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肝细胞局部补体活化对疟原虫红外期发育影响的研究

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中国寄生虫学与寄生虫病杂志 2024年第2期42卷 169-176页

作者：谭涅焦世铭丁艳朱成宇徐文岳陆军军医大学基础医学院病原生物学教研室重庆400038 重庆大学医学院重庆400044

目的探讨肝细胞局部补体对疟原虫红外期发育的影响。方法分别提取Hepa1-6和HepG2-CD81细胞RNA,逆转PCR扩增C3、C3aR1、C5、C5aR1基因。Hepa1-6细胞和HepG2-CD81细胞悬液分别加入蛋白酶和磷酸酶裂解,2,2-联喹啉-4,4-二甲酸二钠(BCA)法测... 详细信息

目的探讨肝细胞局部补体对疟原虫红外期发育的影响。方法分别提取Hepa1-6和HepG2-CD81细胞RNA,逆转PCR扩增C3、C3aR1、C5、C5aR1基因。Hepa1-6细胞和HepG2-CD81细胞悬液分别加入蛋白酶和磷酸酶裂解,2,2-联喹啉-4,4-二甲酸二钠(BCA)法测定蛋白浓度,用蛋白质免疫印迹(Western blotting)测定肝细胞内补体和受体表达情况。将表达红色荧光蛋白(RFP)的约氏疟原虫BY265-RFP株、伯氏疟原虫ANKA株的昆明小鼠供斯氏按蚊吸血,17~19 d后解剖分离斯氏按蚊唾液腺,收集子孢子,在24孔板中按50000个子孢子/孔加入HepG2-CD81细胞(105个/孔)孵育6、12、24 h;另设置共孵育3 h后加入C5aR拮抗剂(40 nnmol/L,每孔500μl)的组别。经4%多聚甲醛固定、封闭,非透膜组加入一抗C3a兔抗人IgG抗体(1∶500)或rC5a兔抗人IgG抗体(1∶500)4℃孵育过夜,加入绿色Dylight 488荧光标记的山羊抗兔IgG二抗(1∶400)孵育1 h,加入DAPI染色液孵育5 min;透膜组加入一抗UIS4山羊多克隆抗体(1∶500)4℃孵育过夜,加入绿色IFKineTM荧光标记的驴抗兔IgG二抗(1∶400)孵育1 h,加入CD88兔多克隆抗体(1∶400)4℃孵育过夜,加入红色Dylight 649荧光标记的山羊抗兔IgG二抗(1∶400)孵育1 h,加入DAPI染色液孵育5 min,激光共聚焦显微镜观察补体在纳虫空泡周围的富集情况。取眼镜蛇毒因子(CVF)腹腔注射至C57BL/6小鼠,为CVF组;并设置C3-/-组(C3全基因敲除C3-/-小鼠)和对照组(C57BL/6小鼠)。取10000个约氏疟原虫子孢子感染各组小鼠,取肝脏提取总RNA后逆转录合成cDNA,荧光定量PCR测定疟原虫18S rRNA含量,肝脏虫荷用18S rRNA的相对含量表示。以尾静脉注射方式,用200个约氏疟原虫子孢子感染对照组(C57BL/6小鼠)10只、C3aR^(-/-)小鼠10只;1000个约氏疟原虫子孢子感染对照组(C57BL/6小鼠)5只、C5aR全基因敲除C5aR^(-/-)小鼠6只和肝脏C5aR条件性敲除Alb-cre+/+C5aRflox/flox杂交小鼠5只;1000个伯氏疟原虫子孢子感染对照组(C57BL/6小鼠)6只和C5aR^(-/-)小鼠6只,感染后3 d开始取尾静脉血,制成薄血膜涂片,吉氏染色后观察,至所有小鼠均出现红内期疟原虫为止。采用Graphpad prism 9.0软件进行统计学分析。正态分布的数据采用t检验比较连续变量,两两差异比较采用单因素方差分析(ANOVA)进行多重比较;非正态分布数据比较采用Mann-Whitney U检验。结果PCR结果可见,Hepa1-6细胞株内扩增出C3(358 bp)、C5(267 bp)及其受体C3aR(222 bp)、C5aR(388 bp)基因;HepG2-CD81细胞株内扩增出C3(202 bp)、C5(220 bp)、C3aR(299 bp)和C5aR(374 bp)基因。Western blotting检测结果发现,两种细胞均有C3、C5、C3aR和C5aR蛋白表达。激光共聚焦显微镜成像可见,细胞核经DAPI染色呈蓝色荧光,约氏疟原虫红外期呈红色自发荧光,非透膜组HepG2-CD81细胞内高表达的C3a和C5a呈绿色荧光,与纳虫空泡分布区域重叠;透膜组C5aR(粉色)与纳虫空泡膜(绿色)重叠;加入C5aR拮抗剂组别的纳虫空泡膜上仍有C5aR表达。约氏疟原虫子孢子感染后,对照组、CVF组、C3-/-组的肝脏虫荷(18S rRNA相对含量)分别为0.954±0.523、0.958±0.231、0.638±0.437,3组间差异均无统计学意义(P>0.05)。约氏疟原虫子孢子感染后,对照组和C3aR^(-/-)小鼠分别在(5.30±0.78)d和(5.30±0.78)d后出现红内期;伯氏疟原虫子孢子感染后,对照组和C5aR^(-/-)小鼠分别在(3.67±0.47)d和(3.83±0.69)d后出现红内期;2组基因敲除小鼠红内期出现时间与对照组相比,差异均无统计学意义(P>0.05)。约氏疟原虫子孢子感染后,对照组、Alb-cre^(+/+)C5aR^(flox/flox)小鼠和C5aR^(-/-)小鼠红内期的出现时间分别为(4.00±0.00)、(4.00±0.00)、(4.17±0.37)d,差异无统计学意义(P>0.05)。结论肝细胞局部补体活化对疟原虫红外期发育无显著影响。

关键词：疟原虫红外期肝细胞局部补体

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泛素化参与自噬调节固有免疫应答的研究进展

中国免疫学杂志 2024年第7期40卷 1525-1535页

作者：蔡依廷陈玮浙江大学医学院免疫学研究所杭州310058

固有免疫应答是人体抵御病原体入侵的第一道防线。接受病原体刺激后,免疫细胞通过3条主要信号通路诱导Ⅰ型干扰素(IFNs)合成,从而建立全面的抗病毒反应。越来越多的证据表明,选择性自噬参与对固有免疫Ⅰ型IFN应答信号的调节,可抑制过度... 详细信息

固有免疫应答是人体抵御病原体入侵的第一道防线。接受病原体刺激后,免疫细胞通过3条主要信号通路诱导Ⅰ型干扰素(IFNs)合成,从而建立全面的抗病毒反应。越来越多的证据表明,选择性自噬参与对固有免疫Ⅰ型IFN应答信号的调节,可抑制过度的免疫反应。E3泛素连接酶可催化形成不同类型的多聚泛素链,是自噬调控抗病毒信号转导的关键参与者,协同自噬在时间和空间上对固有免疫信号转导进行调节。本综述总结了自噬调节固有免疫的最新研究成果,并讨论E3泛素连接酶在其中的关键作用。

关键词：泛素化自噬固有免疫 Ⅰ型干扰素

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烟曲霉锌稳态相关基因研究进展

中华微生物学和免疫学杂志 2024年第1期44卷 81-85页

作者：兰冠达贺丹王丽吉林大学基础医学院病原生物学系长春130021

烟曲霉是一种通过空气传播的机会性致病真菌。其感染免疫功能低下患者肺部并引起严重的侵袭性曲霉病。锌是微生物生长所必需的微量元素,所有真菌包括烟曲霉生长都需要锌元素。有研究表明宿主体内的真菌毒力高低与真菌摄取锌的能力直接... 详细信息

烟曲霉是一种通过空气传播的机会性致病真菌。其感染免疫功能低下患者肺部并引起严重的侵袭性曲霉病。锌是微生物生长所必需的微量元素,所有真菌包括烟曲霉生长都需要锌元素。有研究表明宿主体内的真菌毒力高低与真菌摄取锌的能力直接相关。由于元素锌在人体内大部分与锌结合蛋白结合导致在宿主组织微环境中的离子浓度远低于真菌最适生长浓度。烟曲霉演化出几种锌转运蛋白,使烟曲霉能够在锌缺乏的条件下有效吸收锌元素,同时抵抗锌元素过量,防止对烟曲霉细胞造成损害。本文将总结概述烟曲霉锌稳态调控对其生长发育及毒力的作用以及相关基因。明确烟曲霉对元素锌水平调控基因的研究现状并探讨干扰烟曲霉锌稳态是否会成为开发治疗侵袭性曲霉病的新一代辅助治疗措施和真菌治疗方案。

关键词：烟曲霉锌稳态毒力药物靶点

肝细胞内补体活化对疟原虫红外期发育影响的研究

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中国寄生虫学与寄生虫病杂志 2024年

作者：谭涅焦世铭丁艳朱成宇徐文岳陆军军医大学基础医学院病原生物学教研室重庆大学医学院

目的探讨肝细胞局部补体对疟原虫红外期发育的影响。方法首先采用反转录PCR扩增和蛋白质免疫印迹分析观察C57BL/6小鼠来源的Hepa1-6细胞和人肝癌细胞来源的HepG2-CD81细胞内是否存在补体C3、C5,以及是否表达C3aR和C5aR。随后,将约氏... 详细信息

目的探讨肝细胞局部补体对疟原虫红外期发育的影响。方法首先采用反转录PCR扩增和蛋白质免疫印迹分析观察C57BL/6小鼠来源的Hepa1-6细胞和人肝癌细胞来源的HepG2-CD81细胞内是否存在补体C3、C5,以及是否表达C3aR和C5aR。随后,将约氏疟原虫BY265-RFP子孢子与HepG2-CD81细胞孵育,在6、12或24 h后,利用激光共聚焦显微镜观察肝细胞局部补体C3、C5是否活化,以及纳虫空泡膜上是否表达C5aR。最后,观察活化的肝细胞局部补体及其受体在疟原虫红外期感染中的作用。先将小鼠分为对照组、眼镜蛇毒因子(cobra venom factor,CVF)特异耗竭血清C3组和C3全基因敲除组,用伯氏疟原虫ANKA株(Plasmodium berghei ANKA,***)子孢子攻击48 h后定量PCR查肝脏虫荷,观察系统性补体对疟原虫红外期感染的影响;尔后,用子孢子攻击C3aR全基因敲除小鼠和C5aR全基因敲除小鼠,制备血涂片查红内期出现时间,观察补体受体在疟原虫红外期感染中的作用;最后,再用约氏疟原虫BY265株(Plasmodium yoelii BY265,***265)子孢子攻击野生型小鼠(对照组)、C5aR全基因敲除小鼠和肝脏C5aR条件性敲除小鼠,查红内期出现时间,观察肝细胞局部补体受体在疟原虫红外期感染中的作用。结果 Hepa1-6细胞和HepG2-CD81细胞内存在补体C3、C5及其受体C3aR、C5aR;子孢子感染能活化补体C3、C5,且活化的C3a、C5a、C5aR主要集中在纳虫空泡周围。***子孢子攻击后,野生型小鼠、CVF处理小鼠和C3全基因敲除小鼠的肝脏虫荷之间差异无统计学意义(P>0.05);C3aR全基因敲除小鼠和C5aR全基因敲除小鼠红内期出现时间与对照组相比,差异均无统计学意义(P>0.05);***265子孢子攻击后,对照组小鼠、C5aR全基因敲除小鼠和肝脏C5aR条件性敲除小鼠红内期出现时间差异无统计学意义(P> 0.05)。结论肝细胞局部补体活化对疟原虫红外期发育无显著影响。

关键词：疟原虫红外期肝细胞局部补体

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迭宫属绦虫的分类学研究进展

中国寄生虫学与寄生虫病杂志 2024年第1期42卷 98-104页

作者：张玺茹丝丝龙绍蓉刘若丹姜鹏崔晶王中全郑州大学基础医学院病原生物学系河南郑州450001

迭宫属绦虫是一类被长期忽视的医学绦虫类群,其中绦期幼虫裂头蚴可侵入人体多种组织和器官引起裂头蚴病,造成较大危害。迭宫绦虫的分类系统一直较混乱,给相关的科研和教学工作带来困难。本文对迭宫绦虫的系统地位变迁及其分类学研究进... 详细信息

迭宫属绦虫是一类被长期忽视的医学绦虫类群,其中绦期幼虫裂头蚴可侵入人体多种组织和器官引起裂头蚴病,造成较大危害。迭宫绦虫的分类系统一直较混乱,给相关的科研和教学工作带来困难。本文对迭宫绦虫的系统地位变迁及其分类学研究进展进行系统综述,以期为相关问题提供答案,同时为相关物种的研究提供参考资料。

关键词：迭宫绦虫分类学研究进展

生殖支原体MG_095蛋白的生物信息学分析及抗原表位预测

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中国病原生物学杂志 2024年第4期19卷 411-416,423页

作者：陈列松易希阳曾麒霖吴移谋南华大学衡阳医学院基础医学院病原生物学研究所特殊病原体防控湖南省重点实验室湖南衡阳421001

目的本研究旨在应用生物信息学方法对生殖支原体MG_095蛋白的理化性质进行分析,并预测其结构和表位,以探讨其作为潜在疫苗候选抗原的可能性。方法首先,利用DEG数据库分析MG_095基因是否为生殖支原体必需基因;其次,采用Prot-Param、ProtS... 详细信息

目的本研究旨在应用生物信息学方法对生殖支原体MG_095蛋白的理化性质进行分析,并预测其结构和表位,以探讨其作为潜在疫苗候选抗原的可能性。方法首先,利用DEG数据库分析MG_095基因是否为生殖支原体必需基因;其次,采用Prot-Param、ProtScale、BUSCA、SOPMA、DeepTMHMM、SignalP 6.0、Motif Scan、STRING等在线软件预测生殖支原体MG_095蛋白的氨基酸组成、理化性质、亲/疏水性、亚细胞定位、二级结构、跨膜区、信号肽、修饰位点和互作蛋白;最后,使用IEDB、ABCpred、SYFPEITHI和NetMHCIIpan 4.1软件预测靶蛋白的B、T细胞抗原表位。结果靶蛋白MG_095为生殖支原体必需基因MG_095所编码,是由398个氨基酸构成的稳定亲水性蛋白,其分子式为C_(2018)H_(3127)N_(527)O_(632)S_(6),分子质量为44.93154 ku,理论等电点为8.80。该蛋白的二级结构主要由α-螺旋和无规卷曲组成,其亚细胞定位于细胞外,无跨膜区,含有信号肽,存在19个磷酸化位点、4个糖基化位点和2个N-豆蔻酰化位点,并与多个核糖体蛋白有互作关系。此外,靶蛋白MG_095含6个优势B细胞抗原表位和3个优势T细胞抗原表位。结论假定表面暴露分子MG_095具有良好的免疫原性,可作为生殖支原体潜在的疫苗候选分子。

关键词：生殖支原体 MG_095 生物信息学分析抗原表位

基于肠道菌群探讨营养干预2型糖尿病的研究进展

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生命科学 2024年第4期36卷 499-508页

作者：王蕊蕊党冬梅延安大学医学院延安716000 延安大学医学院病原生物学教研室延安716000

2型糖尿病(T2DM)发病机制复杂,由多方面因素共同作用形成,以持续性高血糖为主要特征。肠道微生物群是人体肠道内由细菌、古菌、病毒和真核微生物等组成的庞大系统,参与并影响机体的物质和能量代谢。研究发现,肠道菌群可通过影响短链脂... 详细信息

2型糖尿病(T2DM)发病机制复杂,由多方面因素共同作用形成,以持续性高血糖为主要特征。肠道微生物群是人体肠道内由细菌、古菌、病毒和真核微生物等组成的庞大系统,参与并影响机体的物质和能量代谢。研究发现,肠道菌群可通过影响短链脂肪酸、胆汁酸、支链氨基酸、脂多糖等间接导致胰岛素抵抗和胰岛素敏感性降低,影响T2DM的发生发展。而营养干预是治疗糖尿病的基础手段,可有效调节肠道菌群平衡使之维持稳态,间接调节胰岛素的生成,有效改善血糖。本文综述了肠道菌群在T2DM发生发展中的作用机制,分析营养干预肠道菌群改善T2DM的研究进展,以期为通过调控肠道菌群治疗T2DM提供新思路,为精准的个性化营养干预提供参考。

关键词：肠道菌群营养干预 2型糖尿病胰岛素抵抗发病机制

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《医学寄生虫学》课程思政建设新思考

中国血吸虫病防治杂志 2024年第1期36卷 87-90页

作者：张玺龙绍蓉刘若丹姜鹏崔晶王中全郑州大学基础医学院病原生物学系河南郑州450001

随着课程思政改革不断深化,《医学寄生虫学》课程教师需要与时俱进地更新教学理念、转变教学思路,不断尝试将思政教育与课程内容有机紧密结合起来,在教授学生基础知识、实践技能的同时,培养他们的道德素养、政治意识,为他们后续适应社... 详细信息

随着课程思政改革不断深化,《医学寄生虫学》课程教师需要与时俱进地更新教学理念、转变教学思路,不断尝试将思政教育与课程内容有机紧密结合起来,在教授学生基础知识、实践技能的同时,培养他们的道德素养、政治意识,为他们后续适应社会环境和对接岗位工作奠定基础。目前,《医学寄生虫学》课程思政相关研究仍处于探索阶段,高校需要对《医学寄生虫学》课程思政进行有效建设,以便取得良好教学成效,并为教师开展课程思政教学工作提供参考。

关键词：医学寄生虫学课程思政课程建设教学理念

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亚精胺抑制核糖体DNA转录

科学通报 2024年第15期69卷 2072-2080页

作者：许银丰万伟湖南第一师范学院基础生物学实验室长沙410205 浙江大学医学院生物化学系杭州310058

核糖体是细胞内合成蛋白的唯一细胞器,主要由核糖体RNA(ribosomal RNA,rRNA)和核糖体蛋白组装形成.rDNA转录生成rRNA在细胞内的核仁处完成,是核糖体生物发生的重要限速步骤之一.在正常细胞内,核糖体DNA(ribosomal DNA,rDNA)的转录活性... 详细信息

核糖体是细胞内合成蛋白的唯一细胞器,主要由核糖体RNA(ribosomal RNA,rRNA)和核糖体蛋白组装形成.rDNA转录生成rRNA在细胞内的核仁处完成,是核糖体生物发生的重要限速步骤之一.在正常细胞内,核糖体DNA(ribosomal DNA,rDNA)的转录活性受到营养状态的严密调控.而在癌细胞内,癌基因的激活、抑癌基因的失活和生长相关信号通路的失调等多种不同的机制均可导致rDNA的转录绕过营养状态的控制.癌细胞内异常激活的rDNA转录是癌细胞快速生长、增殖的必要前提,也是癌细胞的共有特征之一.抑制癌细胞内异常激活的r DNA转录有望开发出新的抗癌药物.我们既往的研究揭示,肿瘤蛋白p53诱导核蛋白2(tumor protein p53 inducible nuclear protein 2,TP53INP2)的核仁定位是其促进rDNA转录的重要前提,可用来指示细胞内的rDNA转录活性.本研究发现,天然活性成分亚精胺可抑制TP53INP2的核仁定位,并显著降低细胞的rDNA转录活性.机制研究表明,亚精胺可抑制蛋白激酶雷帕霉素靶蛋白复合物1(mechanistic target of rapamycin complex 1,mTORC1)的必需亚基Raptor的乙酰化并降低细胞内m TORC1的活性,进而抑制r DNA的转录.功能研究揭示,亚精胺可显著抑制蛋白的合成和细胞的增殖.本研究提示,抑制细胞内的r DNA转录活性可能是亚精胺发挥抗癌作用的重要机制之一.

关键词：癌症 mTORC1 rDNA转录核糖体生物发生亚精胺