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重组甲型流感病毒NS2蛋白抑制感染小鼠肺组织干扰素的产生

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细胞与分子免疫学杂志 2015年第12期31卷 1615-1619页

作者：朱颜鑫牟秋菊赵兵兵罗红智妍兰露莎江滟贵州医科大学微生物学教研室贵州贵阳550004 贵州医科大学实验动物中心贵州贵阳550004

目的用大肠杆菌表达获得甲型流感病毒(IAV)非结构蛋白2(NS2),并观察NS2蛋白对小鼠肺组织γ干扰素(IFN-γ)产生的影响。方法构建p ET22b(+)/NS2原核表达质粒并转化大肠杆菌Rosetta-gami(2),通过诱导表达、纯化获得NS2。将40只BALB/c小鼠... 详细信息

目的用大肠杆菌表达获得甲型流感病毒(IAV)非结构蛋白2(NS2),并观察NS2蛋白对小鼠肺组织γ干扰素(IFN-γ)产生的影响。方法构建p ET22b(+)/NS2原核表达质粒并转化大肠杆菌Rosetta-gami(2),通过诱导表达、纯化获得NS2。将40只BALB/c小鼠,随机分8组,分别为正常对照组、200μg/kg NS2联合病毒组、200μg/kg NS2联合RNA组、100μg/kg灭活病毒、0.2×半数致死量(LD50)病毒组、50μg/kg病毒RNA组、200μg/kg NS2组和100μg/kg NS2组,各组滴鼻给予小鼠处理。通过反转录PCR、Western blot法分别检测肺组织IFN-γ的mRNA和蛋白表达。结果在异丙基硫代-β-D-半乳糖苷(IPTG)诱导下表达并纯化获得重组NS2;将NS2或/和IAV滴鼻给小鼠后,反转录PCR和Western blot法检测表明NS2联合病毒组的小鼠肺组织IFN-γmRNA和蛋白水平较病毒组均降低。结论 NS2抑制IAV所诱导的小鼠肺组织IFN-γmRNA和蛋白的水平。

关键词：甲型流感病毒非结构蛋白 γ干扰素

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HHV-6:一种新的疱疹病毒

国外医学（微生物学分册） 1990年第6期13卷 244-247页

作者：胡智昌吴洁如李沛涛李秋香李冬田任中原湖南医科大学病毒研究室天津医学院微生物学教研室

人疱疹病毒-6(HHV-6)是一种新发现的疱疹病毒,它与已知人类其它疱疹病毒有明显不同,HHV-6感染在人类中非常普遍,感染后能引起机体的免疫反应。HHV-6感染与人类疾病关系还不大清楚,可能与婴儿红疹、慢性疲劳综合征、角膜结膜干燥综合征... 详细信息

人疱疹病毒-6(HHV-6)是一种新发现的疱疹病毒,它与已知人类其它疱疹病毒有明显不同,HHV-6感染在人类中非常普遍,感染后能引起机体的免疫反应。HHV-6感染与人类疾病关系还不大清楚,可能与婴儿红疹、慢性疲劳综合征、角膜结膜干燥综合征有关。本文就病毒的形态结构、分子生物学、免疫学特性及与人类疾病的关系等作了讨论。

关键词：疱疹病毒 HHV-6

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共受体信号传导与HIV

细胞与分子免疫学杂志 2003年第6期19卷 626-628页

作者：姜山谭锦泉张林杰安徽医科大学免疫学教研室安徽合肥230032

众所周知, CD4分子是HIV-1感染靶细胞的主要受体, 但单纯CD4分子对于病毒进入细胞既不是充分的, 也不是唯一的途径.例如一些高水平表达CD4蛋白的人类细胞, 包括未分化的CD4+单核细胞, 对HIV的感染并不敏感.人-人细胞杂交以及人CD4+细胞... 详细信息

众所周知, CD4分子是HIV-1感染靶细胞的主要受体, 但单纯CD4分子对于病毒进入细胞既不是充分的, 也不是唯一的途径.例如一些高水平表达CD4蛋白的人类细胞, 包括未分化的CD4+单核细胞, 对HIV的感染并不敏感.人-人细胞杂交以及人CD4+细胞与啮齿动物体细胞杂交的研究提示, 除CD4分子外, 细胞膜上的其他某些分子也是HIV进入细胞所必需的.基于此, 1996年Feng等证明, 趋化性细胞因子受体CXCR4可辅助嗜T细胞性HIV-1(X4株)进入宿主细胞.此后, 很快又证明, CCR5可辅助嗜单核-巨噬细胞性HIV-1(R5株)感染靶细胞.这些受体称为HIV-1入侵靶细胞的共受体(coreceptor), 又称辅助受体.由于目前所发现的HIV的共受体绝大多数均是趋化性细胞因子受体, 因此共受体一般多指趋化性细胞因子受体.

关键词：趋化性细胞因子受体信号传导 HIV 共受体

含miR-193b前体基因的重组腺病毒感染K562细胞可抑制其增殖

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细胞与分子免疫学杂志 2015年第4期31卷 452-455页

作者：舒燕齐杰玉王灿蔚于淑静陶崑重庆医科大学基础医学院免疫学教研室分子医学与肿瘤研究中心重庆400016

目的构建小RNA193前体(pre-miR-193b)重组腺病毒,观察miR-193b对慢性髓系白血病K562细胞增殖的影响。方法化学合成miR-193b cDNA序列,克隆进入pAdTrack-CMV穿梭质粒;重组穿梭质粒经PmeⅠ酶切线性化后,转入含有腺病毒骨架质粒pAdEasy-1... 详细信息

目的构建小RNA193前体(pre-miR-193b)重组腺病毒,观察miR-193b对慢性髓系白血病K562细胞增殖的影响。方法化学合成miR-193b cDNA序列,克隆进入pAdTrack-CMV穿梭质粒;重组穿梭质粒经PmeⅠ酶切线性化后,转入含有腺病毒骨架质粒pAdEasy-1的大肠杆菌BJ5183感受态细胞中进行同源重组,获得pAd-miR-193b重组腺病毒质粒,经PacI线性化后转入HEK293细胞包装、扩增。倍比稀释法测定病毒滴度。实时荧光定量PCR检测K562细胞中miR-193b表达水平,MTT法检测K562细胞增殖能力。结果pAd-miR-193b重组腺病毒质粒,经限制性内切酶鉴定和测序分析显示构建成功,并能够高效转染K562细胞;与对照组相比,荧光定量PCR检测显示重组腺病毒载体感染K562细胞后,miR-193b基因表达明显增加;同时高表达miR-193b基因的K562细胞增殖水平低于对照组。结论K562细胞高效表达的miR-193b可抑制K562细胞的增殖。

关键词：腺病毒微小RNA193前体 K562细胞

新型冠状病毒E蛋白结构与免疫优势表位的信息学预测分析

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温州医科大学学报 2021年第3期51卷 209-214,219页

作者：李明洋 SAIDU Kamara 汪琪郭艳茹李青峰朱珊丽陈俊蒋朋飞张丽芳温州医科大学分子病毒与免疫研究所病原生物与免疫学系浙江温州325035

目的:应用生物信息学方法预测和分析新型冠状病毒(SARS-CoV-2)包膜蛋白(E蛋白)的结构及免疫优势表位。方法:从NCBI GenBank数据库中检索SARS-CoV-2 E蛋白的氨基酸序列,通过Expas y服务器上的软件分析预测其理化性质、二级结构、跨膜区域... 详细信息

目的:应用生物信息学方法预测和分析新型冠状病毒(SARS-CoV-2)包膜蛋白(E蛋白)的结构及免疫优势表位。方法:从NCBI GenBank数据库中检索SARS-CoV-2 E蛋白的氨基酸序列,通过Expas y服务器上的软件分析预测其理化性质、二级结构、跨膜区域;并结合其亲水性、表面可及性、极性、抗原性和柔韧性等综合分析,预测其可能的B细胞表位;利用Net CTL1.2 server预测CTL表位;通过Vector NTI对冠状病毒属E蛋白进行同源性分析;同时应用Swiss Model对E蛋白进行三维结构同源建模及功能结构域预测分析。结果:SARS-CoV-2 E蛋白由75个氨基酸残基组成,为跨膜蛋白,跨膜区域以α螺旋为主;E蛋白可能含有2个B细胞表位和6个CTL表位,其免疫优势表位区域分别位于其N端16-34aa和C端50-70aa区段;SARS-CoV-2与SARS-CoV和Bat-SARS-like-CoV E蛋白的免疫优势表位存在极高的同源性;其疏水性跨膜结构和PDZ结合基序分别位于N端12-34aa和C端72-75aa区段。结论:E蛋白为跨膜蛋白,其氨基酸序列的16-34和50-70区段可能为免疫优势表位。

关键词：新型冠状病毒包膜蛋白生物信息学免疫优势表位同源性分析

人乳头瘤病毒16型E7过表达细胞的鉴定及其迁移效应的影响

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病毒学报 2021年第5期37卷 1043-1050页

作者：谭晓淳姜洁林中民谢自新蒋朋飞张丽芳李文姝温州医科大学微生物与免疫教研室温州325000 宁波市第九医院宁波315000 温州医科大学附属第一医院病理科温州325000

鉴定人乳头瘤病毒16型早期蛋白7(HPV16E7)过表达细胞及其迁移效应的影响,为后续基于HPV16E7靶向分子作用机制的研究奠定工作基础。脂质体转染法将本室保存的pcDNA3.1⁃HPV16E7重组真核表达质粒分别转染人胚肾293T细胞(HPV16型DNA阴性)、... 详细信息

鉴定人乳头瘤病毒16型早期蛋白7(HPV16E7)过表达细胞及其迁移效应的影响,为后续基于HPV16E7靶向分子作用机制的研究奠定工作基础。脂质体转染法将本室保存的pcDNA3.1⁃HPV16E7重组真核表达质粒分别转染人胚肾293T细胞(HPV16型DNA阴性)、宫颈癌SiHa细胞株(HPV16 DNA阳性),转染48 h后收集细胞,提取RNA,RT⁃PCR扩增相应的目的基因,Western Blotting和间接免疫荧光实验检测HPV16E7目的蛋白在细胞中的表达。转染24 h的细胞进行细胞划痕和Transwell实验,检测过表达细胞迁移行为的变化。RT⁃PCR结果显示:分别从E7质粒转染的293T、SiHa细胞的cDNA中,均可扩增到250 bp的目的条带;Western Blotting分析结果显示:以HPV16E7单克隆抗体为检测抗体,转染细胞的裂解液中均能在相对分子质量(Mr)约为15000处出现特异性目的条带;间接免疫荧光结果显示:转染细胞中均能检测到目的绿色荧光,且分布于胞浆及细胞核周围;细胞划痕和Transwell实验结果显示:转染E7细胞的迁移效应显著提高。本研究证实了HPV16E7转染细胞后可成功表达,且过表达细胞明显促进了细胞迁移行为,为后续基于HPV16E7迁移相关分子机制及靶向干预等研究奠定了前期工作基础。

关键词：人乳头瘤病毒16型 E7 过表达迁移

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一种新型抗体替代品——亲和体的研究进展

国际生物制品学杂志 2022年第5期45卷 272-276页

作者：杨佳周璐琪(综述) 张丽芳朱珊丽(审校) 温州医科大学基础医学院微生物学与免疫学教研室温州325000

作为抗体的一种新型替代品,亲和体不仅以高亲和力与靶蛋白特异性结合,同时又具备相对分子质量小(~6500)、穿透性强、免疫原性弱和制备过程简单等诸多特性。因此,亲和体在肿瘤靶向治疗、体内成像诊断和生物技术应用等方面具有更突出的优... 详细信息

作为抗体的一种新型替代品,亲和体不仅以高亲和力与靶蛋白特异性结合,同时又具备相对分子质量小(~6500)、穿透性强、免疫原性弱和制备过程简单等诸多特性。因此,亲和体在肿瘤靶向治疗、体内成像诊断和生物技术应用等方面具有更突出的优势和可行性。此文对其特性和应用研究进展做一综述。

关键词：亲和体靶向治疗成像诊断生物技术

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分子生态调节是免疫功能发生的必需机制

免疫学杂志 1997年第2期13卷 131-135页

作者：向近敏林雨霖向连滨刘学锋周峰湖北医科大学病毒研究所暨基础医学院分子生态学研究室美国密西西比大学医学院微生物学免疫学系暨VA医学中心

分子生态调节是免疫功能发生的必需机制向近敏１林雨霖１向连滨２刘学锋１周峰１在首届全国分子生态学学术研讨会上，我们讨论了分子生态学在生命科学中的地位问题，认为包括核酸分子在内的生物活性分子的功能活动，是生命活动的本质所... 详细信息

分子生态调节是免疫功能发生的必需机制向近敏１林雨霖１向连滨２刘学锋１周峰１在首届全国分子生态学学术研讨会上，我们讨论了分子生态学在生命科学中的地位问题，认为包括核酸分子在内的生物活性分子的功能活动，是生命活动的本质所在；分子生态学比分子生物学更应被视...

关键词：分子生态调节免疫功能免疫细胞

UVC诱导CD4^+T细胞表面CRT分子表达的动力学特征

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免疫学杂志 2018年第10期34卷 875-879,885页

作者：沈晨芳薛向阳江明华周海霞温州医科大学第二临床医学院 325035 温州医科大学基础医学院微生物和免疫学教研室 325035 温州医科大学附属第二医院检验科 325027 温州医科大学附属第二医院血液科 325027

目的探讨UVC处理后CD4^+T淋巴细胞表面钙网蛋白(calreticulin,CRT)的分子动力学特征。方法应用免疫磁珠分选技术分选得到人外周血CD4^+T淋巴细胞,采用流式、细胞免疫荧光等方法检测UVC处理后CD4^+T淋巴细胞表面CRT的分子动力学改变,并... 详细信息

目的探讨UVC处理后CD4^+T淋巴细胞表面钙网蛋白(calreticulin,CRT)的分子动力学特征。方法应用免疫磁珠分选技术分选得到人外周血CD4^+T淋巴细胞,采用流式、细胞免疫荧光等方法检测UVC处理后CD4^+T淋巴细胞表面CRT的分子动力学改变,并分析植物血球凝集素(phytohaemagglutinin,PHA)处理后对CD4^+T淋巴细胞表面CRT的分子动力学的影响。结果1)活化的CD4^+T淋巴细胞经UVC处理后细胞表面出现CRT的暴露,并且随着UVC处理时间的延长,CRT的暴露也随之增多。2)经UVC处理后的CD4^+T淋巴细胞出现细胞凋亡现象,且UVC诱导的CRT暴露早于凋亡过程中的磷脂酰丝氨酸的外翻。3)还发现经PHA刺激活化的CD4^+T细胞相对于未活化的细胞而言细胞表面CRT的暴露量更多。结论 UVC处理使CD4^+T淋巴细胞表面出现CRT分子动力学改变的一系类特征为将来进一步研究经UVC灭活后的CD4^+T淋巴细胞诱导机体产生免疫原性反应(T细胞疫苗)的机制提供了一定的理论基础。

关键词： CD4^+T细胞钙网蛋白 UVC