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TEMPO-NaBr-NaClO体系对细菌纤维素的氧化过程研究

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中国生物医学工程学报 2013年第6期32卷 699-707页

作者：廖世波奚廷斐赖琛廖世玉黄涛王甩艳温州医科大学信息与工程学院温州325035 北京大学深圳研究院生物医学工程研究中心深圳518057 温州医科大学检验医学院与生命科学学院温州325035 安徽大学生命科学学院合肥230601

细菌纤维素是具有天然纳米网状结构的支架材料，选择性催化氧化可改善其降解性能。以NaCIO、TEMPO和反应时间为变量，研究2，2，6，6-四甲基哌啶-1一氧化物自由基（TEMPO）／NaBr／NaClO体系对细菌纤维素的氧化。结果表明，在试验条件... 详细信息

细菌纤维素是具有天然纳米网状结构的支架材料，选择性催化氧化可改善其降解性能。以NaCIO、TEMPO和反应时间为变量，研究2，2，6，6-四甲基哌啶-1一氧化物自由基（TEMPO）／NaBr／NaClO体系对细菌纤维素的氧化。结果表明，在试验条件范围内，体系初始阶段的反应速率随NaClO用量的增加而减小；体系pH值是影响此阶段反应速率的主要因素且体系最大反应速率出现在pH=10．50—11．00之间；TEMPO用量对此阶段反应速率的影响不明显。对整个反应过程而言，体系的反应速率和不溶性产物的羧基含量都随NaCl0用量的增加而增大，其中NaCl0用量在1—8mL之间时，都呈现良好的线性关系；二者都随催化剂TEMPO用量的增加而增大。不溶性产物的羧基含量随反应时间的延长先逐渐减小后保持相对稳定在0．70—0．75mol／kg。在不同反应阶段，TEMPO／NaBr／NaClO体系对BC的氧化规律存在明显差异，BC独特的结构特点可能是导致这种差异的主要原因。

关键词：细菌纤维素 2,2,6,6-四甲基哌啶一1一氧化物自由基选择性氧化羧基含量

HMGB1低表达对结直肠癌细胞迁移和侵袭的影响

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中国细胞生物学学报 2019年第4期41卷 645-651页

作者：龙露叶王思萱徐建昕方雪娇钱诗菡吕建新温州医科大学检验医学院生命科学学院

该文研究了低表达高迁移率族蛋白(high mobility group box 1, HMGB1)对结直肠癌细胞迁移侵袭的影响,构建了稳定低表达HMGB1的结直肠癌细胞系SW480和HCT-15。采用Transwell实验检测细胞迁移和侵袭能力,免疫印迹法(Western blot)检测蛋... 详细信息

该文研究了低表达高迁移率族蛋白(high mobility group box 1, HMGB1)对结直肠癌细胞迁移侵袭的影响,构建了稳定低表达HMGB1的结直肠癌细胞系SW480和HCT-15。采用Transwell实验检测细胞迁移和侵袭能力,免疫印迹法(Western blot)检测蛋白表达水平。Transwell实验结果表明, shHMGB1组(HMGB1低表达组)的迁移侵袭能力明显强于shNC组(阴性对照组)(**P<0.01,***P<0.001)。Western blot结果显示,与shNC组相比, shHMGB1组上皮标志物E-Cadherin蛋白的表达水平下降(*P<0.05,**P<0.01),间质标志物Snail蛋白的表达水平上升(*P<0.05)。此外shHMGB1组的c-Myc和GSK3B蛋白表达水平明显高于shNC组(*P<0.05,**P<0.01,***P<0.001)。上述结果表明,低表达HMGB1能显著促进结直肠癌细胞SW480和HCT-15的迁移和侵袭能力以及上皮–间质化(epithelial-mesenchymal transition, EMT),这为结直肠癌的治疗提供了新的潜在靶点和视角。

关键词：结直肠癌 HMGB1 迁移侵袭

二甲双胍通过下调c-Myc增强他莫昔芬对乳腺癌的抗肿瘤作用

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中国细胞生物学学报 2019年第4期41卷 601-610页

作者：徐建昕管晨方雪娇龙露叶王思萱钱诗菡吕建新温州医科大学检验医学院生命科学学院

乳腺癌是一种常见的高度恶性肿瘤,在临床病人的治疗中,寻找有效的抑制肿瘤生长的治疗方法尤为重要。他莫昔芬目前被用于治疗雌激素受体阳性乳腺癌。二甲双胍是一种抗糖尿病药物,据报道可以降低人类癌症发病率,提高乳腺癌患者的生存率。... 详细信息

乳腺癌是一种常见的高度恶性肿瘤,在临床病人的治疗中,寻找有效的抑制肿瘤生长的治疗方法尤为重要。他莫昔芬目前被用于治疗雌激素受体阳性乳腺癌。二甲双胍是一种抗糖尿病药物,据报道可以降低人类癌症发病率,提高乳腺癌患者的生存率。该文主要研究二甲双胍联合他莫昔芬对乳腺癌细胞的协同作用及其机制。采用CCK-8法和平板克隆形成实验检测细胞活力和增殖;流式细胞术检测细胞凋亡;Transwell实验检测细胞迁移、侵袭能力;免疫印迹法检测MAPK信号通路和c-Myc蛋白。结果显示,他莫昔芬与二甲双胍联合用药对乳腺癌细胞增殖、克隆形成、迁移侵袭及凋亡的作用均优于单独用药,表明二甲双胍可以增强他莫昔芬对肿瘤生长的抑制作用,并能下调c-Myc蛋白的表达。该研究结果显示,二甲双胍能明显提高乳腺癌细胞的抗肿瘤作用,这些影响是通过下调c-Myc蛋白介导的。该发现可能对乳腺癌的治疗有潜在的临床应用价值。

关键词：二甲双胍他莫昔芬 c-Myc 乳腺癌 MAPK

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条件性重编程人源肿瘤细胞初步研究

中国细胞生物学学报 2019年第10期41卷 1876-1884页

作者：赵鸿雁赵旋陈如章高基民温州医科大学检验医学院生命科学学院

该研究利用条件性重编程技术培养来源于人肺癌、乳腺癌组织的原代细胞。细胞计数结果显示,利用条件性重编程技术可以在体外较短时间内获取大量细胞,并可在体外传代较长时间。制备培养的原代细胞的染色体标本并进行显带处理,结果显示,原... 详细信息

该研究利用条件性重编程技术培养来源于人肺癌、乳腺癌组织的原代细胞。细胞计数结果显示,利用条件性重编程技术可以在体外较短时间内获取大量细胞,并可在体外传代较长时间。制备培养的原代细胞的染色体标本并进行显带处理,结果显示,原代细胞的染色体为多倍体。STR分析结果显示,培养的细胞基本保留了其来源组织的分子遗传学特性。HE染色显示,培养的原代细胞中存在明显的多核仁以及明显的核分裂像。免疫组化结果显示,体外培养的原代细胞高表达CD44以及EpCAM,不表达ER、CK7等常见的表面标志物。体外悬浮培养、类器官培养以及流式细胞术结果表明,利用条件性重编程技术培养的原代细胞存在干细胞的特性。综上所述,利用条件性重编程技术可在短时间内在体外获得较多的原代肿瘤细胞,并且所获得的肿瘤细胞具有部分干细胞的特征。

关键词：条件性重编程原代细胞干细胞

NCAM L1小基因模型的建立及其剪接模式研究

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浙江大学学报（医学版） 2011年第4期40卷 427-431页

作者：张薇沈权彭正羽浙江大学城市学院医学与生命科学学院浙江杭州310015 复旦大学生物医学研究院上海200032

目的:建立可用于前体mRNA可变剪接分析的NCAM L1小基因模型。方法:以人基因组DNA为模板,通过PCR扩增获得NCAM L1小基因片段,并将其克隆至真核表达载体中,构建小基因的质粒。在此基础上,用NCAM L1小基因模型转染HeLa、COS-1、PFSK及R28细... 详细信息

目的:建立可用于前体mRNA可变剪接分析的NCAM L1小基因模型。方法:以人基因组DNA为模板,通过PCR扩增获得NCAM L1小基因片段,并将其克隆至真核表达载体中,构建小基因的质粒。在此基础上,用NCAM L1小基因模型转染HeLa、COS-1、PFSK及R28细胞,并用RT-PCR进行被剪接的小基因产物的半定量检测。结果:NCAM L1小基因在4种细胞中的剪接模式不同,在PFSK以及Hela细胞中,存在2种剪接亚型,而在COS-1以及R28细胞中只有一种剪接亚型存在。结论:所构建的NCAM L1小基因可用于细胞水平的基因剪接分析。

关键词： Hela细胞质粒遗传载体剪接体 NCAML1 小基因前体mRNA 可变剪接

体外联合用药对黏菌素异质性耐药鲍曼不动杆菌的抗菌活性研究

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中华微生物学和免疫学杂志 2018年第8期38卷 593-598页

作者：张思琴卢鸿曹建明徐春泉张晓亚郑相阔董郭枫周铁丽温州医科大学附属第一医院医学检验中心 325000 长治医学院附属和平医院检验科 046000 温州医科大学检验医学院、生命科学学院 325000

目的评价黏菌素分别与美罗培南、左氧氟沙星和磷霉素联用对黏菌素异质性耐药鲍曼不动杆菌的体外抗菌活性.方法收集2014—2015年温州医科大学附属第一医院临床分离的576株鲍曼不动杆菌,采用微量肉汤稀释法检测黏菌素对鲍曼不动杆菌最... 详细信息

目的评价黏菌素分别与美罗培南、左氧氟沙星和磷霉素联用对黏菌素异质性耐药鲍曼不动杆菌的体外抗菌活性.方法收集2014—2015年温州医科大学附属第一医院临床分离的576株鲍曼不动杆菌,采用微量肉汤稀释法检测黏菌素对鲍曼不动杆菌最小抑菌浓度（MIC）,并采用菌谱分析法（PAPs）筛选黏菌素异质性耐药鲍曼不动杆菌.通过棋盘法设计和微量肉汤稀释法检测黏菌素分别与美罗培南、左氧氟沙星和磷霉素联用及各自单用时对黏菌素异质性耐药鲍曼不动杆菌的MIC值,并通过计算部分抑菌浓度指数（FICI）评价联合抑菌效果.结果通过微量肉汤稀释法检测的576株鲍曼不动杆菌中,未获得黏菌素耐药菌株.通过PAPs筛选共获得9株黏菌素异质性耐药鲍曼不动杆菌,黏菌素与美罗培南、左氧氟沙星和磷霉素联用后对异质性耐药菌株的MIC值较单用时均降低.其中,与美罗培南联用后对黏菌素异质性耐药鲍曼不动杆菌的联合抗菌活性表现为协同作用的占55.6％,相加作用占33.3％,无关作用占11.1％,不存在拮抗作用;与左氧氟沙星联用后对黏菌素异质性耐药鲍曼不动杆菌的联合抗菌活性表现为协同作用的占55.6％,相加作用占22.2％,无关作用占22.2％,不存在拮抗作用;与磷霉素联用后对黏菌素异质性耐药鲍曼不动杆菌的联合抗菌活性表现为协同作用的占77.8％,相加作用占22.2％,不存在无关和拮抗作用.结论黏菌素与美罗培南、左氧氟沙星或磷霉素联用对黏菌素异质性耐药鲍曼不动杆菌的体外抗菌活性主要表现为协同和相加作用,与美罗培南或左氧氟沙星联用的抗菌活性较少表现为无关作用,均无拮抗作用.

关键词：黏菌素异质性耐药鲍曼不动杆菌联合用药

KCTD5对急性单核细胞白血病U937细胞增殖的影响

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中国细胞生物学学报 2019年第5期41卷 859-866页

作者：马兰王思恒吴琼徐甜贺立彩吕建新温州医科大学检验医学院生命科学学院

KCTD5是钾离子通道四聚体结构域(KCTD)蛋白家族的一员。KCTD5可作为Cullin3的接头蛋白发挥生物学功能,但是其与急性髓系白血病(acute myeloid leukemia, AML)的关系尚不清楚。通过对癌症与肿瘤基因图谱(the Cancer of Genome Atlas, TC... 详细信息

KCTD5是钾离子通道四聚体结构域(KCTD)蛋白家族的一员。KCTD5可作为Cullin3的接头蛋白发挥生物学功能,但是其与急性髓系白血病(acute myeloid leukemia, AML)的关系尚不清楚。通过对癌症与肿瘤基因图谱(the Cancer of Genome Atlas, TCGA)数据库的分析,发现KCTD5mRNA表达水平与AML病人生存期呈显著负相关。免疫印迹(Western blot)结果显示AML细胞株中KCTD5蛋白表达量显著高于正常对照细胞。该文通过shRNA干扰技术,敲低U937细胞中KCTD5的表达,研究了KCTD5对人急性单核细胞白血病U937细胞增殖的影响。采用CCK8实验、锥虫蓝拒染实验、瑞氏染色、PI单染及Western blot技术,检测干扰KCTD5对U937细胞生长、活力、细胞形态、细胞周期分布及周期相关蛋白表达的影响。结果显示,干扰KCTD5的表达可以显著抑制U937细胞的增殖能力,但对细胞活力没有明显影响;形态学检查显示,干扰KCTD5后, U937细胞体积明显增大,染色质凝集及多核细胞比例增加;流式结果显示,干扰KCTD5的表达使G2/M期细胞比例明显增加;Western blot结果显示,干扰KCTD5后, Cdk1Tyr15磷酸化水平下降,而Cyclin B1表达量升高。以上结果表明,干扰KCTD5可以抑制人急性单核细胞白血病U937细胞增殖,其机制可能是由于干扰KCTD5通过使Cdk1Tyr15发生去磷酸化,从而诱导U937细胞发生了G2/M期阻滞。

关键词：急性单核细胞白血病 KCTD5 细胞增殖 G2/M期阻滞

蝉拟青霉多糖体外对乙型肝炎病毒复制的抑制作用

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中国病理生理杂志 2010年第2期26卷 327-332页

作者：卓佳杨介钻金丽琴陈柏坤温州医学院生命科学学院浙江温州3250233 浙江大学医学院附属第一医院浙江杭州310003 温州医学院生物化学教研室浙江温州325023

目的:探讨蝉拟青霉多糖(PcPS)体外对乙型肝炎病毒(HBV)的抑制作用及对HepG2.2.15细胞表达Toll样受体4(TLR4)mRNA的影响。方法:以不同浓度PcPS与HepG2.2.15细胞株共培养,以拉米夫定(LMV)为阳性对照,采用四甲基偶氮唑盐(MTT)法和ELISA法,... 详细信息

目的:探讨蝉拟青霉多糖(PcPS)体外对乙型肝炎病毒(HBV)的抑制作用及对HepG2.2.15细胞表达Toll样受体4(TLR4)mRNA的影响。方法:以不同浓度PcPS与HepG2.2.15细胞株共培养,以拉米夫定(LMV)为阳性对照,采用四甲基偶氮唑盐(MTT)法和ELISA法,检测PcPS对HepG2.2.15细胞毒性作用及其分泌HBsAg、HBeAg的情况。实时荧光定量PCR分析PcPS对HepG2.2.15细胞表达与分泌HBV-DNA和TLR4 mRNA表达的影响。结果:蝉拟青霉多糖在体外能有效抑制HepG2.2.15细胞分泌HBsAg、HBeAg,最大抑制率分别为44.8%、31.0%;对HepG2.2.15细胞内HBV-DNA复制和TLR4 mRNA表达均有一定抑制作用。结论:一定浓度的蝉拟青霉多糖在体外具有显著抑制HBV的复制作用。

关键词：蝉拟青霉多糖肝炎病毒乙型 Toll样受体4

脾气虚证和脾不统血证模型大鼠脾脏能量代谢的比较研究

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中华中医药学刊 2018年第6期36卷 1355-1358页

作者：屈小虎陈慧黄玲吕斌金丽琴温州医科大学检验医学院生命科学学院

目的：研究脾气虚证和脾不统血证模型大鼠脾脏组织能量代谢变化及其差异,为科学解释中医脾脏理论内涵提供基础资料。方法：构建脾气虚证和脾不统血证大鼠模型,测定各组大鼠脾脏ATP含量、线粒体呼吸链复合物（ComplexⅠ、ComplexⅡ、Comp... 详细信息

目的：研究脾气虚证和脾不统血证模型大鼠脾脏组织能量代谢变化及其差异,为科学解释中医脾脏理论内涵提供基础资料。方法：构建脾气虚证和脾不统血证大鼠模型,测定各组大鼠脾脏ATP含量、线粒体呼吸链复合物（ComplexⅠ、ComplexⅡ、ComplexⅢ、ComplexⅣ）活性、柠檬酸合酶（CS）活性和mtDNA拷贝数。结果：脾气虚证大鼠和脾不统血证大鼠脾脏ATP含量显著降低,呼吸链复合物活性、CS活性和mtDNA拷贝数较正常大鼠均发生显著改变,脾不统血证大鼠脾脏ATP含量、CS活性和mtDNA拷贝数与脾气虚证大鼠存在显著差异。结论：脾气虚证大鼠和脾不统血证大鼠脾脏组织线粒体能量代谢发生障碍,其柠檬酸循环和氧化磷酸化功能受到损伤,而脾不统血证和脾气虚证线粒体能量代谢障碍程度的不同是二者存在差异的重要原因。本研究认为,对中医脾虚证脾脏组织能量代谢功能损伤的研究能够积极的揭示脾虚证的科学本质。

关键词：脾气虚证脾不统血证脾脏线粒体能量代谢