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氯化壳聚糖季铵盐纳米粒对树突状细胞的转染效率研究

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中国药学杂志 2018年第9期53卷 707-712页

作者：冯胜贡长慧沈文静李军海南大学热带生物资源教育部重点实验室海南大学海洋学院药学系海口570228

目的探讨不同修饰度氯化壳聚糖季铵盐纳米粒对小鼠骨髓来源树突状细胞转染效率的影响,为以壳聚糖纳米粒为佐剂的树突状细胞生物免疫疫苗研究提供理论依据。方法采用卤代法修饰合成不同修饰度的氯化壳聚糖季铵盐;离子交联法制备不同修饰... 详细信息

目的探讨不同修饰度氯化壳聚糖季铵盐纳米粒对小鼠骨髓来源树突状细胞转染效率的影响,为以壳聚糖纳米粒为佐剂的树突状细胞生物免疫疫苗研究提供理论依据。方法采用卤代法修饰合成不同修饰度的氯化壳聚糖季铵盐;离子交联法制备不同修饰度的氯化壳聚糖季铵盐/p EGFP-C1纳米粒;激光粒度仪测粒径和Zate电位,酶保护实验评价纳米粒质量。用改良Insba法,体外分离培养树突状细胞,用不同修饰度的氯化壳聚糖季铵盐纳米粒做体外转染实验,验证其细胞毒性和转染效率。结果纳米粒粒径:(220±15)nm,Zeta电位:(29±5)m V,包封率99.8%,氯化壳聚糖季铵盐纳米粒对树突状细胞体外转染效率比壳聚糖纳米粒提高了10%。结论氯化壳聚糖季铵盐纳米粒能有效提高p EGFP-C1质粒在树突状细胞中的转染效率。

关键词：氯化壳聚糖季铵盐纳米粒树突状细胞细胞转染

HPLC法测定海鲈鱼鱼油中EPA和DHA的含量

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食品工业 2019年第4期40卷 327-330页

作者：张凌云杨莹邓世明海南大学海洋学院海南大学热带生物资源教育部重点实验室海口570228

设计建立测定海洋鲈鱼鱼油中EPA (二十碳五烯酸)和DHA (二十二碳六烯酸)含量的方法,并测定尿素包合前后鱼油中EPA和DHA含量变化。采用Agilent色谱柱型号XDB (C_(18)),设置柱温38℃、检测波长220 nm、恒定流速1 mL/min,流动相乙腈-水梯... 详细信息

设计建立测定海洋鲈鱼鱼油中EPA (二十碳五烯酸)和DHA (二十二碳六烯酸)含量的方法,并测定尿素包合前后鱼油中EPA和DHA含量变化。采用Agilent色谱柱型号XDB (C_(18)),设置柱温38℃、检测波长220 nm、恒定流速1 mL/min,流动相乙腈-水梯度洗脱。结果表明, EPA甲酯和DHA甲酯的检测线性范围分别为0.059～5.9和0.094～9.4μg (R^2_(EPA)=0.999 6, R^2_(DHA)=0.999 9),检出限分别为0.5和0.9μg/mL。在精密度试验中, EPA甲酯和DHA甲酯的RSD分别为0.29%和0.34%。在加样回收率试验中,分别设计了6个加标浓度做检测, EPA甲酯和DHA甲酯的平均回收率分别为99.29%～99.87%(平均99.52%)和99.59%～101.48%(平均100.22%),平均RSD分别为0.24%和0.83%。尿素包合前,原料鱼油中EPA和DHA的含量分别为1.23%和2.52%;尿素包合后,含量分别为5.66%和12.34%。建立的HPLC法稳定、快捷、重复性好,适用于海鲈鱼下脚料鱼油中EPA和DHA含量测定。尿素包合后EPA和DHA的含量显著增长,达到包合前的4.8倍。

关键词：含量测定二十二碳六烯酸二十碳五烯酸高效液相色谱法尿素包合法

波纹唇鱼(Cheilinus undulatus)的胚胎发育及初孵仔鱼的形态观察

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渔业科学进展 2015年第5期36卷 38-44页

作者：陈猛猛骆剑陈国华文鑫吴光灿李文深韩玉龙海南大学海洋学院热带生物资源教育部重点实验室海口570228

波纹唇鱼(Cheilinus undulatus)是世界著名的濒危礁栖鱼类,具有特殊的生物学特性和较高的经济价值。本研究对波纹唇鱼的胚胎发育及初孵仔鱼的形态进行了观察,将其全过程划分为胚盘形成、卵裂、囊胚、原肠?神经胚、器官发生和孵化6个阶段... 详细信息

波纹唇鱼(Cheilinus undulatus)是世界著名的濒危礁栖鱼类,具有特殊的生物学特性和较高的经济价值。本研究对波纹唇鱼的胚胎发育及初孵仔鱼的形态进行了观察,将其全过程划分为胚盘形成、卵裂、囊胚、原肠?神经胚、器官发生和孵化6个阶段,共26个发育时期。波纹唇鱼的受精卵为无色透明的浮性卵,圆球形,卵径为(635.6±50.0)μm,具油球1个,其卵径显著小于多数海水鱼类。在水温27.7–29.0℃、盐度30的条件下,受精卵历时15 h 30 min孵出仔鱼。初孵仔鱼全长为(1305.5±50.0)μm,卵黄囊前部长于仔鱼头部,且油球位于卵黄囊的最前端。结果显示,波纹唇鱼卵子较小,胚胎发育较快,其较快的胚胎发育与较小的初孵仔鱼可能是导致胚后发育阶段死亡率较高的重要原因。

关键词：波纹唇鱼胚胎发育卵径神经板初孵仔鱼

布氏鲳鲹超氧化物歧化酶基因的序列分析及组织分布

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基因组学与应用生物学 2021年第5期40卷 2020-2028页

作者：朱祎刘伊凡王怡叶恒振符丹凤骆剑海南大学海洋学院南海海洋资源利用国家重点实验室热带生物资源教育部重点实验室海口570228

超氧化物歧化酶(SOD)是通过歧化反应催化超氧化物转化为O_(2)和H_(2)O_(2)的酶,铜锌超氧化物歧化酶(CuZnSOD)和锰超氧化物歧化酶(MnSOD)是两种主要存在形式。本研究通过RACE法和RT-qPCR技术对布氏鲳鲹(Trachinotus blochii)的SOD-1、SO... 详细信息

超氧化物歧化酶(SOD)是通过歧化反应催化超氧化物转化为O_(2)和H_(2)O_(2)的酶,铜锌超氧化物歧化酶(CuZnSOD)和锰超氧化物歧化酶(MnSOD)是两种主要存在形式。本研究通过RACE法和RT-qPCR技术对布氏鲳鲹(Trachinotus blochii)的SOD-1、SOD-2进行基因克隆、序列分析和组织分布的研究。结果显示,布氏鲳鲹SOD-1(icCuZnSOD)基因的ORF长486 bp,编码161个氨基酸,分子量为16.676 kD,蛋白结构预测无信号肽,含有1个SOD-CU结构域。布氏鲳鲹SOD-2(mMnSOD)基因的ORF长657 bp,编码218个氨基酸,分子量为24.261 k D,蛋白结构预测无信号肽,含有1个SOD-FE蛋白结构域。氨基酸序列同源比对结果表明,布氏鲳鲹SOD-1有1段与其他鱼类显著差异的精氨酸-天冬酰胺-丝氨酸-丙氨酸-半胱氨酸-谷氨酰胺-异亮氨酸序列,且与鲈形目点带石斑鱼(Epinephelus coioides)、斜带石斑鱼(Epinephelus malabaricus)CuZnSOD同源性较高;SOD-2与鲈形目的红甘鲹(Seriola dumerili)MnSOD同源性较高且聚为一支。组织分布结果表明,SOD-1和SOD-2在布氏鲳鲹的心脏和肝脏中表达量最高,其次在脑和鳃表达量相对较高,表明SOD-1和SOD-2可能在免疫反应和维持新陈代谢方面有重要作用。本研究为今后布氏鲳鲹的抗逆、免疫的研究提供了研究依据。

关键词：布氏鲳鲹(Trachinotus blochii) 超氧化物歧化酶序列分析组织分布

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糙海参胚胎和幼体发育的形态观察

水产学报 2012年第7期36卷 1073-1080页

作者：严俊贤王世锋周永灿朱彦博冯永勤海南大学海洋学院热带生物资源教育部重点实验室

为提高糙海参育苗技术,研究描述了糙海参从受精卵发育到稚参的形态变化,在显微镜下测定了受精卵、胚胎和幼体的大小,确定了糙海参胚胎发育的过程。结果表明,通过利用阴干、流水刺激法对成熟亲参进行人工催产,得到大量的受精卵,其受精率... 详细信息

为提高糙海参育苗技术,研究描述了糙海参从受精卵发育到稚参的形态变化,在显微镜下测定了受精卵、胚胎和幼体的大小,确定了糙海参胚胎发育的过程。结果表明,通过利用阴干、流水刺激法对成熟亲参进行人工催产,得到大量的受精卵,其受精率为90%以上。糙海参胚胎和幼体发育可分为受精卵、卵裂期、囊胚期、旋转囊胚期、原肠期、初耳状幼体、中耳状幼体、大耳状幼体、樽形幼体和稚参等阶段;在平均水温29℃,平均盐度34条件下,糙海参受精卵经3 h发育形成囊胚,4 h进入旋转囊胚期,5 h进入原肠期,19 h完成胚胎发育变态为耳状幼体;并经过7 d的生长与发育进入樽形幼体;第15天变态为稚参。观察发现,多精入卵现象则会导致胚胎发育不正常,最终使胚胎发育停止并死亡。在糙海参幼体发育过程中,大耳状幼体期幼虫臂的大小及其球状体的形成均可作为判断其幼体发育健康状况的重要指标:幼虫臂越大,球状体出现率越高,其幼虫的变态率和成活率也越高。对比发现,位于糙海参尾部的突出结构——尾突,为仿刺参和新西兰刺参所没有,这一结构差异同时导致了其骨片位置也不同;并且,糙海参胚胎和幼体与其他种类的海参在发育时间上存在一定差异。

关键词：糙海参胚胎幼体发育

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布氏鲳鲹VEGFA基因克隆与组织表达分析

基因组学与应用生物学 2020年第3期39卷 1020-1027页

作者：李岩强郭辰浩叶恒振朱凡王茜周智骆剑海南大学海洋学院南海海洋资源利用国家重点实验室热带生物资源教育部重点实验室海口570228

血管内皮生长因子A (vascular endothelial growth factor A, VEGFA)主要生理功能是增加小静脉血管与微血管的通透性,是血管生成过程最重要的正向调控因子。本研究采用RACE技术克隆布氏鲳鲹VEGFA基因和实时荧光定量PCR方法对该基因进行... 详细信息

血管内皮生长因子A (vascular endothelial growth factor A, VEGFA)主要生理功能是增加小静脉血管与微血管的通透性,是血管生成过程最重要的正向调控因子。本研究采用RACE技术克隆布氏鲳鲹VEGFA基因和实时荧光定量PCR方法对该基因进行组织分布表达分析。结果显示,该VEGFA基因cDNA序列全长1 470 bp,5’UTR、3’UTR长度分别为617 bp和208 bp,ORF为645 bp,共编码214个氨基酸,其中包括一个信号肽和两个N-糖基化位点。理论分子量为25.23 kD,等电点为8.91。同源性分析结果表明,布氏鲳鲹VEGFA基因与同属鲈形目鱼类高体鰤的同源性最高(96.1%)。荧光定量PCR分析显示,VEGFA在布氏鲳鲹组织中均有表达,其中肝脏表达水平最高,其次是心脏,在小脑、胃、肠表达较低,在肾脏组织中的表达量最低,说明布氏鲳鲹VEGFA基因在生理代谢以及血管生成过程中可能发挥重要调节作用。本研究结果为深入研究布氏鲳鲹VEGFA基因的生理代谢调控功能提供理论依据。

关键词：布氏鲳鲹 VEGFA 基因克隆组织表达

禁食及进餐前后对布氏鲳鲹缩胆囊素表达的影响

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基因组学与应用生物学 2019年第8期38卷 3506-3510页

作者：叶恒振欧阳冬冬王海洋严耿杰王茜骆剑陈国华海南大学海洋学院南海海洋资源利用国家重点实验室热带生物资源教育部重点实验室

缩胆囊素(cholecystokinin, CCK)是生物体中抑制生物食欲的饱食信号因子,布氏鲳鲹属于摄食代谢十分旺盛的鱼类,揭示其CCK的表达规律能够进一步揭示鲳鲹的代谢机制。本研究开展了布氏鲳鲹禁食及餐前餐后养殖实验,并利用荧光定量PCR技术... 详细信息

缩胆囊素(cholecystokinin, CCK)是生物体中抑制生物食欲的饱食信号因子,布氏鲳鲹属于摄食代谢十分旺盛的鱼类,揭示其CCK的表达规律能够进一步揭示鲳鲹的代谢机制。本研究开展了布氏鲳鲹禁食及餐前餐后养殖实验,并利用荧光定量PCR技术对布氏鲳鲹的缩胆囊素的表达模式进行了分析。在餐前餐后实验中,结果表明布氏鲳鲹下丘脑中的CCK的表达量在餐后0 h迅速上升达到峰值,随后在餐后1 h、3 h逐渐下降,并在+3 h下降至对照组水平。在禁食实验中,下丘脑中CCK的表达量在禁食阶段逐渐降低并在第5天下降至显著低于对照组,复投喂后在第7天又上升到对照组水平并保持至第11天。布氏鲳鲹CCK的表达对于饱食的信号反馈非常迅速,CCK的高表达与鲳鲹食欲控制相关。本研究结果可以为进一步研究布氏鲳鲹CCK基因的功能及调控提供理论参考。

关键词：布氏鲳鲹(Trachinotus blochii) 缩胆囊素禁食进餐前后

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变性淀粉制备鲈鱼油微囊的工艺

食品工业 2019年第9期40卷 69-72页

作者：杨莹张凌云邓世明海南大学海洋学院海口570228 海南大学热带生物资源教育部重点实验室海口570228

研究以鲈鱼油为芯材,探索乳化条件、处方工艺条件及喷雾干燥条件,电镜观察鱼油微囊的形态。乳化条件:乳化剂配比蔗糖酯与单硬脂酸甘脂质量比9︰1,均质转速为10 000 r/min,均质时间为1.0 min最佳。通过正交试验设计得到制备鱼油微囊的最... 详细信息

研究以鲈鱼油为芯材,探索乳化条件、处方工艺条件及喷雾干燥条件,电镜观察鱼油微囊的形态。乳化条件:乳化剂配比蔗糖酯与单硬脂酸甘脂质量比9︰1,均质转速为10 000 r/min,均质时间为1.0 min最佳。通过正交试验设计得到制备鱼油微囊的最佳处方工艺条件:壁材比(变性淀粉与麦芽糊精质量比) 2︰1、芯壁比1︰2、乳化剂用量1.00%。利用此条件制备鱼油微囊的综合分数最高。对最佳处方工艺进行验证试验, RSD为0.44%,表明工艺稳定。再通过正交试验设计得到制备鱼油微囊的最佳喷雾干燥条件:出风温度170℃、空气流量0.35 m3/min、固形物含量25%、空气压力0.3 MPa。在此工艺条件下,进样速度360 mL/h,雾化压力100 kPa。并对最佳喷雾干燥工艺进行验证试验, RSD为066%,表明工艺稳定。通过电镜显示微囊呈圆形或椭圆形,部分微囊有凹陷。

关键词：鲈鱼油鱼油微囊乳化条件处方工艺喷雾干燥

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敌草快对斑马鱼组织损伤及慢性肝脏损害作用

农业环境科学学报 2021年第5期40卷 949-956页

作者：沈文静张潇赵子昂方再光谢曦王蓉胡文婷海南大学生命科学与药学院热带生物资源教育部重点实验室海口570228 海南大学海洋学院海口570228

探讨敌草快对斑马鱼(Brachydanio rerio)的毒性效应及其致毒机理。观察敌草快对斑马鱼鳃和肝脏组织的急性损伤效应,并分析慢性敌草快胁迫对斑马鱼肝脏超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽-S转移酶(GST)、丙二醛(MDA)和甘油三酯(TG)的影响。... 详细信息

探讨敌草快对斑马鱼(Brachydanio rerio)的毒性效应及其致毒机理。观察敌草快对斑马鱼鳃和肝脏组织的急性损伤效应,并分析慢性敌草快胁迫对斑马鱼肝脏超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽-S转移酶(GST)、丙二醛(MDA)和甘油三酯(TG)的影响。敌草快对斑马鱼的96 h半致死浓度(LC50)为16.92 mg·L^(-1);斑马鱼暴露于8.46、4.23、1.69 mg·L^(-1)敌草快中96 h后,苏木精-伊红(H-E)染色显示鳃小片出现卷曲变形、上皮细胞排列不规则和细胞脱落现象,肝细胞呈现明显的肿大,胞质产生空泡化,局部区域细胞坏死、溶解,斑马鱼鳃和肝脏组织的损伤程度随着敌草快浓度的增加而加重;暴露于1.69、0.84 mg·L^(-1)和0.34 mg·L^(-1)敌草快中28 d后,斑马鱼肝脏的SOD活性变化表现为降-升-降,并呈现出剂量效应;1.69 mg·L^(-1)和0.84 mg·L^(-1)敌草快处理组肝脏的GST活性表现为先升后降,28 d时显著低于对照组(P0.05);与对照组相比,处理组肝脏的MDA含量在第7 d和14 d变化均不明显(P>0.05),在第28 d时0.84 mg·L^(-1)和1.69 mg·L^(-1)敌草快处理组肝脏的MDA含量极显著升高(P<0.01);处理组斑马鱼肝脏中TG的含量均从14 d开始出现增加。水体中的敌草快对斑马鱼有较严重的急性损伤作用,长时间暴露于低浓度敌草快中的斑马鱼,其肝脏会发生氧化应激反应,肝脏代谢功能也会受到影响。

关键词：敌草快斑马鱼组织结构肝脏损害