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茶树硝酸还原酶基因克隆及表达分析

西北植物学报 2013年第7期33卷 1292-1297页

作者：周月琴庞磊李叶云江昌俊安徽农业大学茶叶生物化学与生物技术教育部重点实验室合肥230036

利用茶树全器官转录组文库中硝酸还原酶(NR)的EST,通过RACE技术扩增出NR基因的cDNA,并利用实时荧光定量PCR检测了NR基因在不同茶树品种中的表达。结果表明:NR基因cDNA全长2 927bp,开放阅读框2 652bp,编码一个有884个氨基酸蛋白质,GenBan... 详细信息

利用茶树全器官转录组文库中硝酸还原酶(NR)的EST,通过RACE技术扩增出NR基因的cDNA,并利用实时荧光定量PCR检测了NR基因在不同茶树品种中的表达。结果表明:NR基因cDNA全长2 927bp,开放阅读框2 652bp,编码一个有884个氨基酸蛋白质,GenBank登录号为JX987133。经BlastX比对,与GenBank中登录的烟草NR相似性达到74%。茶树NR蛋白属于亲水性蛋白,可能为胞质蛋白。25个茶树品种叶片中NR表达水平差异明显,最高值是最低值的22.75倍。因NR是植物氮代谢过程中的关键限速酶,推测25个茶树品种间氮吸收利用能力存在差异。

关键词：茶树硝酸还原酶 cDNA克隆 qRT-PCR

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真菌侵染引发的茶树内源糖苷酶基因差异表达

植物学报 2011年第5期46卷 552-559页

作者：王瑾戚丽张正竹安徽农业大学茶叶生物化学与生物技术教育部重点实验室合肥230036

通过探讨顺-3-己烯醇、芳樟醇氧化物、芳樟醇、水杨酸甲酯、香叶醇、苯甲醇和苯乙醇7种茶叶游离态香气组分和糖苷类香气前体对茶炭疽病菌、茶云纹叶枯病菌、茶轮斑病菌和茶赤叶斑病菌4种致病菌的抑制作用,以及真菌侵染引发的茶树(Camell... 详细信息

通过探讨顺-3-己烯醇、芳樟醇氧化物、芳樟醇、水杨酸甲酯、香叶醇、苯甲醇和苯乙醇7种茶叶游离态香气组分和糖苷类香气前体对茶炭疽病菌、茶云纹叶枯病菌、茶轮斑病菌和茶赤叶斑病菌4种致病菌的抑制作用,以及真菌侵染引发的茶树(Camellia sinensis)内源β-樱草糖苷酶、β-木糖苷酶、β-葡萄糖苷酶I、β-葡萄糖苷酶II、β-葡萄糖基转移酶基因的表达差异,结果表明:7种游离态香气组分和糖苷类香气前体对4种致病菌均有明显的抑制作用,其中香叶醇的抑制作用最强,在浓度为***-1时即对茶炭疽病菌的抑制率达到100%。实时定量PCR结果显示:真菌侵染可不同程度诱导茶树内源糖苷酶和β-葡萄糖基转移酶基因的表达上调,且上调多发生于染病初期。

关键词：抑菌香气茶差异表达糖苷酶

普洱茶渥堆阶段游离态香气成分分析及含量变化

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食品与发酵工业 2010年第4期36卷 161-164页

作者：谷勋刚张正竹宁井铭姚成程邵宛芳宛晓春安徽农业大学农业部茶叶生物化学与生物技术重点实验室云南农业大学普洱茶研究院云南昆明650201

研究了普洱茶中游离态的香气成分的分析方法,分析了不同渥堆阶段目标成分的变化趋势及原因。试验首先采用标准物质及GC-MS对普洱茶中游离态香气成分进行了定性分析,在此基础上,以癸酸乙酯为内标,用GC法对目标成分进行了定量分析研究,获... 详细信息

研究了普洱茶中游离态的香气成分的分析方法,分析了不同渥堆阶段目标成分的变化趋势及原因。试验首先采用标准物质及GC-MS对普洱茶中游离态香气成分进行了定性分析,在此基础上,以癸酸乙酯为内标,用GC法对目标成分进行了定量分析研究,获得的结果重复性好,定量分析准确可靠。然后用建立的SDE-GC分析方法测定了普洱茶不同翻堆阶段中目标游离态香气成分的含量。结果显示:高挥发性香气成分随着渥堆时间的延长,含量总体上呈降低趋势,但芳樟醇在二翻中出现最大值,可能与芳樟醇糖苷含量高有关;1,2,3-及1,2,4-三甲氧基苯含量则相反,总体呈增加趋势,但在第2次翻堆及第3次翻堆时分别出现了极大值,可能与霉菌和酵母菌联合作用有关,二者加快了酚基甲基化反应的进程。

关键词： GC 定量分析普洱茶渥堆游离态香气成分

Bombyx mori Pyridoxal Kinase cDNA Cloning and Enzymatic Characterization

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Journal of Genetics and Genomics 2007年第8期34卷 683-690页

作者：石瑞君张剑韵江昌俊黄龙全安徽农业大学茶与食品科技学院教育部和农业部茶叶生物化学与生物技术重点实验室合肥230036 安徽农业大学生命科学学院合肥230036

Pyridoxal kinase （PLK）（EC 2.***.1.35） catalyzes the ATP-dependent phosphorylation of pyridoxal, generating pyridoxal-5＇-phosphate （PLP）, an important cofactor for many enzymatic reactions. Bombyx mori, similar to mammals, relies on a nutritional source of vitamin B6 to synthesize PLP. This article describes how a cDNA encoding PLK was cloned from Bombyx mori using the PCR method （GenBank accession number： DQ452397）. The cDNA has an 894 bp open reading frame and encodes a protein of 298 amino acid residues with a molecular mass of 33.1 ***. The amino acid sequence shares 48.6% identity with that of human PLK, and it also contains signature conserved motifs of the PLK family. However, the protein is 10 or more amino acids shorter than the PLK from mammals and plants, and several amino acid residues conserved in the PLK from mammals and plants are changed in the protein. The cDNA cloned was expressed successfully in Escherichia coli using the T7 promoter/T7 RNA polymerase expression system, and the crude extracts containing the expressed product were found to have strong PLK enzymatic activity with a value of 30 nmol/min/mg, confirming that the cDNA encodes the functional PLK of Bombyx mori. This is the first identification of a gene encoding PLK in insects.

关键词： pyridoxal kinase Bombyx mori (silkworm) pyridoxal-5'-phosphate (PLP) vitamin B6 metabolism genomic database

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陶瓷膜纯化油茶皂苷的工艺研究

中国粮油学报 2009年第7期24卷 89-92,97页

作者：赵敬娟杜先锋安徽农业大学教育部农业部茶叶生物化学与茶叶技术重点实验室合肥230036

目前市售油茶皂苷多为乙醇提取物,这些提取物多为粗提物,色泽比较深,纯度相对低,并且杂质成分复杂。在前人的基础上采用陶瓷膜对油茶皂苷进行分离纯化研究。选取不同的膜孔径、不同的操作压力以及不同的料液浓度为粗油茶皂苷精制的工艺... 详细信息

目前市售油茶皂苷多为乙醇提取物,这些提取物多为粗提物,色泽比较深,纯度相对低,并且杂质成分复杂。在前人的基础上采用陶瓷膜对油茶皂苷进行分离纯化研究。选取不同的膜孔径、不同的操作压力以及不同的料液浓度为粗油茶皂苷精制的工艺条件,以膜通量、总皂苷转移率和除杂率为标准对陶瓷膜精制油茶皂苷的工艺进行优化。结果表明,以0.05μm的膜孔径、0.15 MPa的操作压力和1%的料液浓度为最佳精制工艺条件,得到的滤液经过浓缩并喷雾干燥。同时对过滤后的产品进行高效液相色谱法检测。测定产品纯度由50%提高到81%,得率为66.4%,并且颜色也从黄色变为淡黄色。具有大规模工业生产的可行性。

关键词：油茶皂苷陶瓷膜总皂苷转移率除杂率膜通量

茶树β-1,3葡聚糖酶基因在大肠杆菌中的优化表达

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安徽农业大学学报 2007年第4期34卷 543-546页

作者：高轩江昌俊朱林余梅叶爱华邓威威安徽农业大学农业部茶叶生物化学与生物技术重点实验室

从茶树中获得β-1,3葡聚糖酶(β-1,3-glucanase,β-1,3-glu)基因cDNA,发现其中存在着一些序列,它们与核糖体竞争性地结合pET32 a载体上的RBS位点,造成该基因cDNA在原核生物中很难表达。作者对其中的两处基因序列进行了突变,通过设计PCR... 详细信息

从茶树中获得β-1,3葡聚糖酶(β-1,3-glucanase,β-1,3-glu)基因cDNA,发现其中存在着一些序列,它们与核糖体竞争性地结合pET32 a载体上的RBS位点,造成该基因cDNA在原核生物中很难表达。作者对其中的两处基因序列进行了突变,通过设计PCR引物,利用密码子的简并性,保证了突变后蛋白质的一级结构不变。使葡聚糖酶基因在大肠杆菌中明显表达。通过SDS-PAGE分析,证明表达产物分子量约75.8 kD,与预计大小一致,并通过水杨酸法对其进行酶活测定,证明其有活性。

关键词：茶树 β-1 3葡聚糖酶原核表达

茶树对茶尺蠖取食危害的补偿光合生理反应研究

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安徽农业大学学报 2007年第3期34卷 355-359页

作者：韦朝领童鑫高香凤江昌俊安徽农业大学农业部茶叶生物化学与生物技术重点实验室

利用叶绿素荧光仪和光合测定系统研究了茶树受到害虫茶尺蠖危害后的补偿光合生理变化。结果表明,茶树在受到茶尺蠖危害后的21 d之内,受害叶片和同株未受害叶片的光系统Ⅱ的光化学效率(Fv/Fm)、光合电子传递速率(ETR)和净光合速率(Pn)的... 详细信息

利用叶绿素荧光仪和光合测定系统研究了茶树受到害虫茶尺蠖危害后的补偿光合生理变化。结果表明,茶树在受到茶尺蠖危害后的21 d之内,受害叶片和同株未受害叶片的光系统Ⅱ的光化学效率(Fv/Fm)、光合电子传递速率(ETR)和净光合速率(Pn)的值均高于对照,NPQ明显低于对照,且这种差异在危害后第7 d最大,随后逐渐减小。说明茶树对茶尺蠖危害后,诱导产生了补偿光合作用,且补偿能力随时间的推移而变小。此外,茶树在茶尺蠖取食后,气孔导度和蒸腾速率增加。

关键词：茶树茶尺蠖补偿光合生理

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茶树组织与器官培养研究进展

安徽农业大学学报 2007年第3期34卷 348-354页

作者：江昌俊安徽农业大学农业部茶叶生物化学与生物技术重点实验室合肥230036

收集了自20世纪60年代以来茶叶研究者在国内和国际刊物上发表的重要论文,对茶树组织与器官培养研究工作做了简要的介绍。近40年来茶树组织与器官培养研究取得了较大的进展,但仍然还有不少难题未攻克。利用离体培养作为技术平台运用于茶... 详细信息

收集了自20世纪60年代以来茶叶研究者在国内和国际刊物上发表的重要论文,对茶树组织与器官培养研究工作做了简要的介绍。近40年来茶树组织与器官培养研究取得了较大的进展,但仍然还有不少难题未攻克。利用离体培养作为技术平台运用于茶树育种,还有一段艰难的路程要走,期待着茶叶研究者在今后的研究中取得更大的成果。

关键词：茶树组织培养器官培养进展

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单宁酶及协同物质对绿茶饮料稳定性的影响

食品与发酵工业 2006年第6期32卷 69-72页

作者：宁井铭方世辉夏涛周天山安徽农业大学农业部茶叶生物化学与生物技术重点开放实验室合肥230036

研究了不同剂量的单宁酶对绿茶饮料防沉淀的作用并用HPLC分析了经单宁酶处理后茶汤中酯型儿茶素的变化,同时分别对β-环状糊精、果胶酶、木瓜蛋白酶、葡萄糖氧化酶与单宁酶协同抗沉淀作用进行了研究。结果表明,单宁酶最佳作用剂量为4.0U... 详细信息

研究了不同剂量的单宁酶对绿茶饮料防沉淀的作用并用HPLC分析了经单宁酶处理后茶汤中酯型儿茶素的变化,同时分别对β-环状糊精、果胶酶、木瓜蛋白酶、葡萄糖氧化酶与单宁酶协同抗沉淀作用进行了研究。结果表明,单宁酶最佳作用剂量为4.0U/g;在一定范围内,随着酶剂量的增加,茶汤中酯型儿茶素的总量在不断减少,茶汤的透光率随着酯型儿茶素的减少在不断增大;β-环状糊精、果胶酶、木瓜蛋白酶与单宁酶协同抗沉淀效果达显著水平,葡萄糖氧化酶与单宁酶协同抗沉淀有效果且差异性达到极显著水平。

关键词：绿茶饮料酶沉淀