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高压氧对糖尿病型牙周炎牙龈细胞凋亡及凋亡因子表达的调控作用研究

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口腔医学 2021年第7期41卷 588-593页

作者：陈铁楼许兵郭梓琰张新海马丽婷王世锋陈骏刘进方以群海军军医大学第一附属医院全军口腔中心牙周科上海200081 同济大学化学科学与工程学院上海200092 上海市奉贤区牙病防治所上海201499 海军军医大学特色医学中心高气压和生理重点实验室上海201433

目的探讨高压氧(hyperbaric oxygen,HBO)对糖尿病型牙周炎(diabetes-associated periodontitis,DAP)牙龈组织细胞凋亡及凋亡因子表达的调控作用及机制。方法选择DAP患者60例,其中20例予以0.25 MPa HBO治疗2周,20例予以牙周洁治和根面平... 详细信息

目的探讨高压氧(hyperbaric oxygen,HBO)对糖尿病型牙周炎(diabetes-associated periodontitis,DAP)牙龈组织细胞凋亡及凋亡因子表达的调控作用及机制。方法选择DAP患者60例,其中20例予以0.25 MPa HBO治疗2周,20例予以牙周洁治和根面平整(scaling and root planning,SRP)治疗,20例予以HBO+SRP治疗,在治疗前和治疗后1个月测定PLI、SBI、GI、PD、AL,用HE染色、TUNNEL染色和透射电镜观察牙龈细胞凋亡,免疫组化(IHC)检测牙龈组织IL-1β、TNF-α、PGE2、Caspase3表达。结果治疗后1个月时HBO组、SRP组、HBO+SRP组SBI、GI、PD比治疗前明显降低;牙龈上皮层和固有层细胞凋亡数量和凋亡细胞阳性表达指数明显降低,牙龈组织IL-1β、TNF-α、PGE2及Caspase3表达明显降低。治疗后1个月时HBO+SRP组SBI、GI、PD、AL及牙龈细胞凋亡指数与HBO组和SRP组相比均有显著性差异;牙龈组织IL-1β、TNF-α、PGE2、Caspase3表达比HBO组和SRP组降低。IL-1β、TNF-α、PGE2主要阳性细胞为巨噬细胞和淋巴细胞,Caspase3阳性细胞为上皮基底细胞、棘细胞。结论HBO可显著降低DAP患者牙龈组织中IL-1β、TNF-α、PGE2含量,减少牙龈组织中Caspase3表达,抑制细胞凋亡,HBO联合SRP疗效更好,可维持1个月以上。

关键词：高压氧糖尿病型牙周炎细胞凋亡炎症因子凋亡因子

滑膜成纤维细胞在类风湿性关节炎中的作用及中药干预研究进展

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中国实验方剂学杂志 2022年第14期28卷 226-234页

作者：白永峰曹乌吉斯古楞内蒙古民族大学蒙医药学院内蒙古通辽028000 内蒙古民族大学蒙医药研发工程教育部重点实验室内蒙古通辽028000 中国人民解放军海军军医大学药学院上海200433 内蒙古医科大学蒙医药学院呼和浩特010110

类风湿性关节炎(RA)是一种常见的自身免疫性疾病,滑膜组织的过度增生和破骨细胞性骨吸收是引起RA发生骨、关节破坏的两大主要原因。RA滑膜成纤维细胞(RA-FLS)是RA滑膜组织中最主要的细胞之一,其生长特性的改变及凋亡抑制导致滑膜组织增... 详细信息

类风湿性关节炎(RA)是一种常见的自身免疫性疾病,滑膜组织的过度增生和破骨细胞性骨吸收是引起RA发生骨、关节破坏的两大主要原因。RA滑膜成纤维细胞(RA-FLS)是RA滑膜组织中最主要的细胞之一,其生长特性的改变及凋亡抑制导致滑膜组织增生,激发炎症反应,破坏关节结构及导致关节功能障碍。因此,调控RA-FLS的异常增殖和促凋亡能够干预RA发病进程。目前有很多中药及中药单体成分对RA-FLS过度增殖及促凋亡方面的研究。鉴于此,本文通过查阅大量文献资料,对RA-FLS在RA中的作用及中药单体和复方通过调控RA-FLS来干预RA的相关研究进展进行了综述,结果表明,单体成分包括萜类、黄酮类、生物碱类、蒽醌类及其他类。虽然他们的类型不相同,但通过不同的途径最终达到能够有效地干预RA。如通过抑制炎性细胞因子的分泌,抑制软骨细胞及破骨细胞的生成从而防治骨、软骨的破坏,和上调Fas/FasL、核转录因子-κB(NF-κB)、JAK/信号传导及转录激活因子(STAT)、p38丝裂原活化蛋白激酶(p38 MAPK)等信号通路中的促凋亡基因B细胞淋巴瘤-2(Bcl-2)相关X蛋白(Bax)、胱天蛋白酶(Caspase)及下调抑制凋亡基因Bcl-XL、Bcl-2的水平而实现细胞凋亡,以及降低RA-FLS自噬蛋白微管相关蛋白1轻链3Ⅱ(LC3Ⅱ)/LC3Ⅰ、Beclin-1蛋白表达水平而实现抑制RA-FLS增殖。虽然他们的分子作用机制和靶点不相同但都起到了相应的作用,以上研究结果为阐明中医药的多成分、多靶点治疗RA提供了科学依据。

关键词：类风湿性关节炎滑膜成纤维细胞中药研究进展

沉默非肌肉肌球蛋白Ⅱ骨髓间充质干细胞移植对内毒素/脂多糖诱导急性肺损伤大鼠肺细胞外基质的影响

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中华烧伤与创面修复杂志 2022年第5期38卷 422-433页

作者：尹希周万芳侯文佳范明枝伍国胜刘晓彬马琪敏王玉松朱峰张家港市第一人民医院(苏州大学附属张家港医院)烧伤整形科苏州215600 海军军医大学第一附属医院烧伤科上海200433

目的探讨沉默非肌肉肌球蛋白Ⅱ(NMⅡ)基因的骨髓间充质干细胞(BMMSC)对内毒素/脂多糖(LPS)诱导的急性肺损伤(ALI)大鼠肺细胞外基质(ECM)和肺纤维化的影响。方法采用实验研究方法。取4只1周龄雄性SD大鼠股骨和胫骨骨髓腔细胞并经流式细... 详细信息

目的探讨沉默非肌肉肌球蛋白Ⅱ(NMⅡ)基因的骨髓间充质干细胞(BMMSC)对内毒素/脂多糖(LPS)诱导的急性肺损伤(ALI)大鼠肺细胞外基质(ECM)和肺纤维化的影响。方法采用实验研究方法。取4只1周龄雄性SD大鼠股骨和胫骨骨髓腔细胞并经流式细胞术鉴定为BMMSC。取第3代BMMSC用于后续实验。取细胞,分为用含NMⅡ基因的小干扰RNA序列的pHBLV-U6-ZsGreen-Puro质粒转染的沉默NMⅡ组,转染空载质粒的空载组及未进行任何处理的空白对照组,采用蛋白质印迹法检测干预后72 h的NMⅡ的蛋白表达(样本数为3)。取细胞,于倒置相差显微镜下观察形态;另取细胞,用氯甲基苯甲酰胺(CM-DiⅠ)标记,于倒置荧光显微镜下观察体外细胞标记情况。取20只4周龄雄性SD大鼠,按随机数字表法分为空白对照组、单纯ALI组、ALI+BMMSC组及ALI+沉默NMⅡ的BMMSC组,每组5只大鼠。对空白对照组不进行任何处理,其余3组大鼠均给予LPS诱导ALI。造模后即刻,单纯ALI组大鼠经尾静脉注射1 mL生理盐水,ALI+BMMSC组、ALI+沉默NMⅡ的BMMSC组大鼠分别经尾静脉注入1 mL 1×10^(7)个/mL CM-DiⅠ标记的BMMSC、NMⅡ基因沉默的BMMSC,空白对照组大鼠于相同时间点通过尾静脉注射1 mL生理盐水。干预后24 h,取肺组织于倒置荧光显微镜下观察BMMSC肺内归巢情况。干预后24 h、1周、2周,取肺组织行苏木精-伊红染色观察肺部炎症情况,行Masson染色观察肺纤维化程度并采用改良Ashcroft评分法对干预后2周肺纤维化程度进行评分(样本数为5)。采用免疫组织化学法检测干预后2周α平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、基质金属蛋白酶2(MMP-2)、MMP-9的含量(样本数均为3),采用酶联免疫吸附测定法检测干预后24 h超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛、髓过氧化物酶(MPO)活性(样本数均为3),采用免疫荧光染色法检测干预后1周CD11b和含表皮生长因子样模块黏蛋白样激素受体1(EMR1)蛋白表达(样本数均为3)。对数据行单因素方差分析、Bonferroni法及Kruskal-Wallis H检验。结果干预后72 h,沉默NMⅡ组细胞NMⅡ蛋白表达水平显著低于空白对照组和空载组(P值均炎症细胞浸润,ALI+BMMSC组和ALI+沉默NMⅡ的BMMSC组大鼠干预后24 h肺组织炎症细胞浸润较单纯ALI组明显减少,且2组大鼠干预后1、2周肺泡壁变薄,局部肺组织有少量淤血。干预后1、2周,单纯ALI组、ALI+BMMSC组和ALI+沉默NMⅡ的BMMSC组大鼠肺组织胶原纤维沉积均较空白对照组明显加重,但ALI+BMMSC组和ALI+沉默NMⅡ的BMMSC组大鼠肺组织胶原纤维沉积均较单纯ALI组显著改善。干预后2周,单纯ALI组、ALI+BMMSC组和ALI+沉默NMⅡ的BMMSC组大鼠肺纤维化改良Ashcroft评分分别为(2.36±0.22)、(1.62±0.16)、(1.06±0.26)分,均明显高于空白对照组的(0.30±0.21)分(P0.05)。与空白对照组比较,单纯ALI组大鼠肺组织MMP-9含量显著升高(P<0.01);与单纯ALI组比较,ALI+BMMSC组、ALI+沉默NMⅡ的BMMSC组大鼠肺组织MMP-9含量均显著降低(P<0.01)。干预后24 h,与空白对照组比较,单纯ALI组、ALI+BMMSC组、ALI+沉默NMⅡ的BMMSC组大鼠肺组织丙二醛、SOD、MPO活性均显著升高(P<0.01);与单纯ALI组比较,ALI+沉默NMⅡ的BMMSC组大鼠肺组织丙二醛活性显著升高(P<0.05),ALI+BMMSC组、ALI+沉默NMⅡ的BMMSC组大鼠肺组织SOD活性均显著升高(P<0.01);与ALI+BMMSC组比较,ALI+沉默NMⅡ的BMMSC组大鼠

关键词：急性肺损伤间充质干细胞细胞外基质基因沉默非肌肉肌球蛋白Ⅱ

应激条件下地塞米松可以选择性抑制调节性T细胞亚群

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应激条件下地塞米松可以选择性抑制调节性T细胞亚群

细胞—生命的基础——中国细胞生物学学会2013年全国学术大会·武汉

作者：严军高闻达杨雪范霞张醇刘东擘梁华平第三军医大学野战外科研究所第一研究室创伤、烧伤与复合伤国家重点实验室

目的:疾病、创伤、感染以及炎症等诸多因素都可能导致机体处于应激状态,而这种状态可以直接介导体内的神经内分泌反应,进而调控机体的免疫功能。作为下丘脑-垂体-肾上腺(hypothalamus-pituitary-adrenal,HPA)轴的主要效应激素,糖皮质激... 详细信息

目的:疾病、创伤、感染以及炎症等诸多因素都可能导致机体处于应激状态,而这种状态可以直接介导体内的神经内分泌反应,进而调控机体的免疫功能。作为下丘脑-垂体-肾上腺(hypothalamus-pituitary-adrenal,HPA)轴的主要效应激素,糖皮质激素(glucocoritocid,GC)在此过程中发挥了重要作用;另一方面,作为T淋巴细胞亚群中的主要成员,调节性T细胞(regular

关键词：应激地塞米松调节性T细胞

年龄因素下间充质干细胞对巨噬细胞免疫调控能力改变

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年龄因素下间充质干细胞对巨噬细胞免疫调控能力改变

第十一次全国牙周病学学术会议

作者：殷园陈发明军事口腔医学重点实验室第四军医大学口腔医院牙周科

目的:牙周炎是慢性炎症性疾病。干细胞治疗应用于牙周炎越来越引发了广泛的关注,其不仅可以直接参与再生;而且可以调控免疫应答、抑制炎症、促进再生。研究认为间充质干细胞(MSCs)可以调控巨噬细胞(促再生表型)引导骨再生。然而,年龄增...

目的:牙周炎是慢性炎症性疾病。干细胞治疗应用于牙周炎越来越引发了广泛的关注,其不仅可以直接参与再生;而且可以调控免疫应答、抑制炎症、促进再生。研究认为间充质干细胞(MSCs)可以调控巨噬细胞(促再生表型)引导骨再生。然而,年龄增长是否影响MSCs对巨噬细胞免疫调控性能尚未有研究。因此,本研究探索年龄因素对MSCs调控巨噬细胞能力的影响。方法:应用了两种不同年龄小鼠(鼠龄8周和>24周)骨髓来源MSCs(定义为年轻组:YMSCs,年老组:AMSCs)与RAW264.7(巨噬细胞系)在Transwell间接共培养后,检测RAW264.7相关性能表现。分为YMSCs共培养组,AMSCs共培养组,以RAW264.7单独培养为对照组。用流式和免疫荧光检测RAW264.7表型(CD86,CD206和诱导型一氧化氮合酶等标志物);实时定量PCR检测RAW264.7表型相关m RNA(促炎症表型相关m RNA:肿瘤坏死因子,白介素-1,诱导型一氧化氮合酶;促再生表型相关m RNA:白介素-10,精氨酸酶,转化生长因子);ELISA检测RAW264.7分泌的细胞因子(肿瘤坏死因子-α,白介素-10);迁移实验检测RAW264.7迁移能力。结果:YMSCs更能诱导RAW264.7表达促再生表型相关标志物(CD206),及分泌抗炎细胞因子。然而,年老干细胞共培养后的RAW264.7迁移能力更强。结论:年轻干细胞诱导巨噬细胞转变为促再生表型发挥促再生作用能力更强。此研究结果为临床上牙周治疗应用干细胞提供了依据。

关键词：

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成体干细胞与脓毒症

成体干细胞与脓毒症

第七届全国创伤学术会议暨2009海峡两岸创伤医学论坛

作者：蒋建新第三军医大学附属大坪医院野战外科研究所创伤、烧伤与复合伤国家重点实验室

脓毒症是当今全球危重病患者中最常见的并发症和死亡原因,尽管十多年来,人们一直探寻其防治措施,特别是2004年来开展了全球拯救脓毒症的行动,但是脓毒症的发病率和死亡率仍维持在较高水平。脓毒症能否可以攻克呢?大量基础与临床研究表明...

脓毒症是当今全球危重病患者中最常见的并发症和死亡原因,尽管十多年来,人们一直探寻其防治措施,特别是2004年来开展了全球拯救脓毒症的行动,但是脓毒症的发病率和死亡率仍维持在较高水平。脓毒症能否可以攻克呢?大量基础与临床研究表明,脓毒症本质上是一种感染引发的宿主反应,主要表现为宿主免疫、炎症和凝血机制的广泛失调,最终因循环系统衰竭(感染性休克)和

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芳香烃受体对脂多糖致炎小鼠免疫细胞和肝肾功能影响的体内研究

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芳香烃受体对脂多糖致炎小鼠免疫细胞和肝肾功能影响的体内研究

2015第十一届全国中西医结合灾害医学大会、江苏省中西医结合学会第二届灾害医学学术会议、中华卫生应急电子杂志第二届编委会会议暨2015江苏国际医疗器械科技博览会

作者：严军杨雪范霞罗莉唐婉琦马娓余静梁华平第三军医大学大坪医院野战外科研究所第一研究室创伤、烧伤与复合伤国家重点实验室

目的:在前期研究正常和严重创伤后骨髓细胞表达芳香烃受体(aryl hydrocarbon receptor,AhR)作用的基础上,利用现有AhR-/-及其匹配的AhR+/+小鼠探讨AhR对炎症中机体免疫细胞和重要脏器功能的影响。方法:从美国Jackson实验室引进B6.129-Ah... 详细信息

目的:在前期研究正常和严重创伤后骨髓细胞表达芳香烃受体(aryl hydrocarbon receptor,AhR)作用的基础上,利用现有AhR-/-及其匹配的AhR+/+小鼠探讨AhR对炎症中机体免疫细胞和重要脏器功能的影响。方法:从美国Jackson实验室引进B6.129-Ahrtm1Bra/J小鼠,通过基因分型获得AhR野生型(wildtype,+/+)和AhR基因敲除型(knockout,K0,-/-)小鼠。实验共分为AhR+/+对照组、AhR+/+致炎组、AhR-/-对照组和AhR-/-致炎组等4组,要求选取各品系精确配对的成年小鼠用于实验,即每组实验不同品系小鼠均为来自同窝别、同周龄、同性别的成年小鼠,实验分多批次进行,以积累样本含量。致炎方式为脂多糖(1ipopolysaccharide,LPS)刺激,即各实验组按10mg/kg腹腔注射LPS。致炎4小时(hour,h)后常规处死小鼠,取小鼠全血,用于检测血清中肝功(ALT、AST、LDH等)和肾功指标(UREA、CREA等);取脾、淋巴结和胸腺,FACS检测各组别T(含Th各亚型)、B淋巴细胞的分布和比例;取骨髓前体细胞,各组别接种相同数量细胞(15×106),常规粒细胞巨噬细胞集落刺激因子(Granulocyte-Macrophage Colony-Stimulating Factor,GM-CSF)诱导7天(day,d)后收集诱导后的BMDM和BMDC,比较各组别各类细胞数量的差异,同时利用BMDC与同种异体Th0细胞共培养,观察各组别各品系BMDC对初始T细胞分化结局的影响。结果:与对照组相比,LPS致炎4h后各品系小鼠的肝功和肾功指标、致炎后脾T细胞和DC细胞以及胸腺中T细胞比例、LPS处理后各品系周围淋巴结和肠系膜淋巴结中Treg和Th2比例以及胸腺中Treg比例均明显上升,而且AhR-/-高于相应组别的AhR+/+。LPS作用能够等比例减少BM前体细胞诱导分化为BMDM和BMDC的数量(按照前述分组获得的BMDM数量分别为2.85×106、0.9×106、6×106、0.3×106;BMDC数量分别为22×106、8×106、67.5×106、0.65×106),但能使AhR-/-组BM前体细胞诱导分化为BMDC的能力明显弱于BMDM,从而导致BMDM的比例在总数急剧降低的情况下反而显著升高。LPS致炎条件下AhR+/+来源的BMDC诱导Th0分化为IFNγ和Foxp3的能力显著上升,而AhR-/-来源的BMDC诱导能力仅在Foxp3和IL-17A上略有升高。结论:AhR对于维护机体肝肾功能具有重要作用;炎症条件下AhR缺如可能影响机体免疫细胞的增殖、分化以及对致炎因素的免疫应答,从而导致Th1-Th2、Treg-Th17平衡难以正常发挥作用,其中AhR可能和Treg的作用关系更为密切;脾可能是AhR发挥重要作用的靶器官之一。

关键词： AhR 肝肾功能体内研究

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创伤小鼠腹腔巨噬细胞自噬活性降低

创伤小鼠腹腔巨噬细胞自噬活性降低

全国危重病急救医学学术会议

作者：梁华平韩健吴丹徐祥王正国第三军医大学野战外科研究所创伤、烧伤与复合伤国家重点实验室

目的：抗原呈递细胞如巨噬细胞的自噬在抵抗细胞内病原体的天然及适应性免疫中起重要作用,但创伤后巨噬细胞的自噬活性是否发生变化尚不清楚,本研究对此进行了探讨。方法：通过对 BALB/c 小鼠实施双后肢股骨骨折合并35%失血量制备创伤模... 详细信息

目的：抗原呈递细胞如巨噬细胞的自噬在抵抗细胞内病原体的天然及适应性免疫中起重要作用,但创伤后巨噬细胞的自噬活性是否发生变化尚不清楚,本研究对此进行了探讨。方法：通过对 BALB/c 小鼠实施双后肢股骨骨折合并35%失血量制备创伤模型, 通过以下两种方法测定腹腔巨噬细胞自噬活性：激光共聚焦显微镜下观察并计算针点状 MDC 阳性细胞百分率、透射电镜下观察细胞的自噬小体。结果：创伤小鼠腹腔巨噬细胞的基础自噬水平于伤后3小时至伤后7天降低,以伤后3天降为最低点。表现为针点状 MDC 阳性细胞百分率减少、细胞内自噬小体缺失。通过雷帕霉素、氨基酸饥饿或内毒素处理来自于正常小鼠的腹腔巨噬细胞,可诱导其自噬活性提高,但来自创伤小鼠的腹腔巨噬细胞对上述同等诱导刺激产生耐受。结论：巨噬细胞的自噬,作为机体对应激和炎症响应的保护机制,于创伤后受到抑制。

关键词：创伤巨噬细胞自噬

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胍丁胺对脂多糖诱导的急性肝损伤的保护作用

胍丁胺对脂多糖诱导的急性肝损伤的保护作用

2014第十届全国中西医结合灾害医学学术大会江苏省中西医结合学会灾害医学、重症医学专业委员会成立大会暨健康产业成果展示洽谈会

作者：李炫飞范霞郑志华杨雪刘政龚建平梁华平第三军医大学大坪医院野战外科研究所第一研究室创伤烧伤与复合伤国家重点实验室

目的研究胍丁胺(agmatine,AGM)对脂多糖(1ipopolysaccharide,LPS)诱导肝损伤的保护作用,并探讨其相应的分子机制。方法将60只成年C57BL/6小鼠随机分为正常对照组(20只,腹腔注射磷酸盐缓冲液)、LPS模型组(20只,腹腔注射LPS10mg/kg)和AGM... 详细信息

目的研究胍丁胺(agmatine,AGM)对脂多糖(1ipopolysaccharide,LPS)诱导肝损伤的保护作用,并探讨其相应的分子机制。方法将60只成年C57BL/6小鼠随机分为正常对照组(20只,腹腔注射磷酸盐缓冲液)、LPS模型组(20只,腹腔注射LPS10mg/kg)和AGM治疗组(20只,腹腔注射LPS10mg/kg和AGM200mg/kg),各组于注射后6h和24h处死,每组每时相点10只,采集血和肝组织标本。采用酶联免疫吸附法(ELISA)检测血清和肝组织匀浆中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)白细胞介素-1β(IL-1β)及白细胞介素-6(IL-6)的含量,全自动生化分析仪测定血清丙氨酸转氨酶(ALT)和天冬氨酸转氨酶(AST)水平,Western Blot检测肝组织匀浆中核转录因子-κB p65(NF-κB p65)在细胞核内的含量,并观察肝组织病理变化。结果 LPS注射6h各组小鼠均表现为精神萎靡、蜷缩少动、禁饮食水,但其中AGM治疗组小鼠精神和活动明显好于LPS模型组。AGM治疗后能有效降低LPS所致小鼠外周血中ALT(U/L:107.9±8.5比189.9±13.6,P炎症因子TNF-α(ng/ml:296.3±42.5比627.2±81.3,P炎症因子的合成和释放,进而减轻小鼠肝组织的损伤。

关键词：胍丁胺 LPS 急性肝损伤白细胞介素