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基于NRG1/ErbB4信号通路研究安寐丹对睡眠剥夺大鼠海马神经元损伤及突触微环境的保护作用

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中国中药杂志 2024年

作者：谢光璟徐波夏婧徐子绚李非洲王平湖北中医药大学教育部工程研究中心湖北中医药大学基础医学院湖北中医药大学中医学院

探讨安寐丹对睡眠剥夺大鼠海马神经元及突触微环境的影响。60只SD大鼠随机分为空白组、模型组、安寐丹组和褪黑素组，每组15只。采用多平台水环境法制备睡眠剥夺模型，安寐丹组给药剂量为18.18 g·kg-1·d-1，褪黑素组给药剂量为100 mg... 详细信息

探讨安寐丹对睡眠剥夺大鼠海马神经元及突触微环境的影响。60只SD大鼠随机分为空白组、模型组、安寐丹组和褪黑素组，每组15只。采用多平台水环境法制备睡眠剥夺模型，安寐丹组给药剂量为18.18 g·kg-1·d-1，褪黑素组给药剂量为100 mg·kg-1·d-1，空白组和模型组给予等容纯水，大鼠灌胃方式给药，时间为4周。动物行为视频系统评估大鼠自发活动变化，尼氏染色观察海马锥体神经元及尼氏体变化，原位末端转移酶标记技术观察神经元凋亡，透射电镜观察神经元突触超微结构，高尔基染色观察海马树突棘变化，免疫荧光检测海马胶质纤维酸性蛋白(GFAP)与γ-氨基丁酸A受体(GABAA)、谷氨酸受体N1(GLUN1)表达及突触后致密蛋白95(PSD95)、突触素(SYP)、脑源性神经营养因子(BDNF)、神经生长因子(NGF)的表达，蛋白免疫印迹法检测神经调节素1(NRG1)、酪氨酸激酶受体4(ErbB4)和谷氨酸受体A1(GLUA1)、GLUN1及谷氨酸受体N2A(GLUN2A)的表达。结果显示，与空白组比较，模型组水平得分、垂直得分及修饰次数、中央区路程比例显著降低，海马锥体细胞数量减少，尼氏体减少，凋亡指数增加，NRG1、ErbB4及GLUA1、GLUN1、GLUN2A蛋白表达下调，GFAP+/GABAA+及GFAP+/GLUN1+阳性表达下降，PSD95、SYP及BDNF、NGF荧光强度下降，同时突触囊泡密度不均，突触界面曲率及突触后致密物质厚度降低，树突棘减少。与模型组比较，安寐丹组水平得分、垂直得分及修饰次数、中央区路程比例升高，海马锥体细胞及尼氏体增加，凋亡指数下降，NRG1、ErbB4、GLUA1、GLUN1、GLUN2A蛋白表达上调，GFAP+/GABAA+及GFAP+/GLUN1+阳性表达增加，PSD95、SYP及BDNF、NGF荧光强度升高，且突触损伤减轻，树突棘增加。研究结果表明，安寐丹缓解睡眠剥夺大鼠海马神经元损伤可能与上调NRG1/ErbB4信号通路，促进谷氨酸受体、神经营养因子、突触蛋白表达改善突触微环境有关。

关键词：安寐丹睡眠剥夺突触微环境 NRG1/ErbB4信号通路

基于脂肪可塑性研究大黄素对肥胖小鼠的改善作用和机制

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中草药 2024年第4期55卷 1228-1236页

作者：冯倩倩贺润铖张磊耿杨赵子阳史浩男贾占红张硕峰孙建宁董世芬北京中医药大学中药学院中药药理系北京102488

目的基于脂肪可塑性探究大黄素改善肥胖的作用和机制。方法通过高脂饲养8周建立肥胖小鼠模型,肥胖小鼠随机分为对照组、模型组、大黄素(40、80 mg/kg)组、CL316243(1 mg/kg)组和罗格列酮(10 mg/kg)组,连续给药4周。测量各组小鼠体质量,... 详细信息

目的基于脂肪可塑性探究大黄素改善肥胖的作用和机制。方法通过高脂饲养8周建立肥胖小鼠模型,肥胖小鼠随机分为对照组、模型组、大黄素(40、80 mg/kg)组、CL316243(1 mg/kg)组和罗格列酮(10 mg/kg)组,连续给药4周。测量各组小鼠体质量,检测Lee’s指数和皮下腹股沟白色脂肪组织(inguinal white adipose tissue,iWAT)、附睾白色脂肪组织(epididymal white adipose tissue,eWAT)、肾周白色脂肪组织(perirenal white adipose tissue,pWAT)、肩胛区棕色脂肪组织(brown adipose tissue,BAT)指数,测量肩胛骨体温;检测口服葡萄糖耐受量、血糖曲线下面积(area under curve,AUC)及血清中总胆固醇(total cholesterol,TC)、三酰甘油(triglyceride,TG)、低密度脂蛋白胆固醇(low density lipoprotein cholesterol,LDL-C)、高密度脂蛋白胆固醇(high density lipoprotein cholesterol,HDL-C)水平;采用苏木素-伊红(HE)染色观察脂肪组织病理变化;免疫组化法检测脂肪组织中棕色化相关蛋白解偶联蛋白1(uncoupling protein 1,UCP1)表达;Western blotting检测皮下iWAT中脂肪可塑性相关蛋白葡萄糖转运蛋白4(glucose transporter 4,GLUT4)、过氧化物酶体增殖物激活受体γ共激活剂-1α(peroxisome proliferator-activated receptor-gamma coactivator-1α,PGC-1α)、PR结构域蛋白16(positive regulatory domain-containing 16,PRDM16)、线粒体转录因子A(mitochondrial transcription factor A,TFAM)、腺苷酸活化蛋白激酶(AMP-dependent/activated protein kinase,AMPK)、磷酸化AMPK(phosphorylated AMPK,p-AMPK)蛋白表达。结果与模型组比较,大黄素组小鼠体质量、Lee’s指数及皮下iWAT、eWAT、pWAT指数均显著降低(P<0.05、0.01、0.001),肩胛区体温升高(P<0.01),血糖和血清中TC、TG、LDL-C水平均显著降低(P<0.05、0.01、0.001);BAT中UCP1表达显著增加(P<0.001),皮下iWAT中PGC-1α、PRDM16、TFAM、p-AMPK/AMPK、GLUT4蛋白表达水平均显著升高(P<0.05、0.01)。结论大黄素能够有效抑制肥胖小鼠模型的体质量增加,改善糖脂代谢紊乱,其机制与激活BAT、诱导WAT棕色化有关。

关键词：大黄素脂肪可塑性肥胖糖脂代谢棕色脂肪组织白色脂肪组织

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经典名方射干麻黄汤的关键信息考证

中国实验方剂学杂志 2024年

作者：罗成叶远航宁博王飞成都中医药大学临床医学院湖北中医药大学中医学院成都中医药大学基础医学院成都中医药大学附属医院

射干麻黄汤源自于东汉张仲景所著《金匮要略》，是治疗哮喘的经典名方，收录于《古代经典名方目录（第二批）—汉族医药》。通过文献计量学的方法，对射干麻黄汤的方剂源流、组成、基原、炮制、剂量、煎服法、功效与应用等关键信息进行... 详细信息

射干麻黄汤源自于东汉张仲景所著《金匮要略》，是治疗哮喘的经典名方，收录于《古代经典名方目录（第二批）—汉族医药》。通过文献计量学的方法，对射干麻黄汤的方剂源流、组成、基原、炮制、剂量、煎服法、功效与应用等关键信息进行考证分析。经考证，射干麻黄汤史载于《金匮要略》，是治疗寒哮的祖方，后世古籍中均以《金匮要略》原方沿用至今。方中药物基原建议射干选鸢尾科植物射干Belamcanda chinensis的干燥根茎；麻黄选麻黄科草麻黄Ephedra sinica干燥草质茎；生姜选姜科植物姜Zingiber officinale的新鲜根茎；细辛选马兜铃科植物北细辛Asarum heterotropoides var. mandshuricum、汉城细辛Asarum sieboldii var. seou1ense或华细辛Asarum sieboldii的干燥根和根茎；紫菀选菊科植物紫菀Aster tataricus的干燥根和根茎；款冬花选菊科植物款冬Tussilago farfara的干燥花蕾；南五味子选木兰科植物华中五味子Schisandra sphenanthera的干燥成熟果实；大枣选鼠李科植物枣Ziziphus jujuba的干燥成熟果实；半夏选天南星科植物半夏Pinellia ternata的干燥块茎的炮制加工品清半夏。剂量建议为射干41.4 g、麻黄55.2 g、生姜55.2 g、细辛41.4 g、紫菀41.4 g、款冬花41.4 g、南五味子37.5 g、大枣21 g、半夏34.5 g。煎服法为以水2 400 mL，先煮麻黄，去沫，再加入余药一起煎煮，煮取600 mL，温服，一日3次，每次200 mL。射干麻黄汤现代临床最常用于呼吸系统疾病，尤其在治疗成人或小儿的支气管哮喘和咳嗽变异性哮喘等疾病最为普遍，喉中痰鸣音是临床上运用射干麻黄汤的核心症状，“寒饮郁肺”是其核心病机。该文可为射干麻黄汤的现代临床应用及新药研发提供文献参考依据。

关键词：经典名方射干麻黄汤方剂源流基原炮制煎服法功效临床应用

雷公藤甲素对Ⅱ型胶原诱导性关节炎雌性大鼠生殖毒性的影响

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中国中药杂志 2024年第11期49卷 3061-3069页

作者：樊媛芳苏晓慧徐颖孔祥英刘立玲田雅格林娜中国中医科学院中药研究所北京100700

为研究雷公藤甲素(triptolide, TP)对Ⅱ型胶原诱导性关节炎(collagen induced arthritis, CIA)雌性大鼠生殖系统的毒性作用及机制,将50只SD大鼠随机分为正常组(Con),模型组(CIA),雷公藤片临床等效剂量0.5、1、2倍组(含雷公藤甲素3.75、... 详细信息

为研究雷公藤甲素(triptolide, TP)对Ⅱ型胶原诱导性关节炎(collagen induced arthritis, CIA)雌性大鼠生殖系统的毒性作用及机制,将50只SD大鼠随机分为正常组(Con),模型组(CIA),雷公藤片临床等效剂量0.5、1、2倍组(含雷公藤甲素3.75、7.5、15μg·kg^(-1)·d^(-1)),每组10只,首次免疫后当日开始灌胃给药,每天1次,给药42 d。分别于第21、42天取材,计算子宫和卵巢脏器指数;显微镜下观察子宫和卵巢组织病理形态学变化;ELISA法检测卵巢组织匀浆中雌二醇(estradiol, E_(2))及细胞色素P450A1(aromatase, CYP19A1)水平;免疫组织化学法检测卵巢组织中通路相关蛋白转化生长因子β3(transforming growth factor β3, TGFβ3)、细胞信号传导分子3(mothers against decapentaplegic homolog 3, Smad3)及肾上腺核受体1(steroidogenic factor-1, SF-1)表达水平。并在体外建立中国仓鼠卵巢(Chinese hamster ovary, CHO)细胞系,经TP给药(30、60、120 nmol·L^(-1))24 h后MTT法检测细胞增殖,流式细胞术检测细胞凋亡,蛋白免疫印迹(Western blot)法检测细胞中TGFβ3、Smad3及SF-1蛋白表达,并通过免疫荧光检测SF-1因子入核情况。结果表明,与模型组比较,TP各给药组在给药21、42 d子宫腺体数、总卵泡数、成熟卵泡数、黄体数均有降低趋势,但差异并无统计学意义,仅2倍TP在给药42 d时可显著增加闭锁卵泡数;TP 3.75μg·kg^(-1)·d^(-1)在给药21 d即可显著降低E_(2)水平,但对雌激素合成限速酶CYP19A1无显著影响,但可显著降低卵巢组织TGFβ3、Smad3因子表达,且无论给药21 d还是42 d,TP 7.5、15μg·kg^(-1)·d^(-1)均显著降低SF-1因子表达。TP可显著促进体外卵巢细胞凋亡,给药24 h后,凋亡主要集中在凋亡晚期;且60 nmol·L^(-1) TP即可显著降低TGFβ3、Smad3及SF-1蛋白表达,并呈剂量依赖性。综上所述,2倍以下临床等效剂量的TP灌胃21、42 d并未引起CIA大鼠子宫、卵巢组织明显的生殖损伤,仅在2倍临床等效剂量给药42 d时,闭锁卵泡数发生显著变化。TP通过抑制TGFβ3/Smad3/SF-1通路表达发挥体内生殖靶器官及体外卵巢细胞生殖毒性作用。

关键词：雷公藤甲素胶原诱导性关节炎雌性大鼠卵巢功能毒性毒性机制

基于Cx43研究产前应激对子代大鼠睾丸发育的影响及左归丸干预作用

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中国中药杂志 2024年第1期49卷 197-207页

作者：萧闵曹继刚江晓翠王朝阳龚健陈思易周艳艳赵敏湖北中医药大学实验动物中心湖北武汉430065 湖北中医药大学基础医学院湖北武汉430065

基于缝隙连接蛋白43(connexin 43, Cx43)研究产前应激大鼠影响子代睾丸发育的机制及左归丸的防治作用。制备SD孕鼠40只,随机分为空白对照组、模型组、左归丸高剂量组(18.9 g·kg^(-1))、左归丸低剂量组(9.45 g·kg^(-1))、维生素E组(1.4... 详细信息

基于缝隙连接蛋白43(connexin 43, Cx43)研究产前应激大鼠影响子代睾丸发育的机制及左归丸的防治作用。制备SD孕鼠40只,随机分为空白对照组、模型组、左归丸高剂量组(18.9 g·kg^(-1))、左归丸低剂量组(9.45 g·kg^(-1))、维生素E组(1.44 mg·kg^(-1))。除空白对照组以外,其余各组通过慢性不可预测轻度应激法复制产前应激(prenatal stress, PS)孕鼠模型。采用糖水偏好实验、旷场实验、酶联免疫吸附法(enzyme linked immunosorbent assay, ELISA)检测糖皮质激素(glucocorticoids, GC)含量评估PS孕鼠模型;ELISA法检测血清甲状腺素4(thyroxine 4, T4)、睾酮(testosterone, T)、促卵泡生长激素(follicle-stimulating hormone, FSH)评估肾虚状态及性激素水平;苏木素-伊红(hematoxylin-eosin, HE)染色评估睾丸生殖细胞状况;全自动精子分析仪检测精子质量;免疫荧光双染检测子代大鼠睾丸Cx43蛋白、促卵泡激素受体(follicle-stimulating hormone receptor, FSHR)表达;实时荧光定量聚合酶链式反应法(real-time fluorescent quantitative PCR, RT-PCR)检测Cx43、促卵泡生长激素受体(FSHR)、磷脂酰肌醇-3-激酶(phosphatidylinositol 3 kinase, PI3K)、蛋白激酶B(protein kinase B, Akt)基因mRNA表达;蛋白免疫印迹(Western blot, WB)法检测子代大鼠睾丸Cx43、PI3K、FSHR、Akt蛋白表达。PS诱发子代大鼠睾丸发育障碍,HE染色结果显示,出生当天子代雄鼠睾丸曲精小管数量减少,血清FSH升高,睾丸组织Cx43水平降低,60日龄子代雄鼠睾丸生精功能降低,精子质量下降,血清FSH升高,T降低,睾丸组织Cx43、FSHR、PI3K、Akt蛋白及mRNA水平均降低;而给予左归丸防治后对子代大鼠上述睾丸发育异常及功能障碍均有改善。综上,左归丸可能通过激活PI3K/Akt通路调节睾丸Cx43表达改善PS对子代大鼠睾丸发育及生精功能的影响。

关键词：产前应激连接蛋白43 子代左归丸睾丸发育

基于方剂靶点谱效关系的中成药临床精准定位模式探索——以芪蛭通络胶囊为例

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中国实验方剂学杂志 2024年第3期30卷 98-104页

作者：于亚南李兵刘骏王忠中国中医科学院中医临床基础医学研究所北京100700 中国中医科学院中药研究所北京100700

中成药临床价值是中药产业发展的核心方向。“精准化”的临床定位决定了从哪个角度证明药物的价值,是凸显临床价值的关键环节。该文以中成药“芪蛭通络胶囊”临床定位研究为例,展示“方剂靶点谱效比较-方剂核心价值发现-临床定位试验确... 详细信息

中成药临床价值是中药产业发展的核心方向。“精准化”的临床定位决定了从哪个角度证明药物的价值,是凸显临床价值的关键环节。该文以中成药“芪蛭通络胶囊”临床定位研究为例,展示“方剂靶点谱效比较-方剂核心价值发现-临床定位试验确证”的中成药临床精准定位关键技术框架。该技术框架靶向临床精准定位需要解决的系列问题,在临床试验开展前,基于方剂多组分、多靶点及临床适应证多表型数据的多组学网络分析技术,发现中药品种的核心价值,预测其可能的临床优势,继而再针对其预测的临床优势选择合理的疗效指标,结合动态灵活的创新性临床试验判断及验证其临床疗效,提高临床定位的成功率。该研究模式将“组学技术”与“循证”相结合,定位“精准循证”的理念,旨在为建立具有中医药特色的中成药上市后精准用药与定位提供一种新的策略与方法,也为中医学走向精准医学提供更多技术层面的思考。

关键词：方剂组学临床定位靶点谱效精准循证芪蛭通络胶囊

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肛肠疾病术后止痛研究进展

中文科技期刊数据库（引文版）医药卫生 2024年第2期 5-8页

作者：唐晓艳黎海龙湖北中医药大学中医学院湖北武汉430000

随着经济的发展,群众生活水平的提升,随之而来的是人类生活习惯、饮食习惯、社会习惯的改变,一系列改变导致医学研究发展到更多的临床疾病。近年来越来越受到重视的肛肠疾病,具有发病率高、复发率高的特点,严重影响人类生活质量,有大型... 详细信息

随着经济的发展,群众生活水平的提升,随之而来的是人类生活习惯、饮食习惯、社会习惯的改变,一系列改变导致医学研究发展到更多的临床疾病。近年来越来越受到重视的肛肠疾病,具有发病率高、复发率高的特点,严重影响人类生活质量,有大型流行病学调查结果显示,18岁以上人群中痔疮、肛瘘、肛周脓肿、肛裂、结直肠炎等常见肛肠疾病的发病率高达51.14%,故对肛肠疾病的临床研究也越来越多,现代小肛肠手术治疗技术已经达到成熟,在痔疮、肛周脓肿、肛瘘方面我国中医外科传统疗法有着得天独厚的优势,然而在关注手术技术提升的同时,肛肠术后疼痛也成为一个不可忽视的方面,很多患者在肛肠术后易出现疼痛的情况,为了进一步提升患者生活质量,临床术后止痛的研究也得到重视,特别是在中药外用、熏洗、配合中药口服、针灸、穴位注射等方式上有进一步进展。本文在多方查阅资料后对肛肠疾病术后止痛的研究进展作相关的论述。

关键词：肛肠疾病术后止痛针灸中药熏洗穴位注射

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稀有人参皂苷的应用基础与开发利用研究进展

中国中药杂志 2024年第2期49卷 304-314页

作者：郭佳龙刘畅王瑶袁成福袁丁何毓敏三峡大学健康医学院湖北宜昌443002 三峡大学国家中医药管理局中药药理科研三级实验室湖北宜昌443002 三峡大学基础医学院湖北宜昌443002

稀有人参皂苷是一类天然含量稀少、生物利用度较高、生物学活性较突出的次生皂苷,其获得途径通常是由人参属植物中直接提取的原型皂苷经生物学或化学方法转化得到,近来年还出现了利用代谢工程与合成生物学技术创建的微生物细胞工厂合成... 详细信息

稀有人参皂苷是一类天然含量稀少、生物利用度较高、生物学活性较突出的次生皂苷,其获得途径通常是由人参属植物中直接提取的原型皂苷经生物学或化学方法转化得到,近来年还出现了利用代谢工程与合成生物学技术创建的微生物细胞工厂合成的途径。稀有人参皂苷因其在提高机体免疫功能、抗肿瘤等方面的显著生物活性而受到广泛关注。目前关于稀有人参皂苷综述多数集中在转化制备、工艺优化及药理活性等方面,而在产业化分析方面有所不足。该文结合国内外相关文献整理总结了目前常见稀有人参皂苷的结构类型、药理活性、获取来源以及转化途径,并概括了目前已有稀有人参皂苷制备过程中存在的问题,讨论了未来的研究与利用展望,以期为提升稀有人参皂苷的基础研究水平,并促进其产业化发展提供理论依据。

关键词：人参属稀有人参皂苷应用基础开发利用

丹参酮ⅡA通过Nrf2信号通路抑制肝组织铁死亡对非酒精性脂肪肝大鼠肝脏的保护作用

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中国中药杂志 2024年第6期49卷 1611-1620页

作者：秦智周敏武汉体育学院运动医学院湖北武汉430079 武汉航海职业技术学院航海技术系湖北武汉430062

探讨丹参酮ⅡA(tanshinoneⅡA,TSⅡA)对非酒精性脂肪肝(non⁃alcoholic fatty liver disease,NAFLD)大鼠肝脏的保护作用,及其通过核因子E2相关因子2(nuclear factor E2⁃related factor 2,Nrf2)信号通路对肝细胞铁死亡的调控机制。通过高脂饲料连续喂养12周构建NAFLD大鼠模型,造模成功后分为模型组,TSⅡA低、高剂量组,抑制剂组,另设对照组。通过酶联免疫吸附试剂盒检测血清超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)和脂质过氧化产物丙二醛(malondialdehyde,MDA)含量;通过生化分析检测血清中天门冬氨酸氨基转移酶(aspartate aminotransferase,AST)、丙氨酸氨基转移酶(alanine aminotransfe⁃rase,ALT)、总胆固醇(total cholesterol,TC)、甘油三酯(triglycerides,TG)含量;苏木素⁃伊红(HE)染色检测肝组织病理损伤;通过脱氧核糖核苷酸末端转移酶介导的缺口末端标记法(terminal⁃deoxynucleoitidyl transferase⁃mediated nick end labeling,TUNEL)试剂盒检测肝组织的细胞凋亡;通过油红O染色检测各组大鼠肝组织脂质沉积;通过MitoSOX染色检测各组大鼠肝组织中氧自由基(reactive oxygen species,ROS)含量;通过普鲁士蓝染色检测肝组织中铁沉积;通过Western blot法检测肝组织中Nrf2、血红素加氧酶⁃1(heme oxygenase⁃1,HO⁃1)、谷胱甘肽过氧化物酶4(glutathione peroxidase 4,GPX4)、铁死亡抑制蛋白1(ferroptosis suppressor protein 1,FSP1)、B淋巴细胞瘤⁃2(B cell lymphoma⁃2,Bcl⁃2)和Bcl⁃2相关X蛋白(Bcl⁃2 associated X protein,Bax)的表达。结果显示,TSⅡA能明显降低大鼠血清中MDA、AST、ALT、TC和TG含量,升高SOD活性;下调肝组织细胞凋亡率,下调组织脂质沉积、ROS含量以及铁沉积;上调肝组织Nrf2、HO⁃1、FSP1、GPX和Bcl⁃2的表达,抑制肝组织Bax的表达;而抑制剂(ML385)可部分逆转TSⅡA对肝组织的保护作用。综上,TSⅡA能抑制大鼠NAFLD后肝细胞的铁死亡,下调肝组织ROS含量,降低肝组织中脂质蓄积,这可能与激活Nrf2信号通路有关。

关键词：丹参酮ⅡA 非酒精性脂肪肝核因子E2相关因子2信号通路铁死亡脂质沉积