检索结果-南通市图书馆

槟榔黄化植原体16SrI组的实时荧光定量PCR检测方法的建立

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分子植物育种 2024年

作者：林兆威唐庆华龙仕达牛晓庆刘帆宋薇薇中国热带农业科学院椰子研究所海南省院士团队创新中心

由植原体侵染引起的槟榔黄化病(Areca palm yellow leaf disease， YLD)是槟榔生产上一种毁灭性病害。目前，在中国引起槟榔黄化病的植原体主要有16SrI组、16SrII组及16SrXXXII组3个种群。为了对槟榔黄化植原体16SrI组群体进行检测，本... 详细信息

由植原体侵染引起的槟榔黄化病(Areca palm yellow leaf disease， YLD)是槟榔生产上一种毁灭性病害。目前，在中国引起槟榔黄化病的植原体主要有16SrI组、16SrII组及16SrXXXII组3个种群。为了对槟榔黄化植原体16SrI组群体进行检测，本研究基于槟榔黄化病植原体16SrI组secY基因，设计实时荧光定量PCR特异性引物和探针，对该引物探针组合进行准确性、灵敏度、特异性及重复性测试，并对儋州的槟榔黄化样品进行检测应用。结果显示，在准确性方面，引物qSecY-F1/R1和探针qSecY-P1能够准确检测出槟榔黄化植原体16SrI组样品；在灵敏度方面，该引物探针组合能检测到4.81×101copies/μL数量级，标准品的Ct值与质粒拷贝数的对数呈线性关系，标准曲线方程为y=-3.578 8x+43.342，相关系数R2=0.993，扩增效率为90.29%，说明该检测方法适用于低浓度植原体检测和定量分析，扩增效率符合检测技术要求；在特异性方面，该引物探针组合具有较好的特异性，16SrII组和16SrXXXII组的植原体、槟榔相关的病原及内生菌均对本引物探针无影响；在重复性方面，组内和组间重复的变异系数均低于1%，具有较好的重复性；利用该引物探针，儋州地区36份槟榔样品共22份检查为阳性，检出率为61.11%。综上，该实时荧光定量PCR检测方法能满足对槟榔黄化植原体16SrI组的检测需求，可为该群体的流行学研究提供技术参考。

关键词：槟榔槟榔黄化植原体 secY基因实时荧光定量PCR

槟榔黄化植原体tuf、secA及rp基因的克隆及序列分析

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分子植物育种 2024年

作者：林兆威龙仕达孟秀利唐庆华牛晓庆王晔楠宋薇薇中国热带农业科学院椰子研究所海南省院士团队创新中心

槟榔黄化病(areca palm yellow leaf disease， YLD)是由植原体侵染引起的一种毁灭性病害。为了从亚组水平上明确槟榔黄化植原体的分类地位，本研究采用通用引物和特异性引物对槟榔黄化植原体的tuf、secA及rp基因进行巢氏PCR扩增，并对... 详细信息

槟榔黄化病(areca palm yellow leaf disease， YLD)是由植原体侵染引起的一种毁灭性病害。为了从亚组水平上明确槟榔黄化植原体的分类地位，本研究采用通用引物和特异性引物对槟榔黄化植原体的tuf、secA及rp基因进行巢氏PCR扩增，并对核苷酸序列进行分析。结果显示，克隆获得tuf、secA及rp基因序列片段分别为842、708及1 201 bp，分别编码280、235及415个氨基酸；NCBI blastn同源性检索显示，tuf、secA及rp基因均分别与GenBank数据库中的植原体16SrI组成员相应的基因序列相似性最高；将获得的tuf、secA及rp基因分别与各组或亚组的代表株进行比对，显示与tuf I-B亚组、secA I-B亚组及rp I-B亚组植原体的同源性最高，分别为99.88%、99.63%及99.70%；系统发育树分析显示，槟榔黄化植原体在tuf、secA及rp基因聚类分析上分别与tuf I-B亚组、secA I-B亚组及rp I-B亚组植原体亲缘关系最近。综上表明，槟榔黄化植原体在tuf、secA及rp基因的划分上属于tuf I-B、secA I-B及rp I-B亚组。本研究结果为槟榔黄化病的发生、流行规律及遗传变化的研究提供理论基础。

关键词：槟榔槟榔黄化植原体 tuf基因 secA基因 rp基因

布氏鲳鲹microRNA-novel＿176组织表达及靶基因验证

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水产学报 2024年

作者：宋飞彪施立萍郑达梁欢纪馨馨佟金凤卜邵洋孙俊龙骆剑海南大学海洋生物与水产学院海南大学三亚南繁研究院海南省水产种业工程研究中心海南省院士团队创新中心

分了研究microRNA在布氏鲳鲹性腺发育中的作用，本研究以前期发现的性腺发育关键miR-novel＿176为对象，采用荧光定量PCR、荧光原位杂交、双荧光素酶报告基因、RNA干扰和过表达等实验手段，系统验证其与靶基因的调控关系及潜在的生物学... 详细信息

分了研究microRNA在布氏鲳鲹性腺发育中的作用，本研究以前期发现的性腺发育关键miR-novel＿176为对象，采用荧光定量PCR、荧光原位杂交、双荧光素酶报告基因、RNA干扰和过表达等实验手段，系统验证其与靶基因的调控关系及潜在的生物学功能。结果显示，miR-novel＿176在布氏鲳鲹各组织中均表达，在卵巢中的表达量高于精巢，但差异不显著；miR-novel＿176主要定位于卵巢细胞质，阳性信号主要位于卵母细胞和颗粒细胞中，在精巢中的支持细胞和精原细胞也显示出微弱杂交信号；miR-novel＿176与esr2和foxo3基因的3’-UTR互补，显著抑制荧光素酶的活性；细胞转染novel＿l76-antagomir和novel＿l76-agomir后，miR-novel＿176的表达水平显著下调和上调，靶基因foxo3和esr2的表达水平发生显著相反的表达变化。研究表明，miR-novel＿176的靶基因为esr2和foxo3，miR-novel＿176能够特异互补3’UTR区域进而调控其表达水平。本研究为进一步揭示miRNA在鱼类性腺发育中的功能提供了新证据，同时为布氏鲳鲹性腺发育研究提供了新的候选miRNA。

关键词：布氏鲳鲹 miRNA 性腺发育细胞定位 RNA干扰过表达

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叶下珠黄化植原体和丛枝植原体的分子鉴定

热带作物学报 2024年第4期45卷 864-871页

作者：林兆威牛晓庆唐庆华王晔楠孟秀利宋薇薇中国热带农业科学院椰子研究所/海南省院士团队创新中心海南文昌571339

2022年8月在海南省文昌市一个槟榔黄化病园内,分别发现叶片黄化和丛枝症状的叶下珠,前期检测均为植原体感染。为了明确叶下珠黄化植原体和丛枝植原体的分类鉴定,本研究通过克隆16S rDNA基因和核糖体蛋白(rp)基因,并进行基因序列一致性... 详细信息

2022年8月在海南省文昌市一个槟榔黄化病园内,分别发现叶片黄化和丛枝症状的叶下珠,前期检测均为植原体感染。为了明确叶下珠黄化植原体和丛枝植原体的分类鉴定,本研究通过克隆16S rDNA基因和核糖体蛋白(rp)基因,并进行基因序列一致性、系统发育树及虚拟RFLP等分析。结果显示:克隆获得叶下珠黄化植原体16S rDNA片段1246 bp,rp基因1212 bp;叶下珠丛枝植原体16S rDNA片段1827 bp,rp基因1240 bp。基因序列一致性显示,叶下珠黄化植原体与丛枝植原体的16S rDNA基因序列均与16SrⅠ组的植原体一致性高达98%以上,与槟榔黄化植原体海南株系的16S rDNA序列一致性达100%;而二者的rp基因序列均与rpⅠ组的植原体一致性高达99%以上。系统发育树分析显示,叶下珠黄化植原体和丛枝植原体16S rDNA基因均与翠菊黄化组(16SrⅠ)植原体聚于一个大分支,且与16SrⅠ-B亚组的槟榔黄化植原体聚于同一个小分支,亲缘关系接近;而rp基因均与翠菊黄化组(rpⅠ)植原体集聚于一个大分支,且与rpⅠ-B亚组的翠菊黄化植原体聚于同一个小分支,亲缘关系接近。虚拟RFLP分析显示,叶下珠黄化植原体和丛枝植原体的16S rDNA基因序列虚拟RFLP图谱与16SrⅠ-B的洋葱黄化植原体的参考图谱相同,且相似系数为1.00。综上表明,叶下珠黄化植原体和丛枝植原体均属于16SrⅠ-B亚组成员。研究结果可对采用铲除槟榔黄化病中间寄主的防控手段提供理论依据。

关键词：叶下珠黄化丛枝植原体分子鉴定

槟榔黄化植原体TaqMan探针实时荧光定量PCR检测方法的建立

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热带作物学报 2024年第6期45卷 1120-1126页

作者：林兆威孟秀利唐庆华牛晓庆宋薇薇中国热带农业科学院椰子研究所/海南省院士团队创新中心海南文昌571339

槟榔是海南省重要的热带经济作物,由植原体侵染引起的槟榔黄化病(areca palm yellow leaf disease,YLD)是当前我国槟榔生产上的一种毁灭性病害。为了建立精准高效的槟榔黄化植原体检测方法,本研究基于槟榔黄化植原体16SrDNA基因,设计并... 详细信息

槟榔是海南省重要的热带经济作物,由植原体侵染引起的槟榔黄化病(areca palm yellow leaf disease,YLD)是当前我国槟榔生产上的一种毁灭性病害。为了建立精准高效的槟榔黄化植原体检测方法,本研究基于槟榔黄化植原体16SrDNA基因,设计并合成特异性引物AMf/AMr和探针AM-Prode,使用该方法进行准确性、敏感性、特异性及重复性测试,并在其他植物的植原体病害进行检测。结果显示:本检测方法能够准确的检测出阳性样品,健康样品无扩增曲线;在敏感性测试中,该检测方法能检测到1.16×10^(1) copies/μL样本浓度水平,其标准曲线方程为y=-3.4185x+43.624,扩增效率为96.12%,相关系数R^(2)=0.9833;在特异性测试中,该检测方法对YLD的检测具有较好的特异性,槟榔、槟榔其他病害病原及其内生菌的基因组对本方法未造成干扰;在重复性测试中,该检测方法对槟榔黄化病的检测具有较好的重复性;并且该检测方法可对苦楝黄化病、细圆藤丛枝病及辣椒黄化病等8种植原体病害进行检测,对植原体的检测具有一定的通用性。本检测方法的建立,有利于为槟榔黄化病的精准诊断、病原监测及媒介昆虫的检测等研究提供可靠的技术手段。

关键词：槟榔槟榔黄化病植原体 TaqMan实时荧光定量PCR 病害检测

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海南省结球甘蓝的引种与腋芽苗生根诱导筛选

分子植物育种 2024年第21期 7110-7123页

作者：竺莲李孟娜杨丽梅方智远于俊川朱国鹏刘平武海南大学热带农林学院海南大学南繁学院(三亚南繁研究院) 海南省方智远院士团队创新中心中国农业科学院蔬菜花卉研究所海南中禾至佳生态农业发展有限公司

结球甘蓝是中国重要的叶类蔬菜之一，为补充丰富海南叶类蔬菜品种资源，满足消费者以及市场对优质、高产品种的需求，本研究引种种植了10个结球甘蓝品种，在各品种农艺性状、结球性状、产量性状与抗病性状等评价的基础上，进一步探索腋... 详细信息

结球甘蓝是中国重要的叶类蔬菜之一，为补充丰富海南叶类蔬菜品种资源，满足消费者以及市场对优质、高产品种的需求，本研究引种种植了10个结球甘蓝品种，在各品种农艺性状、结球性状、产量性状与抗病性状等评价的基础上，进一步探索腋芽苗生根诱导与开花诱导方法，为建立海南省自给的结球甘蓝繁育种体系打好基础。经综合评价，‘中甘602’、‘中甘606’、‘中甘608’、‘中甘828’与‘21C12’这5个结球甘蓝品种/组合的综合性状、商品性较好，较抗裂球，适宜作为海南结球甘蓝繁育种的基础育种材料，也可择区域先行推广种植。不同结球甘蓝品种的腋芽苗诱导生根表现差异明显，同一结球甘蓝品种不同株系诱导生根表现也有差异，表明腋芽苗诱导生根性状尚未经过育种选择，充分筛选利用腋芽苗诱导生根性状好的品系，再结合室内光温诱导开花或就近利用广西北部桂林市的山区低温条件诱导开花，即可初步建立海南省结球甘蓝的繁育种体系，为未来适应南方生态气候的结球甘蓝新品种选育创造条件。

关键词：结球甘蓝引种评价腋芽苗生根诱导花开诱导

菜心叶片响应高温胁迫的转录组分析及转录因子筛选

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分子植物育种 2024年第8期22卷 2473-2487页

作者：庞强强孙晓东周曼蔡兴来陈贻诵王亚强海南省农业科学院蔬菜研究所海南省蔬菜学院士团队创新中心海南省瓜菜育种工程技术研究中心海南省蔬菜生物学重点实验室海口571100

为探索菜心响应高温胁迫的分子机制,挖掘高温胁迫相关基因。利用转录组测序技术,对热敏DH系CX7-3和耐热DH系CX1-7高温胁迫处理前后叶片中的转录情况进行分析,建立差异表达基因库,并从中筛选高温胁迫转录因子。结果表明,转录组测序共获得... 详细信息

为探索菜心响应高温胁迫的分子机制,挖掘高温胁迫相关基因。利用转录组测序技术,对热敏DH系CX7-3和耐热DH系CX1-7高温胁迫处理前后叶片中的转录情况进行分析,建立差异表达基因库,并从中筛选高温胁迫转录因子。结果表明,转录组测序共获得32.25 Gb的样本数据和46 204条unigene,在9个功能数据库中有76.76%的unigene得到注释。比较高温胁迫前后样本,获得3 803个差异表达基因。GO功能分类可将DEG富集到生物过程、细胞组分和分子功能3个方面,KEGG功能富集数量居于前三位的为植物-病原相互作用、植物激素信号转导和植物MAPK信号通路。从差异表达基因库中鉴定得到275个转录因子,主要涉及MYB、AP2、C3H、NAC、C2H2、bHLH、bZIP、HSF和WRKY等34类转录因子家族,且受高温诱导呈现多种表达模式。进一步筛选获得15个共表达、4个特有表达、1个非特有表达转录因子基因。挑选12个转录因子基因进行RT-qPCR验证,基因表达趋势与RNA-seq分析结果一致。本研究结果为今后开展菜心耐热分子机制和耐热新品种的选育提供理论参考。

关键词：菜心高温胁迫转录组差异表达基因转录因子

PRRSV HNHK3-2021毒株的ORF5和ORF7序列分析

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新疆农业科学 2024年第5期61卷 1292-1300页

作者：范悦轩马佳镁黄春媛郑佳馨陈素贞张艳刘光亮曹宗喜新疆农业大学动物医学学院乌鲁木齐830000 海南省农业科学院畜牧兽医研究所/海南省热带动物繁育与疫病研究重点实验室海口571100 海南省农业科学院畜牧兽医研究所海南省院士团队创新中心海口571100

【目的】研究海南猪繁殖与呼吸综合征病毒PRRSV的流行病学特征和遗传变异规律。【方法】采集海南省海口市及周边地区样品,分离出PRRSV HNHK3-2021毒株,并测定NSP2基因以及ORF5和ORF7基因序列,采用Lasergene 7.1进行序列比对分析,用MEGA-... 详细信息

【目的】研究海南猪繁殖与呼吸综合征病毒PRRSV的流行病学特征和遗传变异规律。【方法】采集海南省海口市及周边地区样品,分离出PRRSV HNHK3-2021毒株,并测定NSP2基因以及ORF5和ORF7基因序列,采用Lasergene 7.1进行序列比对分析,用MEGA-X进行遗传演化分析。【结果】分离出的PRRSV HNHK3-2021株为美洲型毒株,PRRSV HNHK3-2021株和EF112447 HEB1、EU109503 GD、EU624117 XH-GD的ORF5和ORF7的核苷酸相似性较高,分别为99.2%~99.3%和99.5%~100%,推导氨基酸相似性为99%~99.5%和100%;PRRSV HNHK3-2021株和EU864232 SHB、AY262352_HB-2(sh)2002、AY656990 Abst-1、AY032626 CH-1a、EU807840 CH-1R的ORF5和ORF7的核苷酸相似性为87.1%~96.4%和91.4%~97.3%,推导氨基酸的相似性为86.6%~93%和91.9%~97.6%;PRRSV HNHK3-2021株和JN654459 NADC30、KP860909 FJZ03、MH068878 SD17-38、AY881994 FJ-1的ORF5和ORF7的核苷酸相似性为85.4%~87.1%和89%~91.4%。氨基酸的相似性为86.1%~87.1%和89.5%~91.9%。【结论】RRSV HNHK3-2021毒株和EU624117 XH-GD具有最近的遗传距离。

关键词：猪繁殖与呼吸综合征遗传进化 ORF5 ORF7

橡胶炭疽病拮抗海洋放线菌的筛选鉴定及其生防机制

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分子植物育种 2024年

作者：冼世莹方婧佳王阳锋苑文新李悦徐小雄冯慧敏海南热带海洋学院三亚市热带植物分子育种实验室海南热带海洋学院海南省院士团队创新中心海南省海洋食品工程技术研究中心海洋食品精深加工关键技术省部共建协同创新中心

本研究以分离的79株海洋放线菌为供试菌株，以橡胶炭疽病菌RC178为靶标，采用平板对峙法进行初筛，并进一步利用单菌平板对峙法、菌丝生长速率法和牛津杯法对初筛抑制率大于20%的菌株进行复筛；通过生理生化特征测定、16S rDNA基因序列... 详细信息

本研究以分离的79株海洋放线菌为供试菌株，以橡胶炭疽病菌RC178为靶标，采用平板对峙法进行初筛，并进一步利用单菌平板对峙法、菌丝生长速率法和牛津杯法对初筛抑制率大于20%的菌株进行复筛；通过生理生化特征测定、16S rDNA基因序列对拮抗菌株进行鉴定，明确其分类地位；通过显微镜观察拮抗菌株对靶标病原菌菌丝形态的影响，并测定拮抗菌株产真菌细胞壁水解酶能力，从而探究其生防机制。研究结果表明，经平板对峙法初筛得到16株对橡胶炭疽病具有抑菌效果的菌株，但仅菌株A5-1抑制效果最明显，大于20%。复筛结果显示，单菌平板对峙时，菌株A5-1对橡胶炭疽病的抑菌率达72.90%，但其无菌发酵液对橡胶炭疽病无明显效果。结合菌落形态、生理生化及16S rDNA系统发育进化树分析结果，鉴定菌株A5-1为清澜链霉菌( Streptomyces qinglanensis )。拮抗菌株A5-1能使病原菌菌丝扭曲、消解，造成不可逆的伤害，并能分泌蛋白酶和β-1，3葡聚糖酶，水解病原真菌细胞壁，并产生嗜铁素，抑制孢子萌发，达到生防目的。海洋来源放线菌株A5-1具有开发成为橡胶炭疽病生防菌的潜力。

关键词：橡胶炭疽病海洋放线菌拮抗生防机制