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CTB-Aβ42融合蛋白的原核表达条件优化及鉴定

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中国生化药物杂志 2012年第4期33卷 342-345,349页

作者：程晶晶潘斯科钟云平张涵铭王驰余帅于威李司浙江理工大学生命科学学院生物化学研究所浙江省家蚕生物反应器和生物医药重点实验室浙江杭州310018

目的探索融合基因CTB-Aβ42在大肠杆菌中表达的最适条件,并纯化得融合蛋白。方法设置不同的诱导温度、诱导时间、异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)浓度,在大肠杆菌中表达融合基因CTB-Aβ42,SDS-PAGE凝胶电泳鉴定表达产物,GST亲和色谱柱... 详细信息

目的探索融合基因CTB-Aβ42在大肠杆菌中表达的最适条件,并纯化得融合蛋白。方法设置不同的诱导温度、诱导时间、异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)浓度,在大肠杆菌中表达融合基因CTB-Aβ42,SDS-PAGE凝胶电泳鉴定表达产物,GST亲和色谱柱纯化目的蛋白,Western blot鉴定目的蛋白免疫原性。结果 SDS-PAGE结果显示,GST-CTB-Aβ42融合蛋白分子质量约为45 kD,与预期结果一致;Western blot结果表明,纯化得到的目的蛋白具有免疫原性。在诱导条件为30℃,0.1 mmol/L IPTG诱导2 h表达的可溶性蛋白所占比例最高;在37℃,0.1mmol/L IPTG诱导4 h表达的融合蛋白总量最高,小部分可溶性表达,大部分以包涵体的形式存在。结论本实验对CTB-Aβ42融合蛋白的原核表达条件进行了优化,经GST亲和色谱柱纯化获得具有免疫原性的融合蛋白。

关键词：霍乱毒素B亚单位(CTB) β-淀粉样蛋白可溶性表达胞内表达

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聚合物微针药物经皮递送应用研究进展

高分子学报 2022年第8期53卷 876-893页

作者：曾志勇江国华刘天琦张雪雅孙延芳浙江理工大学材料科学与工程学院杭州310018 浙江理工大学智能生物材料与功能纤维国际科技合作基地杭州310018 浙江理工大学浙江-毛里求斯生物医用材料与组织工程联合中心杭州310018 浙江理工大学生命科学与医药学院杭州310018

微针是一种新型的药物经皮递送技术,能穿透皮肤角质层,形成微孔通道,促进药物的渗透和吸收,在药物递送中有重要作用.本文从微针的结构和功能特点,系统阐述了聚合物微针的结构和功能设计,以及制造聚合物微针的材料和方法、微针的给药方式... 详细信息

微针是一种新型的药物经皮递送技术,能穿透皮肤角质层,形成微孔通道,促进药物的渗透和吸收,在药物递送中有重要作用.本文从微针的结构和功能特点,系统阐述了聚合物微针的结构和功能设计,以及制造聚合物微针的材料和方法、微针的给药方式;综述了微针经皮递送技术近年来在抗肿瘤、疫苗递送、血糖调控、组织液提取和检测,以及生物传感等领域中的研究进展,并对其优势及存在的问题进行分析,总结了微针技术发展需要解决的关键问题,展望了微针疫苗未来的发展方向.

关键词：聚合物微针抗肿瘤疫苗递送血糖调控经皮给药

碳青霉烯类联合黏菌素对耐药阴沟肠杆菌复合群的体外抗菌活性评估

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中华微生物学和免疫学杂志 2020年第12期40卷 898-902页

作者：徐春泉方人驰曾未良刘世星林奕帅陈丽琼周铁丽温州医科大学附属第一医院医学检验中心 325000 浙江大学医学院附属第一医院检验科 310003 温州医科大学检验医学院生命科学学院 325000

目的研究黏菌素与3种碳青霉烯类药物分别联用时对碳青霉烯类和黏菌素共同耐药阴沟肠杆菌复合群的体外抗菌活性。方法收集2011—2018年间自温州医科大学附属第一医院临床患者各类标本中分离的阴沟肠杆菌复合群菌株,Vitek 2-Compact全自... 详细信息

目的研究黏菌素与3种碳青霉烯类药物分别联用时对碳青霉烯类和黏菌素共同耐药阴沟肠杆菌复合群的体外抗菌活性。方法收集2011—2018年间自温州医科大学附属第一医院临床患者各类标本中分离的阴沟肠杆菌复合群菌株,Vitek 2-Compact全自动微生物分析仪检测菌株对临床常用抗菌药物的敏感性;共筛选出对碳青霉烯类和黏菌素共同耐药的阴沟肠杆菌复合群菌株19株,采用琼脂稀释法检测碳青霉烯类和黏菌素对19株菌株的最低抑菌浓度(MIC),微量棋盘稀释法评估黏菌素分别与3种碳青霉烯类药物联用对碳青霉烯类和黏菌素共同耐药阴沟肠杆菌复合群菌株的体外抗菌活性。结果19株菌株对一、三代头孢菌素的耐药率均高于90%;对厄他培南、美罗培南和亚胺培南的耐药率分别为100%、26.3%和31.6%;黏菌素与亚胺培南、美罗培南和厄他培南对阴沟肠杆菌复合群的联合用药主要表现为协同作用或相加作用,美罗培南/黏菌素与亚胺培南/黏菌素组合各对1株菌株表现为无关作用。结论碳青霉烯类与黏菌素的联合使用对碳青霉烯类和黏菌素共同耐药阴沟肠杆菌复合群具有较好的作用效果,可作为此类多重耐药菌株感染的潜在治疗策略。

关键词：碳青霉烯类黏菌素阴沟肠杆菌复合群联合治疗

Her2抗体与MMAE偶联物的制备及生物活性研究

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中国生物工程杂志 2015年第2期35卷 66-71页

作者：佘栋宇黄嘉慧刘东晨张途谢秋玲暨南大学生命科学技术学院广东省生物工程药物重点实验室基因工程药物国家工程研究中心广州510632

目的:制备Her2抗体与海兔毒素MMAE的偶联物,检测该抗体-药物偶联药物(ADC)对于乳腺癌细胞的抑制作用。方法:将Her2抗体通过一个可降解的linker与小分子毒素(MMAE)连接起来,形成抗体药物偶联物(ADC)。通过细胞学试验检测Her2抗体-MMAE偶... 详细信息

目的:制备Her2抗体与海兔毒素MMAE的偶联物,检测该抗体-药物偶联药物(ADC)对于乳腺癌细胞的抑制作用。方法:将Her2抗体通过一个可降解的linker与小分子毒素(MMAE)连接起来,形成抗体药物偶联物(ADC)。通过细胞学试验检测Her2抗体-MMAE偶联物对于肿瘤细胞抑制、细胞凋亡和细胞周期的作用。结果:通过优化偶联条件,ADC偶联率达80%以上。肿瘤细胞生长抑制的实验显示ADC药物的IC50比单克隆抗体的IC50明显降低,作用效果更加明显。细胞凋亡和细胞周期实验结果表明,ADC药物72h诱导细胞凋亡率高达40%,单一抗体药物则仅为20%。结论:该ADC药物具有很好的抑制乳腺癌细胞的作用。

关键词： Her2抗体 MMAE 偶联 ADC 制备

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姜黄素葡甲胺共晶的大鼠肠吸收特征研究

中草药 2015年第11期46卷 1645-1648页

作者：邢潇琳范春雷丛晓东杨培培蔡宝昌浙江中医药大学中药炮制技术研究中心浙江杭州310053 浙江省省级药学类工程实践教学基地浙江杭州310053 浙江中医药大学生命科学院浙江杭州310053

目的比较姜黄素葡甲胺共晶(MGC,姜黄素与葡甲胺通过氢键连接的新共晶化合物)与姜黄素的肠吸收参数变化。方法采用大鼠在体肠段单向灌流模型,用紫外分光光度法(UV)对药物的质量浓度进行检测,分别计算在大鼠各肠段的吸收速率常数(Ka)和表... 详细信息

目的比较姜黄素葡甲胺共晶(MGC,姜黄素与葡甲胺通过氢键连接的新共晶化合物)与姜黄素的肠吸收参数变化。方法采用大鼠在体肠段单向灌流模型,用紫外分光光度法(UV)对药物的质量浓度进行检测,分别计算在大鼠各肠段的吸收速率常数(Ka)和表观渗透系数(Papp)。结果 MGC在十二指肠与结肠的Ka和Papp比较有明显差异(P0.05)。各肠段Ka数据排序:十二指肠>空肠>回肠>结肠;Papp数据排序:十二指肠>空肠>结肠>回肠,MGC的全肠段Ka为(9.966±0.030)×10-3 min-1,Papp为(6.871±0.013)×10-3 cm/min,较姜黄素分别提高了1.53和2.21倍。结论 MGC较姜黄素有更好的肠吸收特征,提示MGC生物利用度可能提高。

关键词：姜黄素葡甲胺共晶姜黄素肠吸收吸收速率常数表观渗透系数

银花平感颗粒和三拗汤体内体外结合对甲型流感病毒的影响

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中国中西医结合杂志 2019年第2期39卷 223-229页

作者：杜海霞周惠芬何昱尹斐杨洁红卢亦愚万海同浙江中医药大学基础医学院杭州310053 浙江中医药大学生命科学学院杭州310053 浙江中医药大学药学院杭州310053 浙江省疾病预防控制中心微生物所杭州310009

目的通过银花平感颗粒和三拗汤两方药体内外对甲型H1N1流感病毒影响的实验研究,探讨不同方剂配伍对流感病毒的抑制作用。方法体内实验:采用滴鼻感染建立小鼠流感病毒肺炎模型,按体重分层随机分为正常对照组、病毒模型组、达菲组[21. 63 ... 详细信息

目的通过银花平感颗粒和三拗汤两方药体内外对甲型H1N1流感病毒影响的实验研究,探讨不同方剂配伍对流感病毒的抑制作用。方法体内实验:采用滴鼻感染建立小鼠流感病毒肺炎模型,按体重分层随机分为正常对照组、病毒模型组、达菲组[21. 63 mg/(kg·d)]、银花平感颗粒组[12 g/(kg·d)]和三拗汤组[9 g/(kg·d)],灌胃给予相应药物,每天1次,连续5天。灌胃结束后,摘取肺、脾及胸腺组织,分别称重,计算各组小鼠肺指数、肺组织抑制率及免疫脏器指数;采用实时荧光定量PCR法检测各组小鼠肺组织病毒载量表达,苏木精-伊红(HE)染色法检测各组小鼠肺组织的病理改变。体外实验:将银花平感颗粒和三拗汤两方药作用于感染甲型H1N1流感病毒的犬肾细胞(MDCK),采用MTT法检测两方药对甲型H1N1流感病毒的抗病毒有效率及显微镜观察其引起的细胞病变效应(CPE)。结果体内实验中,与正常对照组比较,病毒模型组小鼠肺指数升高,脾指数、胸腺指数均降低,多处肺实变,炎症细胞浸润,肺组织内病毒载量高表达(P <0. 01),与病毒模型组比较,银花平感颗粒和三拗汤均降低流感病毒感染小鼠肺指数(P <0. 01),升高脾指数、胸腺指数(P <0. 05,P <0. 01),并明显减轻流感病毒肺炎小鼠肺组织病理变化,降低肺组织病毒载量(P <0. 05,P <0. 01);体外实验中,银花平感颗粒和三拗汤可以明显抑制流感病毒引起的CPE,对病毒感染也有明显的保护作用。结论银花平感颗粒和三拗汤两方药在体内外均有良好的病毒抑制作用,其抗病毒作用可能与抑制流感病毒复制、保护免疫器官、减轻肺部炎症损伤及抑制病毒引起的CPE有关,且在体内外对流感病毒的抑制方面,银花平感颗粒比三拗汤配伍更全面,疗效更好。

关键词：银花平感颗粒三拗汤甲型H1N1流感病毒方剂配伍

莪术油注射液协同治疗新型冠状病毒肺炎(COVID-19)可行性浅析

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中草药 2020年第11期51卷 3062-3069页

作者：姜程曦郭月琴张淑君崔友李晓祥任仙樱李校堃鲍康德温州大学生命科学研究院浙江温州325035 温州医科大学药学院浙江温州325035 浙江天瑞药业有限公司浙江瑞安325200 合肥市未来药物开发有限公司安徽合肥230000 浙江省生物医药协同创新中心浙江温州325035

当前新型冠状病毒肺炎(COVID-19)的治疗尚无特效药,国家医疗救治主管部门陆续发布多个针对COVID-19的诊疗方案。莪术油及其制剂在抗病毒、治疗肺纤维化等方面的疗效已被多项基础研究及临床应用所证实,推测在COVID-19的临床治疗中可试用... 详细信息

当前新型冠状病毒肺炎(COVID-19)的治疗尚无特效药,国家医疗救治主管部门陆续发布多个针对COVID-19的诊疗方案。莪术油及其制剂在抗病毒、治疗肺纤维化等方面的疗效已被多项基础研究及临床应用所证实,推测在COVID-19的临床治疗中可试用莪术油注射液,特别是治疗肺间质改变造成的肺纤维化、促进止泻、减少患者发热时间等。此外,与抗病毒、抗生素等临床配伍使用的经验提示,莪术油注射液可用于减少COVID-19患者在治疗过程中药物引发性肝损伤,提高治疗效果。为莪术油及其制剂在协同治疗COVID-19中的科学使用提供理论依据。

关键词：莪术油莪术油注射液新型冠状病毒肺炎新型冠状病毒肺纤维化

中药材中肝毒性吡咯里西啶类生物碱的净化富集和分析技术

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药物分析杂志 2023年第5期43卷 731-738页

作者：焦蕊齐沛沛戴贤君王新全中国计量大学生命科学学院杭州310000 浙江省农业科学院农产品质量安全与营养研究所杭州310000

肝毒性吡咯里西啶类生物碱(hepatotoxic pyrrolizidine alkaloids,HPAs)是植物产生的一类天然毒素,可在人体内蓄积,对肝脏产生副作用。HPAs具有种类多样,含量低,广泛存在于基质复杂的中药材等特点,故而高效的前处理技术和高灵敏度的仪... 详细信息

肝毒性吡咯里西啶类生物碱(hepatotoxic pyrrolizidine alkaloids,HPAs)是植物产生的一类天然毒素,可在人体内蓄积,对肝脏产生副作用。HPAs具有种类多样,含量低,广泛存在于基质复杂的中药材等特点,故而高效的前处理技术和高灵敏度的仪器分析是实现中药材中HPAs分析检测的关键。本文综述了近年来中药材中HPAs的净化富集和分析技术,对比并探讨了不同分析方法的研究现状和技术优缺点,并提出相应建议,以便为中药材限量标准的制定提供技术支撑,并为中药材中内源性毒性成分的研究提供参考。

关键词：中药材肝毒性吡咯里西啶类生物碱固相萃取吸附剂液相色谱-质谱联用技术

高嗜肝性8型重组腺相关病毒体内转导法制备乙型肝炎病毒持续感染小鼠模型

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病毒学报 2010年第6期26卷 425-431页

作者：董小岩尉迟捷王刚田文洪陆月张风卫王文王岳谭文杰吴小兵复旦大学生命科学学院遗传学研究所遗传工程国家重点实验室上海200433 中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所病毒基因工程国家重点实验室北京100052 吉林大学生命科学学院长春130012 温州医学院浙江省医学遗传学重点实验室温州325035

用高嗜肝性的重组8型腺相关病毒(Recombinant adeno-associated virus type8,rAAV8)载体携带1.3拷贝乙型肝炎病毒(Hepatitis B virus,HBV)基因组(ayw亚型)体内转导法,建立持续表达HBV抗原的C57BL/6小鼠模型。首先,制备并纯化了携带1.3拷贝HBV基因组(ayw亚型)的重组8型腺相关病毒(rAAV8-1.3HBV);将rAAV8-1.3HBV以剂量2×10e11vg/只注射C57BL/6小鼠(Viralgenome,vg);在不同时间点实施尾静脉采血,采用ELISA方法监测血清中HBsAg和HBeAg的水平及动力学变化;10周后处死小鼠,取血液、肝组织样本,提取基因组DNA,荧光定量PCR检测HBVDNA拷贝数;利用鉴定HBVDNA环化形式的特异性引物进行PCR扩增以检测肝组织中环化的HBVDNA,并检测HBV抗原特异性的免疫组化和肝脏病理变化。结果显示,注射rAAV8-1.3HBV的3只C57BL/6小鼠第1周开始在血液中检测到HBsAg和HBeAg的表达,并持续至第10周均为阳性,其中HBsAg的表达水平经历了一个上升-下降-再上升的过程(注射后第4周时最低,第6周后维持较高水平),而HBeAg表达水平则持续阳性且比较稳定。荧光定量PCR结果显示,3只小鼠10周后血清中HBV DNA的拷贝数分别为4.2×103、3.6×103、2.5×103copies/mL,肝脏中则分别为8.0×106、5.7×106、2.6×106copies/g肝组织。在3只小鼠肝组织中均检测到环化HBV DNA,提示AAV8载体携带的线性HBV DNA成功回复成环化HB VDNA。免疫组化分析显示3只小鼠肝脏中均存在HBsAg和HBcAg表达;体内转染10周后肝脏组织切片的HE染色分析显示未见明显的炎性细胞浸润及组织结构异常。结果表明,本研究利用高嗜肝性重组8型腺相关病毒载体携带1.3拷贝乙型肝炎病毒基因组(ayw亚型)体内转导C57BL/6小鼠,成功地建立了HBV病毒在肝内稳定复制并持续表达HBV抗原的小鼠模型,为进一步研究HBV慢性持续感染的机制与应用于药物以及疫苗评价打下了基础。

关键词：动物模型乙型肝炎病毒 AAV8 持续感染