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脑缺血后IκB激酶的自身磷酸化及活性调节(英文)

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Acta Pharmacologica Sinica 2003年第4期24卷 25-29+96-97页

作者：沈万华张春翌张光毅徐州医学院生物化学与分子生物学研究中心徐州医学院生物化学与分子生物学研究中心徐州 221002 中国

目的:观察脑缺血后IκB激酶的自身磷酸化及活性变化的调节机制。方法:采用IKKα/B抗体进行免疫印迹和免疫沉淀分析,测定IKK蛋白表达,体外激酶活性分析测定IKK的自身磷酸化及活性。结果:IKK蛋白的表达在脑缺血不同时间以及脑缺血复灌不... 详细信息

目的:观察脑缺血后IκB激酶的自身磷酸化及活性变化的调节机制。方法:采用IKKα/B抗体进行免疫印迹和免疫沉淀分析,测定IKK蛋白表达,体外激酶活性分析测定IKK的自身磷酸化及活性。结果:IKK蛋白的表达在脑缺血不同时间以及脑缺血复灌不同时间都没有明显的变化;IKK的活性在缺血30分钟时达到最高;NMDA受体拮抗剂ketamine、非NMDA受体拮抗剂DNQX和NF-κB抑制剂PDTC均能抑制IKK的自身磷酸化及活性。结论:NMDA受体和非NMDA受体介导了脑缺血后IKK的自身磷酸化及活性调控,从而介导其下游因子NF-κB的蛋白表达及活性变化,参与脑缺血的损伤调控。

关键词：脑缺血 IκB激酶核因子-κB 海马 N-甲基-D-天冬氨酸受体活性氧自由基信号传递

金雀异黄素对脑缺血/再灌注诱导大鼠海马组织STAT3激活的抑制作用(英文)

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Acta Pharmacologica Sinica 2003年第11期24卷 69-74+112-113页

作者：李洪春张光毅徐州医学院生物化学与分子生物学研究中心徐州医学院生物化学与分子生物学研究中心徐州 221002 中国

目的:观察脑缺血/再灌注(I/R)后海马组织信号转导与转录激活子-3 (STAT3)的激活及金雀异黄素对其的影响。方法:免疫印迹测定STAT3蛋白表达及磷酸化水平,电泳迁移率改变分析STAT3的DNA结合活性。结果:I/R 3h后胞浆STAT3持续磷酸化激活,... 详细信息

目的:观察脑缺血/再灌注(I/R)后海马组织信号转导与转录激活子-3 (STAT3)的激活及金雀异黄素对其的影响。方法:免疫印迹测定STAT3蛋白表达及磷酸化水平,电泳迁移率改变分析STAT3的DNA结合活性。结果:I/R 3h后胞浆STAT3持续磷酸化激活,再灌注3h和72h达两高峰(1.7和 2.5倍);而STAT3、蛋白表达I/R 24h开始升高,72h 达高峰(1.7倍);核内STAT3的磷酸化水平及DNA结合活性缺血后即显著增高,再灌注3h和72h达两高峰(分别为2.6、3.1及3.6、4.4倍),金雀异黄素呈剂量依赖方式明显抑制I/R 72h诱导STAT3的磷酸化及DNA结合活性的升高,但不影响STAT3蛋白表达。结论:脑缺血/再灌注导致STAT3的磷酸化激活及DNA结合活性的增加,蛋白酪氨酸激酶参与STAT3的激活调控。

关键词：信号传递转录因子金雀异黄素脑缺血酪氨酸磷酸化海马

人白细胞介素18半胱氨酸的定点突变及其对活性的影响

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Acta Biochimica et Biophysica Sinica 2002年第1期34卷 57-61页

作者：裴冬生傅奕孙亚锋赵惠仁徐州医学院生物化学与分子生物学研究中心徐州医学院生物化学与分子生物学研究中心徐州221002

为研究IL 18结构与功能的关系 ,用重叠延伸PCR定点突变技术构建人白细胞介素 18(hIL 18) 4个半胱氨酸的突变体hIL 18C74 S、C10 4 S、C112 S和C163 S。将突变体的cDNA与原核细胞表达载体pJW2重组并转化大肠杆菌JM10 1。经热诱导后 ,4个... 详细信息

为研究IL 18结构与功能的关系 ,用重叠延伸PCR定点突变技术构建人白细胞介素 18(hIL 18) 4个半胱氨酸的突变体hIL 18C74 S、C10 4 S、C112 S和C163 S。将突变体的cDNA与原核细胞表达载体pJW2重组并转化大肠杆菌JM10 1。经热诱导后 ,4个突变体在大肠杆菌中均得到了高效表达。表达的蛋白质主要以包涵体的形式存在。包涵体经超声破碎 ,2mol/L尿素洗涤 ,8mol/L尿素溶解 ,SephadexG 10 0柱纯化后 ,纯度可达 90 %以上。以诱导人外周血单个核细胞 (PBMC)产生IFN γ的能力为指标检测复性突变体的活性。结果显示除C10 4 S外 ,其他 3个突变体的生物活性均低于野生型hIL 18,C74 S、C112 S和C163 S的活性分别是野生型hIL 18活性的 5 %、5 8%和11%。证明Cys74 、Cys163 为hIL 18诱导产生IFN γ的功能所必需

关键词：白细胞介素18 半胱氨酸定点突变突变体

激动多巴胺受体抑制大鼠纹状体脑片Ca2+-钙调蛋白依赖性蛋白激酶Ⅱ活性(英文)

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Acta Pharmacologica Sinica 2001年第11期22卷 8-12页

作者：侯筱宇唐放鸣张光毅中国 221002 徐州医学院生物化学与分子生物学研究中心徐州医学院生物化学与分子生物学研究中心徐州

目的:研究缺氧时纹状体多巴胺能神经毒性的机制。方法:采用大鼠纹状体脑片体外培养模型,以底物磷酸化32P-掺入法测定Ca2+-钙调蛋白依赖性蛋白激酶Ⅱ(CCDPKⅡ)的活性。结果:缺氧30min,纹状体脑片CCDPKⅡ活性降低75％,慢性利血平化使得缺... 详细信息

目的:研究缺氧时纹状体多巴胺能神经毒性的机制。方法:采用大鼠纹状体脑片体外培养模型,以底物磷酸化32P-掺入法测定Ca2+-钙调蛋白依赖性蛋白激酶Ⅱ(CCDPKⅡ)的活性。结果:缺氧30min,纹状体脑片CCDPKⅡ活性降低75％,慢性利血平化使得缺氧诱导的酶活性降低程度减轻,与对照组相比大约降低40％。外源性多巴胺显著降低纹状体脑片CCDPKⅡ活性。去除胞外Ca2+后,多巴胺诱导的酶活性降低作用被削弱。阿扑吗啡(非特异性多巴胺受体激动剂)、SKF38393(特异性D1样受体激动剂)和喹吡罗(特异性D2样受体激动剂)均可显著降低CCDPKⅡ的活性。Sch-23390(特异性D1样受体拮抗剂)和吗丁啉(特异性D2样受体拮抗剂)均可拮抗多巴胺所诱导的酶活性的抑制作用。结论:多巴胺参与缺氧诱导的纹状体CCDPKⅡ活性抑制,其作用机制与D1样和D2样受体的激活以及胞外Ca2+的内流有关,从而导致多巴胺介导的纹状体神经损伤。

关键词：多巴胺 Ca2+-钙调蛋白依赖性蛋白激酶低氧钙利血平多巴胺激动剂多巴胺拮抗剂纹状体

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谷氨酸受体可逆磷酸化及其功能

生物化学与生物物理进展 1999年第4期26卷 315-318页

作者：高灿张光毅徐州医学院生物化学与分子生物学研究中心徐州221002

谷氨酸受体（ＧｌｕＲｓ）Ｃ端区存在被多种蛋白激酶磷酸化的位点，同时又能被多种蛋白磷酸酶去磷酸化，磷酸化的结果可使Ｃａ２＋内流增加，增强ＧｌｕＲｓ功能；去磷酸化作用则相反．正常情况下ＧｌｕＲｓ可逆磷酸... 详细信息

谷氨酸受体（ＧｌｕＲｓ）Ｃ端区存在被多种蛋白激酶磷酸化的位点，同时又能被多种蛋白磷酸酶去磷酸化，磷酸化的结果可使Ｃａ２＋内流增加，增强ＧｌｕＲｓ功能；去磷酸化作用则相反．正常情况下ＧｌｕＲｓ可逆磷酸化处于一种动态平衡状态，在突触可塑性机制如长时程增强（ＬＴＰ）中起重要作用，而在病理状态如缺血性脑损伤中。

关键词：谷氨酸受体蛋白激酶蛋白磷酸酶磷酸化

Asp126、Asp130、Asp134对人白介素18功能的影响(英文)

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Acta Biochimica et Biophysica Sinica 2001年第4期33卷 368-372页

作者：傅奕裴冬生赵惠仁徐州医学院生物化学与分子生物学研究中心!徐州221002

为研究人白细胞介素 18(hIL 18)中一些氨基酸残基对IL 18功能的影响 ,用重叠延伸PCR定点诱变技术构建hIL 18突变体hIL 18D12 6N、hIL 18D13 0 K、hIL 18D134 K。将突变体cDNA与原核表达载体pJW2重组并转化大肠杆菌DH5α。经热诱导表达 ,... 详细信息

为研究人白细胞介素 18(hIL 18)中一些氨基酸残基对IL 18功能的影响 ,用重叠延伸PCR定点诱变技术构建hIL 18突变体hIL 18D12 6N、hIL 18D13 0 K、hIL 18D134 K。将突变体cDNA与原核表达载体pJW2重组并转化大肠杆菌DH5α。经热诱导表达 ,3个突变体占菌体总蛋白质的 15 %～ 31%以上。SDS PAGE证实 ,表达的蛋白质以包含体形式存在。包含体经超声破碎 ,2mol/L尿素洗涤 ,8mol/L尿素溶解 ,SephadexG 75柱纯化后 ,纯度均可达 95 %以上。Western印迹表明 3个突变体与野生型hIL 18具有相同的免疫原性。纯化的突变体蛋白质经复性后 ,以诱导人外周血单个核细胞 (PBMC)产生干扰素 γ(IFN γ)的能力为指标检测其活性 ,结果显示 3个突变体的生物学活性分别为野生型IL 18的 32 %、8%、10 % ,表明hIL 18中 12 6、130、134位的天冬氨酸 (Asp)对其功能是必需的

关键词：人白细胞介素18 蛋白质结构与功能定点诱变干扰素-γ

严重急性呼吸综合征冠状病毒刺突蛋白在酿酒酵母中的表达和纯化

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中华传染病杂志 2007年第9期25卷 543-546页

作者：杨雷张洪勤吴淑珍毕云天包其郁温州医学院分子生物学中心 325000

目的构建重组表达质粒pYES6-S,诱导SARS冠状病毒刺突蛋白(spike protein)在酿酒酵母中的表达并纯化。方法反转录获得SARS冠状病毒DNA片段,PCR法获得刺突蛋白基因互相重叠的四部分片段,酶切连接成全长,在大肠埃希菌*** JM109中构建重组... 详细信息

目的构建重组表达质粒pYES6-S,诱导SARS冠状病毒刺突蛋白(spike protein)在酿酒酵母中的表达并纯化。方法反转录获得SARS冠状病毒DNA片段,PCR法获得刺突蛋白基因互相重叠的四部分片段,酶切连接成全长,在大肠埃希菌*** JM109中构建重组表达克隆pYES6- S,在酿酒酵母中诱导表达并纯化。结果重组克隆pYES6-S经酶切、测序鉴定确定,插入片段大小、方向、碱基匹配与预期一致,获得1个完整的刺突蛋白基因,表达产物纯化后,电泳鉴定,相对分子质量大小近110 000。结论成功克隆SARS冠状病毒刺突蛋白基因全长,并在酿酒酵母中诱导表达成功,有助于抗SARS分子疫苗的研究。

关键词： SARS病毒刺突蛋白反转录聚合酶链反应克隆,分子基因表达酵母菌,酿酒

基质细胞衍生因子1修饰左旋聚乳酸多孔微球促进软骨细胞增殖和组织形成

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中国组织工程研究 2025年第22期29卷 4653-4662页

作者：马玥檀诗雨楚飞洋陈琢琦刘思宇刘文帅刘霞中国医学科学院北京协和医学院整形外科医院研究中心北京市100144

背景:二维培养条件下的软骨细胞增殖及表型维持受限,多孔微球作为支架材料可提供三维培养环境,以更好地模拟体内生长条件。基质细胞衍生因子1是有强趋化效力的稳态细胞因子,能够促进细胞的黏附与增殖。目的:明确接枝基质细胞衍生因子1... 详细信息

背景:二维培养条件下的软骨细胞增殖及表型维持受限,多孔微球作为支架材料可提供三维培养环境,以更好地模拟体内生长条件。基质细胞衍生因子1是有强趋化效力的稳态细胞因子,能够促进细胞的黏附与增殖。目的:明确接枝基质细胞衍生因子1左旋聚乳酸多孔微球对软骨细胞生物学特性及软骨组织形成的影响。方法:(1)体外验证不同质量浓度基质细胞衍生因子1对兔软骨细胞增殖、迁移、表型维持的影响。(2)采用复乳法制备左旋聚乳酸多孔微球,利用碳二亚胺法将基质细胞衍生因子1接枝于左旋聚乳酸多孔微球上,通过酶联免疫吸附实验及孵育基质细胞衍生因子1特异荧光抗体验证接枝情况。(3)将兔软骨细胞分别接种于左旋聚乳酸多孔微球、接枝基质细胞衍生因子1左旋聚乳酸多孔微球上,检测细胞增殖与黏附。(4)在裸鼠背部皮下分别植入甲基丙烯酰胺基明胶-软骨细胞复合体(对照组)、左旋聚乳酸多孔微球-甲基丙烯酰胺基明胶-软骨细胞复合体(多孔微球组)、接枝基质细胞衍生因子1左旋聚乳酸多孔微球-甲基丙烯酰胺基明胶-软骨细胞复合体(多孔微球修饰组),8周后取材,分别进行组织学染色与成软骨相关基因qRT-PCR检测。结果与结论:(1)相较于0,1 000 ng/mL基质细胞衍生因子1,500 ng/mL基质细胞衍生因子1可促进软骨细胞的增殖与迁移,提升软骨细胞内Ⅱ型胶原、弹性蛋白、增殖细胞核抗原、Bcl-2 mRNA表达;(2)基质细胞衍生因子1成功接枝于左旋聚乳酸多孔微球上,接枝率为93.75%;(3)相较于左旋聚乳酸多孔微球,接枝基质细胞衍生因子1左旋聚乳酸多孔微球可促进软骨细胞的增殖、黏附;(4)裸鼠皮下植入8周后,相较于对照组、多孔微球组,多孔微球修饰组具有更明显的软骨陷窝结构、更丰富的软骨特异性基质和Ⅱ型胶原沉积,弹性蛋白、Ⅱ型胶原、增殖细胞核抗原、Bcl-2 mRNA表达升高。结果表明:接枝基质细胞衍生因子1左旋聚乳酸多孔微球有利于软骨细胞的黏附、增殖、表型维持以及体内软骨组织形成。

关键词：左旋聚乳酸多孔微球基质细胞衍生因子1 软骨细胞细胞三维培养组织工程软骨复合支架

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白细胞介素18

生物化学与生物物理进展 2000年第6期27卷 576-578页

作者：裴冬生赵惠仁徐州医学院生物化学与分子生物学研究中心徐州221002

白细胞介素 18 (IL 18)是新发现的细胞因子 ,具有多种生物学功能 .IL 18能促进外周血单个核细胞产生干扰素 γ (IFN γ)、IL 2、粒细胞巨噬细胞集落刺激因子 (GM CSF)等细胞因子 ,增强天然杀伤细胞 (NK细胞 )的细胞毒作用 .IL 18结构... 详细信息

白细胞介素 18 (IL 18)是新发现的细胞因子 ,具有多种生物学功能 .IL 18能促进外周血单个核细胞产生干扰素 γ (IFN γ)、IL 2、粒细胞巨噬细胞集落刺激因子 (GM CSF)等细胞因子 ,增强天然杀伤细胞 (NK细胞 )的细胞毒作用 .IL 18结构上与IL 1相似 ,而功能更接近IL 12 ,IL 18与IL 12均能诱导Th1细胞产生IFN γ ,存在协同效应 ,但它们的作用途径不同 .IL 18在抗感染抗肿瘤等方面有着潜在的应用前景。

关键词：白细胞介素18 信号转导自身免疫性疾病