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草鱼(Ctenopharyngodon idellus)性腺细胞系(GCO)特性和对鲤春病毒的敏感性

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渔业科学进展 2016年第6期37卷 56-61页

作者：王津津刘莹于力贾鹏陈兵史秀杰郑晓聪兰文升何俊强刘荭深圳出入境检验检疫局动植物检验检疫技术中心深圳518045

草鱼(Ctenopharyngodon idellus)性腺细胞系(GCO)是中国科学院水生生物研究所在20世纪70年代开展草鱼出血病研究时建立的一株细胞系,迄今已传至300多代,在中国鱼类病毒学研究领域发挥了重要作用。本研究采用形态学观察、细胞生长曲线测... 详细信息

草鱼(Ctenopharyngodon idellus)性腺细胞系(GCO)是中国科学院水生生物研究所在20世纪70年代开展草鱼出血病研究时建立的一株细胞系,迄今已传至300多代,在中国鱼类病毒学研究领域发挥了重要作用。本研究采用形态学观察、细胞生长曲线测定、细胞周期测定、细胞核型分析、细胞凋亡检测、电镜观察等方法,对GCO的生长特性及鲤春病毒血症病毒(SVCV)在该细胞中的增殖特性等进行了研究。结果显示,GCO细胞的最适生长温度为25℃,在M199和MEM等细胞培养液中均能较好地生长,培养液中最适的胎牛血清浓度为10%。测定了GCO细胞系对SVCV病毒的敏感性,发现与鲤(Cyprinus carpio)上皮瘤细胞系(EPC)、肥头鲤(Pimephales promelas)细胞系(FHM)、大鳞大麻哈鱼(Oncorhynchus tshawytscha)胚胎细胞系(CHSE-214)等世界动物卫生组织(OIE)推荐和各检测实验室常用的鱼类细胞系相比,GCO细胞系对SVCV表现出非常高的敏感性。生长曲线、电镜观察和凋亡实验显示,SVCV能引起GCO细胞系出现明显而稳定的细胞病变,引起GCO细胞系出现凋亡,并在细胞质中大量增殖。结果表明,GCO细胞系适用于SVCV病毒的分离、检测以及病毒致病性的有关研究。GCO细胞的适宜生长温度为15–28℃,这一特点将使它可以广泛地用于多种水生动物病毒的分离。

关键词：草鱼性腺细胞系生物学特性易感性鲤春病毒血症病毒

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非洲猪瘟病毒抗体量子点检测试纸条的研制

中国兽医科学 2017年第10期47卷 1214-1220页

作者：林彦星曹琛福张彩虹孙洁杨俊兴廖立珊黄超华刘建利阮周曦吕建强花群义深圳出入境检验检疫局动植物检验检疫技术中心广东深圳518045

根据非洲猪瘟病毒(ASFV)VP73蛋白的氨基酸序列推测抗原表位优势区域,合成多肽并与牛血清白蛋白(BSA)偶联,筛选有抗原性的多肽作为试纸条检测线的包被抗原,采用量子点作为标记材料对葡萄球菌蛋白A(SPA)进行标记,以抗SPA的多克隆抗体作为... 详细信息

根据非洲猪瘟病毒(ASFV)VP73蛋白的氨基酸序列推测抗原表位优势区域,合成多肽并与牛血清白蛋白(BSA)偶联,筛选有抗原性的多肽作为试纸条检测线的包被抗原,采用量子点作为标记材料对葡萄球菌蛋白A(SPA)进行标记,以抗SPA的多克隆抗体作为质控线的包被蛋白,制备快速检测ASFV抗体的量子点免疫层析试纸条。结果表明,所制备的试纸条与常见相关猪疫病阳性血清无交叉反应,与进口ELISA试剂盒对临床样品的检测符合率为100%;特异性强、敏感性高、稳定性好、操作简便,可用于ASFV抗体的快速检测和流行病学调查。

关键词：非洲猪瘟病毒 VP73基因量子点免疫层析试纸条

水泡性口炎病毒双重荧光RT-PCR鉴别检测方法的建立

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中国兽医科学 2017年第4期47卷 442-447页

作者：林彦星曹琛福刘建利张彩虹吕建强杨俊兴孙洁林庆燕阮周曦陶虹廖立珊花群义深圳出入境检验检疫局动植物检验检疫技术中心广东深圳518045

为建立水泡性口炎病毒印第安纳型(VSV-IND)和新泽西型(VSV-NJ)的快速鉴别检测方法,本研究根据水泡性口炎病毒2种血清型相对保守的L基因为靶序列,分别设计2对型特异性引物和2条不同荧光基团修饰的探针。经过对反应体系的优化,建立了能够... 详细信息

为建立水泡性口炎病毒印第安纳型(VSV-IND)和新泽西型(VSV-NJ)的快速鉴别检测方法,本研究根据水泡性口炎病毒2种血清型相对保守的L基因为靶序列,分别设计2对型特异性引物和2条不同荧光基团修饰的探针。经过对反应体系的优化,建立了能够同时检测VSV-IND和VSV-NJ的双重荧光RTPCR方法。该方法能准确鉴别VSV两种血清型,与口蹄疫病毒(FMDV)、蓝舌病病毒(BTV)、牛病毒性腹泻病毒(BVDV)、猪水泡病病毒(SVDV)、猪瘟病毒(CSFV)、猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)等灭活抗原核酸无非特异性扩增,特异性强。与普通RT-PCR相比,反应快速、灵敏度高。Ct值的变异系数小于3%,重复性好。利用所建立方法对126份临床样品进行检测,结果与普通RT-PCR相同。上述结果表明,本研究建立的方法为VSV-IND和VSV-NJ的同时鉴别检测提供了一种快速、特异和敏感的方法。

关键词：水泡性口炎病毒双重荧光RT-PCR 鉴别检测

超高效液相色谱-串联质谱法测定菠菜、苹果及大豆中二硝基苯胺类除草剂残留量

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质谱学报 2018年第1期39卷 69-75页

作者：张建莹靳保辉吴卫东邓慧芬林珊梁淑雯深圳出入境检验检疫局食品检验检疫技术中心广东深圳518045

以菠菜、苹果和大豆为代表性分析物,建立了超高效液相色谱-串联质谱法(UPLC-MS/MS)检测蔬菜、水果及粮谷等植物源性食品中8种二硝基苯胺类除草剂(氟乐灵、二甲戊乐灵、仲丁灵、异乐灵、磺乐灵、氨基乙氟灵、氨磺乐灵和氨基丙氟灵)的残... 详细信息

以菠菜、苹果和大豆为代表性分析物,建立了超高效液相色谱-串联质谱法(UPLC-MS/MS)检测蔬菜、水果及粮谷等植物源性食品中8种二硝基苯胺类除草剂(氟乐灵、二甲戊乐灵、仲丁灵、异乐灵、磺乐灵、氨基乙氟灵、氨磺乐灵和氨基丙氟灵)的残留量。采用电喷雾电离,正离子扫描,多反应监测(MRM)模式检测,并使用外标法定量。结果表明:8种二硝基苯胺类除草剂的测定低限均为10μg/kg;在添加水平10~200μg/kg范围内,加标回收率为70.0%~120%,相对标准偏差为0.56%~23.0%。该方法灵敏、有效,适用于蔬菜、水果和粮谷等植物源性食品中二硝基苯胺类除草剂多残留的测定。

关键词：超高效液相色谱-串联质谱(UPLCMS/MS) 二硝基苯胺除草剂蔬菜水果粮谷

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兔病毒性出血症快速检测方法的建立

中国兽医学报 2019年第7期39卷 1280-1283,1290页

作者：林颖峥林士佳孙欣熊炜张强王艳李树清上海出入境检验检疫局动植物与食品检验检疫技术中心

兔病毒性出血症是兔的1种传播性极强、致死率极高的重要传染病,针对性地加强该病原的进出境监测将对动物疫病防控具有重要的意义。本研究使用软件分析设计RT-PCR、实时荧光定量RT-PCR的引物和TaqMan探针,建立了兔病毒性出血症RT-PCR和... 详细信息

兔病毒性出血症是兔的1种传播性极强、致死率极高的重要传染病,针对性地加强该病原的进出境监测将对动物疫病防控具有重要的意义。本研究使用软件分析设计RT-PCR、实时荧光定量RT-PCR的引物和TaqMan探针,建立了兔病毒性出血症RT-PCR和实时荧光定量RT-PCR方法,并测定其特异性和敏感性。试验结果显示,只有阳性参照样品的DNA出现扩增,其他对照样品均未见扩增产物,证实这些检测方法具有良好的特异性。对阳性样品DNA进行10倍梯度稀释,再分别用新建的2种方法进行试验,结果显示兔病毒性出血症RT-PCR检测的DNA下限量为100pg,实时荧光定量RT-PCR的DNA下限量为100fg,2种方法都具有较高的敏感性。新建的RT-PCR和实时荧光定量RT-PCR方法互补应用,有助于缩短检疫周期、提高检测效率,为出入境口岸部门加强入境试验兔或其他不同用途兔的疫病检测提供技术保障。

关键词：兔病毒性出血症引物 TaqMan探针 RT-PCR 实时荧光定量RT-PCR

QuEChERS-高效液相色谱-串联质谱法测定植物源食品中环磺酮残留

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分析化学 2017年第1期45卷 118-123页

作者：粟有志李芳赵光跃黄志强雷红琴李艳美陆平伊犁出入境检验检疫局综合技术服务中心青海出入境检验检疫局湖南出入境检验检疫局

建立了高效液相色谱-串联质谱法（HPLC-MS/MS）测定植物源食品中环磺酮残留量的分析方法。样品经改进的Qu ECh ERS方法一步完成萃取净化,经酸化乙腈(含0.1%（V/V）甲酸的乙腈)提取,经石墨化碳黑（GCB）净化,提取液经离心后直接过膜上机... 详细信息

建立了高效液相色谱-串联质谱法（HPLC-MS/MS）测定植物源食品中环磺酮残留量的分析方法。样品经改进的Qu ECh ERS方法一步完成萃取净化,经酸化乙腈(含0.1%（V/V）甲酸的乙腈)提取,经石墨化碳黑（GCB）净化,提取液经离心后直接过膜上机检测。HPLC-MS/MS方法以0.1%（V/V）甲酸-乙腈为流动相,在0.25 m L/min流速下梯度洗脱,采用C18色谱柱进行液相色谱分离,电喷雾正离子电离（ESI+）,多重反应监测模式（MRM）检测,基质匹配外标法进行定量分析。结果表明,在10种基质（玉米、大米、小麦、葡萄、苹果、葡萄干、枸杞、西红柿、黄瓜、白菜）中,环磺酮在0.5;00.0 ng/m L范围内线性关系良好,相关系数均大于0.996;方法定量限（S/N≥10）为1.0μg/kg;在1.0,2.0和10.0μg/kg添加水平下,环磺酮的平均回收率为82.0%;11.8%,相对标准偏差为3.0%;4.9%。本方法高效快捷,灵敏度、准确度和精密度均符合农药残留检测要求。

关键词：环磺酮植物源食品高效液相色谱-串联质谱

传染性鲑鱼贫血症病毒实时荧光环介导等温扩增检测方法的建立

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渔业科学进展 2014年第4期35卷 51-58页

作者：史秀杰于力王津津何俊强郑晓聪贾鹏兰文升杨锦舜刘荭深圳出入境检验检疫局动植物检验检疫技术中心深圳518045

根据ISAV的基因保守序列,利用LAMP Designer软件设计了6条引物,采用新型的环介导等温扩增设备进行扩增和检测,优化了反应条件,分析了所建立方法的特异性和灵敏度,并与RT-PCR和实时荧光RT-PCR进行比较。研究表明,该方法最适反应温度为64... 详细信息

根据ISAV的基因保守序列,利用LAMP Designer软件设计了6条引物,采用新型的环介导等温扩增设备进行扩增和检测,优化了反应条件,分析了所建立方法的特异性和灵敏度,并与RT-PCR和实时荧光RT-PCR进行比较。研究表明,该方法最适反应温度为64℃,反应10 min就可以观察到明显的扩增。该方法灵敏度高,检测限为78.4 fg RNA,比常规RT-PCR灵敏度高100倍,与实时荧光定量RT-PCR灵敏度相当;特异性好,与传染性胰腺坏死病毒(IPNV)、鲤春病毒血症病毒(SVCV)、出血性败血症病毒(VHSV)、鱼类病毒性神经坏死病病毒(VNNV)、鱼腹水病毒(YAV)等14种主要鱼类病毒没有交叉反应。结果表明,本研究建立了ISAV的实时荧光环介导等温扩增检测方法,实验能对整个扩增过程进行实时监测,提高检测灵敏度的同时,防止由于开盖跑电泳或加染料而导致的污染。

关键词：传染性鲑鱼贫血症病毒实时荧光环介导等温扩增检测

超高效液相色谱-四极杆飞行时间质谱法测定克氏螯虾中39种兽药残留

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色谱 2018年第12期36卷 1261-1268页

作者：宋伟赵暮雨韩芳吕亚宁丁磊周典兵邓晓军胡艳云郑平盛旋安徽出入境检验检疫局检验检疫技术中心安徽合肥230022 食品安全分析与检测安徽省重点实验室安徽合肥230022 上海出入境检验检疫局动植物与食品检验检疫技术中心上海200135

建立了超高效液相色谱-四极杆飞行时间质谱(UHPLC-Q-TOF-MS)快速筛查克氏螯虾中39种兽药残留的分析方法。样品经酸化乙腈提取,增强型脂质去除净化剂(EMR-Lipid)结合石墨化多壁碳纳米管(GMWNTs)净化,采用UHPLC-Q-TOF-MS分析检测。通过比... 详细信息

建立了超高效液相色谱-四极杆飞行时间质谱(UHPLC-Q-TOF-MS)快速筛查克氏螯虾中39种兽药残留的分析方法。样品经酸化乙腈提取,增强型脂质去除净化剂(EMR-Lipid)结合石墨化多壁碳纳米管(GMWNTs)净化,采用UHPLC-Q-TOF-MS分析检测。通过比对待测物准分子离子的精确质量数、同位素丰度比、保留时间等特征信息进行定性初筛,通过二级谱图谱库检索比对进行确证,通过一级提取离子色谱图峰面积进行定量分析。39种化合物在各自的浓度范围内均呈良好的线性关系,线性相关系数均大于0.99,定量限为3～15μg/kg,添加回收率为62. 4%～105. 8%,相对标准偏差(RSD)为2. 5%～13. 5%,方法简便、快速、准确,可应用于克氏螯虾中喹诺酮类、磺胺类、三苯甲烷类39种药物残留的快速筛查定量。

关键词：超高效液相色谱-四极杆飞行时间质谱增强型脂质去除净化剂石墨化多壁碳纳米管兽药残留克氏螯虾

高效液相色谱-串联质谱法测定肉制品和调味料中7种水产品过敏原

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色谱 2019年第7期37卷 712-722页

作者：孟佳古淑青方真钮冰邓晓军郭德华朱坚韩芳上海大学生命科学学院食品工程系上海200444 上海出入境检验检疫局动植物与食品检验检疫技术中心上海200135 安徽出入境检验检疫局检验检疫技术中心安徽合肥230022

基于高效液相色谱-串联质谱系统建立了食品中水产品过敏原的快速筛查和定量检测方法。样品经蛋白质提取、纯化、胰蛋白酶解后,利用超高效液相色谱-四极杆/静电场轨道阱高分辨质谱(UPLC-Q/Exactive-HRMS)结合ProteinPilot软件,基于母离... 详细信息

基于高效液相色谱-串联质谱系统建立了食品中水产品过敏原的快速筛查和定量检测方法。样品经蛋白质提取、纯化、胰蛋白酶解后,利用超高效液相色谱-四极杆/静电场轨道阱高分辨质谱(UPLC-Q/Exactive-HRMS)结合ProteinPilot软件,基于母离子和碎片离子谱分析,实现蛋白质和多肽的鉴定。再通过基本局部比对搜索工具(BLAST)与Uniprot数据库对比分析,筛选出南美白虾、大闸蟹、青蟹、金枪鱼、大西洋鲑鱼的7种过敏原蛋白的30个特征肽。利用高效液相色谱-三重四极杆质谱(UPLC-QqQ-MS)系统对特征肽进行验证和多反应监测(MRM)定量研究。结果表明,该方法在5~250 mg/kg 范围内线性关系良好,检出限为2~3.5 mg/kg ,平均回收率为88.7%~110.2%。该方法重现性好,通量高,可应用于肉制品和调味料中7种过敏原的快速筛查和定量分析。

关键词：液相色谱-串联质谱特征肽段水产品过敏原肉制品调味料