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磷脂酶A_2亚型及其与男性生殖相关性研究

中国细胞生物学学报 2013年第1期35卷 71-78页

作者：谢海锋李坤倪崖温州医学院检验医学院生命科学学院温州325035 浙江省医学科学院生殖生理实验室杭州310013

磷脂酶A2(phospholipase A2,PLA2)是参与细胞代谢活动、信号转导等过程的重要酶类之一,广泛分布于哺乳动物机体内。随着对磷脂酶A2研究的深入,目前已有30余种磷脂酶A2亚型被逐一鉴定,磷脂酶A2亚型与男性生殖相关性研究也有了新的发现。... 详细信息

磷脂酶A2(phospholipase A2,PLA2)是参与细胞代谢活动、信号转导等过程的重要酶类之一,广泛分布于哺乳动物机体内。随着对磷脂酶A2研究的深入,目前已有30余种磷脂酶A2亚型被逐一鉴定,磷脂酶A2亚型与男性生殖相关性研究也有了新的发现。该文通过对磷脂酶A2的最新亚型分类及其特征、磷脂酶A2在男性生殖系统中的分布、磷脂酶A2参与精子顶体反应及其信号转导通路以及与男性生殖相关的磷脂酶A2亚型等内容进行分析,研究磷脂酶A2在男性生殖系统中发挥的作用及其机制,为男性不育的诊断和治疗提供理论依据和思路策略。

关键词：磷脂酶A2 亚型男性生殖顶体反应信号转导

两种脾虚证大鼠肝脏线粒体自噬及细胞凋亡的比较研究

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中国中西医结合杂志 2019年第11期39卷 1359-1365页

作者：陈慧陈燕王丹项伟玲吕斌金丽琴温州医科大学检验医学院生命科学学院

目的比较脾气虚证和脾不统血证两种脾虚证模型大鼠肝脏线粒体自噬及细胞凋亡水平,探讨脾虚证发生发展过程中,肝脏细胞状态变化及可能的机制。方法32只SD大鼠随机分为4组:正常对照组(8只)、低分子肝素钠对照组(8只)、脾气虚组(8只)、脾... 详细信息

目的比较脾气虚证和脾不统血证两种脾虚证模型大鼠肝脏线粒体自噬及细胞凋亡水平,探讨脾虚证发生发展过程中,肝脏细胞状态变化及可能的机制。方法32只SD大鼠随机分为4组:正常对照组(8只)、低分子肝素钠对照组(8只)、脾气虚组(8只)、脾不统血组(8只)。采用劳倦过度加饮食失节的方法复制脾气虚证大鼠模型,在脾气虚证的基础上采用低分子肝素钠诱导出血的方法构建脾不统血证大鼠模型;使用化学发光法检测大鼠肝组织三磷酸腺苷(ATP)含量;JC-1荧光探针法检测大鼠肝组织线粒体膜电位;Western Blot法检测各组大鼠肝组织线粒体自噬相关蛋白PINK1、Parkin、LC3Ⅱ/Ⅰ的表达水平和细胞凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax、Cleaved caspase-3、线粒体外Cyt-C的表达水平;使用荧光定量法检测PINK1、Parkin、Bcl-2、Bax mRNA水平。结果与正常对照组及低分子肝素钠组比较,两种脾虚证大鼠肝组织线粒体膜电位,ATP含量,PINK1、Bcl-2蛋白及mRNA水平显著降低(P线粒体外Cyt-C蛋白水平、Bax mRNA水平显著升高(P线粒体膜电位、ATP含量降低(P线粒体外Cyt-C蛋白水平、Bcl-2蛋白及mRNA水平下降(P线粒体过度损伤导致线粒体自噬紊乱,进一步导致了细胞凋亡,随着脾虚证的加重,肝组织细胞凋亡程度加深。

关键词：脾气虚证脾不统血证肝脏细胞线粒体自噬细胞凋亡

质粒介导KPC-2型碳青霉烯酶弗劳地柠檬酸盐杆菌的研究

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中华检验医学杂志 2009年第11期32卷 1233-1236页

作者：王彩虹陈坚郭杰黄金伟张雪青余方友温州医学院检验医学院生命科学学院 325000 温州医学院附属第一医院检验科丽水市中心医院检验科

碳青霉烯类抗生素对革兰阴性杆菌具有强大的抗菌活性，是治疗由多重耐药革兰阴性杆菌导致的医院感染的有效药物，尤其适用于产超广谱B内酰胺酶（ESBLs）和AmpC酶的肠杆菌科细菌引起的严重感染。随着碳青霉烯类抗生素在临床上使用增加，... 详细信息

碳青霉烯类抗生素对革兰阴性杆菌具有强大的抗菌活性，是治疗由多重耐药革兰阴性杆菌导致的医院感染的有效药物，尤其适用于产超广谱B内酰胺酶（ESBLs）和AmpC酶的肠杆菌科细菌引起的严重感染。随着碳青霉烯类抗生素在临床上使用增加，革兰阴性杆菌临床株对该类药物的耐药性不断增加，特别是非发酵菌的耐药率升高明显，但在肠杆菌科细菌中少见。

关键词：碳青霉烯酶酸盐杆菌质粒介导耐药革兰阴性杆菌碳青霉烯类抗生素弗劳地肠杆菌科细菌柠檬

免疫磁珠富集与免疫层析一体化检测甲型流感病毒的研究

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中华微生物学和免疫学杂志 2016年第4期36卷 310-315页

作者：吴学敏张丽萍马雪征赵勇高基民胡孔新温州医科大学检验医学院、生命科学学院 325000 中国检验检疫科学研究院北京100176

目的：以偶联甲型流感病毒单克隆抗体的免疫磁珠作为示踪标记物，利用免疫磁珠的分离、富集特性，建立免疫磁珠富集与免疫层析一体化的甲型流感病毒检测方法。方法以 EDC/NHS方法制备了免疫磁珠，采用双抗体夹心法和免疫层析技术，建立... 详细信息

目的：以偶联甲型流感病毒单克隆抗体的免疫磁珠作为示踪标记物，利用免疫磁珠的分离、富集特性，建立免疫磁珠富集与免疫层析一体化的甲型流感病毒检测方法。方法以 EDC/NHS方法制备了免疫磁珠，采用双抗体夹心法和免疫层析技术，建立甲型流感病毒的磁珠免疫层析直接检测方法，并进一步将磁珠免疫层析直接检测法与免疫磁珠分离技术相结合建立一种新型的免疫磁珠富集与免疫层析一体化检测技术。通过检测甲型流感病毒感染的患者和正常人的临床咽拭子样本，与常规的胶体金免疫层析法进行比较来评价一体化检测方法的特异性、灵敏度及阳性符合率等指标。结果磁珠免疫层析直接检测方法与胶体金免疫层析法在特异性、灵敏度上大致相同，一般可以检出荧光定量PCR检测Ct值≤22的甲型流感病毒阳性样本，而一体化检测方法可以检出Ct值≤28的阳性样本，灵敏度得到明显提升。结论建立了检测甲型流感病毒抗原的免疫磁珠富集与免疫层析一体化检测技术，适用于临床现场快速检测。

关键词：甲型流感病毒免疫磁珠免疫层析快速检测

环状RNA PVT1促进结直肠癌细胞的增殖并抑制凋亡

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中国生物化学与分子生物学报 2021年第9期37卷 1241-1249页

作者：李韵金子慧张瑞瑞楼哲丰金红蕾温州医科大学检验医学院生命科学学院浙江温州325035

环状RNA(circular RNAs,circRNAs)是一类新型的长非编码RNA,已有研究表明circRNAs可调控肿瘤的发生发展。本研究首先通过高通量测序技术检测5对结直肠癌组织及其配对的癌旁正常组织中的circRNAs差异表达谱,鉴定出477种差异表达的circRN... 详细信息

环状RNA(circular RNAs,circRNAs)是一类新型的长非编码RNA,已有研究表明circRNAs可调控肿瘤的发生发展。本研究首先通过高通量测序技术检测5对结直肠癌组织及其配对的癌旁正常组织中的circRNAs差异表达谱,鉴定出477种差异表达的circRNAs,其中252种表达上调,225种表达下调,选取表达上调最为显著的circRNA——circPVT1(circRNA plasmacytoma variant translocation 1,circPVT1),利用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测150对结直肠癌组织及癌旁正常组织样本中circPVT1的表达水平,获得与高通量测序一致性结果,进一步证实circPVT1在结直肠癌中高表达。同时,在多种结直肠癌细胞系中证实circPVT1的表达较正常结直肠黏膜细胞高,差异均具有统计学意义(P生物学功能。结果表明,circPVT1在体外可显著抑制结直肠癌细胞的凋亡、加快细胞周期进程以促进结直肠癌细胞增殖。综上所述,circPVT1在结直肠癌的生长过程中发挥促癌作用,有望作为治疗结直肠癌的潜在靶点。

关键词：结直肠癌 circPVT1 增殖凋亡

肺炎链球菌StkP激酶与β-内酰胺类抗生素结合能力及耐药相关性分析

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中华微生物学和免疫学杂志 2017年第6期37卷 424-430页

作者：黄燕颖张新蔚楼永良严杰孙爱华温州医科大学检验医学院、生命科学学院 325035 杭州医学院 310053 浙江大学医学院病原生物学系杭州310058

目的确定肺炎链球菌丝氨酸/苏氨酸激酶StkP与耐药相关性及其胞外区与β-内酰胺类抗生素结合的能力.方法采用插入失活法构建肺炎链球菌ATCC6306株stkP基因敲除（ΔstkP）突变株.采用E-test检测青霉素（PCN）和头孢噻肟（CTX）对Δstkp... 详细信息

目的确定肺炎链球菌丝氨酸/苏氨酸激酶StkP与耐药相关性及其胞外区与β-内酰胺类抗生素结合的能力.方法采用插入失活法构建肺炎链球菌ATCC6306株stkP基因敲除（ΔstkP）突变株.采用E-test检测青霉素（PCN）和头孢噻肟（CTX）对Δstkp突变株及其野生株的最低抑菌浓度（MIC）.采用生物信息学软件确定肺炎链球菌ATCC6306株丝氨酸/苏氨酸激酶编码基因（stkP）胞外区（EC-StkP）、构建EC-StkP三维空间结构模型、分析EC-StkP结构与功能关系.采用PCR扩增stkP基因胞外区片段（EC-stkP）,T-A克隆后测序.构建EC-stkP原核表达系统,SDS-PAGE联合凝胶图像分析系统检查目的重组蛋白（EC-rStkP）表达情况,Ni-NTA亲和层析法提纯EC-rStkP.采用等温滴定量热法（VT-ITC）和表面等离子共振法（Biacore）检测EC-rStkP与PCN和CTX结合能力.结果肺炎链球菌ATCC6306株对PCN和CTX敏感（MIC=0.06和0.12 μg/ml）,但ΔstkP突变株对PCN和CTX高度耐药（MIC=16和32 μg/ml）.肺炎链球菌ATCC6306株StkP C端295 aa片段为胞外区,该胞外区有4个青霉素结合蛋白和丝氨酸/苏氨酸激酶相关（PASTA）功能结构域.克隆的stkP胞外区序列与GenBank中相应基因核苷酸和氨基酸序列相似性分别为99.6%和100%.构建的EC-stkP原核表达系统可表达可溶性***和CTX均能与EC-rStkP结合,但后者结合EC-rStkP能力强于前者.结论肺炎链球菌stkP基因与β-内酰胺类抗生素耐药性密切相关,其表达产物丝氨酸/苏氨酸激酶StkP具有识别并结合β-内酰胺类抗生素的能力.

关键词：肺炎链球菌丝氨酸/苏氨酸激酶 β-内酰胺类抗生素结合基因敲除/耐药

mtDNA单倍型D4和B4a细胞线粒体功能及其影响衰老发生的机制研究

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中国细胞生物学学报 2017年第6期39卷 756-764页

作者：周超高静熊静霆仇如意沈丽君吕建新温州医科大学检验医学院、生命科学学院浙江省医学遗传学重点实验室Attardi线粒体生物医学研究院温州325035 浙江大学医学院附属儿童医院杭州310003 杭州医学院杭州310053

该文初步分析了两个与衰老发生抑制及促进的线粒体DNA(mitochondrial DNA,mtDNA)单倍型D4和B4a细胞的线粒体功能情况,并对其影响衰老的可能机制进行了探究。通过细胞融合构建两个核背景一致但mtDNA单倍型分别是D4和B4a的胞质杂合细胞。... 详细信息

该文初步分析了两个与衰老发生抑制及促进的线粒体DNA(mitochondrial DNA,mtDNA)单倍型D4和B4a细胞的线粒体功能情况,并对其影响衰老的可能机制进行了探究。通过细胞融合构建两个核背景一致但mtDNA单倍型分别是D4和B4a的胞质杂合细胞。应用RT-PCR方法检测细胞mt DNA拷贝数以及线粒体基因的mRNA水平,氧电极法和非变性梯度聚丙烯酰胺凝胶电泳(blue native polyacrylamide gelelectrophoresis,BN-PAGE)技术检测细胞线粒体氧化呼吸能力及线粒体复合体水平,TMRM染料和DCFH-DA染料法检测细胞线粒体膜电位和活性氧(reactive oxygen species,ROS)生成水平。结果显示,D4单倍型细胞线粒体氧呼吸能力、膜电位水平以及线粒体基因(mt-ND1、mt-7S RNA)转录水平均明显高于B4a单倍型细胞,而ROS生成水平明显降低,mt DNA拷贝数则并无明显差异。该结果表明,在D4单倍型细胞中,通过提高某些线粒体基因的表达,使得线粒体呼吸复合体表达得到提升,继而提高线粒体氧化呼吸功能,降低细胞氧化损伤,从而延缓衰老的发生。

关键词：线粒体DNA单倍型线粒体功能氧化损伤衰老

基于高通量测序分析入境羊毛微生物群落结构特征

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中国人兽共患病学报 2020年第6期36卷 481-486,513页

作者：韩阿祥康雨童丰新倩谢旦立关万春楼永良温州医科大学检验医学院、生命科学学院温州325035

目的通过高通量测序的方法了解来自5个国家5批入境羊毛表面携带的致病菌和微生物群落结构特征,为国境卫生以及传染病预防提供有效的数据支撑。方法通过浸泡搅拌震荡的方法收集5批羊毛样本表面的总细菌并提取DNA,采用Illumina Miseq高通... 详细信息

目的通过高通量测序的方法了解来自5个国家5批入境羊毛表面携带的致病菌和微生物群落结构特征,为国境卫生以及传染病预防提供有效的数据支撑。方法通过浸泡搅拌震荡的方法收集5批羊毛样本表面的总细菌并提取DNA,采用Illumina Miseq高通量测序的方法,主要分析比较5批羊毛样本的α-多样性指数、微生物群落结构以及致病菌。结果α-多样性指数的结果表明5批羊毛表面微生物群落结构的多样性具有明显差异,其中德国样本的多样性最高,法国样本的多样性最低,美国、阿根廷、比利时则介于之间。主成分分析结果表明德国和比利时样本的微生物组成相似度较高且与其他3个国家之间的微生物群落结构组成有明显差异。微生物群落结构的16S绝对定量结果表明在微生物总量绝对丰度层面美国>阿根廷>德国>比利时>法国,阿根廷、德国、比利时3个国家的羊毛表面微生物以变形菌门(Proteobacteria)为主,厚壁菌门(Firmicutes)其次,而美国、法国以厚壁菌门(Firmicutes)为主,变形菌门(Proteobacteria)其次。在种属水平上,5批羊毛样本均检测出鲁氏不动杆菌(Acinetobacter lwoffii)、肠沙门菌(Salmonella enterica)和嗜麦芽窄食单胞菌(Stenotrophomonas maltophilia)等临床常见的条件致病菌,其中美国样本中肠沙门菌的丰度最高,比利时样本的肠沙门菌的丰度最低。结论根据测序的结果得出羊毛表面病原体含量较多且疫情复杂,检测出了肠沙门菌等危害性较大的致病菌,相关部门以及一线从业人员应注意做好生物防护。

关键词：高通量测序微生物群落结构致病菌口岸羊毛

利用猪单个胚胎建立高效快速的CRISPR/Cas9打靶位点检测方法

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中国科学：生命科学 2016年第3期46卷 304-313页

作者：康难难陈红全高基民温州医科大学检验医学院生命科学学院温州325035

基因工程猪可作为动物模型研究人类疾病,也是异种器官移植最合适的供体.CRISPR/Cas9系统是高效特异的基因编辑工具.因此本文通过显微注射的方式将sg RNA和Cas9 m RNA注射入单细胞期的孤雌胚胎中,待其发育为囊胚后检测打靶效率.T7EN1酶切... 详细信息

基因工程猪可作为动物模型研究人类疾病,也是异种器官移植最合适的供体.CRISPR/Cas9系统是高效特异的基因编辑工具.因此本文通过显微注射的方式将sg RNA和Cas9 m RNA注射入单细胞期的孤雌胚胎中,待其发育为囊胚后检测打靶效率.T7EN1酶切和TA克隆测序结果表明,本研究可以在猪的孤雌胚胎中同时实现3个基因(B2M,CIITA,GGTA1或者LDLR,LEP,LEPR)的高效敲除(敲除率分别为62.5%和50%),为使用CRISPR/Cas9系统高效、快速和经济地建立多基因修饰的猪模型提供了基础.

关键词： CRISPR/Cas9 猪孤雌胚胎多基因敲除基因修饰猪模型