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柑橘木虱黏液样蛋白DcMucin-like抗体制备及应用

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中国农业科学 2025年第2期58卷 281-290页

作者：蒋丽琴苏巧灵李猷魏太云宾羽福建农林大学植物保护学院闽台作物有害生物生态防控国家重点实验室

【目的】黏液样蛋白（mucin-like protein）参与半翅目昆虫取食过程中唾液鞘的形成。本研究旨在制备柑橘木虱（Diaphorina citri）黏液样蛋白DcMucin-like特异性抗体并对木虱取食孔进行免疫荧光标记，为DcMucin-like生物学功能研究提供... 详细信息

【目的】黏液样蛋白（mucin-like protein）参与半翅目昆虫取食过程中唾液鞘的形成。本研究旨在制备柑橘木虱（Diaphorina citri）黏液样蛋白DcMucin-like特异性抗体并对木虱取食孔进行免疫荧光标记，为DcMucin-like生物学功能研究提供依据。【方法】通过解剖柑橘木虱唾液腺、中肠、卵巢和精巢组织，根据木虱DcMcuin-like序列设计特异性引物，利用实时荧光定量PCR检测分析各组织中DcMcuin-like在转录水平的差异；扩增无信号肽的DcMucin-like序列并插入pET-28a中构建重组质粒，测序验证后转化Rosetta表达菌株，以终浓度0.5 mmol·L-1 IPTG在37℃下振荡培养8 h诱导重组蛋白表达，SDS-PAGE凝胶电泳检测重组蛋白表达情况；扩大培养后裂解菌体，裂解液上清经Ni-NTA纯化作为抗原免疫家兔5次，纯化血清IgG获得DcMucin-like多克隆抗体，Western blot检测抗体特异性；利用实时荧光定量PCR和Western blot比较健康木虱和感染黄龙病菌（Candidatus Liberibacter asiaticus,CLas）木虱中DcMucin-like在转录水平和蛋白水平的差异；利用交联荧光素（FITC）的DcMucin-like多克隆抗体标记木虱取食后的柑橘叶片，在共聚焦显微镜下观察柑橘木虱取食孔和唾液鞘。【结果】实时荧光定量PCR检测显示DcMcuin-like在木虱唾液腺中大量表达，且表达量显著高于中肠、卵巢和精巢组织。携带有pET28a-DcMucin的Rosetta表达菌株经IPTG诱导后在菌体裂解液的上清中获得大量表达的重组蛋白。重组蛋白免疫家兔后取抗血清纯化IgG,Western blot结果表明获得特异性好的DcMucin-like多克隆抗体。实时荧光定量PCR和Western blot分析结果显示DcMucin-like在木虱响应黄龙病菌侵染时上调表达。DcMucin-like(FITC)荧光抗体标记木虱取食后的柑橘叶片组织切片，共聚焦显微镜下观察到木虱的取食孔，并在取食孔周围检测到特异的FITC荧光信号，表明DcMucin-like随木虱取食释放到植株组织中参与唾液鞘形成。【结论】DcMucin-like在柑橘木虱唾液腺中高表达并响应黄龙病菌侵染上调表达；成功制备了特异性好的柑橘木虱DcMucin-like多克隆抗体；验证了DcMucin-like随木虱取食分泌到柑橘植株组织中。研究结果可为深入探究DcMucin-like在黄龙病菌-木虱-柑橘三者互作中的作用打下基础。

关键词：柑橘木虱唾液鞘蛋白 DcMucin-like 抗体制备免疫荧光

河南省冬小麦田杂草群落分布现状及其变化原因分析

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中国农业科学 2025年第1期58卷 91-100页

作者：高兴祥孔媛张耀中李美李健金岩张国福刘帅帅刘明平曾艳柏连阳山东省农业科学院植物保护研究所/山东省农业有害生物绿色防控重点实验室山东省农药检定所湖南省农业科学院杂草生物学及安全防控生物学湖南省重点实验室

【目的】过去10年，河南省6个冬小麦种植区杂草群落结构发生了明显变化，明确河南省6大冬小麦种植区域杂草群落演替规律，并分析其演替原因，为制定冬小麦田杂草精准防控策略提供理论依据。【方法】于2023年11—12月，采用倒“W”型九... 详细信息

【目的】过去10年，河南省6个冬小麦种植区杂草群落结构发生了明显变化，明确河南省6大冬小麦种植区域杂草群落演替规律，并分析其演替原因，为制定冬小麦田杂草精准防控策略提供理论依据。【方法】于2023年11—12月，采用倒“W”型九点取样法，调查河南省17市共计378个地块的冬小麦田杂草种类和株数，明确河南省6大冬小麦种植区杂草群落现状，并与2013年调查结果比较，分析10年来的杂草群落变化规律。【结果】河南省冬小麦田杂草群落现状及变化有以下特点：（1）禾本科杂草发展迅速，节节麦（Aegilops tauschii）、多花黑麦草（Lolium multiflorum）、雀麦（Bromus japonicus）和大穗看麦娘（Alopecurus myosuroides）从局部区域逐步向全省扩散蔓延，目前几乎覆盖全省的各大种植区域，其中节节麦和雀麦主要发生在旱茬麦田。2013年这4种杂草的相对优势度排序分别是第14、15、27和35位，2023年相对优势度分别位居第2、5、8和15位。（2）猪殃殃（Galium aparine）和波斯婆婆纳（Veronica persica）是河南省冬小麦田主要的阔叶杂草，2023年相对优势度分别高达26.89%和10.68%。其中猪殃殃相对优势度10年来均居于第1位，且在旱茬麦田和稻茬麦田均能造成巨大危害，波斯婆婆纳从第6位上升为第3位。（3）猪殃殃、节节麦、波斯婆婆纳和播娘蒿（Descurainia sophia）目前成为河南省冬小麦田的绝对优势杂草。2013年相对优势度超过10%的只有猪殃殃和荠菜（Capsella bursa-pastoris），分别为17.38%和10.92%;2023年相对优势度超过10%的有猪殃殃、节节麦、波斯婆婆纳和播娘蒿，分别为26.89%、13.45%、10.68%和10.65%。（4）宝盖草（Lamium amplexicaule）、野芥菜（Raphanus raphanistrum）、牛繁缕（Malachium aquaticum）、泽漆（Euphorbia helioscopia）、麦家公（Lithospermum arvense）、野老鹳草（Geranium carolinianum）等杂草在局部区域危害大，此外稻槎菜（Lapsana apogonoides）、通泉草（Mazus japonicus）、看麦娘（Alopecurus aequalis）等区域性危害杂草主要分布于稻茬麦田。【结论】耕作制度变化、恶性杂草传播入侵和杂草抗药性发展是造成河南省冬小麦田杂草群落变化的主要因素，联合收割机跨区作业和人类无意识携带传播也是推动杂草群落变化的重要因素。在河南省冬小麦田杂草防控中，应推广土壤封闭处理除草剂和苗后茎叶处理除草剂与农艺措施相结合、根据不同种植区域田间草相精准选择除草剂以及不同机理除草剂轮换使用等区域杂草综合防控策略。

关键词：河南省杂草群落冬小麦田群落演替

低温冷藏对蠋蝽成虫存活率和主要生化物质的影响

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中国生物防治学报 2025年

作者：郭义张洁李鹏燕李敦松广东省农业科学院植物保护研究所/农业农村部华南果蔬绿色防控重点实验室/广东省植物保护新技术重点实验室

本研究旨在探究低温冷藏对蠋蝽成虫存活率及其体内主要生化物质含量和生化酶活性的影响，以明确蠋蝽在5 ℃低温保存时长与其生理生化的响应关系。在室内测定低温冷藏时长和不同储存密度对蠋蝽成虫存活率的影响；测定了蠋蝽体内主要能源... 详细信息

本研究旨在探究低温冷藏对蠋蝽成虫存活率及其体内主要生化物质含量和生化酶活性的影响，以明确蠋蝽在5 ℃低温保存时长与其生理生化的响应关系。在室内测定低温冷藏时长和不同储存密度对蠋蝽成虫存活率的影响；测定了蠋蝽体内主要能源物质、抗寒物质的含量，以及抗氧化酶的活性变化。研究发现，随着冷藏时间的延长，蠋蝽成虫的存活率逐渐降低，100头/盒为最佳冷藏密度，60 d后存活率高达到91%。对于低温胁迫，蠋蝽体内生化物质变化表现出积极的应答机制，成虫显著积累了脂肪、糖原等能源物质和海藻糖、甘油、甘油三酯、山梨醇等抗寒物质，同时海藻糖酶、过氧化物酶和超氧化物歧化酶活性显著增强。随着冷藏时间的延长，这些物质含量和酶活逐渐降低或保持不变。本研究结果对蠋蝽的低温保存及其生理响应机制研究具有重要意义。

关键词：蠋蝽冷藏存活率生化物质抗氧化酶

防治卵孢小奥德蘑蛛网病生防菌筛选及其基因组分析

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微生物学报 2025年第2期65卷 758-770页

作者：刘亚勇张涛涛高琳赵娟孟盼盼李莹菲秦文韬北京市农林科学院植物保护研究所农业农村部北方果蔬有害生物绿色防控重点实验室(部省共建)北京河北农业大学植物保护学院河北保定

卵孢小奥德蘑(Oudemansiella raphanipes)是一种食药兼用的珍稀食用菌,但其易受到异形枝葡霉(Cladobotryum varium)引起的蛛网病侵害。【目的】获得能够生物防控蛛网病且促进卵孢小奥德蘑生长的覆土细菌。【方法】从卵孢小奥德蘑覆土中... 详细信息

卵孢小奥德蘑(Oudemansiella raphanipes)是一种食药兼用的珍稀食用菌,但其易受到异形枝葡霉(Cladobotryum varium)引起的蛛网病侵害。【目的】获得能够生物防控蛛网病且促进卵孢小奥德蘑生长的覆土细菌。【方法】从卵孢小奥德蘑覆土中分离细菌,检测其对卵孢小奥德蘑及蛛网病菌的拮抗活性,筛选出具有防病促生的多功能菌株,并基于基因组数据分析明确其潜在的生物机制。【结果】从覆土中共分离获得90株细菌,其中38株细菌对异形枝葡霉具有明显的抑制活性,且对卵孢小奥德蘑无抑制活性。进一步筛选发现,2株细菌的上清液不仅显著促进卵孢小奥德蘑菌丝的生长,还能显著抑制异形枝葡霉菌丝的生长。基于基因组数据分析,鉴定出上述2株细菌分别为简单近芽孢杆菌(Peribacillus simplex)与根际苍白杆菌(Ochrobactrum rhizosphaerae),且它们含有多种功能基因与次级代谢产物基因簇。【结论】本研究获得2株具有食用菌防病促生功能的细菌,为未来蛛网病的生态防控储备了有益微生物资源。

关键词：卵孢小奥德蘑覆土蛛网病异形枝葡霉生物防控

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水稻细菌性条斑病的研究进展

南京农业大学学报 2025年第1期48卷 46-57页

作者：陈贤汤宝赵延存刘凤权江苏省农业科学院植物保护研究所/江苏省食品质量安全重点实验室-省部共建国家重点实验室培育基地江苏南京210014 根特大学生物科学工程学院植物和作物系东佛兰德根特9000

水稻细菌性条斑病(以下简称水稻细条病)是我国重要的植物检疫性病害之一,对我国南方及东南亚国家的水稻生产形成严重威胁。近年来,水稻细条病在华东、华中等稻区的发生流行呈上升趋势,有些稻区的水稻细条病危害程度甚至已超过水稻白叶... 详细信息

水稻细菌性条斑病(以下简称水稻细条病)是我国重要的植物检疫性病害之一,对我国南方及东南亚国家的水稻生产形成严重威胁。近年来,水稻细条病在华东、华中等稻区的发生流行呈上升趋势,有些稻区的水稻细条病危害程度甚至已超过水稻白叶枯病。种植抗病品种被认为是防控水稻细条病最为经济、环保且高效的策略之一。然而,有关水稻细条病抗病品种的应用尚未见报道。目前,化学防治仍是生产上水稻细条病主要的应急防控措施之一。水稻细条病的绿色防控水平取决于水稻细条病菌致病性、水稻抗病性的遗传基础研究水平和及时精准用药。本文简要概述了水稻细条病的历史、发生和流行现状,归纳了致病基因和抗病基因的类型及二者互作机制,总结了主要防治措施,旨在为水稻细条病的绿色防控提供理论指导。

关键词：水稻细菌性条斑病抗病基因致病基因绿色防控

亚致死浓度吡虫啉对南方小花蝽捕食西花蓟马能力的影响

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生态学杂志 2025年

作者：李宜儒胡英张薄杨念李加灿张金龙陈国华陈婷张晓明云南农业大学植物保护学院云南生物资源保护与利用国家重点实验室云南省农业科学院农业环境资源研究所广东省农业科学院植物保护研究所广东省植物保护新技术重点实验室

为明确亚致死浓度吡虫啉对南方小花蝽（Orius similis）控制西花蓟马（Frankliniella occidentalis）能力的影响，本研究采用胃毒法处理南方小花蝽，让其取食2种吡虫啉浓度(LC10、LC20)和清水处理后的西花蓟马，测定不同处理下南方小花... 详细信息

为明确亚致死浓度吡虫啉对南方小花蝽（Orius similis）控制西花蓟马（Frankliniella occidentalis）能力的影响，本研究采用胃毒法处理南方小花蝽，让其取食2种吡虫啉浓度(LC10、LC20)和清水处理后的西花蓟马，测定不同处理下南方小花蝽对西花蓟马的捕食量，利用功能反应模型探究吡虫啉对其捕食、寻找猎物能力的影响。结果表明：南方小花蝽雌成虫和西花蓟马同时经LC10浓度吡虫啉处理后南方小花蝽雌成虫的捕食量18.4头，低于二者分别经LC10浓度吡虫啉处理后的捕食量18.6和19.4头，均低于清水处理后南方小花蝽捕食清水处理后西花蓟马20.9头；2种亚致死浓度吡虫啉处理后南方小花蝽对相同浓度吡虫啉处理和清水处理后西花蓟马的捕食功能反应符合Holling II型；经LC10、LC20浓度吡虫啉处理后的南方小花蝽雌成虫对同一浓度吡虫啉处理后的西花蓟马的控害效能(α/Th)随吡虫啉浓度升高而下降，分别为32.38、25.65；在一定的吡虫啉浓度范围内，吡虫啉的施用会促进南方小花蝽的捕食能力，经清水处理后南方小花蝽3龄若虫对经LC10浓度吡虫啉处理后西花蓟马的控害效能较其对清水处理后西花蓟马的控害效能提高2.89 d；吡虫啉的使用会影响南方小花蝽对猎物的搜寻能力，经2种吡虫啉浓度处理后的南方小花蝽雌成虫对同一浓度吡虫啉处理后的西花蓟马的搜寻效应分别从0.73和0.60下降至0.60和0.52。总之，吡虫啉会抑制南方小花蝽的捕食和搜寻能力。

关键词：南方小花蝽西花蓟马吡虫啉捕食功能

基因工程抗体功能修饰及其在农业食品安全中的应用策略

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中国农业科学 2025年第2期58.0卷 355-386页

作者：徐重新沈建兴金嘉凤何鑫谢雅晶张霄朱庆刘媛刘贤金江苏省农业科学院农产品质量安全与营养研究所/省部共建国家重点实验室培育基地—江苏省食品质量安全重点实验室江苏大学食品与生物工程学院

基因工程抗体是抗体人工定向设计的巨大飞跃，其以重组抗原结合片段、单链抗体、纳米抗体等形式，广泛渗透应用到农业和食品安全中的各个领域；相关创新探索研究还在竞先推进，发展极为迅速。本文总结了当前基因工程抗体主要衍生形式及... 详细信息

基因工程抗体是抗体人工定向设计的巨大飞跃，其以重组抗原结合片段、单链抗体、纳米抗体等形式，广泛渗透应用到农业和食品安全中的各个领域；相关创新探索研究还在竞先推进，发展极为迅速。本文总结了当前基因工程抗体主要衍生形式及其依托的噬菌体、酵母、细菌、核糖体、哺乳动物细胞等抗体库搭载展示平台和相应配套的抗原特异性抗体靶向筛选体系；分析它们借助定点突变、链置换、易错PCR、DNA改组以及同源或异源抗体功能片段甚至与其他功能蛋白融合等策略，在体外开展亲和力成熟乃至提升环境胁迫稳定性等特性功能修饰的关键技术特点；概述它们采用昆虫和动物细胞、植物组织、酵母、大肠杆菌以及其他微生物等表达体系制备相应抗体蛋白状况和潜在优化策略。着重梳理基因工程抗体在产地环境危害物、农兽药投入品、真菌毒素、食源性致病微生物及其有毒代谢物、食源性过敏原等农业食品安全危害物免疫分析上的应用研究现状；同时结合笔者团队近年以Ab2β抗独特型抗体具备模拟抗原结构乃至生物活性功能的特性为理论依据，在模拟Bt Cry毒素结构及抗虫功能的Ab2β抗独特型基因工程抗体和模拟万古霉素抗金黄色葡萄球菌功能的Ab2β抗独特型基因工程抗体等方面创新研发的系列最新成果和相关研究经验，进一步探讨了基因工程抗体在农业食品安全危害物绿色检测和绿色防控创新应用策略研究上的未来发展动向和可行捷径，为基因工程抗体在农业食品安全乃至营养品质评估等领域相关应用研究提供最新最全面的具有参考价值的文献资料和潜在启发思路。

关键词：基因工程抗体抗体亲和成熟抗体蛋白表达免疫检测抗独特型抗体杀虫抗体杀菌抗体

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日本平腹小蜂滞育幼虫的表型研究

植物保护 2025年第1期51卷 89-94,101页

作者：肖俊健袁龙宇夏玥李敦松赵灿广东省农业科学院植物保护研究所农业农村部华南果蔬绿色防控重点实验室广东省植物保护新技术重点实验室广州510640 华南农业大学植物保护学院绿色农药全国重点实验室广州510642

日本平腹小蜂Anastatus japonicus Ashmead是多种蝽类害虫的优势卵寄生蜂,以老熟幼虫滞育。本研究比较了日本平腹小蜂非滞育、滞育、滞育解除老熟幼虫的体重、体长、体宽及体色的变化,并通过尼罗红染色来观察滞育幼虫体内脂滴的变化。... 详细信息

日本平腹小蜂Anastatus japonicus Ashmead是多种蝽类害虫的优势卵寄生蜂,以老熟幼虫滞育。本研究比较了日本平腹小蜂非滞育、滞育、滞育解除老熟幼虫的体重、体长、体宽及体色的变化,并通过尼罗红染色来观察滞育幼虫体内脂滴的变化。结果表明:滞育期间老熟幼虫体重逐渐减轻,体长逐渐缩短,体宽无显著变化,体色灰度值呈现缓慢降低的趋势;相较于非滞育个体,随着滞育时间的延长,滞育老熟幼虫体腔内脂滴数量逐渐减少,同时出现表皮附近脂滴聚集现象,表明脂质是日本平腹小蜂滞育期间主要的能源物质,随着滞育时间延长,脂质被逐渐消耗。而脂滴向日本平腹小蜂老熟幼虫表皮附近大量聚集,有助于增强滞育个体的抗冻能力。本文为深入研究日本平腹小蜂滞育机制奠定基础。

关键词：日本平腹小蜂滞育生物学表型脂滴

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荔枝褐斑病病原鉴定及其生防菌筛选

华南农业大学学报 2025年

作者：丁晓宋雨习平根李敏慧姜子德孔广辉华南农业大学植物保护学院/绿色农药全国重点实验室/广东省微生物信号与作物病害防控重点实验室

【目的】鉴定新发生的荔枝褐斑病病原种类，并进行病原菌生物学特性测定和生防菌的筛选，为该病发生规律研究及其绿色防控提供依据。【方法】2021年10月采集广东茂名荔枝幼树褐斑病叶片，采用病组织分离获得菌株GZ1并依据科赫氏法则确... 详细信息

【目的】鉴定新发生的荔枝褐斑病病原种类，并进行病原菌生物学特性测定和生防菌的筛选，为该病发生规律研究及其绿色防控提供依据。【方法】2021年10月采集广东茂名荔枝幼树褐斑病叶片，采用病组织分离获得菌株GZ1并依据科赫氏法则确定其致病性。然后通过形态学比较及内转录间隔序列（ITS）、β-微管蛋白基因（Tub2）、RNA聚合酶II第二大亚基基因（rpb2）的多序列联合构建系统发育树，明确病原菌的种类。在不同碳源、温度、pH等培养条件下，测定GZ1的生物学特性。采用平板对峙法和菌丝生长速率法测定2种生防菌枯草芽孢杆菌Bacillus subtilis XX和贝莱斯芽孢杆菌B. velezensis BS对GZ1的抑制效果。【结果】菌株GZ1是荔枝褐斑病的致病菌，其种名为嘴突凸脐蠕孢Exserohilum rostratum (Drechsler) K.J. Leonard & Sugg。该菌最适生长温度为28 ℃，最适生长pH为7，能利用多种碳源，其碳源为蔗糖时菌丝生长最快；B. subtilis XX和B. velezensis BS均对该病原菌的生长有明显的抑制效果。【结论】本研究报道了嘴突凸脐蠕孢引起荔枝褐斑病，为荔枝新病害，研究为嘴突凸脐蠕孢引起的荔枝病害防治提供了依据。

关键词：荔枝褐斑病嘴突凸脐蠕孢病原鉴定生防菌