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基于CRISPR/Cas9技术构建猪KLF4基因敲除细胞系及其对细胞活性的影响分析

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中国畜牧兽医 2024年第3期51卷 893-902页

作者：董娇陆繁方晓敏陈瑜哲包文斌王海飞扬州大学动物科学与技术学院扬州225009 江苏省农业科学院农产品质量安全与营养研究所南京210014 昆山市畜禽屠宰检疫中心昆山215300

【目的】试验旨在利用CRISPR/Cas9技术构建Krüppel样因子4(Krüppel-like factor 4,KLF4)基因敲除的猪小肠上皮细胞,并探究KLF4基因敲除对于细胞活性和细胞周期的影响。【方法】在猪KLF4基因转录本第1外显子区域设计3条sgRNAs(sgRNA1、... 详细信息

【目的】试验旨在利用CRISPR/Cas9技术构建Krüppel样因子4(Krüppel-like factor 4,KLF4)基因敲除的猪小肠上皮细胞,并探究KLF4基因敲除对于细胞活性和细胞周期的影响。【方法】在猪KLF4基因转录本第1外显子区域设计3条sgRNAs(sgRNA1、sgRNA2和sgRNA3),经退火形成的双链DNA与线性化pGK1.1载体连接,产物转化大肠杆菌Top10感受态细胞进行鉴定,并将重组载体转染至猪小肠上皮细胞(IPEC-J2)。PCR扩增敲除位点附近序列,并通过测序判断sgRNA敲除效率;利用CruiserTMEnzyme酶切鉴定阳性细胞克隆,通过TA克隆测序鉴定敲除序列;利用Western blotting检测基因敲除细胞中KLF4蛋白表达情况。利用CCK-8和流式细胞术检测KLF4基因敲除后细胞活性和细胞周期的变化。【结果】重组载体测序结果显示,sgRNAs与pGK1.1成功连接。分析敲除效率发现,3个sgRNAs均可对靶序列进行敲除,其中sgRNA3有较高的敲除效率。PCR产物经CruiserTMEnzyme酶切筛选出2个阳性单克隆细胞。TA克隆测序分析发现,KLF4基因2个等位基因序列分别缺失116和137 bp。Western blotting结果表明,KLF4基因敲除细胞中未见KLF4蛋白表达。细胞活性及细胞周期分析显示,敲除KLF4基因极显著抑制了细胞活性(P<0.01),并导致G0/S细胞周期阻滞。【结论】本研究利用CRISPR/Cas9技术构建了KLF4基因敲除的IPEC-J2细胞,且KLF4基因敲除可抑制细胞活性,并引起G0/S细胞周期阻滞。KLF4基因敲除细胞可为进一步探究KLF4基因功能及分子机制提供材料。

关键词：猪 KLF4基因 CRISPR/Cas9技术细胞活性细胞周期

猪屠宰前后常见的人畜共患病的诊断与处理分析

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养猪 2024年第2期 68-69页

作者：钱萌希江苏省常熟市畜禽屠宰检疫和城区动物防疫中心江苏常熟215500

人畜共患病种类很多,当前有超过200种已知的人畜共患疾病,且在新发疾病中的占比很高,严重损害了人畜健康,对商业以及社会产生了诸多的负面影响。我国在对抗人畜共患疾病方面,积极开展了治疗和控制工作,旨在控制人畜共患疾病传播,预防疾... 详细信息

人畜共患病种类很多,当前有超过200种已知的人畜共患疾病,且在新发疾病中的占比很高,严重损害了人畜健康,对商业以及社会产生了诸多的负面影响。我国在对抗人畜共患疾病方面,积极开展了治疗和控制工作,旨在控制人畜共患疾病传播,预防疾病的发生。研究发现,人畜共患病病原体较多,有细菌、病毒、寄生虫等。在猪屠宰过程中,可通过饮水、粪便等途径传染人类,传染风险较高。基于此,本文就几种常见的人畜共患疾病进行分析,并就疾病诊断与具体处理方法展开探究,旨在为预防人畜共患病,降低人畜共患疾病发生概率,最大程度保证生猪食品安全,保障人类身体健康提供参考。

关键词：猪屠宰检疫人畜共患病诊断与处理

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事业单位财务数字化建设探索

齐鲁珠坛 2024年第2期 1-3页

作者：庄萌山东省畜产品质量安全中心<山东省畜禽屠宰技术中心>

财务数字化,是指依托计算机互联网及信息技术,将财务数据和管理流程转化为数字语言,建立统一标准的数据终端,进而实现数据的自动化处理,促进会计信息质量提升的过程。如今,大数据、云计算、移动互联网技术已成为新的潮流与旋律,各行业... 详细信息

财务数字化,是指依托计算机互联网及信息技术,将财务数据和管理流程转化为数字语言,建立统一标准的数据终端,进而实现数据的自动化处理,促进会计信息质量提升的过程。如今,大数据、云计算、移动互联网技术已成为新的潮流与旋律,各行业财务管理都在加速推进数字化建设步伐,不断引进如AI、区块链、大数据分析等新兴技术。该研究以事业单位为研究主体,以数字化需求为切入点,探析事业单位财务数字化的实施路径。

关键词：财务管理移动互联网技术计算机互联网大数据分析自动化处理数字语言数据终端信息技术

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瑶山鸡及其杂交配套组合公鸡肉用性能分析

中国畜牧杂志 2024年

作者：刘嘉苗小猛张立唐继高樊莹张洁贵州省畜禽遗传资源管理站贵州省畜牧兽医研究所

为促进瑶山鸡种质资源的开发利用。本试验以瑶山鸡纯系YS、黄羽绿壳蛋鸡GY和麻羽绿壳蛋鸡GH为父本，隐性白羽鸡RW为母本，配套形成GY×（YS×RW）和GH×[YS×（YS×RW）]2个杂交组合，获得GYR、GYYR杂交后代。随机抽选180日龄YS、GYR和G... 详细信息

为促进瑶山鸡种质资源的开发利用。本试验以瑶山鸡纯系YS、黄羽绿壳蛋鸡GY和麻羽绿壳蛋鸡GH为父本，隐性白羽鸡RW为母本，配套形成GY×（YS×RW）和GH×[YS×（YS×RW）]2个杂交组合，获得GYR、GYYR杂交后代。随机抽选180日龄YS、GYR和GYYR公鸡各30只，测定体尺及屠宰性能，进行相关性、因子及通径分析。结果表明：GYYR的胸宽、髋骨宽大于YS，体斜长、龙骨长、髋骨宽大于GYR；GYR的胸宽、胸深大于YS，龙骨长低于YS（P屠宰率均超84%，全净膛率均超73%。GYYR宰前活重、屠体重、半净膛重、全净膛重、胸肌重优于YS和GYR（P屠宰性能之间呈显著或极显著相关（P屠宰性能指标中提取出质量因子、体长因子、胸部因子，贡献率分别为36.759%、29.915%、16.205%。髋骨宽对宰前活重、屠体重、半净膛重、全净膛重的影响最大，直接效应依次为0.364、0.365、0.365、0.350，胫长对胸肌重、腿肌重的影响最大，直接效应分别为0.308、0.392。因此，GYYR的肉用性能优于YS和GYR；髋骨宽和胫长可作为屠宰性能的选择和评估指标。

关键词：瑶山鸡杂交组合体尺性状屠宰性能因子分析通径分析

区域内猪场粪污循环利用产业模式与减臭技术探讨

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中文科技期刊数据库（全文版）自然科学 2024年第3期 109-112页

作者：周祖澄朱建勋吴瑞彭兆道章志宣瑞安市动物疫病预防控制中心浙江温州325200 瑞安市梅屿兆道畜牧养殖场浙江温州325200 瑞安市绿野农庄有限公司浙江瑞安325200

在瑞安市马屿镇省级现代农业园区内有3家规模猪场,粪污处理源头分别采用沼气工程与舍外异位发酵床技术;且根据农牧结合生态平衡原理,针对粪污资源特性设置利用产业,并成立了畜禽粪污综合利用服务公司,打破小区域超负载利用粪污模式,实... 详细信息

在瑞安市马屿镇省级现代农业园区内有3家规模猪场,粪污处理源头分别采用沼气工程与舍外异位发酵床技术;且根据农牧结合生态平衡原理,针对粪污资源特性设置利用产业,并成立了畜禽粪污综合利用服务公司,打破小区域超负载利用粪污模式,实现异地消纳粪污,走大区域再利用产业所产生的废弃物循环再利用模式,使整个循环系统内实现多层次循环再利用。其主要工艺是“环保化生产+猪粪收集+减臭技术应用+沼气池厌氧工艺或舍外异位发酵床技术+有机肥料制作+田间管网输送+种植基地施肥浇灌+秸秆饲养牛羊”为生态循环处理模式,实现资源充分利用。在该园区内的中小规模猪场应用该模式,应用后结果表明,该模式能够解决区域内中小规模猪场产生的废弃物无害化处理与再利用问题,避免粪污排放造成环境污染,同时,废弃物循环再利用达到100%(包括沼气、沼液利用率,干粪、沉渣利用率,生活污水处理与利用等),减臭符合《浙江省畜禽养殖业污染物排放标准》中持续达到甚至小于 60的标准要求;周边或配套农田减少化肥使用量50%以上;按年出栏肉猪2万头计算,年产沼气20万m3,可集中供气150户和沼气发电25万kw.h。有望为区域内中小规模猪场建立一种实用生态型技术模式。

关键词：区域内规模猪场粪污循环利用产业模式

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哺乳仔鹿大肠杆菌性下痢的防治体会

当代畜牧 2024年第2期 126-127页

作者：邵清邴新帅刘红洋田喜荣吉林省双辽市动物疫病预防控制中心 136400 吉林省双辽市畜禽屠宰工作服务中心 136400

笔者通过实例介绍了哺乳仔鹿发生大肠杆菌性下痢的主要因素、病鹿临床症状、病理变化、疾病诊断方法、防治措施以及个人实践体会,希望有助于鹿场防治本病。

关键词：哺乳仔鹿大肠杆菌性下痢疾病防治

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细菌金属离子外排系统及金属稳态调控

微生物学报 2024年第3期64卷 672-686页

作者：董欣楠邓思敏宋厚辉徐加利程昌勇浙江农林大学动物科技学院·动物医学院动物健康互联网检测技术浙江省工程研究中心浙江省动物医学与健康管理国际科技合作基地浙江省畜禽绿色生态健康养殖应用技术研究重点实验室中澳动物健康大数据分析联合实验室浙江杭州311300

铁、铜、锌、锰等金属离子是各类生物体生存和增殖所必需的微量元素,可影响生物体内蛋白酶活性、免疫反应、生理过程和抗感染机制。细菌感染过程中,宿主可通过限制或提高体内环境中金属离子的浓度来抑制细菌增殖,与此同时,细菌进化出各... 详细信息

铁、铜、锌、锰等金属离子是各类生物体生存和增殖所必需的微量元素,可影响生物体内蛋白酶活性、免疫反应、生理过程和抗感染机制。细菌感染过程中,宿主可通过限制或提高体内环境中金属离子的浓度来抑制细菌增殖,与此同时,细菌进化出各种转运系统以适应宿主体内金属离子水平的变化。由于不同细菌的金属离子外排系统在结构和生化特性上存在变异,它们呈现出独特的金属离子外排模式。本文根据现有文献报道及本团队研究结果,对铁、铜、锌和锰离子的细菌外排系统进行讨论和总结,旨在综述目前对细菌金属离子稳态调控机制研究进展的认识,为深入理解细菌金属稳态调控相关机制提供参考。

关键词：金属离子外排系统细菌感染金属离子稳态调控机制

单增李斯特菌毒力因子溶血素关键氨基酸位点在感染过程中的作用研究

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微生物学报 2024年第4期64卷 1219-1232页

作者：冯昱超徐加利朱斌杰吴泽斌王雯静丁桉蔡孜萌陈绵绵孙静江铃丽宋厚辉夏菁程昌勇浙江农林大学动物科技学院·动物医学院、浙江省畜禽绿色生态健康养殖应用技术研究重点实验室、动物健康互联网检测技术浙江省工程研究中心、浙江省动物医学与健康管理国际科技合作基地、中澳动物健康大数据分析联合实验室浙江杭州311300 宁波卫生职业技术学院浙江宁波315100

【目的】探究单增李斯特菌溶血素O(listeriolysin O,LLO)中D3区域β8折叠片上第253位氨基酸(谷氨酰胺,Q)和第254位氨基酸(异亮氨酸,I)对单增李斯特菌(Listeria monocytogenes)感染生物学功能的影响。【方法】构建LLO_(Q253A)和LLO_(I25... 详细信息

【目的】探究单增李斯特菌溶血素O(listeriolysin O,LLO)中D3区域β8折叠片上第253位氨基酸(谷氨酰胺,Q)和第254位氨基酸(异亮氨酸,I)对单增李斯特菌(Listeria monocytogenes)感染生物学功能的影响。【方法】构建LLO_(Q253A)和LLO_(I254A)突变蛋白的原核表达菌株,以及利用同源重组方法构建hly_(Q253A)和hly_(I254A)突变株;通过表达纯化突变蛋白,测定溶血活性;比较LLO第253位Q和第254位I均突变成丙氨酸(A)后,对细菌体外生长能力、黏附侵袭、胞内迁移和增殖能力的影响。【结果】相应位点突变后,LLO蛋白均能够正常表达。在pH 6.5条件下,所有突变蛋白和突变株的溶血活性丧失。然而,在pH 5.5条件下,LLO_(I254A)和hly_(I254A)恢复了溶血活性。与野生株相比,突变株的体外生长、黏附能力和胞内增殖能力均无明显差异;突变株的侵袭能力和胞间迁移能力显著低于野生株。【结论】本研究证实第253位Q和第254位I均突变成A后,单增李斯特菌在pH 6.5条件下丧失溶血活性,并降低了感染宿主细胞的能力,但具体机制还有待进一步探索。本研究为深入探究LLO结构对单增李斯特菌生物学功能的影响奠定基础,对单增李斯特菌点突变株的构建具有一定参考意义。

关键词：单增李斯特菌溶血素O 感染点突变缺失株

不同比例桑枝叶粉复合饲料对肉鸡血液生化指标及胆固醇含量的影响

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蚕业科学 2024年第2期50卷 147-154页

作者：刘岩林天宝侯凤香赵燕范明亮金俊杰吕志强浙江省农业科学院蚕桑与茶叶研究所杭州310021 温州市农业科学研究院温州市畜禽安全生产工程技术研究中心浙江温州325005 杭州市农业农村事务保障中心杭州310020

桑树是在我国广泛栽种且兼具药食两用价值的木本植物,其营养丰富产量又高。随着机械化栽培生产技术升级和应用推广,桑多元化应用前景十分广阔。为探究机械化收获的杂交桑枝叶粉制备复合饲料对肉鸡生产的影响,在等氮等能的基础上,按基础... 详细信息

桑树是在我国广泛栽种且兼具药食两用价值的木本植物,其营养丰富产量又高。随着机械化栽培生产技术升级和应用推广,桑多元化应用前景十分广阔。为探究机械化收获的杂交桑枝叶粉制备复合饲料对肉鸡生产的影响,在等氮等能的基础上,按基础日粮含0%(对照组)、2%(低剂量组)、4%(中剂量组)、6%(高剂量组)的不同比例配制桑枝叶粉复合饲料,经连续8周的饲养观察,测定肉鸡生长性能、血液理化指标,分析与脂质代谢相关基因的表达特征。结果显示,与对照组相比,桑枝叶粉复合饲料组鸡生长状态、觅食表现和增重无明显变化,但肉鸡的血清总蛋白含量、抗氧化能力、淋巴细胞增殖活性和血清溶菌酶活性显著升高;同时,桑枝叶粉饲养组肉鸡的血清谷丙转氨酶(ALT)活性、谷草转氨酶(AST)活性、尿素氮(UREA)含量和胆固醇含量降低,其中4%桑枝叶粉复合饲料组表现尤为明显。经定量PCR检测表明,内源性胆固醇含量的变化可能与HMGCR、SREBP-2等蛋白基因水平的表达受到抑制,以及LDLR外运蛋白基因的表达量增加有关。综上所述,桑枝叶粉可改善肉鸡体内的物质代谢,提高肝肾及抗氧化和免疫保护功能,促进胆固醇脂质代谢,具有较好的市场应用潜力。

关键词：饲料血清学胆固醇抗氧化桑枝叶粉