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结核分枝杆菌c-di-AMP磷酸二酯酶的重组腺病毒的构建及其诱导的体液免疫应答

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中国人兽共患病学报 2025年

作者：胡家豪宁唤唤董梦娟路延之代婷张从玥徐子晴王姝予周正言柏银兰空军军医大学基础医学院微生物与病原生物学教研室空军军医大学基础医学院学员队空军军医大学军事医学创新中心宁夏医科大学基础医学院生理学和神经生物学系延安大学生命科学学院

目的构建表达结核分枝杆菌（Mtb）c-di-AMP磷酸二酯酶CnpB的重组腺病毒（rAd）并检测其诱导的体液免疫应答。方法经密码子优化的MtbCnpB编码基因克隆入质粒pcADV，获得的重组质粒pcADV-CnpB转染HEK293T细胞，并用Westernblot鉴定表达... 详细信息

目的构建表达结核分枝杆菌（Mtb）c-di-AMP磷酸二酯酶CnpB的重组腺病毒（rAd）并检测其诱导的体液免疫应答。方法经密码子优化的MtbCnpB编码基因克隆入质粒pcADV，获得的重组质粒pcADV-CnpB转染HEK293T细胞，并用Westernblot鉴定表达。重组pcADV-CnpB与骨架质粒共转染HEK293T细胞包装获得重组腺病毒rAd-CnpB，以HEK293T细胞扩增rAd-CnpB，Westernblot和免疫荧光检测rAd-CnpB表达目的蛋白。以rAd-CnpB滴鼻免疫小鼠，收集小鼠血清与肺泡灌洗液（BALF），ELISA检测抗原特异性抗体水平。结果酶切和测序鉴定表明重组质粒pcADV-CnpB构建成功，该质粒能够在真核细胞中表达。在HEK293T细胞内包装并获得rAd-CnpB，大量扩增并纯化获得滴度为5.53×1010PFU/mL的rAd-CnpB。rAd-CnpB可在HEK293T细胞中表达目的蛋白CnpB。rAd-CnpB滴鼻免疫小鼠，可诱导BALF中CnpB特异性IgG与分泌型IgA水平的增加，同时诱导血清中产生高水平的CnpB特异性IgG。结论成功构建表达Mtb c-di-AMP磷酸二酯酶CnpB的重组腺病毒rAd-CnpB，并且rAd-CnpB经黏膜免疫可诱导抗原特异性体液免疫与黏膜免疫应答，可用于结核病新疫苗策略的研究。

关键词：结核分枝杆菌重组腺病毒 c-di-AMP 磷酸二酯酶黏膜免疫

c-di-AMP为佐剂的重组卡介苗免疫对小鼠白色脂肪的调节作用

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中国人兽共患病学报 2025年

作者：董梦娟常宇骁宁唤唤路延之康健徐铭泽代婷李嘉玲郝乐冉张琳娜柏银兰宁夏医科大学基础医学院生理学和神经生物学系空军军医大学基础医学院微生物与病原生物学教研室空军军医大学军事医学创新中心延安大学生命科学学院

目的研究c-di-AMP为佐剂的重组卡介苗（rBCG）调节小鼠附睾白色脂肪（eWAT）代谢及免疫的作用及机制。方法SPF级雄性C57BL/6小鼠经静脉免疫卡介苗（BCG）和重组卡介苗（rBCG），监测小鼠体重变化。分离并称重小鼠eWAT重量，血球仪计血... 详细信息

目的研究c-di-AMP为佐剂的重组卡介苗（rBCG）调节小鼠附睾白色脂肪（eWAT）代谢及免疫的作用及机制。方法SPF级雄性C57BL/6小鼠经静脉免疫卡介苗（BCG）和重组卡介苗（rBCG），监测小鼠体重变化。分离并称重小鼠eWAT重量，血球仪计血管基质成分（SVFs）数量。制备小鼠脂肪组织切片，HE染色后显微镜下观察和比较各组小鼠eWAT脂肪细胞大小、数量和形态以及冠状结构（CLS）形成等变化。qRT-PCR检测各组小鼠脂肪代谢相关因子、细胞因子和衰老相关基因的转录水平。结果BCG和rBCG免疫小鼠体重随时间逐渐增加，rBCG免疫诱导eWAT比重增加，SVFs数量降低。HE染色结果显示，BCG免疫促进eWAT脂肪细胞增生和rBCG免疫促进脂肪细胞肥大，BCG和rBCG免疫均可诱导eWAT中CLS形成。qRT-PCR检测结果显示，rBCG免疫可抑制eWAT脂肪分解和能量消耗相关基因表达。BCG免疫对细胞因子转录作用影响不大，而rBCG显著诱导IFN-γ和IL-1Ra，抑制IL-15和IL-2的转录，但不诱导衰老相关基因的表达。结论 rBCG免疫可诱导eWAT脂肪细胞肥大，其机制与抑制eWAT脂肪分解及调节细胞因子表达有关。

关键词：卡介苗重组卡介苗环二腺苷酸白色脂肪脂肪代谢细胞因子

SHP-1在肿瘤发生发展及免疫调控中的作用及其药物研发进展

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空军军医大学学报 2025年

作者：张玲玲郑文静赵自豪张瀚江俊伟高小朋王涛延安大学生命科学学院空军军医大学基础医学院医学遗传与发育生物学教研室

Src同源区2蛋白质酪氨酸磷酸酶1（SHP-1）由PTPN6基因编码，是一种重要的非受体酪氨酸磷酸酶，在调节细胞周期、细胞运动和细胞死亡等多种重要生物学过程中发挥着关键作用。SHP-1的表达水平与多种肿瘤的预后紧密相关，但其在不同肿瘤中... 详细信息

Src同源区2蛋白质酪氨酸磷酸酶1（SHP-1）由PTPN6基因编码，是一种重要的非受体酪氨酸磷酸酶，在调节细胞周期、细胞运动和细胞死亡等多种重要生物学过程中发挥着关键作用。SHP-1的表达水平与多种肿瘤的预后紧密相关，但其在不同肿瘤中的作用因癌症类型而异。尤为重要的是，SHP-1在调节巨噬细胞免疫应答中发挥着关键调控作用，通过参与如CD47-SIRPα、MHC-Ⅰ-LILRB1和CD24-Siglec-10等信号途径，对肿瘤免疫逃逸具有重要影响。目前，SHP-1已成为抗癌药物研发中具有吸引力的靶标，多种旨在调节SHP-1活性的小分子化合物正处于临床试验探索阶段。本文综述了SHP-1的分子结构、生物学功能、在肿瘤发生发展进程中的作用，及其对巨噬细胞介导的肿瘤免疫调控的深刻影响，并概述了针对SHP-1的药物研发最新进展，旨在为深入理解SHP-1作为肿瘤治疗策略中的潜在靶点提供全面而深入的视角。

关键词： SHP-1 非受体酪氨酸酶肿瘤生物学信号转导抗癌药物

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男性生殖系统:病毒的储存库与性传播

中国科学:生命科学 2025年第1期 45-66页

作者：张静王菲王宇韩代书中国医学科学院基础医学研究所北京协和医学院基础学院

近年来新冠等多种病毒在全球范围内暴发流行,进一步加深了人们对病毒性传染病的担忧.除了不同病毒引起的主要疾病外,人们还担忧一个共性问题:病毒对男性生殖系统(male reproductive system, MRS)的易感性,及其损害男性生殖与性传播风险.... 详细信息

近年来新冠等多种病毒在全球范围内暴发流行,进一步加深了人们对病毒性传染病的担忧.除了不同病毒引起的主要疾病外,人们还担忧一个共性问题:病毒对男性生殖系统(male reproductive system, MRS)的易感性,及其损害男性生殖与性传播风险. MRS为了保护生殖细胞不受免疫系统的攻击,建立了免疫豁免环境.睾丸是典型的免疫豁免器官,附睾也具有免疫豁免特性.然而免疫豁免环境也可成为微生物逃避免疫监视的庇护所,特别是多种病毒容易感染MRS,并逃避免疫系统的清除.病毒在睾丸中可以长期存在,也可以感染其他男性生殖器官,主要包括附睾、精囊和前列腺等.为了抵抗入侵的病毒,这些器官建立了独特的天然抗病毒机制.尽管如此,一些病毒仍可以诱发MRS炎症,影响男性生殖健康.此外,感染MRS的病毒还可能脱落到精液中,从而发生性传播. MRS的免疫环境、病毒感染机制、组织特异性的天然抗病毒反应以及性传播风险,是人们长期关注的重要研究领域.本文将综述该领域的研究进展,提出有待研究的主要方向,为相关领域的研究者提供参考.

关键词：病毒男性生殖系统免疫豁免天然抗病毒反应性传播

萆薢分清饮对急性痛风性关节炎大鼠NF-κB/NLRP3信号通路的影响

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海南医学院学报 2025年

作者：张靖韩真真王思宇苏培培邵灿灿何小鹃李晓冰郭洪涛河南中医药大学第一附属医院风湿病科河南中医药大学第一临床医学院中国中医科学院中医临床基础医学研究所河南中医药大学中医学院(仲景学院)

目的：探讨萆薢分清饮对急性痛风性关节炎(AGA)模型大鼠的影响及作用机制。方法：雄性SD大鼠随机分为空白组、模型组、萆薢分清饮组(23.33 g/kg)、秋水仙碱组(0.3mg/kg)，每组10只，预防性给药，每日1次，连续7d。灌胃给药第5d，空白组... 详细信息

目的：探讨萆薢分清饮对急性痛风性关节炎(AGA)模型大鼠的影响及作用机制。方法：雄性SD大鼠随机分为空白组、模型组、萆薢分清饮组(23.33 g/kg)、秋水仙碱组(0.3mg/kg)，每组10只，预防性给药，每日1次，连续7d。灌胃给药第5d，空白组除外，踝关节注射单钠尿酸盐(MSU)混悬液制备AGA模型。造模后测定踝关节肿胀度、步态评分及炎症指数评分；HE染色观察踝关节滑膜组织病理学变化，酶联免疫吸附(ELISA)法测定血清炎性因子及ROS水平；生化法测定血清MDA、GSH水平，SOD、CAT活性；实时荧光定量PCR 测定踝关节滑膜组织NLRP3、ASC mRNA表达水平；蛋白免疫印迹法(Western blot)检测NF-dB/NLRP3通路相关蛋白表达。结果：与空白组比较，模型组大鼠踝关节明显肿胀(P<0.01)，步态评分和炎症指数评分显著增加(P<0.01)，HE染色滑膜组织增生，大量炎性细胞浸润，组织病理评分升高(P<0.01)，血清IL-6、IL-1β、TNF-α、ROS及MDA水平升高(P<0.05，P<0.01)，SOD、GSH、CAT水平降低(P<0.01)，滑膜组织NLRP3、ASC mRNA表达及p-NF-lb. p65/NF-ebb p65、NLRP3、ASC、cleaved Caspase-1蛋白表达显著升高(P<0.01)；与模型组比较，萆薢分清饮组踝关节肿胀度、步态评分及炎症指数评分明显降低(P<0.05，P<0.01)，滑膜组织增生与炎性细胞浸润减轻，组织病理评分降低(P<0.01)，血清IL-1β、IL-6、TNF-α及ROS、MDA水平显著下降(P<0.05，P<0.01)，SOD、GSH水平升高(P<0.01)，滑膜组织NLRP3、ASC mRNA表达及p-NF-κB p65/NF-κB p65、NLRP3、ASC、cleaved Caspase-1蛋白表达水平降低(P<0.05，P<0.01)。结论：萆薢分清饮可能通过抑制AGA大鼠NF-κB/ NLRP3信号通路改善炎症状态。

关键词：萆薢分清饮急性痛风性关节炎核因子-κB NLRP3炎症小体

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香血灵芝菌丝茶的制备及品质分析

天然产物研究与开发 2025年

作者：何迪卢彬叶璐瑶袁培焯曾俊毅陈庆泽刘主喀什大学生命与地理科学学院韶关学院生物与农业学院韶关学院医学院韶关市星河生物科技有限公司

本研究旨在探究茶梗高值化利用，采用韶关本地香血灵芝（Amauroderma rude），以茶梗为基础配方进行固体发酵，通过菌丝生长情况筛选出香血灵芝的最适培养基配方，使用真空冷冻干燥技术制备灵芝菌丝茶，并对菌丝茶的营养及活性成分和感... 详细信息

本研究旨在探究茶梗高值化利用，采用韶关本地香血灵芝（Amauroderma rude），以茶梗为基础配方进行固体发酵，通过菌丝生长情况筛选出香血灵芝的最适培养基配方，使用真空冷冻干燥技术制备灵芝菌丝茶，并对菌丝茶的营养及活性成分和感官成分进行测定。结果表明香血灵芝的最适培养基配方为茶梗70%、燕麦29%、蔗糖1%。与对照组相比，菌丝茶的营养成分粗多糖、脂肪酸等含量显著上升（P科学依据和新途径。

关键词：香血灵芝茶梗固体发酵菌丝茶品质分析

敦土利水分期针灸治疗脾肾两虚型多囊卵巢综合征胰岛素抵抗的临床疗效及与血清炎症因子的相关性研究

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世界科学技术-中医药现代化 2025年

作者：陈阳邢利威赵锐章小娟王菁夏小焱赵荣海南省妇女儿童医学中心南京中医药大学第一临床医学院云南中医药大学第一临床医学院

目的验证敦土利水分期针灸对多囊卵巢综合征胰岛素抵抗（PCOS-IR）的临床疗效，分析针灸改善PCOS-IR临床指标与炎性因子水平变化的相关性。方法 70例PCOS-IR患者行饮食、运动指导等基础治疗并随机分为二甲双胍（对照）组及敦土利水分... 详细信息

目的验证敦土利水分期针灸对多囊卵巢综合征胰岛素抵抗（PCOS-IR）的临床疗效，分析针灸改善PCOS-IR临床指标与炎性因子水平变化的相关性。方法 70例PCOS-IR患者行饮食、运动指导等基础治疗并随机分为二甲双胍（对照）组及敦土利水分期针灸（主穴取关元、中极、三阴交、足三里、丰隆，隔天针灸）联合二甲双胍组（针灸组），各35例，连续治疗3个月，分别采集治疗前后患者中医症候积分、体征评分（多毛评分、痤疮评分、黑棘皮评分）、性激素、血脂、空腹血糖、空腹胰岛素及血清炎症因子IL1β、IL18水平。结果对照组有效率为48.57%，针灸组有效率为94.29%，统计学差异显著（P0.40，P<0.05）。结论敦土利水针法联合二甲双胍可显著改善PCOS-IR患者糖脂代谢，缓解胰岛素抵抗，调节性激素水平，疗效优于单纯西药治疗。Pearson相关分析提示炎症因子可能是针灸显效的重要靶点之一。

关键词：敦土利水分期针灸脾肾两虚多囊卵巢综合征胰岛素抵抗炎症因子

甲基丙烯酰化改性真皮细胞外基质水凝胶促进腹壁缺损修复

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中国组织工程研究 2025年第10期29卷 2074-2082页

作者：刘忠钰李文娅范永鸿吕双裴娟陈娅琴刘倍余孙红玉西南医科大学临床医学院肝胆外科四川省泸州市646000 中国人民解放军西部战区总医院基础医学实验室四川省成都市610083 西南交通大学临床医学院四川省成都市610031 西南交通大学生命科学与工程学院四川省成都市610031

背景:目前用于填充腹壁缺损部位的合成高分子材料(如聚丙烯或聚酯)不仅缺乏可降解性和生物活性,还难以适应复杂形状伤口需求,因此,找到免疫原性低、组织相容性好的生物活性材料成为腹壁缺损修复研究的热点。目的:制备甲基丙烯酰化改性... 详细信息

背景:目前用于填充腹壁缺损部位的合成高分子材料(如聚丙烯或聚酯)不仅缺乏可降解性和生物活性,还难以适应复杂形状伤口需求,因此,找到免疫原性低、组织相容性好的生物活性材料成为腹壁缺损修复研究的热点。目的:制备甲基丙烯酰化改性真皮细胞外基质水凝胶,探讨其在腹壁缺损中的潜在应用价值。方法:(1)依次用0.25%胰蛋白酶、1%Triton X-100对猪真皮进行脱细胞处理,获得真皮细胞外基质;胃蛋白酶消化真皮细胞外基质,经甲基丙烯酸酐改性后光交联形成甲基丙烯酰化改性真皮细胞外基质水凝胶,扫描电镜观察水凝胶的微观形貌,测试其流变学性能、溶胀性等理化性质;(2)将L929成纤维细胞接种到甲基丙烯酰化改性的真皮细胞外基质水凝胶中,检测细胞相容性;(3)将12只SD大鼠随机分为2组(n=6),创建保留腹膜的腹壁缺损模型,聚丙烯组缺损部位填充聚丙烯材料,水凝胶组缺损部位填充甲基丙烯酰化改性真皮细胞外基质水凝胶,两组创面皮肤均用聚丙烯材料覆盖,观察创面愈合情况并进行组织学分析。结果与结论:(1)采用酶解法对猪真皮进行脱细胞后具有良好的脱细胞效果,并且原有的糖胺聚糖及胶原蛋白保留较好。扫描电镜下可见甲基丙烯酰化改性真皮细胞外基质水凝胶为疏松多孔结构,孔径在70-120μm之间,该水凝胶的溶胀比为(16.88±3.24)%,吸水率为(94.24±1.11)%,流变学性能测试表明该水凝胶状态稳定且具有剪切变稀特点,具备可注射性;(2)CCK-8检测与Live/Dead染色结果显示,甲基丙烯酰化改性真皮细胞外基质水凝胶具有良好的细胞相容性;(3)动物实验结果显示,实验组术后7,10,14 d的皮肤创面愈合率高于对照组(P <0.05);皮肤与肌层组织苏木精-伊红、Masson染色显示,与聚丙烯组比较,水凝胶组术后14 d的皮肤创面上皮化情况、毛囊生成、胶原纤维排列及新生血管情况更好,术后28 d的皮肤创面新生组织结构与正常组织相近,并且瘢痕增生较少,术后28 d时可见少量肌肉组织再生;(4)结果表明,甲基丙烯酰化改性真皮细胞外基质水凝胶可促进腹壁缺损大鼠的皮肤创面愈合和肌肉组织再生。

关键词：猪真皮真皮细胞外基质甲基丙烯酰化改性水凝胶光固化腹壁缺损皮肤愈合肌肉组织再生

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布鲁氏菌BP26蛋白原核表达及双抗原夹心ELISA方法的建立

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中国兽医科学 2025年

作者：席韬罗俊聪朱昱茜林永玉陈婕张帆石鑫泰何印娣李帅鹏徐继英田宏郑海学西北民族大学生命科学与工程学院中国农业科学院兰州兽医研究所兰州大学动物医学与生物安全学院动物疫病防控全国重点实验室

以期建立鉴别检测布鲁氏菌血清抗体的ELISA方法，用于区分BP26基因缺失疫苗免疫。本研究根据NCBI公布的布鲁氏菌M5-90株的参考序列，通过预测BP26的同源性、跨膜区及抗原性等，构建了pET-28a-BP26和pMAL-c2x-BP26两个载体，利用大肠杆... 详细信息

以期建立鉴别检测布鲁氏菌血清抗体的ELISA方法，用于区分BP26基因缺失疫苗免疫。本研究根据NCBI公布的布鲁氏菌M5-90株的参考序列，通过预测BP26的同源性、跨膜区及抗原性等，构建了pET-28a-BP26和pMAL-c2x-BP26两个载体，利用大肠杆菌表达蛋白，亲和层析纯化目的蛋白。采用Western-blot方法分析目的蛋白反应活性，以His-BP26作为包被抗原，HRP标记的MBP-BP26作为检测抗原，经过优化，建立了一种双抗原夹心ELISA方法。结果显示，根据统计学分析，双抗原夹心ELISA临界值为0.35；经检验，该方法与口蹄疫病毒-O型、牛结节皮肤病病毒、牛传染性腹泻病毒的抗体阳性血清以及赤羽病病毒多抗均无交叉反应，敏感性可达1∶640；批间及批内变异系数均小于10％。用该方法对40份已知虎红平板凝集试验检测背景的羊血清进行检测，结果检出8份阳性，32份阴性。由此说明，本研究建立的ELISA方法特异性强、敏感性高、重复性好，可区分BP26基因缺失疫苗免疫，用于布鲁氏菌病的血清学调查和临床诊断。

关键词：布鲁氏菌 BP26 原核表达双抗原夹心ELISA