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剑麻叶斑病病原菌鉴定及同源性分析

分子植物育种 2017年第11期15卷 4356-4362页

作者：张淼芮凯吴凤芝曾向萍符美英王会芳海南大学植物保护学院海口570228 海南省农业科学院植物保护研究所海南省植物病虫害防控重点实验室海口571100

剑麻叶斑病是剑麻上普遍发生的一种病害,因在剑麻叶片上形成深层病斑而严重影响剑麻纤维的品质,为了弄清该病的发病原因,本研究分离纯化病原菌,并对病原菌的种类进行了准确的鉴定。致病性测定表明,分离到的两种病原菌均能为害剑麻,引起... 详细信息

剑麻叶斑病是剑麻上普遍发生的一种病害,因在剑麻叶片上形成深层病斑而严重影响剑麻纤维的品质,为了弄清该病的发病原因,本研究分离纯化病原菌,并对病原菌的种类进行了准确的鉴定。致病性测定表明,分离到的两种病原菌均能为害剑麻,引起剑麻叶斑病。形态学和分子生物学鉴定表明,分离到的两种病菌分别是层出镰刀菌(Fusarium proliferatum)和链格孢(Alternaria alternata)。同源性分析可知两种病菌与不同来源的同种病菌亲缘关系最近,而与其它同属的不同种类的病原菌亲缘关系较远。剑麻叶斑病病原菌种类的确定为该病的防治提供重要的指导意义。

关键词：剑麻叶斑病层出镰刀菌链格孢同源性分析

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海南岛柑橘肾形线虫病的发生及病原鉴定

基因组学与应用生物学 2020年第11期39卷 5100-5105页

作者：林小漫芮凯符美英王会芳陈绵才海南大学植物保护学院海口570228 海南省农业科学院植物保护研究所海南省植物病虫害防控重点实验室海口571100

据调查发现海南岛柑橘根部寄生线虫危害严重,其根部主要寄生线虫为肾形线虫(Rotylenchulus spp.),且分布广泛,侵染根部对其造成严重影响。从海南岛柑橘园中采集表现为黄化、小叶等症状的发病植株根部土样,用改良贝曼漏斗法分离土壤线虫... 详细信息

据调查发现海南岛柑橘根部寄生线虫危害严重,其根部主要寄生线虫为肾形线虫(Rotylenchulus spp.),且分布广泛,侵染根部对其造成严重影响。从海南岛柑橘园中采集表现为黄化、小叶等症状的发病植株根部土样,用改良贝曼漏斗法分离土壤线虫,通过形态学观察与测量、28S rDNA D2-D3区序列扩增、测序、比对及进行系统发育分析。结果表明,在60份土样中该线虫检出率为66.7%,虫口密度最高达513条/100 mL土;由形态学鉴定为肾形线虫。对肾形线虫28S rDNA D2-D3区PCR扩增条带大小为780 bp左右,与目标基因大小一致。测序结果与GenBank中登录的数据进行Blast比对,与肾状肾形线虫(Rotylenchulus reniformis)数据同源性高达99%以上。根据比对结果构建系统发育树,结果与已报道的肾状肾形线虫聚为一类。结合形态学与分子生物学技术,将该线虫鉴定为肾状肾形线虫。本研究对柑橘根部土壤肾形线虫的调查和鉴定研究,为该病害的诊断和防治提供理论参考。

关键词：柑橘肾状肾形线虫(Rotylenchulus reniformis) 鉴定

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象耳豆根结线虫Hsp70基因相关功能分析

基因组学与应用生物学 2016年第10期35卷 2653-2661页

作者：陈慧王会芳赵志祥陈绵才海南大学环境与植物保护学院海口571101 海南省农业科学院植物保护研究所海南省植物病虫害防控重点实验室海口571100

Hsp70基因的表达量在研究中常作为一个重要的生理指标来反映机体的状况。为了研究象耳豆根结线虫Hsp70基因相关功能,本研究前期成功构建了p EASY-E1-Me Hsp70和p ET30a-Me Hsp70两个原核表达载体,通过热激转化将其分别转入大肠杆菌(Esch... 详细信息

Hsp70基因的表达量在研究中常作为一个重要的生理指标来反映机体的状况。为了研究象耳豆根结线虫Hsp70基因相关功能,本研究前期成功构建了p EASY-E1-Me Hsp70和p ET30a-Me Hsp70两个原核表达载体,通过热激转化将其分别转入大肠杆菌(Escherichia coli)BL21进行表达。对转入Me Hsp70基因的大场杆菌BL21、转入空载的大肠杆菌BL21和大肠杆菌BL21原始菌种在55℃、65℃进行热稳定性测定,在37℃、200 r/min条件下进行生长曲线测定。热稳定性试验结果表明,转入p ET30a-Me Hsp70基因的大场杆菌生存时间较长,而转入p EASY-E1-Me Hsp70的菌株、转入空载的菌株和原始菌株热稳定性都相对较差。通过荧光定量PCR测定发现Me Hsp70基因均有上调表达,转入p ET30a-Me Hsp70基因的大场杆菌Hsp70基因水平高于其他菌株。生长曲线测定试验结果表明,重组菌株与原始菌株生长曲线基本一致,转入p ET30a-Me Hsp70载体的菌株调整期滞留时间长于其他菌株。该项研究表明Me Hsp70基因能够提升大肠杆菌BL21的抗应激能力和影响大肠杆菌BL21的生长,为进一步开展Me Hsp70基因在象耳豆根结线虫生长过程的功能研究提供了一定的理论基础。

关键词：象耳豆根结线虫热休克蛋白70基因大肠杆菌抗逆性生长曲线

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芽孢杆菌高产活性物质与诱变育种

分子植物育种 2017年第11期15卷 4600-4607页

作者：严婉荣符美英肖敏陈圆赵志祥肖彤斌海南省农业科学院植物保护研究所海南省植物病虫害防控重点实验室海口571100 海南省农业科学院农业环境与土壤研究所海南省耕地保育重点实验室海口571100

芽孢杆菌属细菌在农业、工业、医药、环境等各个领域发挥重要作用。本综述介绍了芽孢杆菌的主要活性物质和选育方法。分别从酶类物质、抗菌脂肽类物质、其他类型物质3个方面对芽孢杆菌主要活性产物的基本特征和功能做了详细介绍。概述... 详细信息

芽孢杆菌属细菌在农业、工业、医药、环境等各个领域发挥重要作用。本综述介绍了芽孢杆菌的主要活性物质和选育方法。分别从酶类物质、抗菌脂肽类物质、其他类型物质3个方面对芽孢杆菌主要活性产物的基本特征和功能做了详细介绍。概述了自然选育、诱变选育、原生质体选育、基因组改组选育和杂交选育5种常见的选育方法和基本原理。提供了15种芽孢杆菌菌株获得高产活性物质的诱变方法,其中1株芽孢杆菌经2次紫外诱变和1次DES处理后,产中性蛋白酶的能力提高到7 307 U/m L。这些诱变方法为今后快速获得相关活性物质提供了理论指导。

关键词：芽孢杆菌活性物质诱变选育

海南省火龙果炭疽菌病病原鉴定及有效药剂筛选

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基因组学与应用生物学 2017年第2期36卷 638-643页

作者：陈圆严婉荣赵志祥肖彤斌曾向萍王海洪海南省农业科学院植物保护研究所海南省植物病虫害防控重点实验室海口571100 海南省农业科学院农业环境与土壤研究所海南省耕地保育重点实验室海口571100

从海南省火龙果主要种植区采集病样,分离纯化出多个炭疽病菌菌株,对其进行了形态学、分子生物学和致病性的测定。同时,采用菌丝生长速率法测定了生产上常用药剂对该病菌的毒力。结果表明:该病菌的病原为胶胞炭疽菌(Colletotrichum gloeo... 详细信息

从海南省火龙果主要种植区采集病样,分离纯化出多个炭疽病菌菌株,对其进行了形态学、分子生物学和致病性的测定。同时,采用菌丝生长速率法测定了生产上常用药剂对该病菌的毒力。结果表明:该病菌的病原为胶胞炭疽菌(Colletotrichum gloeosporioides)。在供试的6种药剂中,25%吡唑醚菌酯EC、50%咪鲜胺锰盐WP、10%苯醚甲环唑WG和430 g/L戊唑醇SC对火龙果炭疽病菌的抑制效果较好,EC50依次为0.007 5 mg/L、0.109 3 mg/L、2.651 7 mg/L和5.406 0 mg/L。50%多菌灵WP和70%甲基硫菌灵WP抑制效果较差。经回归曲线比较,病菌对25%吡唑醚菌酯EC敏感性最高,对50%多菌灵WP敏感性最低。

关键词：火龙果炭疽病菌毒力测定

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南繁区玉米锈病种类鉴定及病原生物学特性

分子植物育种 2018年第1期16卷 289-296页

作者：赵志祥肖敏陈圆严婉荣肖彤斌海南省农业科学院植物保护研究所海南省植物病虫害防控重点实验室海口571100 海南省农业科学院农业环境与土壤研究所海南省耕地保育重点实验室海口571100

玉米锈病在海南等地种植的玉米上爆发成灾。单从症状和形态特征上很难将其进行分类鉴定。因此,本研究从南繁区玉米种植基地采集病样132份,经夏孢子显微形态观察,离体致病性测定和玉米锈病特异性引物PCR扩增,以及序列和系统进化分析,发... 详细信息

玉米锈病在海南等地种植的玉米上爆发成灾。单从症状和形态特征上很难将其进行分类鉴定。因此,本研究从南繁区玉米种植基地采集病样132份,经夏孢子显微形态观察,离体致病性测定和玉米锈病特异性引物PCR扩增,以及序列和系统进化分析,发现其与玉米多堆柄锈菌(Puccinia polysora)的多条序列聚在同一分支上,相似性99%。说明南繁区玉米锈病病原为多堆柄锈菌(Puccinia polysora),类型为南方型玉米锈病(Southern corn rust)。同时,通过生物学特性的测定,明确了夏孢子萌发的最适温度为20℃~28℃,致死温度为40℃,10 min;光照对夏孢子萌发影响不大;此外,蔗糖、葡萄糖、可溶性淀粉等对夏孢子的萌发有促进作用,尿素、草酸铵、酪氨酸等对夏孢子的萌发有抑制作用。该研究结果为南繁区玉米锈病的防治提供了理论参考。

关键词：玉米锈病 PCR扩增系统进化分析生物学特性

象耳豆根结线虫纤维素结合蛋白Me-cbp-1基因的克隆与功能分析

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农业生物技术学报 2017年第2期25卷 196-204页

作者：龙海波魏丽莎子赵志祥陈绵才海南省农业科学院植物保护研究所/海南省植物病虫害防控重点实验室中国热带农业科学院环境与植物保护研究所

纤维素结合蛋白（cellulose binding protein,CBP）是植物寄生线虫在侵染过程中分泌的重要效应蛋白。为了获得象耳豆根结线虫（Meloidogyne enterolobii）纤维素结合蛋白序列信息、并分析其在线虫寄生致病过程中的功能地位,本研究利用... 详细信息

纤维素结合蛋白（cellulose binding protein,CBP）是植物寄生线虫在侵染过程中分泌的重要效应蛋白。为了获得象耳豆根结线虫（Meloidogyne enterolobii）纤维素结合蛋白序列信息、并分析其在线虫寄生致病过程中的功能地位,本研究利用已构建的象耳豆根结线虫二龄幼虫转录组数据库,结合cDNA末端快速扩增（rapid-amplification of cDNA ends,RACE）技术克隆了象耳豆根结线虫纤维素结合蛋白基因Me-cbp-1（Gen Bank登录号:KU350655）cDNA全长序列。生物信息学分析表明,Me-cbp-1 cDNA全长809bp,其5’末端和3’末端的非编码区长度分别为43和139 bp,以及含有1个长度为627 bp的完整开放阅读框（ORF）,推导编码208个氨基酸。预测蛋白Me-cbp-1含有起分泌功能的信号肽结构和纤维素结合结构域。同源性搜索比对分析表明,象耳豆根结线虫Me-cbp-1与南方根结线虫（***）、爪哇根结线虫（***）及花生根结线虫（***）纤维素结合蛋白具有88%;1%的相似性。原位杂交显示,Mecbp-1在象耳豆根结线虫二龄幼虫的亚腹食道腺细胞特异表达。利用RNAi技术对象耳豆根结线虫二龄幼虫的Me-cbp-1基因进行沉默后,导致二龄幼虫的侵染率显著降低。本实验结果初步证明了纤维素结合蛋白在象耳豆根结线虫二龄幼虫侵染寄主的过程中具有重要地位,推测其通过与细胞壁主要成分纤维素结合,促进植物细胞壁的软化和降解,从而有利于提高线虫的侵染和寄生能力。本研究为揭示象耳豆根结线虫分子寄生致病机制以及进一步研究防治根结线虫病害新策略提供了理论依据。

关键词：象耳豆根结线虫纤维素结合蛋白原位杂交 RNA干扰

21份水稻种质对拟禾本科根结线虫的抗性评价

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分子植物育种 2021年第16期19卷 5489-5495页

作者：符美英罗激光林小漫吉训聪赵志祥芮凯海南省农业科学院植物保护研究所海南省植物病虫害防控重点实验室海口571100

拟禾本科根结线虫是影响水稻产量最严重的植物寄生线虫之一。筛选抗该线虫水稻种质资源对抗病育种至关重要。本研究通过室内接种二龄幼虫实验,利用单一指标与多个指标相结合的方法,根据隶属函数综合结果,评价了21份水稻品种对拟禾本科... 详细信息

拟禾本科根结线虫是影响水稻产量最严重的植物寄生线虫之一。筛选抗该线虫水稻种质资源对抗病育种至关重要。本研究通过室内接种二龄幼虫实验,利用单一指标与多个指标相结合的方法,根据隶属函数综合结果,评价了21份水稻品种对拟禾本科根结线虫的抗性。结果显示,对拟禾本科根结线虫综合抗性较高的3个品种是‘华香’、‘绿金占’和‘秀丰占5号’;对拟禾本科根结线虫敏感性较高的3个品种是‘博优225’、‘海秀占9号’和‘L671’。评价水稻对拟禾本科根结线虫的抗性只凭单一指标会存在一定的错差,通过单一指标与多个指标相结合对水稻抗拟禾本科根结线虫进行评价更为科学。本研究筛选出的高抗和高感种质对生产上有一定的指导意义,并为抗根结线虫的水稻育种提供种质资源。

关键词：拟禾本科根结线虫生长指标抗病指标抗病性

海南豇豆枯萎病病原鉴定及生物学特性初步研究

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基因组学与应用生物学 2015年第2期34卷 345-349页

作者：肖敏曾向萍严婉荣吉训聪王会芳赵志祥海南省农业科学院农业环境与植物保护研究所海南省植物病虫害防控重点实验室海口571100

从海南乐东豇豆地采集到的枯萎病病样,经形态学观察、致病性测定和真菌ITS序列分析,将其病原鉴定为尖孢镰刀菌菜豆专化型（Fusarium oxysporum ***）。生物学特性分析表明：该病原菌菌丝生长适宜温度为20-30℃,最适温度为25℃,50℃时不... 详细信息

从海南乐东豇豆地采集到的枯萎病病样,经形态学观察、致病性测定和真菌ITS序列分析,将其病原鉴定为尖孢镰刀菌菜豆专化型（Fusarium oxysporum ***）。生物学特性分析表明：该病原菌菌丝生长适宜温度为20-30℃,最适温度为25℃,50℃时不能生长;适宜pH为6-10,最适pH值为8.0;全黑暗和全光照有利于菌丝的生长;可利用多种碳、氮源,最适碳源为果糖和D-甘露醇,氮源为蛋白胨和硝酸钠。

关键词：豇豆枯萎病病原鉴定系统进化分析生物学特性