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新型二聚体突变荧光引物定量PCR方法的建立及其在检测HCV中的应用

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中华检验医学杂志 2011年第8期34卷 735-738页

作者：夏乾峰文阳安刘靳波李朴涂植光重庆医科大学医学检验系教育部临床检验诊断学重点实验室 400016

目的开发新型二聚体突变荧光引物技术，建立一种能广泛应用于临床检测HCV的实时PCR方法。方法构建重组质粒pMD18-T—HCV5’NCR作为标准品，设计二聚体突变荧光引物，优化定量PCR体系，并进行方法学评价。将本法应用于临床确诊的30份HCV... 详细信息

目的开发新型二聚体突变荧光引物技术，建立一种能广泛应用于临床检测HCV的实时PCR方法。方法构建重组质粒pMD18-T—HCV5’NCR作为标准品，设计二聚体突变荧光引物，优化定量PCR体系，并进行方法学评价。将本法应用于临床确诊的30份HCV阳性患者、30份其他病毒性肝炎患者和30份健康志愿者血清标本的检测，定量结果与商品化TaqManHCV定量试剂盒的定量结果进行比较。结果建立了利用二聚体突变荧光引物的实时PCR方法，检测的线性范围为20-10^9IU／ml；批内CV在1．37％-4．59％之间，批间CV在1．58％-4．81％之间；对所有其他病毒性肝炎患者和健康志愿者血清HCV的检测结果均阴性，检测特异性为100％（60／60）；对临床确诊的HCV感染患者血清标本全部检出HCV阳性，定量结果与商品化TaqManHCV定量试剂盒的定量结果具有很好的相关性，相关系数R2=0．9501。结论建立的以二聚体突变荧光引物为平台的HCV实时PCR检测方法，具有快速、价廉、准确、结果可靠等特点，可为HCV感染的诊断、治疗监测和流行病学调查提供较好的技术支持。

关键词：肝炎病毒属聚合酶链反应 RNA 病毒

医院典型废水处理工艺单元的抗生素去除效果与评价

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环境科学与技术 2015年第4期38卷 121-127页

作者：肖湘波唐天乐徐浩唐文浩王培杨洋海南大学环境毒理学海口市重点实验室海南海口570228 海南医学院热带医学与检验医学院海南海口571101 海南大学热带作物种质资源保护与开发利用教育部重点实验室海南海口570228 昆明理工大学环境科学与工程学院云南昆明650500

采用固相萃取-高效液相色谱法同时检测了医院废水中2种喹诺酮类（氧氟沙星、环丙沙星）和4种磺胺类（磺胺嘧啶、磺胺甲基嘧啶、磺胺二甲基嘧啶、磺胺甲叶恶唑）抗生素,并对医院废水处理工艺的抗生素去除能力进行了评价。结果表明,现行... 详细信息

采用固相萃取-高效液相色谱法同时检测了医院废水中2种喹诺酮类（氧氟沙星、环丙沙星）和4种磺胺类（磺胺嘧啶、磺胺甲基嘧啶、磺胺二甲基嘧啶、磺胺甲叶恶唑）抗生素,并对医院废水处理工艺的抗生素去除能力进行了评价。结果表明,现行医院废水处理工艺对抗生素的去除能力介于36.3%~100%,废水处理工艺对医院废水中抗生素的去除能力由大到小为：＂厌氧池→好氧池→沉淀池→加氯＂〉＂化粪池→加氯＂〉＂好氧池→沉淀池→加氯＂;＂厌氧池→好氧池→沉淀池→加氯＂工艺对磺胺嘧啶和磺胺甲叶恶唑去除率达到100%,氧氟沙星和环丙沙星的去除率分别为92.5%和95.6%,磺胺甲基嘧啶的去除率为45.8%;＂化粪池→加氯＂工艺对磺胺甲基嘧啶和磺胺甲叶恶唑去除率达到100%,氧氟沙星的去除率达到97.4%,环丙沙星、磺胺嘧啶和磺胺二甲基嘧啶的去除率分别为75.0%、57.9%、36.3%;＂好氧池→沉淀池→加氯＂工艺对磺胺甲基嘧啶去除率达到100%,氧氟沙星、环丙沙星和磺胺甲叶恶唑的去除率分别为59.5%、10.9%和53.8%;厌氧单元对氧氟沙星去除效果较差,对磺胺嘧啶去除效果较好;纯氧曝气好氧单元对环丙沙星、磺胺甲基嘧啶、磺胺二甲基嘧啶、磺胺甲叶恶唑和氧氟沙星的去除率分别为76.0%、62.5%、77.3%、68.4%和13.9%;加氯消毒单元对磺胺二甲基嘧啶的去除效果较差,对磺胺甲叶恶唑的去除效果较好,对其他4种抗生素的去除率也能达到50%以上。

关键词：医院废水处理工艺抗生素去除率评价

某石油炼化企业职工血压偏高现状及其影响因素分析

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中国职业医学 2024年第4期51卷 405-409页

作者：苏朱娜牛永茂吴祺晟周炳贤范世恒卢春芸彭建业张能德于德娥张静海南医科大学公共卫生学院 Heinz Mehlhorn院士工作站海口市疾病预防控制中心

目的分析海南省某大型石油炼化企业职工血压偏高现状及其影响因素。方法采用方便抽样方法，以海南省某石化企业940名职工为研究对象，对其进行健康状况调查、职业健康检查和职业紧张测量。结果研究对象血压偏高检出率为23.9%(225/940... 详细信息

目的分析海南省某大型石油炼化企业职工血压偏高现状及其影响因素。方法采用方便抽样方法，以海南省某石化企业940名职工为研究对象，对其进行健康状况调查、职业健康检查和职业紧张测量。结果研究对象血压偏高检出率为23.9%(225/940)；其中，正常高值血压、高血压检出率分别为17.6%(166/940)和6.3%(59/940)。职业紧张检出率为28.8%(271/940)。多因素logistic回归分析结果显示，在排除性别、家庭住址、工龄、文化程度、个人月收入、体育锻炼、吸烟、食盐摄入情况、食油摄入情况、职业紧张和高温等混杂因素的影响后，年龄30～90 dB(A)者（P90 dB(A)人群的血压管理工作。

关键词：石油炼化企业职工血压偏高高血压影响因素

邻苯二甲酸酯对育龄人群及其子代生殖健康影响的研究进展

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海南医学院学报 2023年第16期29卷 1261-1268,1275页

作者：林彩云尹飞飞王惠子杨华海南省妇女儿童医学中心海南海口570206 海南医学院热带转化医学教育部重点实验室海南海口571199 海南医学院-香港大学热带传染病联合实验室海南海口571199

我国育龄妇女总生育率呈明显下降趋势。研究表明,年龄和遗传等因素与生育率有显著相关性,此外,环境内分泌干扰也可损害生育力。随着新型环境污染物的大量使用,其对育龄夫妇生育能力影响成为相关领域研究热点。邻苯二甲酸酯是一种常用塑... 详细信息

我国育龄妇女总生育率呈明显下降趋势。研究表明,年龄和遗传等因素与生育率有显著相关性,此外,环境内分泌干扰也可损害生育力。随着新型环境污染物的大量使用,其对育龄夫妇生育能力影响成为相关领域研究热点。邻苯二甲酸酯是一种常用塑料制品中的增塑剂,普遍存在于玩具、食品包装、建筑材料、电子与医疗部件、个人护理产品、办公学习用品等塑料包装产品中,是环境污染的主要物质。多项研究表明,邻苯二甲酸酯不仅能造成环境及水源的污染,还因其生殖毒性、遗传毒性、免疫毒性、神经毒性、致畸、致癌等多种毒性作用,对人类健康尤其是对育龄人群及其子代生殖健康的影响不容忽视。当前邻苯二甲酸酯及新型替代品在生殖健康的人群流行病学研究尚存在争议,毒性机制仍处于探索阶段。本文通过对邻苯二甲酸酯对亲本世代、子代(包括胚胎)的生殖发育及遗传毒性等影响的国内外研究进展做一综述,旨在推进邻苯二甲酸酯污染物有效控制措施的制定与其对生殖健康风险的预测,从而为邻苯二甲酸酯对育龄阶段人群不良生殖结局的精准防控提供科学依据和指导方案。

关键词：邻苯二甲酸酯育龄人群生殖毒性遗传毒性

褐藻素对脂多糖活化小胶质细胞诱导神经元损伤的保护作用

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中国老年学杂志 2023年第21期43卷 5253-5258页

作者：张琳琳董筱茜于颖泽张家煜牛韶祎张晨昱胡文婷王蓉赵文杰海南大学药学院热带生物资源教育部重点实验室海南海口570228 海南医学院第一附属医院神经内科

目的探讨褐藻素是否对脂多糖(LPS)激活的小胶质细胞诱导神经元细胞损伤具有保护作用。方法采用LPS活化BV2小胶质细胞构建小胶质细胞激活模型。将BV2细胞分为6组:正常对照组、LPS组、低剂量褐藻素治疗组、高剂量褐藻素治疗组、正常低剂... 详细信息

目的探讨褐藻素是否对脂多糖(LPS)激活的小胶质细胞诱导神经元细胞损伤具有保护作用。方法采用LPS活化BV2小胶质细胞构建小胶质细胞激活模型。将BV2细胞分为6组:正常对照组、LPS组、低剂量褐藻素治疗组、高剂量褐藻素治疗组、正常低剂量褐藻素对照组、正常高剂量褐藻素对照组。采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测各组BV2细胞上清中肿瘤坏死因子(TNF)-α和白细胞介素(IL)-6水平;通过活性氧(ROS)试剂盒和线粒体膜电位试剂盒,采用流式细胞术分别检测各组BV2细胞的ROS水平和线粒体膜电位;采用CCK-8检测各组BV2细胞条件培养基与SH-SY5Y细胞共培养24 h后SH-SY5Y细胞的细胞存活率;采用膜联蛋白(Annexin)Ⅴ-异硫氰酸荧光素(FITC)试剂盒、流式细胞仪检测各组SH-SY5Y细胞的凋亡情况。结果与正常对照组相比,LPS组TNF-α、IL-6水平明显增加(P0.05)。LPS组相较于正常对照组,BV2细胞ROS水平显著升高(P0.05)。与正常对照组相比,LPS组BV2细胞线粒体膜电位显著降低(P0.05)。LPS激活的BV2细胞条件培养基与SH-SY5Y共培养后,SH-SY5Y细胞存活率明显降低,细胞凋亡率明显增加(P0.05)。结论褐藻素可能通过减少促炎因子的释放、改善JC-1、抑制氧化应激水平,抑制小胶质细胞的过度活化和减少神经元凋亡,因而具有神经保护功能。

关键词：褐藻素脂多糖神经炎症 BV2小胶质细胞 SHSY5Y细胞

波形蛋白对EV71感染小鼠脑组织引起NLRP3炎性小体活化的影响

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南方医科大学学报 2018年第6期38卷 704-710页

作者：肖汉森谢茜钟家禹 Bisanga Gerald Rukundo 何肖龙屈雅丽曹虹南方医科大学广东省热带病研究重点实验室//微生物学系广东广州510515 广州市妇女儿童医疗中心中心实验室广东广州510623 南方医科大学国际教育学院广东广州510515

目的观察肠道病毒71型(EV71)感染的小鼠中枢神经系统中波形蛋白(VIM)介导NLRP3炎性小体的活化。方法取3~5 d龄的VIM基因敲除型乳鼠(VIM-/-)40只,随机分为EV71感染实验组和空白对照组,20只/组,实验组每只腹腔注射浓度为1×108半数组织培... 详细信息

目的观察肠道病毒71型(EV71)感染的小鼠中枢神经系统中波形蛋白(VIM)介导NLRP3炎性小体的活化。方法取3~5 d龄的VIM基因敲除型乳鼠(VIM-/-)40只,随机分为EV71感染实验组和空白对照组,20只/组,实验组每只腹腔注射浓度为1×108半数组织培养感染剂量(TCID50)病毒液10μL,空白组腹腔注射无菌PBS 10μL,再将同品质的野生型乳鼠(WT)40只以同样方式分组处理。观察小鼠感染状态1周,提取小鼠脑脊液(CSF)和脑组织全蛋白、RNA及组织切片,通过Western blot、ELISA、RT-PCR检测小鼠中枢神经系统的炎症小体激活状况,以及免疫组化技术考察小鼠中枢神经系统的损伤。结果与空白组比较,VIM-/-实验组小鼠在感染EV71后CSF和脑组织中NLRP3炎症小体及其下游产物IL-1β、caspase-1含量无明显变化;而WT实验组小鼠相较VIM-/-型实验组的NLRP3、IL-1β和caspase-1含量显著升高(P实验组IL-1β和caspase-1的m RNA拷贝数亦明显高于VIM-/-型实验组小鼠(P<0.05);VIM-/-感染EV71的脑组织神经元受损程度较WT小鼠明显轻微(P<0.05)。结论 EV71通过感染小鼠脑组织诱发VIM基因介导的NLRP3炎症小体活化,释放IL-1β和caspase-1,这可能是中枢神经系统炎症和神经元损伤的原因之一。

关键词： EV71 波形蛋白炎性小体中枢神经系统

曼氏迭宫绦虫cathepsin L样蛋白酶的生物信息学分析

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分子诊断与治疗杂志 2017年第5期9卷 328-333,346页

作者：李奕基梁培海南医学院病原生物学教研室海南海口571199 海南医学院热带病转化医学教育部重点实验室海南海口571199

目的通过生物信息学预测曼氏迭宫绦虫cathepsin L样蛋白酶(Smcathepsin L样蛋白酶)的生物学特征及其潜在功能和结构,为下一步Smcathepsin L样蛋白酶参与寄生虫和宿主相互作用过程研究提供依据。方法通过NCBI的ORF finder工具对Smcatheps... 详细信息

目的通过生物信息学预测曼氏迭宫绦虫cathepsin L样蛋白酶(Smcathepsin L样蛋白酶)的生物学特征及其潜在功能和结构,为下一步Smcathepsin L样蛋白酶参与寄生虫和宿主相互作用过程研究提供依据。方法通过NCBI的ORF finder工具对Smcathepsin L样蛋白酶的开放阅读框(ORF)进行分析,利用Ex PASy网站进行蛋白的物理化学参数、信号肽、跨膜螺旋和潜在分子生物学功能的预测,通过NCBI/BLAST对蛋白保守功能域进行预测。从NCBI网站获取不同物种的cathepsin L样蛋白酶序列,并利用Vector NTI suit 8.0和Tree View软件进行分析。利用SWISS-MODEL网站和SPDBV4.10软件分析Smcathepsin L样蛋白酶的三维空间结构。结果 Smcathepsin L样蛋白酶是一个全长基因,编码336个氨基酸。蛋白由2个典型的cathepsin L样蛋白酶结构域组成,序列当中有信号肽,是一个稳定的可溶性蛋白分子。三维空间立体结构分析结果显示Smcathepsin L样蛋白酶是一个保守的蛋白。Smcathepsin L样蛋白酶编码氨基酸序列与细粒棘球绦虫、链状带绦虫、多房棘球绦虫和人的cathepsin L样蛋白酶基因的同源性分别是50%、50%、49%和46%。分子进化分析显示Smcathepsin L样蛋白酶与日本血吸虫、多房棘球绦虫和链状带绦虫亲源性更近,而与其他物种,例如原虫、线虫和哺乳动物亲源性较远。结论 Smcathepsin L样蛋白酶可能是一个潜在的分泌蛋白,该蛋白能在胞外发挥作用,即在寄生虫的消化、转移、入侵及宿主-寄生虫相互作用中起着重要的作用,是一个具有潜在研究价值的多功能分子。

关键词：曼氏迭宫绦虫 cathepsin L样蛋白酶生物信息学分析

PD-L1介导的胰腺癌ceRNA网络机制解析及标志物识别

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国际免疫学杂志 2019年第6期42卷 562-565页

作者：王红黄惠英郑立宇李孔宁海南医学院热带转化医学教育部重点实验室海口571199 哈尔滨医科大学生物信息科学与技术学院 150081

目的对胰腺癌中程序性死亡因子配体1(programmed death factor ligand 1,PD-L1)基因介导的内源竞争RNA(competing endogenous RNAs,ceRNA)ceRNA互作网络的机制解析及其预后标志物进行识别.方法构建PD-L1基因相关的ceRNA网络,对网络中的... 详细信息

目的对胰腺癌中程序性死亡因子配体1(programmed death factor ligand 1,PD-L1)基因介导的内源竞争RNA(competing endogenous RNAs,ceRNA)ceRNA互作网络的机制解析及其预后标志物进行识别.方法构建PD-L1基因相关的ceRNA网络,对网络中的基因表达谱和甲基化谱进行聚类分析,识别与生存相关的基因.结果从PD-L1介导的ceRNA网络中识别了12个与生存潜在相关的mRNA以及挖掘出基因甲基化显著影响患者生存的多个mRNAs.结论通过生物信息学分析,在PD-L1介导的ceRNA网络中识别出多个潜在的胰腺癌生物标志物,从而为胰腺癌的临床治疗提供新的预后靶标.

关键词：胰腺癌程序性死亡因子配体内源竞争RNA 生存分析

海南文昌海域珊瑚非培养共附生放线菌的多样性

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基因组学与应用生物学 2021年第11期40卷 3528-3537页

作者：李芬发周双清许云吴文嫱夏薇张荣萍黄东益黄小龙热带生物资源教育部重点实验室海口570228 海南大学生命科学与药学院海口570228 桂林医学院药学院桂林541199

本研究旨在探究海南文昌海域稀杯盔形珊瑚(Galaxea astreata)、角蜂巢珊瑚(Favites complanata)、滨珊瑚(Porites lichen)、瘿叶蔷薇珊瑚(Montipora aequituberculata)以及叶状蔷薇珊瑚(Montipora foliosa)共附生放线菌物种多样性。本研究提取珊瑚样品总DNA以扩增16S rRNA基因的V3-V4高变区,通过Miseq高通量测序对珊瑚的共附生放线菌群落结构和多样性进行研究分析。结果表明,6个珊瑚样品中存在丰富的放线菌类群,选取的放线菌门序列归为656个不同的OTU,包括放线菌门下的6个纲,19个目,33个科以及50个属。此外在6个珊瑚样品中均检测到大量的未知类群,有407个OTU没有指定到已知的分类水平,其中最高的是叶状蔷薇珊瑚及其共附生放线菌文库,未分类的属达到了94.17%,很可能代表着新的放线菌类群。多样性指数分析结果显示,稀杯盔形珊瑚的共附生微生物丰度和多样性水平最高,叶状蔷薇珊瑚为最低。本研究发现,珊瑚样品之间存在明显的共附生放线菌类群差异性,这种差异性不仅存在于珊瑚的种类之间,也表现在同种珊瑚的个体之间。

关键词：珊瑚放线菌多样性高通量测序海南文昌