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铁皮石斛DoUGT83A1基因克隆及表达特性分析

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中草药 2025年第1期 259-268页

作者：张逸群陈家栋宋敏全姜武刘莹莹段晓婧陶正明浙江农林大学食品与健康学院浙江省特色中药资源保护与创新利用重点实验室浙江省亚热带作物研究所药用植物研究室浙江铁枫堂生物科技股份有限公司

目的对铁皮石斛Dendrobium officinale中糖基转移酶基因DoUGT83A1进行克隆，并对其进行生物信息学及表达模式分析。方法从铁皮石斛“雁荡山1号”叶组织中获得DoUGT83A1基因，利用软件进行生物信息学分析，利用MEGA11构建系统发育树，... 详细信息

目的对铁皮石斛Dendrobium officinale中糖基转移酶基因DoUGT83A1进行克隆，并对其进行生物信息学及表达模式分析。方法从铁皮石斛“雁荡山1号”叶组织中获得DoUGT83A1基因，利用软件进行生物信息学分析，利用MEGA11构建系统发育树，采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测基因表达模式。结果通过PCR扩增得到1个DoUGT83A1基因（GI:1622023669），该基因的CDS序列为1 347 bp，编码448个氨基酸。DoUGT83A1蛋白相对分子质量为54 330，理论等电点为5.75，为亲水性不稳定蛋白，无信号肽和跨膜区域，含有41个磷酸化位点，具有UDPGT和PSPG 2个保守结构域。氨基酸序列分析表明DoUGT83A1蛋白与金钗石斛Dendrobium nobile的UGT83A1蛋白的同源性最高，相似度为96.36%。分子对接结果证明DoUGT83A1蛋白对山柰酚具有较好的催化活性。组织特异性表达分析结果显示，DoUGT83A1在“雁荡山1号”不同组织相对表达量为：叶>茎>花>根（白根、绿根尖）。顺式作用元件分析结果表明，DoUGT83A1基因启动子序列含有多个与非生物胁迫响应相关的元件，且在低温、缺磷和菌根共生诱导下显著上调表达，推测该基因可能参与调控铁皮石斛菌根共生及非生物胁迫响应过程。结论成功克隆获得铁皮石斛DoUGT83A1基因，并进行生物信息学分析和基因表达模式分析。为进一步探究DoUGT83A1基因功能及其在菌根共生和非生物胁迫响应中的作用机制提供理论依据。

关键词：铁皮石斛 DoUGT83A1基因生物信息学分析表达特性分析 qRT-PCR

植物乳杆菌培养上清对不同血清型沙门氏菌的抑制效果及作用机理

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微生物学报 2023年第1期63卷 220-232页

作者：李东昱胡爱心黄雯霞舒鑫刘金松张瑞强许英蕾杨彩梅吴艳萍浙江农林大学动物科技学院、动物医学院浙江杭州311300 浙江惠嘉生物科技股份有限公司浙江湖州313307

【目的】探究植物乳杆菌培养上清(Lactobacillus plantarum culture supernatant,LPC)对3种血清型沙门氏菌猪霍乱(Salmonella cholerae,SC)、肠炎(Salmonella enteritidis,SE)和鸡白痢(Salmonella pullorum,SP)的生长和致病性的抑制作用效果及机理。【方法】将2%LPC与3种沙门氏菌分别共培养后,采用比浊法及牛津杯抑菌圈试验检测沙门氏菌生长情况及LPC中的主要抑菌物质,使用实时荧光定量PCR(quantitative real-time polymerase chain reaction,qRT-PCR)探究沙门氏菌致病性相关基因表达水平,最后通过结晶紫染色法检测沙门氏菌的生物被膜。【结果】2%LPC能够显著抑制3种沙门氏菌的生长,其作用效果与庆大霉素(gentamicin,GM)相近且对SE的生长抑制效果优于GM,其主要抑菌物质为有机酸;2%LPC对3株沙门氏菌SPI-1编码的主要毒力基因(InvA、InvF、SopE、SopB、SipB、HilA和SipA)、SPI-2毒力基因(SopD2)、菌毛相关基因(FliF、LpfA、SefA和FimF)和鞭毛相关基因(FlhD、FliC和FliD)表达均有显著抑制效果且抑制效果与GM相近;2%LPC对3株沙门氏菌的生物被膜形成均有显著抑制效果,抑菌率12 h为40%–50%、24 h为60%–80%,且作用效果与GM相似;对比发现,2%LPC对SE的生长及致病性的抑制效果优于SC与SP。【结论】2%LPC对3种血清型沙门氏菌的生长性能及致病性均有显著抑制效果,且对肠炎沙门氏菌抑制效果最佳。

关键词：植物乳杆菌培养上清沙门氏菌抑制生长致病性

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奥美克松能够更安全地逆转罗库溴铵诱导的神经肌肉阻滞作用（英文）

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中国药理学与毒理学杂志 2018年第7期32卷 515-527页

作者：漆又毛漆莹贝余葆春劳乔聪李春启朱狄峰揭清杭州奥默医药股份有限公司浙江杭州310011 浙江大学药学院浙江杭州310058 杭州环特生物科技股份有限公司浙江杭州310012

目的研究合成的候选药物奥美克松与舒更葡糖的药效与安全性。方法 40只比格犬分为5组检测药效:正常对照组(生理盐水)、舒更葡糖8 mg·kg-(1阳性对照组)和奥美克松2,8和32 mg·kg^(-1)组。分别给予比格犬2轮罗库溴铵1.0 g·L^(-1)后,按... 详细信息

目的研究合成的候选药物奥美克松与舒更葡糖的药效与安全性。方法 40只比格犬分为5组检测药效:正常对照组(生理盐水)、舒更葡糖8 mg·kg-(1阳性对照组)和奥美克松2,8和32 mg·kg^(-1)组。分别给予比格犬2轮罗库溴铵1.0 g·L^(-1)后,按分组分别给予比格犬生理盐水、奥美克松或舒更葡糖,计算每只动物第一轮和第二轮滴注后第4个与第1个刺激强度比值(T4/T1)恢复至50%,75%及90%的时间。再将240尾斑马鱼分为8组(每组30尾),通过检测类胰蛋白酶相对诱导水平进行致敏性实验:正常对照组(有斑马鱼和底物)、C48/80阳性组、舒更葡糖和奥美克松各250,500和1000 ng组。此外,还将斑马鱼(每组30尾)分为正常对照组和舒更葡糖、奥美克松各75,250和750 ng组,计算心率,并在显微镜下观察出血情况,进行安全性评价。结果比格犬药效实验结果显示,奥美克松2,8和32 mg·kg^(-1)剂量下T4/T1恢复至50%,75%和90%的时间相比正常对照组均显著下降(P<0.01),说明这些剂量的奥美克松均能明显逆转罗库溴铵诱导的神经肌肉阻滞作用;与舒更葡糖8 mg·kg^(-1)组相比,奥美克松各剂量下T4/T1恢复至50%,75%和90%的时间与之相当,表明奥美克松在逆转罗库溴铵诱导的方面的效果与舒更葡糖相近。斑马鱼致敏实验结果显示,奥美克松250 ng组的类胰蛋白酶水平与舒更葡糖250 ng组的相近,表明两者的低剂量组均无显著致敏作用;奥美克松500和1000 ng组相比舒更葡糖相同剂量组,其类胰蛋白酶水平分别下降了90.6%和96.4%(P<0.01),表明舒更葡糖组存在显著致敏作用,且较高剂量下的过敏反应更为严重,而奥美克松相应剂量下未见致敏作用。斑马鱼心率模型中,相比正常对照组,奥美克松75 ng和舒更葡糖75 ng组心率相近,未见降低;而舒更葡糖250 ng组心率下降了10%(P<0.01),同一剂量下奥美克松组表现稳定。舒更葡糖750 ng组心率相比对照组降低了21%(P<0.01),而同剂量的奥美克松组仅下降11%(P<0.01),表明奥美克松对心率和心脏功能的影响极小。在斑马鱼出血模型中,奥美克松75,250和750 ng组与对照组均无差异,表明其出血风险与正常对照组相同,而舒更葡糖3个剂量组的出血发生率分别为0%,0%和10%,两组呈显著差异(P<0.01),表明奥美克松相对于舒更葡糖无出血风险。结论不同剂量的奥美克松可明显逆转罗库溴铵诱导比格犬的神经肌肉阻滞作用。使用斑马鱼模型可检测出舒更葡糖的致敏、出血及心率减慢等不良反应,在斑马鱼模型中并未见奥美克松明显的致敏性、出血及心率影响,提示奥美克松是一种更安全的神经肌肉阻滞拮抗剂。

关键词：奥美克松神经肌肉阻滞舒更葡糖

适合于血脂偏高人群食用的山茶营养调和油配方研究

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食品工业 2013年第6期34卷 111-113页

作者：胡水保李海龙杨善言狄志鸿姚璐浙江亚林生物科技股份有限公司富阳311400

以山茶油为主,通过建立符合设计要求的数学模型,利用MATLAB软件求解,成功研制出了适合血脂偏高人群食用的营养调和油。这种调和油的脂肪酸组成合理,SFA∶MUFA∶PUFA=1∶7.1∶5.4,ω-6∶ω-3=4∶1,不饱和脂肪酸含量达到90%以上,同时添加... 详细信息

以山茶油为主,通过建立符合设计要求的数学模型,利用MATLAB软件求解,成功研制出了适合血脂偏高人群食用的营养调和油。这种调和油的脂肪酸组成合理,SFA∶MUFA∶PUFA=1∶7.1∶5.4,ω-6∶ω-3=4∶1,不饱和脂肪酸含量达到90%以上,同时添加植物甾醇14 mg/g。

关键词：高血脂山茶油营养调和油

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氯氰碘柳胺钠的合成工艺改进

中国医药工业杂志 2018年第8期49卷 1091-1094页

作者：邹晔李林玲陈仁尔苏为科浙江工业大学绿色制药协同创新中心浙江杭州310014 浙江荣耀生物科技股份有限公司浙江台州317016

本研究对氯氰碘柳胺钠的合成工艺进行改进。对氯苯乙腈和4-氯-2-硝基甲苯(3)经缩合反应得4-氯-α-(2-氯-4-肟基-5-甲基-2,5-环己二烯-1-亚基)苯乙腈,以钯碳催化加氢代替文献的铁粉/氯化铵还原,制得4-氨基-2-氯-5-甲基-α-(4-氯苯基)苯乙... 详细信息

本研究对氯氰碘柳胺钠的合成工艺进行改进。对氯苯乙腈和4-氯-2-硝基甲苯(3)经缩合反应得4-氯-α-(2-氯-4-肟基-5-甲基-2,5-环己二烯-1-亚基)苯乙腈,以钯碳催化加氢代替文献的铁粉/氯化铵还原,制得4-氨基-2-氯-5-甲基-α-(4-氯苯基)苯乙腈(5),避免了铁泥和废水等污染物的排放,且简化了后处理,收率由84%提高至92%。化合物5和2-羟基-3,5-二碘苯甲酸以双(三氯甲基)碳酸酯(BTC)为酰化试剂,采用"一锅法"制得N-[5-氯-4-[α-(4-氯苯基)氰甲基]-2-甲苯基]-2-羟基-3,5-二碘苯甲酰胺(8),收率由81%提高至94.3%。最后8和氢氧化钠成盐得目标化合物,总收率由43%提高至77%(以3计),纯度99.3%。改进后的工艺操作简便,反应条件温和,收率高,"三废"少,易于大规模工业化生产。

关键词：氯氰碘柳胺钠抗寄生虫药对氯苯乙腈 4-氯-2-硝基甲苯工艺改进

6种植物精油体外抑菌活性及抗氧化能力的比较研究

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中国粮油学报 2024年第5期39卷 148-155页

作者：陈奕颖刘金松刘玉兰肖世平杨彩梅牛玉浙江农林大学动物科技学院·动物医学院杭州311300 浙江惠嘉生物科技股份有限公司湖州313300

植物精油具有较强的抑菌和抗氧化作用,已成为替代抗生素使用的新型饲料添加剂,在饲料中具有广泛的应用前景。本实验研究了百里香酚、香芹酚、丁香酚、香兰素、肉桂醛及桉叶油等6种常见的植物精油对大肠杆菌、肠炎沙门氏菌、鼠伤寒沙门... 详细信息

植物精油具有较强的抑菌和抗氧化作用,已成为替代抗生素使用的新型饲料添加剂,在饲料中具有广泛的应用前景。本实验研究了百里香酚、香芹酚、丁香酚、香兰素、肉桂醛及桉叶油等6种常见的植物精油对大肠杆菌、肠炎沙门氏菌、鼠伤寒沙门氏菌及产气荚膜梭菌的抑菌效果,测定了它们对DPPH自由基、ABTS自由基和超氧阴离子的清除率,并利用铁氰化钾法分析了6种植物精油还原力的大小,然后选择抑菌及抗氧化能力综合效果较好的2种植物精油进行复合,研究复合精油的抑菌和抗氧化效果。结果表明,百里香酚和肉桂醛具有较强的抑菌活性和自由基清除能力,且最佳复配比例是1∶1。

关键词：植物精油抑菌抗氧化自由基

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乳酸菌抑菌作用机制的研究进展

动物营养学报 2021年第12期33卷 6690-6698页

作者：胡爱心刘金松许英蕾吴艳萍浙江农林大学动物科技学院·动物医学院杭州311300 浙江惠嘉生物科技股份有限公司湖州313300

乳酸菌作为重要的饲用益生菌已广泛应用于畜牧生产中,其具有提高动物生长性能、改善肠道环境、增强免疫力和维持动物健康等作用。乳酸菌发挥益生功能的重要机理之一是抑制肠道病原菌。本文从抑菌物质、竞争黏附位点、调控肠道菌群平衡... 详细信息

乳酸菌作为重要的饲用益生菌已广泛应用于畜牧生产中,其具有提高动物生长性能、改善肠道环境、增强免疫力和维持动物健康等作用。乳酸菌发挥益生功能的重要机理之一是抑制肠道病原菌。本文从抑菌物质、竞争黏附位点、调控肠道菌群平衡及激活宿主免疫等方面总结了近年来有关乳酸菌抑菌分子机制的研究进展,以及对畜禽主要病原菌的抑制效果,以期为乳酸菌替代抗生素应用于防治病原菌感染提供参考依据。

关键词：乳酸菌抑菌分子机制肠道病原菌畜禽健康

乳酸杆菌对肉鸡生长性能、消化酶活性和营养物质表观消化率的影响

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动物营养学报 2022年第9期34卷 5721-5729页

作者：管乐琪俞晓蓉戴政列刘金松代兵杨彩梅张瑞强吴艳萍浙江农林大学动物科技学院·动物医学院杭州311300 浙江惠嘉生物科技股份有限公司安吉313300

本试验将类干酪乳杆菌(LPI)和植物乳杆菌(LPM)添加到肉鸡饲粮中,旨在研究其对肉鸡生长性能、消化酶活性和营养物质表观消化率的影响。随机选取1日龄雄性健康黄羽肉仔鸡480只,分为4组,每组8个重复,每个重复15只。对照组(CON组)饲喂基础饲... 详细信息

本试验将类干酪乳杆菌(LPI)和植物乳杆菌(LPM)添加到肉鸡饲粮中,旨在研究其对肉鸡生长性能、消化酶活性和营养物质表观消化率的影响。随机选取1日龄雄性健康黄羽肉仔鸡480只,分为4组,每组8个重复,每个重复15只。对照组(CON组)饲喂基础饲粮,试验组分别饲喂在基础饲粮中添加1000 mg/kg的LPI(LPI组,活菌数3×10^(9) CFU/g)、1000 mg/kg的LPM(LPM组,活菌数3.5×10^(8) CFU/g)和2000 mg/kg的复合益生菌制剂(CL组,LPI活菌数1.5×10^(9) CFU/g,LPM活菌数1.75×10^(8) CFU/g)的试验饲粮。试验期为56 d。结果表明:与CON组相比,LPM组肉鸡末重和平均日增重显著提高(P<0.05),28、56日龄胰腺淀粉酶活性和28日龄胰腺胰蛋白酶活性显著增加(P<0.05),54~56日龄有机物表观消化率和23~25日龄、54~56日龄粗蛋白质表观消化率显著提高(P<0.05);CL组54~56日龄粗蛋白质表观消化率显著提高(P<0.05);LPM组、CL组56日龄胰腺消化器官指数显著提高(P<0.05),56日龄空肠食糜淀粉酶活性和28日龄空肠食糜胰蛋白酶活性显著提高(P<0.05),28和56日龄血清尿素氮含量显著降低(P<0.05);LPI组、LPM组和CL组56日龄胰腺胰蛋白酶活性显著提高(P<0.05),56日龄空肠食糜胰蛋白酶活性显著提高(P<0.05)。综上所述,饲粮中添加LPM和LPI均可提高消化酶活性,且LPM效果更佳,同时LPM具有提高肉鸡生长性能、消化器官发育和改善肉鸡有机物和粗蛋白质表观消化率,降低血清尿素氮含量的作用。此外,LPM和LPI复配未表现出协同益生效果。

关键词：乳酸杆菌肉鸡生长性能消化酶活性表观消化率

黄芪多糖对脂多糖刺激小鼠巨噬细胞形态及免疫功能的影响

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动物营养学报 2020年第9期32卷 4358-4365页

作者：陈广勇韩乾杰张玲玲金庆日崔艳军杨彩梅浙江农林大学动物科技学院·动物医学院杭州311300 浙江惠嘉生物科技股份有限公司安吉311703

本试验旨在研究黄芪多糖(APS)对脂多糖(LPS)刺激小鼠巨噬细胞形态及免疫功能的影响。采用LPS刺激小鼠巨噬细胞(RAW264.7细胞),研究不同浓度(0.1、0.5、1.0 mg/mL)的APS对LPS刺激引起的小鼠巨噬细胞免疫应激的调控作用。结果表明:1)1.0 m... 详细信息

本试验旨在研究黄芪多糖(APS)对脂多糖(LPS)刺激小鼠巨噬细胞形态及免疫功能的影响。采用LPS刺激小鼠巨噬细胞(RAW264.7细胞),研究不同浓度(0.1、0.5、1.0 mg/mL)的APS对LPS刺激引起的小鼠巨噬细胞免疫应激的调控作用。结果表明:1)1.0 mg/mL APS能抑制由LPS刺激引起的巨噬细胞形态和增殖能力的变化。2)1.0 mg/mL APS能够显著提高巨噬细胞酸性磷酸酶的活性(P<0.05)。0.1、0.5、1.0 mg/mL的APS能够显著缓解由LPS刺激引起的碱性磷酸酶活性的降低(P<0.05)。3)不同浓度APS均能显著降低由LPS诱导的促炎症因子白细胞介素-1β(IL-1β)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)含量的升高(P<0.05)。4)LPS刺激显著提高巨噬细胞Toll样受体4(TLR4)、髓样分化因子88(MyD88)、核因子-κB(NF-κB)的mRNA表达量(P<0.05),而添加1.0 mg/mL APS后,巨噬细胞TLR4、MyD88、NF-κB的mRNA表达量均表现出显著降低(P<0.05)。综上可知,APS可以改善小鼠巨噬细胞形态,恢复细胞增殖能力,并可通过调节TLR4信号通路相关基因的表达降低促炎症因子IL-1β和TNF-α分泌,减少机体免疫应激反应。

关键词：黄芪多糖小鼠巨噬细胞细胞形态免疫功能