量,同时确定9种成分含量测定方法。方法通过UPLC-Q-TOF-MS/MS对SHD中化学成分进行分析;HPLC建立SHD指纹图谱及含量测定方法;采用中药色谱指纹图谱相似度评价软件(2012年版),结合层次聚类分析(hierarchical cluster analysis,CA)、主成分分析(principal component analysis,PCA)与正交偏最小二乘法-判别分析(orthogonal partial least squares-discriminant analysis,OPLS-DA),寻找影响SHD质量的主要化学成分。结果从SHD中共鉴定出88个成分,包括26个黄酮类成分、27个萜类成分、18个生物碱类成分、6个香豆素类成分、6个有机酸类成分、2个苯丙素类化合物、3个其他类成分;建立了SHD的HPLC指纹图谱,确定了20个共有峰,10批样品相似度0.972~1.000。3种化学模式识别均将样品分为2类,造成主要差异的质量差异物来源于槲皮苷。建立的多成分含量测定方法耐用性良好。结论UPLC-Q-TOFMS/MS定性鉴别结合HPLC指纹图谱,可以体现SHD组分的整体特征,为其质量控制研究奠定基础。

关键词：疏肝和胃汤 HPLC-MS 裂解规律指纹图谱橘皮素黄藤素白术内酯Ⅲ 甘草酸层次聚类分析主成分分析正交偏最小二乘化法-判别分析

整合代谢组学和网络药理学探究蕲艾的安全性与毒理学机制

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中草药 2024年第10期55卷 3331-3344页

作者：陈乐汪喻巧朱芸芸徐文丽杜鸿志刘大会湖北中医药大学中药资源中心湖北武汉430065 湖北中医药大学湖北时珍实验室湖北武汉430065 南京中医药大学江苏省中药资源产业化过程协同创新中心中药资源产业化与方剂创新药物国家地方联合工程研究中心国家中医药管理局中药资源循环利用重点研究室江苏南京210023

目的基于代谢组学和网络药理学分析相结合的方法探究蕲艾Artemisia argyi的安全性与毒理学机制。方法采用气相色谱-质谱(gas chromatography-mass spectrometry,GC-MS)和超高效液相色谱串联四极杆飞行时间质谱(ultra performance liquid... 详细信息

目的基于代谢组学和网络药理学分析相结合的方法探究蕲艾Artemisia argyi的安全性与毒理学机制。方法采用气相色谱-质谱(gas chromatography-mass spectrometry,GC-MS)和超高效液相色谱串联四极杆飞行时间质谱(ultra performance liquid chromatography coupled to tandem quadrupole time-of-flight mass spectrometry,UPLC-Q-TOF-MS)技术分析蕲艾挥发油组分(essential oil from A.argyi,AAEO)、石油醚组分、醋酸乙酯组分、正丁醇组分和水组分的化学组成;利用KM小鼠连续7 d给药评价AAEO和4个非挥发性组分的安全性;代谢组学技术检测AAEO干预前后肝脏内源性代谢物的变化;网络药理学分析AAEO肝毒性的潜在成分和作用靶点;整合代谢组学和网络药理学并构建“代谢物-反应-酶-基因”相互作用网络揭示AAEO肝毒性的毒理学机制。结果共鉴定出AAEO中39个成分,占挥发油含量的89.30%;从4个非挥发性组分中共鉴定出34个成分。与对照组比较,AAEO显著增加小鼠肝脏指数(P<0.05、0.01),上调肝脏丙氨酸氨基转移酶(alanine aminotransferase,ALT)和天冬氨酸氨基转移酶(aspartate aminotransferase,AST)的活性(P<0.01),并损伤肝脏组织病理结构呈现出明显肝毒性。代谢组学结果显示给予AAEO后肝脏的17个代谢物水平发生显著变化,包含9种氨基酸,主要涉及苯丙氨酸、酪氨酸和色氨酸生物合成,丙氨酸、天冬氨酸和谷氨酸代谢等途径;网络药理学分析提示樟脑、侧柏酮、石竹素、(−)-宁酮等10个成分是AAEO中潜在的肝毒性物质;整合代谢组学和网络药理学分析筛选出苯丙氨酸羟化酶(phenylalanine hydroxylase,PAH)为AAEO肝毒性的关键靶点,且PAH mRNA和蛋白表达在AAEO高、低剂量组均显著降低(P<0.05、0.01),揭示AAEO通过下调PAH表达抑制酪氨酸生物合成产生肝毒性。分子对接结果显示10个潜在毒性物质与PAH结合能均小于−20.00 kJ/mol。结论结合代谢组学和网络药理学阐明了蕲艾的毒性组分、可能的毒性物质及毒理学机制,为蕲艾产业的发展和临床应用提供了依据。

关键词：蕲艾安全性代谢组学网络药理学苯丙氨酸羟化酶挥发油樟脑侧柏酮石竹素 (−)-宁酮

基于Cx43研究产前应激对子代大鼠睾丸发育的影响及左归丸干预作用

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中国中药杂志 2024年第1期49卷 197-207页

作者：萧闵曹继刚江晓翠王朝阳龚健陈思易周艳艳赵敏湖北中医药大学实验动物中心湖北武汉430065 湖北中医药大学基础医学院湖北武汉430065

基于缝隙连接蛋白43(connexin 43, Cx43)研究产前应激大鼠影响子代睾丸发育的机制及左归丸的防治作用。制备SD孕鼠40只,随机分为空白对照组、模型组、左归丸高剂量组(18.9 g·kg^(-1))、左归丸低剂量组(9.45 g·kg^(-1))、维生素E组(1.4... 详细信息

基于缝隙连接蛋白43(connexin 43, Cx43)研究产前应激大鼠影响子代睾丸发育的机制及左归丸的防治作用。制备SD孕鼠40只,随机分为空白对照组、模型组、左归丸高剂量组(18.9 g·kg^(-1))、左归丸低剂量组(9.45 g·kg^(-1))、维生素E组(1.44 mg·kg^(-1))。除空白对照组以外,其余各组通过慢性不可预测轻度应激法复制产前应激(prenatal stress, PS)孕鼠模型。采用糖水偏好实验、旷场实验、酶联免疫吸附法(enzyme linked immunosorbent assay, ELISA)检测糖皮质激素(glucocorticoids, GC)含量评估PS孕鼠模型;ELISA法检测血清甲状腺素4(thyroxine 4, T4)、睾酮(testosterone, T)、促卵泡生长激素(follicle-stimulating hormone, FSH)评估肾虚状态及性激素水平;苏木素-伊红(hematoxylin-eosin, HE)染色评估睾丸生殖细胞状况;全自动精子分析仪检测精子质量;免疫荧光双染检测子代大鼠睾丸Cx43蛋白、促卵泡激素受体(follicle-stimulating hormone receptor, FSHR)表达;实时荧光定量聚合酶链式反应法(real-time fluorescent quantitative PCR, RT-PCR)检测Cx43、促卵泡生长激素受体(FSHR)、磷脂酰肌醇-3-激酶(phosphatidylinositol 3 kinase, PI3K)、蛋白激酶B(protein kinase B, Akt)基因mRNA表达;蛋白免疫印迹(Western blot, WB)法检测子代大鼠睾丸Cx43、PI3K、FSHR、Akt蛋白表达。PS诱发子代大鼠睾丸发育障碍,HE染色结果显示,出生当天子代雄鼠睾丸曲精小管数量减少,血清FSH升高,睾丸组织Cx43水平降低,60日龄子代雄鼠睾丸生精功能降低,精子质量下降,血清FSH升高,T降低,睾丸组织Cx43、FSHR、PI3K、Akt蛋白及mRNA水平均降低;而给予左归丸防治后对子代大鼠上述睾丸发育异常及功能障碍均有改善。综上,左归丸可能通过激活PI3K/Akt通路调节睾丸Cx43表达改善PS对子代大鼠睾丸发育及生精功能的影响。

关键词：产前应激连接蛋白43 子代左归丸睾丸发育

甘草次酸修饰的姜黄素阳离子脂质体肝靶向性和抗肝癌作用研究

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药物评价研究 2024年第4期47卷 754-764页

作者：刘炎清李瀚旻常明向陈诺湖北中医药大学中药资源与中药化学重点实验室湖北武汉430065 湖北中医药大学附属湖北省中医院湖北武汉430061

目的研究甘草次酸修饰的姜黄素阳离子脂质体(GAMCLCL)肝靶向性以及抗肝癌作用。方法制备甘草次酸(GA)配体——GA和十八胺盐(SGO),用红外光谱和质谱检测;并进一步利用SGO制备GAMCLCL,透射电镜观察脂质体形态,Nano ZS90纳米粒度仪测定脂... 详细信息

目的研究甘草次酸修饰的姜黄素阳离子脂质体(GAMCLCL)肝靶向性以及抗肝癌作用。方法制备甘草次酸(GA)配体——GA和十八胺盐(SGO),用红外光谱和质谱检测;并进一步利用SGO制备GAMCLCL,透射电镜观察脂质体形态,Nano ZS90纳米粒度仪测定脂质体粒径与电位;采用活体成像系统观察GAMCLCL小鼠体内荧光分布。Wistar大鼠随机分为对照组、模型组、阿霉素(阳性药,2 mg·kg^(−1))组、姜黄素(20 mg·kg^(−1))组和GAMCLCL低、高剂量(2、4 mg·kg^(−1))组,除对照组外,采用Walker-256细胞种植法制备肝原位移植瘤模型,每天1次,尾iv给药,连续7 d;另设GAMCLCL(4 mg·kg^(−1))给药14 d组;称肿瘤质量,计算肝脏系数、脾脏系数;全自动生化分析仪测定血液红细胞(RBC)、白细胞(WBC)、血小板(PLT)、丙氨酸氨基转移酶(ALT)和肌酐(CRE)水平,试剂盒法检测乳酸脱氢酶(LDH)水平;ELISA法检测血清肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和白细胞介素-6(IL-6)水平;Western blotting法检测肿瘤组织血管内皮生长因子(VEGF)、cleaved Caspase-3、Bcl-2、p53、p-PI3K、p-Akt蛋白表达水平。结果红外光谱和质谱的结果可以验证GA与十八胺的反应生成了SGO;GAMCLCL外观呈球形,其粒径为(194±0.25)nm,聚合物分散性指数(PDI)为0.21±0.02,电位为(31.9±0.31)mV;GAMCLCL在2个月内呈黄色透明溶液,无沉淀析出;GAMCLCL与血清混合未出现任何聚集和沉淀现象;活体成像实验显示,给药后各时间点荧光主要集中在肝脏,10、30、60 min时肝脏荧光较强,120 min时肝脏荧光明显减弱,240 min时肝脏荧光基本消失。与模型组比较,各给药组大鼠肿瘤质量均明显减轻(P<0.05、0.01);各给药组肝脏系数显著降低(P<0.05、0.01),游离姜黄素组、GAMCLCL 4 mg·kg^(−1)(7、14 d)组脾脏系数显著下降(P<0.01);阿霉素及GAMCLCL 4 mg·kg^(−1)(7、14 d)组的RBC和PLT计数均显著升高(P<0.01),WBC计数均显著降低(P<0.05、0.01);各给药组大鼠ALT、CRE均显著降低(P<0.05、0.01),除游离姜黄素组外,各给药组LDH显著降低(P<0.05、0.01);各给药组IL-6、TNF-α均显著降低(P<0.01、0.05);各给药组VEGF、Bcl-2、Akt、p-PI3K的蛋白表达均显著下调(P<0.05、0.01),cleaved Caspase-3和P53蛋白表达均显著上调(P<0.05、0.01);GAMCLCL(4 mg·kg^(−1))给药7 d与14 d的抗肿瘤效果相似,明显强于游离姜黄素。结论GAMCLCL能显著增强姜黄素的肝靶向性和抗肝癌作用,有利于提高荷瘤大鼠的无进展生存期。

关键词：姜黄素甘草次酸阳离子脂质体 Walker 256肝原位移植瘤抗肿瘤作用

基于代谢组学研究葫芦素B诱导人肝内胆管癌HuCCT1细胞凋亡的作用机制

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世界科学技术-中医药现代化 2024年第2期26卷 302-310页

作者：杜思宇王楚婷李励陈新郑国华王桂红胡俊杰湖北中医药大学药学院武汉430065 湖北中医药大学/中药资源与中药复方教育部重点实验室武汉430065

目的探究葫芦素B(CuB)诱导人肝内胆管癌HuCCT1细胞凋亡的作用及机制。方法将HuCCT1细胞分为对照组,CuB给药低(50 nmol·L^(-1))、中(100 nmol·L^(-1))、高(200 nmol·L^(-1))剂量组,给予药物干预24 h,采用Annexin V/PI双染法和Hoechst染色法检测细胞凋亡情况。采用超高效液相色谱/四极杆飞行时间质谱(UHPLC-Q/TOF-MS)检测其主要差异代谢物,并分析其相关代谢通路。结果Annexin V/PI双染结果发现,与对照组相比,经CuB给予处理后HuCCT1细胞的凋亡比例从7.86%±0.73%增加到16.53%±0.27%,P<0.0001;Hoechst染色结果发现,与对照组相比,经200 nmol·L^(-1)CuB给予处理24 h后细胞结构被破坏,细胞破碎,边缘轮廓不规则,出现大量核固缩现象;代谢组学分析筛选出了20个显著的差异代谢物,主要涉及的代谢通路包括TCA循环、能量代谢、氨基酸代谢和脂质代谢等。结论CuB具有较好的抗肿瘤作用,可能是通过干扰HuCCT1细胞的多条代谢通路,引起细胞快速增殖的物质缺乏,最终导致细胞凋亡,而发挥药理作用。

关键词：超高效液相色谱/四极杆飞行时间质谱葫芦素B 细胞代谢组学肝内胆管癌

整合肠道菌群和代谢组学探讨疏肝和胃汤改善抑郁大鼠的作用机制

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世界科学技术-中医药现代化 2024年第2期26卷 336-350页

作者：何地李娟胡俊杰刘焱文刘松林陈新湖北中医药大学中药资源与中药化学湖北省重点实验室武汉430065

目的采用16S rDNA扩增子测序技术结合非靶向代谢组学技术的方法,探讨疏肝和胃汤抗抑郁的作用机制。方法利用慢性温和不可预知应激(Chronic unpredictable mild stress,CUMS)制作抑郁模型;采用16S rDNA扩增子测序技术分析疏肝和胃汤对抑... 详细信息

目的采用16S rDNA扩增子测序技术结合非靶向代谢组学技术的方法,探讨疏肝和胃汤抗抑郁的作用机制。方法利用慢性温和不可预知应激(Chronic unpredictable mild stress,CUMS)制作抑郁模型;采用16S rDNA扩增子测序技术分析疏肝和胃汤对抑郁大鼠肠道菌群分布的影响;采用非靶向代谢组学技术分析疏肝和胃汤对抑郁大鼠海马组织代谢物及其代谢通路的影响;结合Spearman分析法对肠道差异菌群和海马组织差异代谢物进行相关性分析。结果行为学实验结果显示,与空白组比较,模型组糖水偏爱率、体重和旷场运动距离显著降低(P<0.01),强迫游泳不动时间显著延长(P<0.01);与模型组比较,疏肝和胃汤可提高糖水偏爱率(P<0.01),增加体重和运动距离(P<0.05,P<0.01),缩短不动时间(P<0.01);16S rDNA扩增子测序结果发现疏肝和胃汤可以改善Christensenellaceae_R-7_group、考克氏菌属、颤杆菌克属、大肠埃希菌、产丁酸肠杆菌、Subdoligranulum、瘤胃球菌属等菌属的丰度;非靶向代谢组学分析共鉴定出66个差异代谢物,涉及的代谢通路主要为甘油磷脂、鞘脂和花生四烯酸代谢等;Spearman分析发现部分肠道差异菌群与海马组织差异代谢物之间存在密切的关联性。结论疏肝和胃汤可通过调整肠道菌群中多种菌属的丰度、调节海马组织中小分子代谢物的表达进而发挥抗抑郁作用。

关键词：疏肝和胃汤抑郁肠道菌群非靶向代谢组学花生四烯酸代谢脂质代谢

基于incopat专利数据库的五倍子专利分析

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世界科学技术-中医药现代化 2024年

作者：王晨雨陈赤清向杰陈志伟徐雷胡俊杰叶利春石召华湖北中医药大学药学院五峰赤诚生物科技有限公司湖北中医药大学中医临床学院湖北中医药大学中药资源与中药复方教育部重点实验室湖北时珍实验室

五倍子是现代临床常用的中药，应用广泛，可以用于治疗痔疮、出血、口腔溃疡等多种疾病。基于incopat专利数据库对全球近20年的五倍子专利进行检索，共检索到8123件相关专利；运用基本的图表分析法，从申请趋势、专利价值、技术领域、... 详细信息

五倍子是现代临床常用的中药，应用广泛，可以用于治疗痔疮、出血、口腔溃疡等多种疾病。基于incopat专利数据库对全球近20年的五倍子专利进行检索，共检索到8123件相关专利；运用基本的图表分析法，从申请趋势、专利价值、技术领域、法律状态等方面对五倍子专利进行格局分析。分析结果表明，五倍子的开发正处于快速发展阶段，五倍子在治疗痔疮、口腔溃疡、出血等方面具有较深入的研究，五倍子中药材、中成药和化妆品是当今的研发热点，中韩两国为五倍子的专利主要分布国家。我国的五倍子专利数量虽然众多，但是专利的质量、价值与世界的专利水平具有一定的差距；从五倍子的当前发展趋势上来看，该领域仍有较大的专利申请空间，我国五倍子专利申请人可结合自身优势、发展趋势及发展短板制定科学的发展策略，从根本上提高五倍子产业的核心竞争力。

关键词：五倍子专利 incopat专利数据库格局分析发展趋势

复方高滋斑片对抑郁大鼠海马NLRP3炎症小体的影响

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中国医院药学杂志 2024年

作者：肖敏韩正茹游秋云昝俊峰石雷尤朋涛湖北中医药大学药学院中药资源与中药化学省级重点实验

目的研究复方高滋斑片（CGZBT）对抑郁大鼠的缓解作用和海马NLRP3炎症小体的潜在影响。方法适应性喂养1周后根据0 weeks糖水偏好率将大鼠随机分为Control组、CUMS组、LCGZBT组(0.4g·kg-1)、MCGZBT组(0.8g·kg-1)、HCGZBT组(1.6g·kg... 详细信息

目的研究复方高滋斑片（CGZBT）对抑郁大鼠的缓解作用和海马NLRP3炎症小体的潜在影响。方法适应性喂养1周后根据0 weeks糖水偏好率将大鼠随机分为Control组、CUMS组、LCGZBT组(0.4g·kg-1)、MCGZBT组(0.8g·kg-1)、HCGZBT组(1.6g·kg-1)、Fluoxetine组，每组12只。SD大鼠造模6周建立慢性不可预知轻度应激（CUMS）抑郁模型，从第五周开始在CUMS造模同时给予相应药物干预2周。最后一天对大鼠进行糖水偏好实验，旷场实验，强迫游泳实验。麻醉后对大鼠海马体、血清进行取材，苏木精-伊红染色法观察海马体CA1区神经元细胞的变化。用酶联免疫吸附法检测血清中肿瘤坏死因子α（TNF-α）、白介素-1β（IL-1β）表达水平。蛋白免疫印迹法检测海马体中核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3（NLRP3）、凋亡相关斑点样蛋白（ASC）、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-1（Caspase-1）、白细胞介素-1β前体（pro-IL-1β）、IL-1β、白介素-18（IL-18）的表达水平。结果与CUMS组相比，CGZBT各剂量组旷场移动总距离显著增加（P<0.01），强迫游泳不动时间减少（P<0.01或P<0.05）；MCGZBT组和HCGZBT组大鼠的糖水偏好率显著增加（P<0.01）。CGZBT可缓解CUMS大鼠海马体CA1区神经元细胞的损伤和降低血清中TNF-α、IL-1β的含量（P<0.01或P<0.05）。与CUMS组相比，CGZBT各剂量组大鼠海马中ASC、Caspase-1、IL-1β、的蛋白表达显著下调（P<0.01或P<0.05）；MCGZBT组和HCGZBT组大鼠NLRP3、IL-18蛋白表达显著下调（P<0.01或P<0.05）。结论CGZBT可缓解抑郁大鼠的抑郁症状并抑制海马体中NLRP3炎性小体的表达。

关键词：复方高滋斑片抑郁症炎症小体海马