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温郁金提取物对食管癌TE-1细胞增殖的抑制作用

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中国中西医结合杂志 2012年第9期32卷 1219-1222页

作者：景钊邹海洲许芳邹长林温州医学院附属第一医院放化疗科浙江温州325000 温州医学院附属第一医院中医科浙江温州325000 温州医学院生命科学学院浙江温州325000

目的研究温郁金提取物对食管癌TE-1细胞增殖的抑制作用。方法采用超临界CO2萃取法提取温郁金成分。将TE-1细胞贴壁后分成4组:1组加入100μL含0.1%DMSO的RMPI-1640培养基,作为对照组;另外3组分别加入浓度为25、50、100mg/L温郁金提取物... 详细信息

目的研究温郁金提取物对食管癌TE-1细胞增殖的抑制作用。方法采用超临界CO2萃取法提取温郁金成分。将TE-1细胞贴壁后分成4组:1组加入100μL含0.1%DMSO的RMPI-1640培养基,作为对照组;另外3组分别加入浓度为25、50、100mg/L温郁金提取物完全培养液各100μL,分别作为温郁金低、中、高剂量组。培养48h后采用四甲基偶氮唑盐(MTT)比色法测定各组TE-1细胞生长抑制率。应用基因芯片技术检测各组TE-1细胞基因表达谱的变化。对差异表达基因进行基因本体(gene ontology,GO)功能分类。结果与对照组比较,温郁金各剂量组生长抑制率均升高,差异有统计学意义(P<0.05)。温郁金各剂量组TE-1细胞生长抑制率随着剂量升高而增加,差异均有统计学意义(P<0.05)。通过基因芯片筛选出温郁金提取物作用前后88个基因表达水平发生改变且有统计学意义,包括22个基因表达下调,66个基因表达上调。基因GO分类提示差异表达基因主要涉及信号传导(6个)、细胞周期(8个)、凋亡(14个)或分化调节(10个)等。结论温郁金提取物对人食管癌TE-1细胞生长有抑制作用,其抗肿瘤作用可能与调控多层次的基因表达改变有关。

关键词：温郁金食管癌 TE-1细胞基因芯片

果蝇新型碱性磷酸酶相关基因CG6236的敲除及表型分析

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中国细胞生物学学报 2012年第5期34卷 424-431页

作者：缪海锋方可欣黄爽爽金龙金林鑫华吴一卉温州医学院眼视光学院温州325027 温州医学院检验医学院生命科学学院温州325035 中国科学院动物研究所生物膜与膜生物工程国家重点实验室北京100101

碱性磷酸酶广泛存在于人体各器官中,其水平异常与一系列疾病有关,但其在发育中的具体作用机制尚不明确。该文以果蝇为模式生物,研究一个新型碱性磷酸酶样蛋白基因CG6236在发育中的功能。利用P-因子介导的不精确剪切获得CG6236缺失突变... 详细信息

碱性磷酸酶广泛存在于人体各器官中,其水平异常与一系列疾病有关,但其在发育中的具体作用机制尚不明确。该文以果蝇为模式生物,研究一个新型碱性磷酸酶样蛋白基因CG6236在发育中的功能。利用P-因子介导的不精确剪切获得CG6236缺失突变体果蝇品系,发现CG6236纯合突变体半致死,存活的幼虫及成蝇腹部出现黑色素瘤样表型。在细胞中表达CG6236融合蛋白,发现其定位于细胞质中。另外,缺失或过表达CG6236均不影响Wingless和Hedgehog信号通路。综上,该研究首次获得CG6236基因缺失突变和转基因果蝇品系,并观察了缺失CG6236果蝇的表型,为进一步阐明基因CG6236的功能及作用机制奠定了基础。

关键词： CG6236 碱性磷酸酶基因缺失黑色素瘤果蝇

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三氯生和双酚A对斑马鱼神经毒性的比较研究

中国环境科学 2024年第2期44卷 1111-1121页

作者：韩晓雯徐婕妤王伟伟钱秋慧王慧利苏州科技大学环境科学与工程学院江苏苏州215009 温州医科大学检验医学院生命科学学院浙江温州325035

本研究选择常见的两种典型内分泌干扰物三氯生(TCS)和双酚A(BPA)为对象,以斑马鱼作为脊椎模式生物,分析比较了TCS和BPA对斑马鱼神经发育和行为的影响.结果表明:TCS和BPA均会诱导斑马鱼胚胎产生表观畸形,如心包水肿、卵黄囊肿、游囊关闭... 详细信息

本研究选择常见的两种典型内分泌干扰物三氯生(TCS)和双酚A(BPA)为对象,以斑马鱼作为脊椎模式生物,分析比较了TCS和BPA对斑马鱼神经发育和行为的影响.结果表明:TCS和BPA均会诱导斑马鱼胚胎产生表观畸形,如心包水肿、卵黄囊肿、游囊关闭等;TCS和BPA暴露会抑制幼鱼的运动活性,对运动相关神经元有损伤作用,并影响幼鱼体内乙酰胆碱酯酶的活性,进而造成神经行为的失调.此外,TCS和BPA均会导致斑马鱼幼鱼新生神经元细胞的数量下降,幼鱼的脑部凋亡细胞明显增加,对中枢神经系统发育产生影响.药靶预测结合京都基因与基因组百科全书(KEGG)和基因本体(GO)分析比较了TCS和BPA作用的代谢通路及其致毒机制存在不同.本研究为TCS和BPA环境暴露的健康风险评估和风险预警提供了重要参考.

关键词：三氯生双酚A 斑马鱼神经毒性致毒机制新污染物

黄瓜植株与愈伤组织对铜的耐受及其铜积累研究

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热带作物学报 2011年第5期32卷 895-900页

作者：黄玉超董虎徐晨阳任凭钟连进温州医学院生命科学学院浙江温州325035

以黄瓜[cucumis sativus L.]品种优丰早为试材,研究不同铜浓度处理下黄瓜植株和愈伤组织的生长状况及铜在其内的积累与分布情况。结果表明:①10 mg/L铜处理组黄瓜植株生长正常,茎中铜累积浓度达到865mg/kg干重,高于根和叶中铜累积浓度;2... 详细信息

以黄瓜[cucumis sativus L.]品种优丰早为试材,研究不同铜浓度处理下黄瓜植株和愈伤组织的生长状况及铜在其内的积累与分布情况。结果表明:①10 mg/L铜处理组黄瓜植株生长正常,茎中铜累积浓度达到865mg/kg干重,高于根和叶中铜累积浓度;20 mg/L以上铜处理组黄瓜植株出现明显的铜毒害现象,其根中铜累积浓度超过茎叶,均超过1 500 mg/kg干重,高于10 mg/L铜处理组,但其茎中铜累积浓度低于10 mg/L处理组。②黄瓜愈伤组织能耐受10～40 mg/L的铜胁迫,但其生长均明显受到抑制;愈伤组织对铜的吸收积累较快,铜积累量一般在第3周达到最大值,此后会有所下降;愈伤组织铜积累量与铜处理浓度正相关,最高积累量可达2 350 mg/kg;愈伤组织的细胞壁、细胞器和细胞可溶部分都能积累铜,在较低浓度铜胁迫下,细胞壁是主要积累部位,而在较高浓度铜胁迫下,细胞可溶部分是铜的主要积累部位。

关键词：黄瓜愈伤组织铜重金属

靶向FAP的第4代CAR-T细胞的构建及其性能研究

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中华微生物学和免疫学杂志 2020年第5期40卷 372-381页

作者：李帆帆陈辉冯都都高基民温州医科大学检验医学院生命科学学院325035 浙江启新生物技术有限公司温州325035

目的构建靶向肿瘤间质癌相关成纤维细胞活化蛋白(fibroblast activation protein,FAP)的第2代和第4代CAR-T细胞,并比较两者在体内外的性能差异。方法ELISA检测CAR-T细胞的细胞因子分泌情况;手工计数检测其增殖存活能力;Transwell迁移试... 详细信息

目的构建靶向肿瘤间质癌相关成纤维细胞活化蛋白(fibroblast activation protein,FAP)的第2代和第4代CAR-T细胞,并比较两者在体内外的性能差异。方法ELISA检测CAR-T细胞的细胞因子分泌情况;手工计数检测其增殖存活能力;Transwell迁移试验检测其趋化性能;流式细胞术检测其亚型分布;荧光素酶生物发光法检测其杀伤效率;小鼠肺癌转移模型评估其安全性和有效性。结果第2代h4BBz CAR-T细胞的CAR表达率为(74.280±4.384)%,第4代h4BBz-7.19 CAR-T为(67.220±4.013)%;h4BBz-7.19 CAR-T细胞能够分泌IL-7和CCL19,使其在体外的增殖能力和趋化能力较h4BBz CAR-T细胞强,存活能力相当。在亚型分布中,两种CAR表达率在CD4+T细胞群和CD8+T细胞群中均无显著性差异,但h4BBz-7.19 CAR-T细胞中的Naive和T记忆干细胞(T memory stem cell,TSCM)亚群在CD4+T细胞群或CD8+T细胞群中所占比例均较h4BBz CAR-T细胞高。在杀伤试验中,h4BBz-7.19 CAR-T细胞在低效靶比时显示出较h4BBz CAR-T细胞更强的杀伤效率(效靶比为1∶1、2∶1、5∶1、10∶1、20∶1时的P值分别为:P1∶1=0.004、P2∶1=0.0006、P5∶1研究构建的靶向FAP的第4代CAR-T细胞通过分泌IL-7和CCL19增强增殖存活、渗透趋化和特异性杀伤活性,并可在一定程度上通过改善肿瘤免疫抑制性微环境以延缓肿瘤生长、延长生存时间,从而为其在临床上的应用提供参考。

关键词：嵌合抗原受体T细胞成纤维细胞活化蛋白白细胞介素-7 趋化因子CCL19

甲型副伤寒杆菌pagC基因分布及其重组表达产物免疫保护作用

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浙江大学学报（医学版） 2013年第2期42卷 171-176,231页

作者：张佳范欣丽葛玉梅严杰孙爱华温州医学院检验医学院和生命科学学院浙江温州325035 浙江医学高等专科学校浙江杭州310053 浙江大学医学院病原生物学系浙江杭州310058

目的:了解甲型副伤寒沙门菌临床菌株pagC基因携带率及序列保守性,确定甲型副伤寒沙门菌pagC基因原核重组表达产物rPagC免疫原性和保护作用。方法:采用PCR及其产物测序了解甲型副伤寒沙门菌临床菌株pagC基因携带率及序列保守性。构建甲... 详细信息

目的:了解甲型副伤寒沙门菌临床菌株pagC基因携带率及序列保守性,确定甲型副伤寒沙门菌pagC基因原核重组表达产物rPagC免疫原性和保护作用。方法:采用PCR及其产物测序了解甲型副伤寒沙门菌临床菌株pagC基因携带率及序列保守性。构建甲型副伤寒沙门菌pagC基因原核表达系统,Ni-NTA亲和层析法提纯表达的rPagC。采用SDS-PAGE和BioRad凝胶图象分析系统检测rPagC表达情况及其产量。采用免疫扩散法、ELISA和Western Blot鉴定其抗原性和免疫反应性。采用小鼠感染模型了解rPagC对甲型副伤寒杆菌感染的免疫保护效果,微量肥达试验检测rPagC免疫小鼠血清凝集伤寒和副伤寒沙门菌的效果。结果:所有被检测的甲型副伤寒沙门菌临床菌株均携带pagC基因,其核苷酸和氨基酸序列相似性分别高达99.1%～100%和98.4%～100%。所构建的原核表达系统能高效表达rPagC。rPagC免疫家兔可产生高效价抗体并能与甲型副伤寒杆菌全菌抗血清产生阳性Western杂交信号。ELISA结果显示,97.1%(66/68)甲型副伤寒患者血清标本rPagC抗体阳性。100μg和200μg rPagC对感染小鼠的免疫保护率分别为73.3%(11/15)和86.7%(13/15)。rPagC免疫小鼠血清对甲型副伤寒沙门菌和伤寒沙门菌H抗原凝集效价高达1∶10～1∶40。结论:pagC基因在甲型副伤寒沙门菌株中分布广泛。rPagC有良好的免疫原性及较强的免疫保护作用,可作为甲型副伤寒杆菌基因工程疫苗候选抗原。

关键词：沙门菌,甲型副伤寒免疫学沙门菌,甲型副伤寒遗传学基因表达调控,细菌重组,遗传基因表达 pagC基因重组表达免疫原性免疫保护性

PIWI/piRNA复合体调控精子发生的研究进展

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中华男科学杂志 2021年第3期27卷 262-268页

作者：沈鹭俞翀(综述) 高方洪叶挺(审校) 杭州医学院检验医学院浙江杭州3100531 温州医科大学检验医学院/生命科学学院浙江温州325000 浙江省人民医院生殖内分泌科浙江杭州310014

piRNA是近年来研究发现的一类新型小分子非编码RNA,主要表达在生殖细胞中,与PIWI特异性结合形成PIWI/piRNA复合体,调控生殖细胞发育与精子的发生。PIWI/piRNA复合物能抑制转座子维持基因组的稳定性,在球形精子细胞期介导mRNA的翻译激活... 详细信息

piRNA是近年来研究发现的一类新型小分子非编码RNA,主要表达在生殖细胞中,与PIWI特异性结合形成PIWI/piRNA复合体,调控生殖细胞发育与精子的发生。PIWI/piRNA复合物能抑制转座子维持基因组的稳定性,在球形精子细胞期介导mRNA的翻译激活,延长形精子细胞期参与mRNA的降解,精子形成晚期调控MIWI的泛素化降解,甲基转移酶HENMT1的缺失也会导致精子分化阻滞,PIWI/piRNA通路相关蛋白突变或缺失将影响精子的发生。本文简要综述近年来关于PIWI/piRNA复合体在精子发生过程中所发挥的生物学功能及分子机制的研究进展。

关键词： PIWI/piRNA复合体精子发生雄性不育

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自立自强型家庭经济困难学生的培育思考

黑龙江高教研究 2008年第8期26卷 110-112页

作者：潘玉芝温州医学院生命科学学院浙江温州325035

家庭经济困难学生需要社会各界的资助,以缓解其学习的后顾之忧。文章认为,在帮助他们解决经济困难的同时,更应重视培养他们自立自强的品质,这对他们自身的健康成长以及社会的和谐稳定都具有十分重要的意义。

关键词：自立自强经济困难大学生培育

利用细胞筛选法从噬菌体抗体库鉴定人源HIV-1单克隆中和抗体

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病毒学报 2013年第5期29卷 471-479页

作者：张娜满来孙坚萍孟佳子何玉先温州医科大学检验医学院生命科学学院温州325035 中国医学科学院病原生物学研究所北京100005

以细胞法从HIV-1CRF07_BC特异性噬菌体抗体库中筛选和鉴定针对病毒包膜蛋白(Envelope,Env)的人源单克隆中和抗体。将pCH064.2-Env质粒转染293T细胞,以表达Env的活细胞淘洗噬菌体抗体库;利用细胞ELISA方法筛选Env特异性噬菌体阳性克隆,... 详细信息

以细胞法从HIV-1CRF07_BC特异性噬菌体抗体库中筛选和鉴定针对病毒包膜蛋白(Envelope,Env)的人源单克隆中和抗体。将pCH064.2-Env质粒转染293T细胞,以表达Env的活细胞淘洗噬菌体抗体库;利用细胞ELISA方法筛选Env特异性噬菌体阳性克隆,并测定抗体重链可变区(VH)和轻链可变区(VL)序列;以Ni+2-NTA层析柱纯化抗体Fab,SDS-PAGE分析抗体纯度;采用基于转染细胞和重组蛋白的ELISA以及流式细胞技术分析抗体的结合活性;以HIV-1假病毒系统评价抗体的中和活性。四轮淘洗使细胞特异性噬菌体得到约650倍的高度富集,细胞ELISA筛选到28个抗HIV Env的阳性克隆,序列分析发现五个具有不同VH和VL序列的抗体Fab(2801、2837、2863、2870和2920)。这些抗体与转染env的293T细胞反应,但不与重组表达的可溶性gp120蛋白反应,说明它们有可能针对依赖于Env复合物的空间构象表位。我们发现2801、2863和2870三个Fab抗体对HIV-1CRF07_BC亚型CH120.6毒株具有较强的中和活性,其IC50值分别为2.24μg/mL、0.89μg/mL和3.09μg/mL。其中,2801和2863对B亚型HIV-1毒株SF162具有较强的交叉中和作用,其IC50值分别为0.69μg/mL和3.52μg/mL。提示表达于293T细胞表面的HIV-1 Env可以有效富集和筛选噬菌体抗体库,并能成功分离和鉴定依赖于Env空间构象表位的HIV-1中和抗体。因此本研究为探讨HIV-1中和抗体的反应机制和研发艾滋病疫苗提供了新的技术平台。

关键词： HIV-1 中和抗体包膜蛋白噬菌体抗体库细胞法筛选