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动物细胞中活性氧的生成及代谢

生命科学 2015年第5期27卷 609-617页

作者：耿军伟于涵林枝薛凌管敏鑫温州医科大学Attardi线粒体生物医学研究院温州325035 温州医科大学浙江省医学遗传学重点实验室温州325035 浙江大学生命科学学院杭州310058

我们生活在一个氧气充足的环境中,氧自由基参与的化学反应是需氧生物代谢的一部分。生理低水平的活性氧(reactive oxygen species,ROS)作为信使分子介导许多生理过程。同时,活性氧积累和氧化损伤参与许多疾病的病理过程。因此,活性氧分... 详细信息

我们生活在一个氧气充足的环境中,氧自由基参与的化学反应是需氧生物代谢的一部分。生理低水平的活性氧(reactive oxygen species,ROS)作为信使分子介导许多生理过程。同时,活性氧积累和氧化损伤参与许多疾病的病理过程。因此,活性氧分子在生理和病理过程中发挥的作用越来越受到人们的关注。现对细胞内可能产生活性氧的部位及其产生机制进行综述,总结概括了细胞内存在的抗氧化系统,列举了目前检测活性氧的方法及其局限性,提出了目前活性氧研究领域亟待解决的问题,最后对临床药理学的靶向抗氧化剂治疗进行展望。

关键词： ROS 生理学病理学

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血压的性别差异与小鼠肾脏钠离子通道的关系

中国比较医学杂志 2016年第9期26卷 13-18页

作者：王伟俞国峰程梦婷赵蓉刘珍温州医科大学检验医学院生命科学学院浙江省遗传学重点实验室浙江温州325035

目的研究雌雄小鼠的血压、肾脏尿钠排泄以及相关的肾脏钠离子通道和信号通路,初步探讨血压的性别差异与肾脏钠离子通道的关系。方法选取成年雌雄小鼠,用无创血压仪检测小鼠血压,火焰分光光度计测量小鼠血、尿钠离子浓度,Real-time PCR和... 详细信息

目的研究雌雄小鼠的血压、肾脏尿钠排泄以及相关的肾脏钠离子通道和信号通路,初步探讨血压的性别差异与肾脏钠离子通道的关系。方法选取成年雌雄小鼠,用无创血压仪检测小鼠血压,火焰分光光度计测量小鼠血、尿钠离子浓度,Real-time PCR和Western-Blot检测小鼠肾脏钠氯同向转运体(NCC)、钠钾氯同向转运体(NKCC2)、上皮钠离子通道(ENa C)的表达水平,以及上游的缺乏赖氨酸的丝氨酸苏氨酸蛋白激酶(WNK激酶)的mRNA水平。结果雌鼠血压低于雄鼠,尿钠排泄高于雄鼠,NCC、NKCC2的mRNA和蛋白水平均明显增加,ENa C无明显差异,WNK4显著升高,WNK1无差异。结论雌鼠血压低于雄鼠可能是由雌鼠尿钠排泄增加导致,WNK4-NCC/NKCC2信号通路参与其调控。

关键词：性别血压钠离子通道 WNK 小鼠

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铜对线粒体中铁硫蛋白功能的毒性机制研究

中国细胞生物学学报 2016年第7期38卷 811-820页

作者：李艳纯杜璟刘若兰任雪营林楚贤李江辉谭国强吕建新温州医科大学检验医学院、生命科学学院检验医学教育部重点实验室浙江省医学遗传学重点实验室温州325035

该文探讨了铜对线粒体内铁硫蛋白的毒性机理。通过包装慢病毒将Hep G2细胞中铜转运蛋白ATP7B(ATPase copper transporting beta)基因敲低,并用铜离子处理构建高铜细胞模型。通过免疫印迹、胶内酶活、紫外–可见光分光光度法检测细胞线... 详细信息

该文探讨了铜对线粒体内铁硫蛋白的毒性机理。通过包装慢病毒将Hep G2细胞中铜转运蛋白ATP7B(ATPase copper transporting beta)基因敲低,并用铜离子处理构建高铜细胞模型。通过免疫印迹、胶内酶活、紫外–可见光分光光度法检测细胞线粒体内铁硫蛋白、非铁硫蛋白及铁硫簇组装蛋白量和活性的改变;用电镜观察高铜模型中线粒体的形态改变;用海马能量代谢分析仪检测铜离子对细胞能量代谢的影响。结果发现,高铜细胞模型线粒体内铁硫簇组装蛋白ISCA2(ironsulfur cluster assembly 2)及ISCU(iron-sulfur cluster assembly enzyme)水平下降,抑制了铁硫簇的组装,并进一步影响了线粒体内[2Fe-2S]型及[4Fe-4S]型铁硫蛋白功能,但并不影响非铁硫蛋白。高铜状态也影响了呼吸链复合体活性及线粒体能量代谢,并导致线粒体形态发生改变。这些结果表明,异常累积的铜离子也会通过抑制线粒体中铁硫簇的组装,影响线粒体内铁硫蛋白的功能。

关键词：铜毒性铁硫簇铁硫蛋白能量代谢

1例复合杂合突变导致遗传性凝血因子Ⅺ缺陷症的分子致病机制

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中华血液学杂志 2024年第3期45卷 294-298页

作者：陈元秦朗译林双女杨丽红张柯叶龙颖金艳慧王明山温州医科大学附属第一医院医学检验中心浙江省检验诊断及转化研究重点实验室温州325015

1例34岁女性患者因“乳房结节”拟行手术切除,术前检查发现活化部分凝血活酶时间(APTT)66.2 s、凝血因子Ⅺ活性(FⅪ∶C)2%、FⅪ抗原(FⅪ∶Ag)40.3%,患者及家系成员均无异常出血表现。诊断为遗传性凝血因子Ⅺ缺陷症。基因检测发现其F11... 详细信息

1例34岁女性患者因“乳房结节”拟行手术切除,术前检查发现活化部分凝血活酶时间(APTT)66.2 s、凝血因子Ⅺ活性(FⅪ∶C)2%、FⅪ抗原(FⅪ∶Ag)40.3%,患者及家系成员均无异常出血表现。诊断为遗传性凝血因子Ⅺ缺陷症。基因检测发现其F11基因第10外显子c.1107C>A(***351stop)杂合无义突变、第13外显子c.1562A>G(***503Cys)杂合错义突变,其父亲和儿子为***351stop突变的杂合携带者,而母亲和女儿为***503Cys突变的杂合携带者。体外表达结果显示,***351stop突变导致F11基因转录水平显著降低,而***503Cys突变对F11基因转录水平以及蛋白表达水平无影响,但该突变导致细胞培养上清液中FⅪ∶C水平显著降低。

关键词：遗传性凝血因子Ⅺ缺陷症异常出血家系成员无义突变携带者凝血因子Ⅺ 基因检测分子致病机制

两个遗传性蛋白C缺陷症家系的临床特征与基因突变分析

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中华血液学杂志 2023年第11期44卷 952-955页

作者：曾蔓霖杨丽红邹安庆陈元贾恺琦王明山金艳慧温州医科大学附属第一医院医学检验中心浙江省检验诊断及转化研究重点实验室温州325015

蛋白C是一种由肝细胞合成和分泌的维生素K依赖性丝氨酸蛋白酶原^([1]),是机体重要的生理性抗凝物质之一。蛋白C活化后能通过水解活化凝血因子Ⅴ(FⅤa)和活化凝血因子Ⅷ(FⅧa)来抑制凝血酶的产生。遗传性蛋白C缺陷症是由编码蛋白C的基因(... 详细信息

蛋白C是一种由肝细胞合成和分泌的维生素K依赖性丝氨酸蛋白酶原^([1]),是机体重要的生理性抗凝物质之一。蛋白C活化后能通过水解活化凝血因子Ⅴ(FⅤa)和活化凝血因子Ⅷ(FⅧa)来抑制凝血酶的产生。遗传性蛋白C缺陷症是由编码蛋白C的基因(PROC)突变引起的导致常染色体显性遗传疾病,纯合或复合杂合突变导致的严重蛋白C缺陷症极其罕见,发病率约为1/400万^([2]),临床可表现为出生后不久发生的新生儿暴发性紫癜.

关键词：暴发性紫癜遗传性蛋白C缺陷症凝血因子Ⅴ 丝氨酸蛋白酶凝血因子Ⅷ 基因突变分析临床特征蛋白C

与衰老相关的线粒体功能严重缺陷的胞质杂合细胞的分子特征

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中国细胞生物学学报 2017年第8期39卷 1049-1056页

作者：沈露茜袁渭华曹颖黄蓉熊旭升李红智首都医科大学宣武医院北京100053 温州医科大学检验医学与生命科学学院教育部检验医学重点实验室浙江省医学遗传学重点实验室温州325035

该研究组先前建立了含有不同年龄组小鼠神经细胞线粒体的胞质杂合细胞株(其细胞核基因组背景相同),发现老年组较年轻组的胞质杂合细胞线粒体总体功能显著降低。为了研究与衰老相关的线粒体功能严重缺陷的胞质杂合细胞的分子特征,该研究... 详细信息

该研究组先前建立了含有不同年龄组小鼠神经细胞线粒体的胞质杂合细胞株(其细胞核基因组背景相同),发现老年组较年轻组的胞质杂合细胞线粒体总体功能显著降低。为了研究与衰老相关的线粒体功能严重缺陷的胞质杂合细胞的分子特征,该研究采用3个线粒体总体功能极其低下的老年组胞质杂合细胞株(1个正常功能年轻组胞质杂合细胞株作为对照)作为研究对象。首先,证实氧耗水平和ATP合成显著降低(P线粒体DNA(mitochondrial DNA,mt DNA)进行了高通量测序,特别是检出突变型比例低的mt DNA异质性突变,并进一步对呼吸链复合体依赖性氧耗进行了检测。测序结果显示,在老年组胞质杂合细胞中mt DNA点突变明显积累。这些突变包括非编码区的3个变异,据DNA保守性分析结果,其中2个(异质性m.15849G>T、m.16289A>T)可能为有害的;编码区的4个变异,据DNA和氨基酸保守性分析及蛋白质功能预测结果,其中2个(ND5基因的同质性m.12496T>C、Cyt b基因的异质性m.15199A>T)可能为有害的。进一步研究结果显示,同时具有复合体I亚基ND5(或复合体III亚基Cyt b)突变和2个调控区突变的胞质杂合细胞,其复合体I(或复合体III)依赖性呼吸显著降低(P线粒体总体功能异常,其原因可能为,mt DNA调控区和编码区的异质性和同质性突变,以及多重mt DNA突变的累加引起线粒体呼吸链复合体功能的缺陷,进而导致线粒体总体功能异常,从而促进衰老。

关键词：线粒体功能 DNA突变衰老高通量测序小鼠胞质杂合细胞

7城市已婚新生代农民工与已婚城市居民性模式及艾滋病认知比较

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中国艾滋病性病 2022年第12期28卷 1414-1418页

作者：刘小月陈莉温州医科大学精神医学学院浙江温州325035 温州医科大学老年研究院浙江省阿尔兹海默病研究重点实验室浙江温州325035

目的比较7城市已婚新生代农民工(简称农民工)与已婚城市居民(简称城市居民)在性模式及艾滋病认知上的差异,并提出对策建议。方法采用多阶段分层抽样,以长江三角洲和珠江三角洲两大区域1070名农民工与933名城市居民为调查对象,使用性模... 详细信息

目的比较7城市已婚新生代农民工(简称农民工)与已婚城市居民(简称城市居民)在性模式及艾滋病认知上的差异,并提出对策建议。方法采用多阶段分层抽样,以长江三角洲和珠江三角洲两大区域1070名农民工与933名城市居民为调查对象,使用性模式及艾滋病认知问卷进行研究。结果在性观念上,农民工不在意贞操观占61.12%、接受随意性行为占5.33%、赞成婚前性行为占31.50%、赞成婚外性行为占7.94%、赞成闪婚占9.63%,而城市居民分别占54.23%、3.86%、9.00%、1.07%、4.93%,两者差异有统计学意义;在性态度上,与城市居民(25.42±6.63)相比,农民工(31.55±7.04)性态度更加宽容(t=19.97,P<0.001);在性行为上,与城市居民相比,农民工性行为更加开放(P均<0.05),农民工有婚前性行为占78.79%、婚外性行为占7.94%,而城市居民分别占63.02%和5.68%。在艾滋病预防与传播上,农民工错误认知率较高,17.76%认为戴安全套不能减少艾滋病,21.59%认为握手可以传播艾滋病,而城市居民仅占3.54%和5.68%。结论与城市居民相比,农民工性模式表现为开放性、宽容性及偏差性,艾滋病认知表现为不均衡性。农民工性模式及艾滋病认知现状亟待加强。

关键词：已婚新生代农民工已婚城市居民性观念性态度性行为艾滋病认知

US31介导人巨细胞病毒调控系统性红斑狼疮发生的机制研究

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中国免疫学杂志 2021年第24期37卷 3015-3021页

作者：刘春雅金晶李玉芳喻敏姜毅徐利鸳衢州市人民医院肾内科衢州324000 温州医科大学检验医学院、生命科学学院检验医学教育部重点实验室浙江省医学遗传学重点实验室温州325035

目的:研究人巨细胞病毒(HCMV)基因US31调控系统性红斑狼疮(SLE)发生发展的机制。方法:征集临床60例SLE患者和111例健康志愿者,检测SLE患者与健康志愿者血清中抗HCMV-IgG及IgM抗体滴度,检测外周血白细胞中HCMV UL55基因表达,聚类分析SLE... 详细信息

目的:研究人巨细胞病毒(HCMV)基因US31调控系统性红斑狼疮(SLE)发生发展的机制。方法:征集临床60例SLE患者和111例健康志愿者,检测SLE患者与健康志愿者血清中抗HCMV-IgG及IgM抗体滴度,检测外周血白细胞中HCMV UL55基因表达,聚类分析SLE患者外周血单个核细胞(PBMC)中HCMV病毒基因表达谱,鉴定在SLE患者中相对特异性高表达的病毒基因。另外,构建过表达US31基因的重组腺病毒(AdUS31),感染THP1单核细胞和THP1源性的巨噬细胞,分析US31基因对单核-巨噬细胞功能的影响。其次,筛选与US31相互作用的蛋白,细胞水平检测NF-κB相关通路蛋白变化,炎症相关基因TNF-α、IL-8、CCL2、ICAM1变化。分离细胞核和细胞质中的蛋白质,检测US31蛋白细胞定位,细胞水平感染过表达US31蛋白的重组腺病毒后抑制MG132蛋白酶表达,检测NF-κB相关通路蛋白变化。结果:SLE患者的抗HCMV-IgG及IgM抗体滴度均明显高于对照组(P研究显示,SLE患者PBMC中US31表达水平明显高于健康对照人群(P<0.001)。炎症相关基因TNF-α、IL-8、CCL2、ICAM1表达量升高(P<0.001)。NF-κB非经典途径的NF-κB2及前体p100可与US31直接相互作用,US31表达可明显促激活状态的NF-κB2(p52)表达。结论:HCMV诱导US31的表达通过与NF-κB通路相互联系直接改变炎症相关基因的表达,进而调控SLE发生。

关键词：人巨细胞病毒 US31 系统性红斑狼疮

下调线粒体转录因子A对肺腺癌细胞A549成瘤能力和药物敏感性的影响

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中国细胞生物学学报 2016年第4期38卷 375-381页

作者：伍潇怡卢圆圆胡轲轲蓝林华谢德耀刘永章吕斌温州医科大学检验医学院生命科学学院浙江省医学遗传学重点实验室温州325035 温州医科大学附属第一医院心胸外科温州325000

该文初步探讨了下调线粒体转录因子A(mitochondrial transcription factor A,TFAM)对人肺腺癌细胞A549的影响。该研究将靶向TFAM基因的sh RNA慢病毒载体感染A549细胞,应用蛋白免疫印迹(Western blot)方法检测TFAM蛋白质水平,划痕愈合实... 详细信息

该文初步探讨了下调线粒体转录因子A(mitochondrial transcription factor A,TFAM)对人肺腺癌细胞A549的影响。该研究将靶向TFAM基因的sh RNA慢病毒载体感染A549细胞,应用蛋白免疫印迹(Western blot)方法检测TFAM蛋白质水平,划痕愈合实验检测细胞迁移能力,裸鼠成瘤实验检测细胞体内增殖能力,CCK-8实验和Western blot检测细胞毒性及细胞对药物敏感性。结果显示,该研究成功地在A549细胞中下调了TFAM蛋白质水平,TFAM敲低的细胞形态发生改变,愈合能力明显减弱,裸鼠成瘤能力减弱,裸鼠成瘤的体积和体重均具有显著差异,细胞毒性增强,且细胞对阿霉素的敏感性增强。结果表明,下调TFAM可影响细胞迁移能力和体内增殖能力,通过增加细胞凋亡提高肿瘤细胞对抗肿瘤药物阿霉素的敏感性,提示TFAM可作为肺腺癌治疗的潜在靶点。

关键词：线粒体转录因子A A549细胞细胞迁移肿瘤形成药物敏感性