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鳕鱼皮胶原蛋白肽对小鼠急性肝损伤的保护作用研究

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现代食品科技 2015年第7期31卷 18-24页

作者：刘晨晨赵玉勤杨最素丁国芳浙江海洋学院食品与医药学院浙江省海洋生物医用制品工程技术研究中心浙江舟山316022

本文对鳕鱼皮胶原蛋白肽(CSCP)在小鼠急性肝损伤中的保护作用进行研究。测定CSCP的急性毒性作用及最大给药剂量;建立CCl4致小鼠急性肝损伤模型,检测小鼠血清ALT、AST活性以及肝组织匀浆GSH-Px、SOD活性以及MDA含量;HE染色观察肝脏病理... 详细信息

本文对鳕鱼皮胶原蛋白肽(CSCP)在小鼠急性肝损伤中的保护作用进行研究。测定CSCP的急性毒性作用及最大给药剂量;建立CCl4致小鼠急性肝损伤模型,检测小鼠血清ALT、AST活性以及肝组织匀浆GSH-Px、SOD活性以及MDA含量;HE染色观察肝脏病理学改变;透射电镜观察肝脏微观结构;蛋白印迹法测定肝组织Bax、Bcl-2、Cleavage Caspase-3、TNF-α蛋白表达量。结果表明CSCP最大给药量达到8.0 g/kg,无小鼠死亡;CSCP组与模型组比较,血清中ALT、AST的活性显著降低,最高降幅达到60%以上;肝组织匀浆中SOD和GSH-Px活性显著增高,分别增加23%和29%;MDA含量显著降低,最高降幅达到38%;HE染色观察肝组织结构明显好转;透射电镜表明肝脏微观结构得到明显改善;Bcl-2蛋白表达量增加,Bax、Cleavage Caspase-3、TNF-α蛋白表达量降低。因此,CSCP对CCl4小鼠急性肝损伤有较明显的保护作用。

关键词：鳕鱼皮胶原蛋白肽急性肝损伤模型

乌贼墨多肽诱导人前列腺癌DU-145细胞凋亡的机制研究

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现代食品科技 2014年第9期30卷 1-6页

作者：景奕文杨最素黄芳芳郁迪丁国芳浙江海洋学院食品与医药学院、浙江省海洋生物医用制品工程技术研究中心浙江舟山316004

本文探讨了乌贼墨多肽(SHP)诱导DU-145细胞凋亡机制。采用CCK-8法检测SHP对DU-145细胞增殖的影响;采用HE染色和AO/EB荧光染色观察DU-145细胞的形态学的变化;采用流式细胞术检测细胞早期凋亡率;并通过Western Blotting检测细胞中p53、Bc... 详细信息

本文探讨了乌贼墨多肽(SHP)诱导DU-145细胞凋亡机制。采用CCK-8法检测SHP对DU-145细胞增殖的影响;采用HE染色和AO/EB荧光染色观察DU-145细胞的形态学的变化;采用流式细胞术检测细胞早期凋亡率;并通过Western Blotting检测细胞中p53、Bcl-2、Bax、Caspase-3、VEGF的蛋白表达变化。结果表明,SHP对DU-145细胞的增殖具有明显的抑制作用且呈现剂量和时间依赖性;SHP作用后的DU-145细胞出现凋亡的形态学特征;流式细胞术结果显示,随着SHP浓度和作用时间的增加,DU-145细胞的早期凋亡率从12.25%增加到34.20%;Western Blotting结果显示,当SHP作用24 h后,VEGF、Bcl-2蛋白表达量降低,p53、Bax、Caspase-3蛋白表达量增加。综上可知,SHP能够诱导DU-145细胞凋亡,其机制有可能是通过激活抑癌基因p53,下调Bcl-2/Bax比例;下调VEGF,激活凋亡蛋白酶Caspase-3,诱发凋亡级联反应来实现的。

关键词：乌贼墨多肽凋亡

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假酸浆籽胶质多糖的结构及凝胶特性研究

现代食品科技 2015年第9期31卷 68-73 123,123页

作者：牛庆凤王斌李涛金鑫陈荫浙江海洋学院食品与医药学院浙江舟山316022 浙江省海洋生物医用制品重点工程技术研究中心浙江舟山316022

用热水从假酸浆籽中提取胶质多糖(NPG),对其结构和成胶特性进行研究。采用高效液相色谱、高效凝胶渗透色谱、红外光谱、核磁共振碳谱对其化学结构特征进行解析。通过原子力学显微镜观察和透射电镜对假酸浆胶质多糖的成胶特性进行研究。... 详细信息

用热水从假酸浆籽中提取胶质多糖(NPG),对其结构和成胶特性进行研究。采用高效液相色谱、高效凝胶渗透色谱、红外光谱、核磁共振碳谱对其化学结构特征进行解析。通过原子力学显微镜观察和透射电镜对假酸浆胶质多糖的成胶特性进行研究。结果表明假酸浆胶质多糖分子量为1.6×106 u,主要由半乳糖醛酸、葡萄糖、半乳糖和鼠李糖这四种单糖构成,其摩尔比为12:4:1:1。该胶质多糖的主链是由半乳糖糖醛酸通过1→4糖苷键连接而成。假酸浆胶质多糖分子的空间结构为球形结构,在钙离子存在下,多糖分子首尾相连,成带分支状结点的链状结构,分支相互交联形成具有空间的网状结构。随着钙离子浓度的升高,交联进一步加深,多糖纤维状结构加厚聚集,形成凝胶。

关键词：胶质多糖假酸浆籽结构凝胶

文蛤多肽的制备及对非酒精性脂肪肝细胞模型的修复作用

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中国食品学报 2017年第6期17卷 33-39页

作者：赵莎莎赵玉勤张亚茹杨最素黄芳芳丁国芳浙江海洋大学食品与医药学院浙江省海洋生物医用制品工程技术研究中心浙江舟山316022

目的:探讨文蛤酶解多肽的制备工艺及对非酒精性脂肪肝(NAFLD)细胞模型的修复作用。方法:用质量浓度15μg/m L的软脂酸诱导正常肝Chang liver细胞建立NAFLD模型,以TG含量为指标,筛选酶解文蛤内脏的最佳酶种,通过正交试验、超滤、G-25葡... 详细信息

目的:探讨文蛤酶解多肽的制备工艺及对非酒精性脂肪肝(NAFLD)细胞模型的修复作用。方法:用质量浓度15μg/m L的软脂酸诱导正常肝Chang liver细胞建立NAFLD模型,以TG含量为指标,筛选酶解文蛤内脏的最佳酶种,通过正交试验、超滤、G-25葡聚糖凝胶层析、高效液相等技术获得酶解产物。将其作用于NAFLD细胞模型,油红O染色后镜下观察形态,检测细胞中的MDA,GSH-ST,ALT,AST,SOD,γ-GT等含量。结果:软脂酸诱导Chang liver细胞48 h后获得NAFLD细胞模型;最佳酶种为碱性蛋白酶,酶解条件为40℃、pH9.5、料液比1∶2、酶解时间12 h,加酶量1 000 U/g;超滤后得到<5 ku酶解液,经G-25葡聚糖凝胶层析得到4个峰;峰Ⅰ组分的氨基酸序列为Gln-Leu-Asn-Trp-Asp。该多肽能明显降低NAFLD细胞模型内的TG含量,使MDA,ALT,AST,γ-GT的含量下降,SOD,GSH-ST的含量上升,与未用药的模型组细胞相比有统计学意义。结论 :经碱性蛋白酶酶解文蛤得到的多肽,对NAFLD细胞模型具有明显的修复作用。

关键词：文蛤多肽 Chang liver细胞 NAFLD细胞模型修复

岩藻黄素对小鼠非酒精性脂肪性肝病的修复作用

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食品科学 2024年第3期45卷 42-52页

作者：任祥雨郑佳文田笑笑曹洪杰李航婷唐云平杨最素浙江海洋大学食品与药学学院浙江省海洋生物医用制品重点工程技术研究中心浙江舟山316022

目的:探究岩藻黄素对高脂饮食诱导的C57BL/6小鼠非酒精性脂肪性肝病(non-alcoholic fatty liver disease,NAFLD)的修复作用及其机制。方法:将52只C57BL/6小鼠随机分成4组,正常组14只,其余为实验组,实验组给予8周的高脂饮食喂养之后,再... 详细信息

目的:探究岩藻黄素对高脂饮食诱导的C57BL/6小鼠非酒精性脂肪性肝病(non-alcoholic fatty liver disease,NAFLD)的修复作用及其机制。方法:将52只C57BL/6小鼠随机分成4组,正常组14只,其余为实验组,实验组给予8周的高脂饮食喂养之后,再分为模型组、岩藻黄素低剂量和高剂量组,给予灌胃6周,每日1次。每周记录小鼠的体质量,第14周结束时小鼠禁食12 h后全部处死。后续分别测定各组小鼠血清中谷草转氨酶(aspartate aminotransferase,AST)、谷丙转氨酶(alanine aminotransferase,ALT)活力,总胆固醇(total cholesterol,TC)、甘油三酯(triglyceride,TG)、低密度脂蛋白胆固醇(lowdensitylipoproteincholesterol,LDL-C)、高密度脂蛋白胆固醇(highdensitylipoproteincholesterol,HDL-C)、游离脂肪酸、脂联素和瘦素含量;检测肝脏组织匀浆液中超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)、谷胱甘肽(glutathione,GSH-Px)、丙二醛(malondialdehyde,MDA)、过氧化氢酶(catalase,CAT)、白细胞介素-1β、白细胞介素-6和肿瘤坏死因子α含量;透射电镜下观察肝脏的组织病理学变化并采用蛋白免疫印迹法检测肝脏中5’-单磷酸腺苷活化蛋白激酶(adenosine 5’-monophosphate-activated protein kinase,AMPK)、核因子红系2相关因子2(nuclear factor erythroid2-related factor 2,Nrf2)和Toll样受体4(toll-like receptors 4,TLR4)信号通路蛋白表达情况。结果:与模型组相比,岩藻黄素组中的TC、TG、LDL-C、ALT、AST显著降低(P<0.05),HDL-C显著升高(P<0.05),且降低了瘦素水平,增加了脂联素分泌,GSH-Px、SOD、CAT升高(P<0.05),MDA降低(P<0.05),且炎症因子的水平降低。苏木精-伊红染色、油红O染色、糖原染色和透射电镜结果显示岩藻黄素组肝脏组织学结构好转,趋近于正常组。蛋白免疫印迹法结果显示岩藻黄素治疗可上调AMPK信号通路中磷酸化5’-单磷酸腺苷活化蛋白激酶和过氧化物酶体增殖物激活受体α、磷酸化乙酰辅酶A羧化酶、肉碱脂酰转移酶1,下调固醇调节元件结合蛋白-1c、脂肪酸合酶表达;抑制Kelch样环氧氯丙烷相关蛋白1/Nrf2信号通路中Keap-1的水平,提高Nrf2及其下游抗氧化蛋白血红素氧合酶1、NAD(P)H-醌氧化还原酶1和谷氨酸-半胱氨酸连接酶的表达水平;下调TLR4信号通路中TLR4蛋白的表达,抑制髓样分化因子88、磷酸化人核因子κB抑制蛋白α和磷酸化核因子κB蛋白(p65)的表达。结论:岩藻黄素可通过调节脂质代谢、减少氧化应激和调节炎症等途径修复高脂饮食诱导的小鼠非酒精性脂肪性肝病。

关键词：岩藻黄素小鼠非酒精性脂肪性肝病 5’-单磷酸腺苷活化蛋白激酶/核因子κB通路 Kelch样环氧氯丙烷相关蛋白1-核转录因子红系2相关因子2通路

沙蚕活性蛋白酶诱导人肺癌SPC-A-1细胞凋亡的机制研究

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现代食品科技 2015年第3期31卷 6-11页

作者：张国梅杨最素丁国芳黄芳芳赵玉勤浙江海洋学院食品与医药学院浙江省海洋生物医用制品工程技术研究中心浙江舟山316022 浙江省海洋水产研究所浙江舟山316021

本文探讨了沙蚕活性蛋白酶(Nereis active protease,NAP)诱导SPC-A-1细胞凋亡机制。采用MTT法检测NAP对SPC-A-1细胞的抑制作用,倒置显微镜及AO/EB染色观察SPC-A-1细胞的形态学的变化,采用流式细胞术检测细胞早期凋亡率和细胞膜电位的变... 详细信息

本文探讨了沙蚕活性蛋白酶(Nereis active protease,NAP)诱导SPC-A-1细胞凋亡机制。采用MTT法检测NAP对SPC-A-1细胞的抑制作用,倒置显微镜及AO/EB染色观察SPC-A-1细胞的形态学的变化,采用流式细胞术检测细胞早期凋亡率和细胞膜电位的变化;并通过Western Blotting检测细胞中凋亡相关蛋白的表达变化。NAP对SPC-A-1细胞活性具有明显的抑制作用且呈现剂量和时间的依赖性;NAP作用后细胞出现凋亡的形态学特征;经流式细胞术检测结果显示,随着NAP作用浓度的增加,SPC-A-1细胞的早期凋亡率从13.50%提高到22.98%,且线粒体膜电位下降所占的百分率从12.95%提高到25.28%。Western Blotting结果显示,50μg/mL NAP作用24h后,Bax/Bcl-2的比率相对对照组明显增加了6.05倍;Cyt-C、Cleaved-Caspase 9、Cleaved-Caspase 3、Cleaved-PARP等含量显著上调,相对表达量分别达到对照组的2.32、3.07、3.68、1.36倍。NAP诱导SPC-A-1细胞凋亡的作用机理有可能是通过下调Bcl-2蛋白的表达、上调Bax蛋白的表达,进而诱导线粒体膜电位的下降,促使Cyt-C的转移以及激发Caspase家族发生级联反应最终导致SPC-A-1细胞的凋亡。

关键词：海洋药物沙蚕蛋白酶抗肺癌细胞凋亡

文蛤寡肽对RAW264.7细胞的免疫调节作用

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水产学报 2019年第2期43卷 410-418页

作者：叶蕾阎洁张文邹舒舒叶盛旺杨最素余方苗丁国芳浙江海洋大学食品与医药学院浙江省海洋生物医用制品工程技术研究中心

以RAW264.7细胞为实验模型,探讨文蛤寡肽(MMO)在体外的免疫调节作用。实验设立空白对照组、阳性药物组(脂多糖,LPS)及低、中、高浓度MMO组,采用MTT比色法检测细胞活性,流式细胞仪检测细胞周期变化,H.E染色观察细胞形态变化,中性红吞噬... 详细信息

以RAW264.7细胞为实验模型,探讨文蛤寡肽(MMO)在体外的免疫调节作用。实验设立空白对照组、阳性药物组(脂多糖,LPS)及低、中、高浓度MMO组,采用MTT比色法检测细胞活性,流式细胞仪检测细胞周期变化,H.E染色观察细胞形态变化,中性红吞噬实验检测细胞吞噬能力,免疫荧光标记法观察诱导型一氧化氮合酶(iNOS)的表达情况,硝酸根还原酶法和酶联免疫吸附法(ELISA)检测细胞培养上清液中一氧化氮、白介素-6(IL-6)和白介素-1β(IL-1β)的含量。结果显示,MMO能促进RAW264.7细胞的增殖和分化。当MMO浓度为250μg/mL时,增强细胞吞噬能力、增加细胞周期中G1/G0期和G2/M期细胞、诱导iNOS刺激NO释放、促进IL-6和IL-1β分泌效果最为显著,表现出与LPS对RAW264.7细胞相似的激活作用。研究表明,MMO具有促使RAW264.7细胞活化,增强非特异性免疫的潜力。

关键词：文蛤寡肽 RAW264.7细胞免疫调节

鱿鱼墨多肽制备及其诱导DU-145和PC-3细胞早期凋亡研究

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中国食品学报 2014年第2期14卷 35-41页

作者：李丽朱亚珠胡晓斐黄芳芳丁园芳丁国芳浙江国际海运职业技术学院浙江舟山316021 浙江省舟山医院浙江舟山316021 浙江海洋学院食品与药学学院浙江省海洋生物医用制品重点工程技术研究中心浙江舟山316022

目的:研究鱿鱼墨多肽酸法提取工艺及不同浓度鱿鱼墨多肽对DU-145和PC-3细胞的增殖抑制和诱导凋亡作用。方法:以料液比、加酸量、酸解时间和酸解温度为因素,以酸解液的氨基氮含量为指标,通过正交试验确定提取鱿鱼墨多肽的酸解条件。采用C... 详细信息

目的:研究鱿鱼墨多肽酸法提取工艺及不同浓度鱿鱼墨多肽对DU-145和PC-3细胞的增殖抑制和诱导凋亡作用。方法:以料液比、加酸量、酸解时间和酸解温度为因素,以酸解液的氨基氮含量为指标,通过正交试验确定提取鱿鱼墨多肽的酸解条件。采用CCK-8法检测其对DU-145和PC-3的生长抑制作用。采用Annexin V-FITC/PI双标记流式细胞术检测和AO/EB双染法,观察鱿鱼墨多肽对DU-145和PC-3细胞的早期凋亡情况。结果:酸法提取鱿鱼墨多肽最佳组合为0.02 mol/L盐酸、酸提料液比1∶1、酸解时间2 h、酸解温度35℃;鱿鱼墨多肽对DU-145和PC-3细胞有增殖抑制作用,能诱导DU-145和PC-3细胞凋亡。结论:鱿鱼墨多肽能抑制DU-145和PC-3细胞增殖,并诱导其细胞凋亡。

关键词：鱿鱼墨多肽 DU-145细胞株 PC-3细胞株细胞凋亡

绿鳍马面鲀(Navodon septentrionalis)鱼皮胶原蛋白的分离纯化及理化性质研究

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海洋与湖沼 2016年第5期47卷 1055-1062页

作者：郁迪丁冬各王斌浙江省海洋生物医用制品工程技术研究中心浙江海洋大学食品与医药学院舟山316022

利用酸溶法和酶溶法分离纯化绿鳍马面鲀(Navodon septentrionalis)鱼皮酸溶性胶原蛋白(ASC)和酶溶性胶原蛋白(PSC),并对所得的ASC和PSC的氨基酸组成、亚基组成、红外光谱(FTIR)、黏度和热变性温度,以及溶解度等性质进行系统分析。研究... 详细信息

利用酸溶法和酶溶法分离纯化绿鳍马面鲀(Navodon septentrionalis)鱼皮酸溶性胶原蛋白(ASC)和酶溶性胶原蛋白(PSC),并对所得的ASC和PSC的氨基酸组成、亚基组成、红外光谱(FTIR)、黏度和热变性温度,以及溶解度等性质进行系统分析。研究结果表明:马面鲀鱼皮酸溶性胶原蛋白(ASC)和酶溶性胶原蛋白(PSC)的得率分别为0.87%±0.15%和9.52%±0.41%(按鱼皮干重计算)。ASC和PSC中含有的主要氨基酸为甘氨酸(Gly),含量分别为323.3残基/1000残基和321.7残基/1000残基;二者中所含的亚氨基酸含量分别为191.1/1000残基和183.4/1000残基。氨基酸组成分析、SDS-PAGE和FTIR证实马面鲀鱼皮酸溶性胶原蛋白(ASC)为I型胶原蛋白,且其SDS-PAGE图中的亚基组成(α1-肽链和α2-肽链)、氨基酸序列,以及胶原蛋白构型与PSC明显不同。ASC和PSC的热变性温度(Td)分别为21.5℃和18.9℃,显著低于哺乳动物来源的胶原蛋白。ASC和PSC的最大溶解度出现在p H 2—3时,当Na Cl的浓度低于2%时,二者的溶解度就开始急剧下降。此外,冻干的胶原蛋白显示出疏松多孔的超微结构。综上,相对于哺乳动物类胶原蛋白,马面鲀鱼皮ASC和PSC的亚氨基酸含量和热变性温度较低,结构稳定性差,易于降解,可作为胶原蛋白肽的制备原料进行开发利用。

关键词：绿鳍马面鲀鱼皮酸溶性胶原蛋白(ASC) 酶溶性胶原蛋白(PSC)