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病理技师应是全自动免疫组化仪的主导者

病理技师应是全自动免疫组化仪的主导者

2024中国肿瘤标志物学术大会暨CACA整合肿瘤学高峰论坛暨第十七届肿瘤标志物青年科学家论坛暨中国肿瘤标志物产业创新大会

作者：朱维健祝峙海军军医大学第二附属医院(长征医院)

随着免疫组化标准化的逐步实行和病理科设备的不断更新,全自动免疫组化染色仪已全面进入病理科,病理技师从烦琐的手工操作中解脱出来,极大地提高了免疫组化的工作效率,同时也将免疫组化标准化工作推上了一个新台阶。为了不断提高病理科... 详细信息

随着免疫组化标准化的逐步实行和病理科设备的不断更新,全自动免疫组化染色仪已全面进入病理科,病理技师从烦琐的手工操作中解脱出来,极大地提高了免疫组化的工作效率,同时也将免疫组化标准化工作推上了一个新台阶。为了不断提高病理科免疫组化结果的可靠性,还应具备以下条件:(1)合格的免疫组化实验室,(2)标准化的免疫组化染色程序,(3)配备高质量合格的免疫组化染色仪,(4)全自动免疫组化染色仪的应用并不是让病理技师彻底休息,病理技师仍然是免疫组化仪的主导者,技师应与免疫组化仪器工程师定期沟通与交流,来持续改进和优化免疫组化染色仪的程序或指导更新设备,更好的为免疫组化工作服务,(5)科室免疫组化质控体系的建设,(6)合格稳定的免疫组化试剂,(7)科学的设立对照实验,(8)阳性和阴性结果的正确判读,(9)病理诊断中抗体的联合应用,(10)有丰富经验的病理医生和病理技师的相互配合。同时,病理技师必须树立高度的责任心,技师的工作质量是免疫组化染色结果成功的关键,它不仅提高了病理诊断的可靠性,也将进一步促进病理科免疫组化工作持续健康的发展。

关键词：病理技师免疫组化仪主导者

全程优化急诊护理服务模式对急性心肌梗死病人干预成效的研究

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中文科技期刊数据库（引文版）医药卫生 2024年第5期 0158-0161页

作者：王琳海军军医大学第二附属医院·上海长征医院上海200001

研究全程优化急诊护理对急性心肌梗死患者临床效果的影响。方法将我院急诊科于2022年1月~2023年7月间收治的120例急性心肌梗死患者采用随机数字法分为对照组和实验组,每组60例,对照组患者接受常规护理,实验组患者接受全程优化急诊护理... 详细信息

研究全程优化急诊护理对急性心肌梗死患者临床效果的影响。方法将我院急诊科于2022年1月~2023年7月间收治的120例急性心肌梗死患者采用随机数字法分为对照组和实验组,每组60例,对照组患者接受常规护理,实验组患者接受全程优化急诊护理干预,并分析不同护理方式的应用效果。结果实验组患者各项急救措施所用时间均短于对照组,且护理满意度高于对照组,并发症发生率低于对照组,P<0.05。结论急性心肌梗死的患者接受全程优化急诊护理干预能够使抢救的时间缩短,提高患者的急救效率,稳定患者的心态,降低致残率和致死率,患者的护理满意度更高。

关键词：急性心肌梗死全程优化急诊护理抢救时间护理满意度

基于双气相CT扫描肺血管定量参数对慢性阻塞性肺疾病及高危人群的诊断价值研究

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中华放射学杂志 2024年第7期58卷 729-737页

作者：张金周秀秀周陶胡范丽萧毅吴燕燕刘士远徐州医科大学医学影像学院徐州221000 海军军医大学第二附属医院放射诊断科上海200003

目的探讨双气相CT肺血管定量参数的差值、相对值在慢性阻塞性肺疾病(COPD)诊断及高危人群预警中的价值。方法该研究为横断面研究。回顾分析2018年8月至2020年12月在海军军医大学第二附属医院接受双气相胸部CT检查的受试者624例,根据肺... 详细信息

目的探讨双气相CT肺血管定量参数的差值、相对值在慢性阻塞性肺疾病(COPD)诊断及高危人群预警中的价值。方法该研究为横断面研究。回顾分析2018年8月至2020年12月在海军军医大学第二附属医院接受双气相胸部CT检查的受试者624例,根据肺功能检查进行分组:正常组321例、保留比率的肺功能受损(PRISm)组204例及COPD组99例。双气相CT图像导入工作站得到肺血管定量参数:呼气相、吸气相全肺距胸膜9、12、15、18、21 mm水平的肺血管数量(N_(total))、横截面积小于5 mm2肺小血管数量(N_(CSA5))、血管面积(VA_(total))及全肺血管总体积(TBV)、全肺横截面积0.05),而呼气相与吸气相差值、呼气相与吸气相相对值在COPD组与正常组的差异有统计学意义(P<0.05)。结论双气相CT肺血管定量参数差值、相对值比单一吸气相血管参数更有助于区分COPD患者与正常人群的肺血管重塑变化,同时也补充PRISm人群的肺血管特征,为COPD及高危人群的早期预警提供依据。

关键词：肺疾病慢性阻塞性体层摄影术 X线计算机肺血管

柴胡桂枝干姜汤治疗胆热脾寒型慢性非萎缩性胃炎的临床疗效观察及作用机制初探

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柴胡桂枝干姜汤治疗胆热脾寒型慢性非萎缩性胃炎的临床疗效观察及...

作者：闻韬中国人民解放军海军军医大学

学位级别：硕士

一、研究背景及目的慢性非萎缩性胃炎(Chronic Non-atrophic Gastritis,CNAG)是一种常见疾病,在全世界范围内有着极高的发病率,严重影响了人们的日常生活。目前针对慢性非萎缩性胃炎的治疗仍以药物为主,主要包括质子泵抑制剂及抗生素等... 详细信息

一、研究背景及目的慢性非萎缩性胃炎(Chronic Non-atrophic Gastritis,CNAG)是一种常见疾病,在全世界范围内有着极高的发病率,严重影响了人们的日常生活。目前针对慢性非萎缩性胃炎的治疗仍以药物为主,主要包括质子泵抑制剂及抗生素等。然而西药治疗仍存在诸多问题,比如疗效欠佳及进行性耐药等。中医药在治疗慢性胃炎中一直发挥着重要作用。随着现代生活节奏的快速化、饮食结构的辛辣化及精神压力的不断增大,中医理论中阐述的胆热脾寒型CNAG的发病率呈现出上升趋势,这一现象在中医临床实践中愈发受到关注。柴胡桂枝干姜汤出自《伤寒论》,其核心病机为胆热脾寒,目前在临床上具有十分广泛的应用,尤以消化系统为主。然而,现有研究多聚焦于典型病案分析上,缺乏其体内外成分的表征,更未见其治疗胆热脾寒型CNA G的临床疗效观察及机制研究。因此,本研究系统评估了柴胡桂枝干姜汤治疗胆热脾寒型CNAG的临床疗效,并对其治疗胆热脾寒型CNAG的作用机制进行了初步探索。此外,本研究对柴胡桂枝干姜汤的化学成分进行了详尽表征。这些工作不仅为柴胡桂枝干姜汤在临床上的应用提供了有力的科学支撑,也为后续深入研究其药效物质奠定了坚实基础。二、研究方法本实验首先开展了一项前瞻性的随机对照研究,研究对象为2023年1月1日至6月30日期间,在海军军医大学附属长征医院中医科就诊符合标准的胆热脾寒型慢性非萎缩性胃炎患者,随机分为柴胡桂枝干姜汤治疗组与对照组。比较两组患者治疗前后的一般情况、胃肠激素激素变化、中医证候评分、西医症状评分及安全性评价指标,从而评估柴胡桂枝干姜汤的疗效。随后,实验在上一部分临床疗效观察的基础上开展了血浆非靶向代谢组学研究,以期寻找其作用的直接靶点。研究对象为柴胡桂枝干姜汤治疗有效的患者与长征医院体检中心招募的健康对照者。评估两组参与者的一般情况后,分别采集患者治疗前后与健康对照者的空腹血浆,基于UHPLC-Q-TOF/MS技术进行血浆非靶向代谢组学分析。利用ELISA试剂盒测量患者治疗前后的ACTH与CRF含量变化。接着,基于代谢组学的结果,我们进一步地寻找其作用的间接靶点。这里实验采用化学刺激结合饥饱失常的办法诱导SD大鼠10周,构建慢性非萎缩性胃炎大鼠模型,在造模6周后分别给予奥美拉唑与不同剂量的柴胡桂枝干姜汤继续治疗4周。首先对柴胡桂枝干姜汤在防治慢性非萎缩性胃炎方面的药效学进行研究,观察记录了柴胡桂枝干姜汤对慢性非萎缩性胃炎大鼠的体重、胃组织形态、炎症指标及胃肠激素的影响。随后利用16S技术对肠道菌群进行了研究,并基于UPLC-ESI-MS/MS技术测定了大鼠粪便短链脂肪酸(Short chain fatty acids,SCFAs)的含量变化。最后,实验通过查阅文献分别了建立7种单味药材及柴胡桂枝干姜汤方剂的化学成分库。采用UHPLC-Q-TOF/MS技术分别获得7种单味药材及柴胡桂枝干姜汤方剂的质谱数据,并通过碎片信息、裂解规律及标准品比对等信息,完成化合物的定性分析。接下来将16只200～220g SD大鼠随机分为两组(空白对照组与给药组),适应性喂养一周后给药组以4倍人鼠等效剂量柴胡桂枝干姜汤连续灌胃3天,第4天给药后分别采集两组大鼠不同时间点的血浆样本,通过UHPLC-Q-TOF/MS技术获取质谱数据,以方剂的体外定性分析结果为成分库,通过比对空白大鼠血浆与体外识别结果,确定柴胡桂枝干姜汤的入血原型成分。此外,实验基于指纹图谱对柴胡桂枝干姜汤的质量进行了评价。三、研究结果临床研究共招募到60名胆热脾寒型CNAG患者,随机分为柴胡桂枝干姜汤治疗组与对照组,每组30例。两组患者的基线水平一致,可以进行比较分析(P>0.05)。柴胡桂枝干姜汤治疗4周后,患者的胃蛋白酶原水平由127.07±27.15μg/L显著升至146.75±26.21μg/L(P=0.009),其余胃肠激素无明显变化。而对照组的胃肠激素含量均无明显改变。在中医证候评分上,治疗组由20.77±3.76降至5.81±3.67(P<0.01),对照组由21.42±3.15降至14.81±4.09(P<0.01)。在西医症状评分上,治疗组由14.11±3.30降至5.37±2.99(P<0.01);对照组由14.31±2.31降至9.92±3.37(P<0.01)。基于尼莫地平法进行疗效评价,治疗组的总有效率为90.0%,对照组的总有效率为66.7%。且两组在治疗过程中无任何不良反应出现。随后,选取柴胡桂枝干姜汤治疗有效的27名患者与招募到的30名健康对照者进行非靶向代谢组学分析,结果显示柴胡桂枝干姜汤主要通过影响甘油磷脂代谢与支链氨基酸的生物合成这两条通路发挥治疗作用。随后我们找到了在这个过程中的15种关键差异代谢物,包括缬

关键词：柴胡桂枝干姜汤慢性非萎缩性胃炎化学成分作用机制代谢组学肠道菌群

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免疫组化双重染色在病理诊断中的应用

免疫组化双重染色在病理诊断中的应用

2024中国肿瘤标志物学术大会暨CACA整合肿瘤学高峰论坛暨第十七届肿瘤标志物青年科学家论坛暨中国肿瘤标志物产业创新大会

作者：朱维健海军军医大学第二附属医院(长征医院)

目的:利用免疫组化双重染色技术对于前列腺组织以及肺癌组织进行染色,分析染色效果以及不同抗原之间的关系,验证双重染色在肿瘤病理诊断中的应用价值。方法:收集前列腺组织共计21例,其中包括前列腺良性增生9例,前列腺上皮内瘤变7例,前... 详细信息

目的:利用免疫组化双重染色技术对于前列腺组织以及肺癌组织进行染色,分析染色效果以及不同抗原之间的关系,验证双重染色在肿瘤病理诊断中的应用价值。方法:收集前列腺组织共计21例,其中包括前列腺良性增生9例,前列腺上皮内瘤变7例,前列腺癌5例;肺腺癌组织10例,肺鳞癌组织13例,肺腺鳞癌组织5例。采用P63/34βE12/p504S,CK5/6+TTF-1两种不同鸡尾酒抗体组合分别对前列腺组织,以及肺癌组织进行染色,并对结果进行分析,研究不同抗原的表达及分布。结果:在P63/34βE12/P504S鸡尾酒抗体染色中,P63和34βE12表达于基底细胞,染色呈棕色,P504S表达于腺癌细胞,呈红色。该技术有助于良性前列腺增生,前列腺上皮内瘤变,前列腺癌的鉴别。CK5/6+TTF-1鸡尾酒抗体染色中CK5/6表达于肺鳞癌细胞中,呈红色,TTF-1表达于肺腺癌细胞中,呈棕色。通过CK5/6+TTF-1免疫组化双重染色可对肺癌类型进行精准区分。结论:免疫组化双染在同一切片上检测两种不同的抗原表达,同时观察两种不同的染色结果,使得阅片更加直观,判读更加快捷,可以减少工作量,对于活检珍贵小样本具有重要意义。

关键词：免疫组化双重染色病理诊断应用

(AI)人工智能将成为病理诊断领域的强力助推剂

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(AI)人工智能将成为病理诊断领域的强力助推剂

2024中国肿瘤标志物学术大会暨CACA整合肿瘤学高峰论坛暨第十七届肿瘤标志物青年科学家论坛暨中国肿瘤标志物产业创新大会

作者：朱维健祝峙海军军医大学第二附属医院(长征医院)

当今的(AI)人工智能已进入医学诊断的众多领域,应用包括疾病诊疗、医疗辅助、药物开发等。而病理诊断是一种基于图像信息的诊断方式,被誉为疾病诊断的"金标准",但由于自动化程度较低,病理医生缺乏等诸多因素,在目前病理诊断领域中,还处... 详细信息

当今的(AI)人工智能已进入医学诊断的众多领域,应用包括疾病诊疗、医疗辅助、药物开发等。而病理诊断是一种基于图像信息的诊断方式,被誉为疾病诊断的"金标准",但由于自动化程度较低,病理医生缺乏等诸多因素,在目前病理诊断领域中,还处于起步发展阶段。本文通过分析医疗大数据与病理技术开发及病理AI图像识别技术开发的现状,进而分析了(AI)人工智能助推病理转向数字化诊断技术的发展前景,可以有效提升病理诊断的效率,由此可见(AI)人工智能将成为病理诊断领域的强力助推剂。

关键词： AI 人工智能病理诊断

胸部高分辨率CT对持续性气流受限性哮喘的评估价值及模型构建

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胸部高分辨率CT对持续性气流受限性哮喘的评估价值及模型构建

作者：王忠照中国人民解放军海军军医大学

学位级别：硕士

研究目的哮喘是一种异质性疾病,以慢性气道炎症性改变和可逆性气道受限为主要特点,典型临床症状为呼吸困难、咳嗽、胸闷和喘息等。目前,哮喘治疗中仍存在许多问题,如难以预防的急性发作和肺功能的下降等。持续性气流受限(PAL)性哮喘作... 详细信息

研究目的哮喘是一种异质性疾病,以慢性气道炎症性改变和可逆性气道受限为主要特点,典型临床症状为呼吸困难、咳嗽、胸闷和喘息等。目前,哮喘治疗中仍存在许多问题,如难以预防的急性发作和肺功能的下降等。持续性气流受限(PAL)性哮喘作为常见哮喘表型,通常定义为哮喘患者吸入支气管扩张剂后,一秒率(FEV1/FVC)低于0.7,其临床表现更重,急性发作更频繁。随着胸部高分辨率CT对慢性肺部疾病的肺脏变化评估的应用愈加成熟和广泛,其在哮喘患者中的应用也越来越受到临床医生的关注。研究表明在哮喘患者尤其是PAL性哮喘患者中,胸部高分辨率CT对哮喘严重程度及治疗等方面有着重要的评估价值。因此本研究旨在探讨PAL性哮喘的临床特点,并通过胸部高分辨率CT评估PAL性哮喘肺脏改变特点及探讨胸部高分辨率CT对PAL性哮喘的评估价值。研究方法第一部分回顾性分析上海长征医院呼吸与危重症医学科2018.01.01-2022.12.31门诊及住院患者病历。通过筛选共计评估1322名哮喘患者,最后因数据不全或不能确诊哮喘等原因排除881人,最终入组441名哮喘患者。其中217名患者诊断为非PAL性哮喘,224名患者诊断为PAL性哮喘。针对该441名哮喘患者,我们进行了如下分析:1.评估PAL性哮喘与非PAL性哮喘患者在基本信息、临床表现、肺功能和实验室检查各指标的差异。2.对比PAL性哮喘与非PAL性哮喘吸入支气管扩张剂前后小气道功能缓解差异。3.通过Logistic回归模型,基于患者基本信息包括性别、年龄、吸烟情况(吸烟史、戒烟率、年支)、ACT评分等,建立PAL性哮喘临床诊断预测模型。第二部分对第一部分最终入组441名哮喘患者进行筛选,回顾在肺功能前后2周内完善胸部高分辨率CT哮喘患者,最终入组199名哮喘患者,其中PAL性哮喘136人,非PAL性哮喘63人。而后通过分层抽样选取2018.01.01-2022.12.31上海长征医院体检健康志愿者77人,纳入健康对照组。1.通过胸部高分辨率CT评估对比哮喘患者与健康志愿者肺脏改变,描述哮喘患者肺脏改变特点。2.通过胸部高分辨率CT评估对比PAL性和非PAL性哮喘间肺脏改变差异,描述PAL性哮喘肺脏改变特点。3.通过多重线性回归模型,研究哮喘患者胸部高分辨率CT和肺功能关联,建立哮喘患者肺功能预测模型。结果第一部分通过PAL与非PAL性哮喘患者基本资料对比,发现PAL性哮喘多发于老年男性,吸烟率和吸烟年支高于非PAL性哮喘患者,戒烟率显著低于非PAL性哮喘患者。通过电话随访以及回顾临床资料,我们发现PAL性哮喘患者的哮喘严重程度更高,控制情况和生活质量较非PAL性哮喘患者均更差。PAL性哮喘患者在肺功能方面主要表现为阻塞性通气障碍、小气道功能障碍、弥散功能障碍以及残气量升高。在吸入支气管扩张剂前后,PAL性哮喘患者的小气道功能均明显降低且小气道功能缓解率更差。我们对患者基本信息包括性别、年龄、吸烟情况(吸烟史、戒烟率、年支)、ACT评分等差异指标进行Logistic回归分析以及Nomogram分析,建立了非PAL性哮喘的预测模型,其中性别、吸烟情况(年支)、ACT评分为PAL性哮喘的独立危险因素。第二部分通过健康对照组与哮喘患者组胸部高分辨率CT参数对比,发现哮喘患者在5-8级支气管管壁面积(WA)、管腔面积(LA)、支气管计数(TAC)均显著降低。与健康对照组相比,哮喘组低于-950 HU单位的低衰减区域面积(LAA-950)和低于-950 HU单位的低衰减区域面积百分比(LAA-950%)均明显升高,而肺内支气管管腔内周长为10mm的支气管管壁面积的平方根(Pi10)显著降低。5-8级支气管管壁面积百分比(WA%)和平均肺密度在两组间无统计学差异。通过对比PAL与非PAL性哮喘患者的胸部高分辨率CT参数,发现PAL性哮喘患者较非PAL性哮喘患者肺气肿及薄壁组织破坏相关参数LAA-950和LAA-950%显著升高,平均肺密度显著降低,表明PAL性哮喘患者肺气肿及薄壁组织破坏更严重。我们发现PAL性哮喘患者7级支气管TAC较非PAL性哮喘患者明显降低,且在健康对照、非PAL性哮喘、PAL性哮喘患者间逐级降低。而5-8级支气管WA、LA、WA%和5级、6级、8级支气管TAC在两组哮喘患者间无统计学差异。进一步分析哮喘患者胸部高分辨率CT参数与吸入支气管舒张剂后FEV1/FVC的关系我们发现,LAA-950和LAA-950%与哮喘患者吸入支气管舒张剂后FEV1/FVC成负相关,7级支气管TAC和平均肺密度与吸入支气管舒张剂后FEV1/FVC成正相关。此外多重线性回归分析显示,支气管扩张剂后FEV1/FVC与全肺平均肺密度、LAA-950%和TAC独立相关,多重线性回归

关键词：哮喘持续性气流受限体层摄影术肺功能检查气道重构肺气肿

皮肤癣菌病临床流行病学调查及交叉引物扩增诊断体系的研发

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皮肤癣菌病临床流行病学调查及交叉引物扩增诊断体系的研发

作者：石媛漾中国人民解放军海军军医大学

学位级别：硕士

研究背景皮肤癣菌病是临床最常见的浅部真菌感染性疾病,全球患病率约为20%～25%。目前,皮肤癣菌主要依赖直接镜检和真菌培养进行鉴定,但直接镜检受主观因素影响较大,而真菌培养耗时长。虽然PCR技术已经相当成熟,但依赖检验科PCR扩增环... 详细信息

研究背景皮肤癣菌病是临床最常见的浅部真菌感染性疾病,全球患病率约为20%～25%。目前,皮肤癣菌主要依赖直接镜检和真菌培养进行鉴定,但直接镜检受主观因素影响较大,而真菌培养耗时长。虽然PCR技术已经相当成熟,但依赖检验科PCR扩增环境及设备。MALDI-TOF MS技术需要基于培养物进行鉴定,且丝状菌数据库仍不完善。皮肤科门诊的皮肤癣菌病患者数量多,快速诊断需求迫切,经典的方法无法快速精确到种的水平,导致大量患者在病原学证据不足的情况下实施经验性治疗。因此,临床急需一种“立等可取”的鉴定方法,恒温扩增技术则是病原体即时检验(Point-Of-Care testing,POCT)的重要实现方式。研究目的本研究基于皮肤癣菌病的流行现状,和目前诊断技术的发展方向,分为两个部分:第一部分旨在了解皮肤癣菌病的临床流行病学情况,第二部分旨在研发交叉引物扩增(Cross Priming Amplification,CPA)诊断体系,以开发一套适用于皮肤科门诊的检测技术体系,从而改变我国真菌病及其他感染性疾病的诊疗路径。研究方法第一部分调查了2021年1月至2023年11月就诊于上海长征医院皮肤科门诊,并确诊为皮肤癣菌病的1084人次,使用SPSS 27.0软件和卡方检验的方法对患者信息进行统计学分析。第二部分结合了“交叉引物扩增技术”和“快速核酸提取技术”。首先,针对高发的皮肤癣菌设计特异性引物,并与已知的物种序列进行比对,确定了实验阳性菌株和阴性菌株。随后,提取出所有实验菌株的核酸,筛选出适合的引物,进行了反应体系的优化,确定了CPA最佳反应体系,之后利用实验菌株的核酸验证了反应体系的特异性和敏感性,同时设置了实时荧光定量PCR(Real-time Quantitative PCR,qPCR)作为平行参照。最后,采集临床甲屑、皮屑样本,利用两种“快速核酸提取技术”(试剂盒法、溶解液法)提取核酸,分别进行CPA和qPCR扩增,检测感染的阴阳性,对比两种分子诊断技术和传统的“金标准”方法的符合程度。结果第一部分的统计数据显示,以“直接镜检+真菌培养”为鉴定的“金标准”,红色毛癣菌(799/1084,73.71%)是本地区皮肤癣菌感染最常见的菌种,其次为须癣毛癣菌(234/1084,21.59%)。在感染类型方面,甲癣(n=459/1084,42.34%)最为常见,其次为足癣(n=196/1084,18.08%)、股癣(n=159/1084,14.67%)和体癣(n=138/1084,12.73%)。同时患有甲癣和足癣的有23例,“两足一手”的患者有3例。对年龄分布进行分析显示,皮肤癣菌病的发病人群集中在21～70岁(n=897/1084,82.75%)。其中,头癣(n=8/14,57.14%)最好发于1～10岁的儿童,甲癣(n=271/459,59.04%)好发于21～40岁的青年人。分析性别与感染的关系显示,发现股癣(男/女=129/30,P<0.01)和甲癣(男/女=267/192,P=0.005)发病以男性为主,而感染犬小孢子菌的女性稍多于男性(男/女=13/26,P<0.001)。第二部分的实验结果表明,CPA体系可覆盖红色毛癣菌、须癣毛癣菌、犬小孢子菌、絮状表皮癣菌、断发毛癣菌、铁锈色小孢子菌这6种皮肤癣菌,其最适温度为63℃,最佳反应为90循环数(1.5h)。用117株菌株验证,发现CPA体系具有100%的特异性,敏感性可达到2.5×10～2copies/u L。在100份临床样本中的应用显示,与“金标准”比较,CPA体系表现出100%的特异度和95%的灵敏度,实验耗时约1.5h～2h。与此同时,作为对照的qPCR技术同样表现出100%的特异性,敏感性能够达到1×10～2copies/u L,在100份临床样本中的应用表现出100%的特异度和灵敏度,实验时间大约1.5h。结论本地区皮肤癣菌感染以红色毛癣菌最常见,其次为须癣毛癣菌,感染类型以甲癣最多,其次为足癣、股癣、体癣,与国内外流行病学规律基本一致。CPA技术相较于qPCR技术更为简便,整个反应过程仅需用一种酶,在中等温度(63℃)下进行,无需进行高温变性步骤,也不依赖大型的实验仪器设备。CPA技术的综合成本只有qPCR的1/6,其所用的扩增酶价格低,在大规模检测时可节约经济成本,更适合用于临床样本的POCT。并且,与传统的直接镜检+真菌培养(通常需要14天)相比,CPA在时间效率方面具有显著的优势,同时在准确性上也能匹敌传统方法。检测结果可及时指导临床治疗用药,提高诊疗效率。综上所述,本课题在开展流行病学调查的基础上,针对常见的皮肤癣菌,成功研发出了一套快速、简便、准确、经济的皮肤癣菌病交叉引物扩增诊断体系,有效地弥补了传统

关键词：皮肤癣菌病流行病学交叉引物扩增恒温扩增 qPCR

表面增强拉曼光谱与机器学习的组学技术在常染色体显性多囊肾病进展性评估中的应用

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表面增强拉曼光谱与机器学习的组学技术在常染色体显性多囊肾病进...

作者：崔方正中国人民解放军海军军医大学

学位级别：硕士

目的:本研究基于表面增强拉曼光谱（SERS）这一高度灵敏的技术,通过该技术对正常人群和常染色体显性多囊肾病（ADPKD）患者尿液样本进行检测,对比正常人群和ADPKD患者以及快速进展型ADPKD患者和缓慢进展型ADPKD患者的拉曼光谱图,筛选出... 详细信息

目的:本研究基于表面增强拉曼光谱（SERS）这一高度灵敏的技术,通过该技术对正常人群和常染色体显性多囊肾病（ADPKD）患者尿液样本进行检测,对比正常人群和ADPKD患者以及快速进展型ADPKD患者和缓慢进展型ADPKD患者的拉曼光谱图,筛选出与ADPKD发病以及疾病进展相关的拉曼峰并确定各拉曼峰对应拉曼强度所指代的分子振动模式和物质归属。在拉曼光谱数据的基础上,采用主成分分析（PCA）、支持向量机（SVM）机器学习算法挑选出最具信息量和预测力的特征,建立本研究中ADPKD患者的疾病进展性预测模型。最后,通过留一交叉验证（LOOCV）来验证预测模型,评估不同特征子集的泛化能力,提高预测模型的稳定性,从而为ADPKD患者疾病的进展性评估提供一种新型、快速、简单、可靠、无创的方法。方法:1.样本收集:本研究选取了2023年3月至2023年10月上海长征医院健康体检中心体检人员和长征医院肾脏病科符合1型梅奥分型（典型）ADPKD患者的尿液样本,取中段尿约5-10ml,至普通尿管保存,并在6h内送上海理工大学能源与动力工程学院实验室进行检测。2.样本检测并生成拉曼光谱:采用上海理工大学能源与动力工程学院研制的表面增强拉曼光谱仪对尿液样本进行检测。将1ml尿液与2ml商用银胶体纳米颗粒（南京先锋纳米材料科技有限公司）混合。纳米银的浓度为0.1 mg/ml。然后将混合物倒入比色皿进行进一步研究。激光光源设定为功率50m W的785nm的二极管激光器。入射光依次通过二极管激光器前的准直器和带通滤波器,然后聚焦在比色皿上。与入射光在90°方向上的散射光经过透镜组和边缘滤波器滤光,消除瑞利散射,通过光谱仪（IHR 320）传输,然后由CCD探测器（Horiba-Syncerity）接收。利用1200沟槽/mm光栅采集了460 cm-1～960 cm-1和1060 cm-1～1660 cm-1的光谱区域,采集时间为20秒,累积两次,光谱分辨率为0.8 cm-1。拉曼光谱仪每天用无水乙醇校准两次。每个样品测试5次,每个样品采集的光谱使用Origin Pro,Version 2019（Origin Lab Corporation,Northampton,MA,USA）进行矢量归一化处理,每个样品检测5次,取平均数据最为样品最终代表光谱。最后,采用四阶多项式拟合消除荧光背景和噪声。3.拉曼光谱图分析:根据身高校正的肾脏总体积（Ht TKV）和年龄估算的Ht TKV年增长率（Ht TKV-α）,将本研究的ADPKD患者分为快速进展型和缓慢进展型两组。分别对比正常人群和ADPKD患者以及快速进展型ADPKD患者和缓慢进展型ADPKD患者的拉曼光谱图,采用Shapiro Wilk和Kolmogorov-Smirnov检验来验证数据的正态分布,使用参数（t检验）或非参数（Wilcoxon检验）检验来比较组间的平均值,统计学显著性定义为P<0.05,从而选取出有统计学差异的拉曼峰。使用广义线性模型分析疾病状态、性别、年龄以及肾功能情况对上述各拉曼峰的影响。最后,根据既往文献报道确定上述拉曼峰对应拉曼强度下的分子振动模式和物质归属。4.建立疾病分类和进展性预测模型:在上述两组拉曼光谱数据的基础上,采用PCA将光谱数据集复杂程度降低,选取其中可涵盖数据集大部分信息的前12-20个主成分作为数据集,建立PCA-SVM分类模型。通过ROC曲线优化SVM阈值,并将该值用于分类模型预测中,得到最优模型的灵敏度、特异度、准确度和F1值。最后,对上述模型进行留一交叉验证,评估不同特征子集的稳定性和泛化能力。结果:1.通过SERS检测正常人群和ADPKD患者的尿液,对比二组拉曼光谱图发现正常人群和ADPKD患者在14个拉曼峰（483/520/542/604/673/715/794/820/888/928/1185/1278/1385/1414 cm-1）的拉曼强度存在差异。对以上14个主要拉曼峰进行正态分布检验和差异性分析,结果显示:正常人群与ADPKD患者在12个主要拉曼峰（483/520/604/673/715/794/820/888/928/1185/1385/1414 cm-1）的拉曼强度存在差异（P<0.05）。广义线性模型分析显示该12个主要拉曼峰的拉曼强度均与年龄和性别无关。最后我们通过查找文献中拉曼光谱强度谱找到以上12个主要拉曼峰对应的物质归属,包括多糖和糖原、磷脂酰肌醇、甘油、胞嘧啶、尿嘧啶、腺嘌呤、I型胶原、脯氨酸、缬氨酸、脂质、磷酸盐等。2.采用PCA将正常人群和ADPKD患者尿液光谱数据复杂度降低至171个主成分,采用前15个PC（包含原数据的97.47%信息）作为训练数据,建立PCA-SVM分类模型。通过ROC曲线,

关键词：常染色体显性多囊肾病表面增强拉曼光谱疾病分型预测模型