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基于荟萃分析评估生长育肥猪能量与蛋白质摄入及预测其生长性能

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浙江大学学报（农业与生命科学版） 2024年第4期50卷 542-550页

作者：狄寒秋王珊珊钟一帆陈斌汪海峰浙江大学动物科学学院浙江杭州310058 浙江华统肉制品股份有限公司浙江金华322005

采用荟萃分析方法,通过整合2002—2022年共112篇文献的研究结果,拟合多项式函数、幂函数与Bridges函数3种函数模型来预测中国生长育肥猪的每日消化能摄入量与粗蛋白摄入量,并预测猪的体质量、饲粮消化能摄入量、饲粮粗蛋白摄入量与生长... 详细信息

采用荟萃分析方法,通过整合2002—2022年共112篇文献的研究结果,拟合多项式函数、幂函数与Bridges函数3种函数模型来预测中国生长育肥猪的每日消化能摄入量与粗蛋白摄入量,并预测猪的体质量、饲粮消化能摄入量、饲粮粗蛋白摄入量与生长性能指标之间的函数关系。结果表明:3种函数模型均对消化能摄入量、粗蛋白摄入量进行了合理拟合,其中,多项式函数较幂函数与Bridges函数的拟合优度更高。多项式函数与Bridges函数对消化能摄入量的预测值整体上高于美国国家科学研究委员会(National Research Council, NRC)于2012年发布的《猪营养需要》[以下简称NRC(2012)]提供的数值;3种函数对粗蛋白摄入量的预测值整体上低于或接近于NRC(2012)提供的数值。本研究结果有助于制定更符合生长育肥猪营养需要的饲喂计划,为生猪饲料配制提供参考,从而提高饲料利用率、降低生猪饲养成本。

关键词：生长育肥猪能量摄入蛋白质摄入生长性能荟萃分析

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植物乳杆菌后生元缓解小鼠沙门氏菌感染的作用效果及机理

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微生物学报 2024年第4期64卷 1095-1109页

作者：舒鑫黄雯霞马世越刘金松杨彩梅张瑞强肖肖吴艳萍浙江农林大学动物科技学院·动物医学院浙江杭州311300 南京农业大学动物科技学院江苏南京210095 浙江惠嘉生物科技股份有限公司浙江湖州313300

【目的】研究不同剂量的植物乳杆菌后生元缓解小鼠伤寒沙门氏菌(Salmonella enterica Typhimurium,ST)感染的作用效果及分子机制。【方法】选择60只5周龄的C57BL/6小鼠,分为5组:Control、ST、CFS-L+ST、CFS-M+ST和CFS-H+ST,后三组分别... 详细信息

【目的】研究不同剂量的植物乳杆菌后生元缓解小鼠伤寒沙门氏菌(Salmonella enterica Typhimurium,ST)感染的作用效果及分子机制。【方法】选择60只5周龄的C57BL/6小鼠,分为5组:Control、ST、CFS-L+ST、CFS-M+ST和CFS-H+ST,后三组分别灌胃低、中、高剂量植物乳杆菌后生元,即50、100和200μL的无细胞培养上清(cell-free culture supernatant,CFS)预处理21 d,然后在第22天灌胃3×10^(8) CFU ST进行攻毒,3 d后采样。【结果】与对照组相比,饲喂低、中剂量CFS小鼠体重增长无明显变化,而高剂量组体重显著降低(P0.05)。与ST组相比,预饲中剂量CFS可通过显著降低促炎因子白细胞介素-1β(interleukin-1β,IL-1β)、白细胞介素-6(interleukin-6,IL-6)和肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)水平(P<0.05),以及显著升高抑炎因子白细胞介素-4(interleukin-4,IL-4)和白细胞介素-10(interleukin-10,IL-10)水平(P<0.05)缓解炎症反应。进一步研究发现,与ST组相比,CFS-M+ST组热蛋白结构域相关蛋白3[nucleotide-binding oligomerization domain-like receptor(NLR)family pyrin domain-containing protein 3,NLRP3]炎症小体关键基因NLRP3、凋亡相关斑点样蛋白(apoptosis-associated speck-like protein,ASC)、半胱氨酸蛋白酶(caspase-1)和细胞死亡调节蛋白(gasdermin D,GSDMD)的mRNA表达水平显著降低(P<0.05),其上游核因子-κB(nuclear factor kappa beta,NF-κB)通路中关键分子髓样分化因子(myeloid differentiation factor 88,MyD88)、肿瘤坏死因子受体相关因子6(tumor necrosis factor receptor-associated factor 6,TRAF6)、转化生长因子β激活激酶1(transforming growth factor beta-activated kinase 1,TAK1)和NF-𝜅B的mRNA表达量显著降低(P<0.05)。【结论】植物乳杆菌后生元CFS可通过抑制NF-κB通路介导的NLRP3炎症小体缓解小鼠沙门氏菌感染和炎症反应,并且预饲中剂量CFS效果最佳。

关键词：植物乳杆菌后生元沙门氏菌感染组织损伤 NLRP3炎症小体 NF-κB通路

小麦胚芽的灭酶稳定化及其在烘焙制品中的应用

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食品与发酵工业 2024年第11期50卷 379-388页

作者：王文洁孙宇欣童志芳陈维周绪霞丁玉庭浙江工业大学食品科学与工程学院浙江杭州310014 浙江新迪嘉禾食品有限公司浙江杭州311107

小麦胚芽是小麦颗粒中营养密度最高的部分,富含膳食纤维与抗氧化物质,具有强抗氧化、降血糖血脂和通便等功效。随着人们健康意识提升,小麦胚芽逐渐从动物饲料向高值食品原料转型,用于开发全谷物及粗粮制品。但小麦胚芽本身具有强内源酶... 详细信息

小麦胚芽是小麦颗粒中营养密度最高的部分,富含膳食纤维与抗氧化物质,具有强抗氧化、降血糖血脂和通便等功效。随着人们健康意识提升,小麦胚芽逐渐从动物饲料向高值食品原料转型,用于开发全谷物及粗粮制品。但小麦胚芽本身具有强内源酶活性,易在贮藏中氧化变味,严重影响后续加工。该文综述了小麦胚芽的主要营养成分和活性,以及作为原料的加工特性,对其在粗粮烘焙制品开发利用中面临的主要问题和相关作用机理进行解释,并介绍了国内外灭酶稳定化创新技术,重点阐述了使用物理、化学、生物等方式抑制酶活性并提高抗氧化性的工作,展望了麦胚在未来功能性烘焙制品中的应用,为其工业化应用提供重要参考。

关键词：小麦胚芽灭酶烘焙制品生物活性营养强化品质改良

猫疱疹病毒Ⅰ型gIgE基因缺失毒株的构建及生物学特性分析

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南京农业大学学报 2024年第3期47卷 515-521页

作者：张晶晶孙慧敏宋家升鲍恩东南京农业大学动物医学院江苏南京210095 浙江迪福润丝生物科技有限公司浙江杭州310051

[目的]为了开发一种能够预防感染、阻止潜伏期建立的猫疱疹病毒Ⅰ型(FHV-1)弱毒疫苗,利用同源重组以及CRISPR/Cas9技术将FHV-1的gIgE基因替换为红色荧光蛋白基因(RFP)。[方法]构建针对gIgE基因的3条sgRNA及表达Cas9蛋白的质粒,将含有sg... 详细信息

[目的]为了开发一种能够预防感染、阻止潜伏期建立的猫疱疹病毒Ⅰ型(FHV-1)弱毒疫苗,利用同源重组以及CRISPR/Cas9技术将FHV-1的gIgE基因替换为红色荧光蛋白基因(RFP)。[方法]构建针对gIgE基因的3条sgRNA及表达Cas9蛋白的质粒,将含有sgRNA及Cas9蛋白的质粒与含有RFP的转移载体共转染到猫肾细胞(F81),通过噬斑纯化以及有限稀释方法进行病毒纯化,以重组病毒感染F81细胞连续10代验证其遗传稳定性,通过测定重组病毒以及亲本病毒H07的病毒滴度、一步生长曲线以及判断噬斑大小评价其生物学特性。[结果]成功构建了FHV-1 gIgE基因缺失毒株并将其命名为FHV-ΔgIgE-RFP;提取重组病毒DNA,通过PCR验证gIgE基因无目的条带,表明重组病毒纯化成功,再通过PCR验证RFP基因有目的条带,表明重组病毒成功插入外源基因。病毒滴度测定结果显示,与亲本病毒相比重组病毒的病毒滴度下降了90%;在F 1—F 10连续传代过程中RFP荧光表达且无减弱现象,表明重组病毒可稳定表达外源基因;测定FHV-ΔgIgE-RFP以及H07的生长曲线,重组病毒的生长趋势与亲本病毒大致相同,表明插入外源基因并不会改变病毒本身的生长特性;噬斑观察及染色结果显示,在病毒感染细胞前、后期,重组病毒的噬斑都小于亲本病毒,表明缺失gIgE基因后病毒毒力下降。[结论]成功构建并筛选出FHV-1 gIgE基因缺失致弱毒株,为开发疱疹病毒弱毒活载体疫苗奠定了基础。

关键词：猫疱疹病毒Ⅰ型(FHV-1) 致弱毒株重组病毒病毒筛选

单宁酸对脂多糖应激仔猪肝组织的功能、抗氧化能力和炎症应答的影响

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畜牧兽医学报 2024年第6期55卷 2519-2529页

作者：周琦璐刘金松吴超杨彩梅刘玉兰张瑞强浙江农林大学动物科技学院•动物医学院浙江省畜禽绿色生态健康养殖应用技术研究重点实验室动物健康互联网检测技术浙江省工程实验室杭州311300 惠嘉绿色动物保健品重点农业企业研究院浙江惠嘉生物科技股份有限公司安吉313300

旨在研究断奶仔猪饲粮添加单宁酸(tannic acid, TA)对脂多糖(lipopolysaccharide, LPS)应激断奶仔猪肝组织功能、抗氧化能力、炎症应答反应及相关基因表达的影响。本试验分为两部分。第一部分选择72头体重相近、健康状况良好的28日龄三... 详细信息

旨在研究断奶仔猪饲粮添加单宁酸(tannic acid, TA)对脂多糖(lipopolysaccharide, LPS)应激断奶仔猪肝组织功能、抗氧化能力、炎症应答反应及相关基因表达的影响。本试验分为两部分。第一部分选择72头体重相近、健康状况良好的28日龄三元杂交(杜×长×大)断奶仔猪,随机分为2组,分别为基础饲粮饲喂组(饲喂基础饲粮)和单宁酸饲喂组(饲喂在基础饲粮中额外添加1 000 mg·kg^(-1)单宁酸的试验饲粮),每组6个重复,每个重复6头猪,试验期为28 d。第二部分于第一部分试验结束时,分别从基础饲粮饲喂组和单宁酸饲喂组各选取12头体重接近平均体重、健康状况良好的56日龄仔猪,将其分为4组,每组6头仔猪。对照组(CON)和LPS应激组(LPS)的仔猪来自第一部分试验的基础饲粮饲喂组;单宁酸组(TA)和单宁酸+LPS组(TA+LPS)的仔猪来自第一部分试验的单宁酸饲喂组。在仔猪56日龄早上8:00,给LPS组和TA+LPS组仔猪腹腔注射1.5 mL浓度为1 mg·mL^(-1)的LPS,给CON组和TA组仔猪腹腔注射1.5 mL生理盐水,注射1.5 h后屠宰采样。结果发现,LPS应激增加了仔猪的肝脏指数,提高了血清中谷草转氨酶(aspartate aminotransferase, AST)和谷丙转氨酶(alanine aminotransferase, ALT)活性,降低了仔猪肝组织过氧化氢酶(catalase, CAT)和总超氧化物歧化酶(total superoxide dismutase, T-SOD)水平,提高了仔猪肝组织基因Kelch-1ike ECH-associated protein-1(Keap1)、Toll-like receptor 4(TLR4)、Myeloid differentiation factor 88(MyD88)、Nod-like receptor protein 3(NLRP3)、Interleukin-6(IL-6)和Tumor necrosis factor-α(TNF-α)的表达水平,降低了Nuclear factor erythroid 2-related factor 2(Nrf2)、NADH Quinone Oxidoreductase 1(NQO1)、Manganese superoxide dismutase(Mn-SOD)和Catalase(CAT)的表达水平(P<0.05)。饲粮中添加TA可降低仔猪血清中AST和ALT水平,提高仔猪肝组织CAT和T-SOD水平,显著影响仔猪肝组织IL-6、IL-10和TNF-α含量,下调仔猪肝组织基因Keap1、TLR4、MyD88、NLRP3、IL-6和TNF-α的表达水平,上调Nrf2、NQO1、Cu/Zn-SOD、Mn-SOD和CAT的表达水平(P<0.05)。与CON组相比,TA+LPS组仔猪血清中AST的水平降低(P<0.05)。与LPS组相比,TA+LPS组血清中AST和ALT水平降低,IL-6和TNF-α含量减少,基因Keap1、TLR4、IL-6和TNF-α表达水平降低,Mn-SOD和CAT的表达量增加(P<0.05)。综上,在本试验条件下,单宁酸通过调节仔猪肝脏指数,改善肝抗氧化能力,抑制肝组织炎症因子的分泌,调控Nrf2信号、TLR4信号和NLRP3炎症小体信号相关基因表达,缓解LPS应激引起的仔猪肝应激损伤状态。

关键词：单宁酸脂多糖猪肝应激

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湖羊瘤胃微生物GH9家族葡聚糖酶基因IDSGLUC9-25的表达与功能表征

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微生物学报 2024年第3期64卷 755-766页

作者：徐晓锋韩俊彦丁钰杰廖静高德英张骥王佳堃尹尚军王谦徐洁皓浙江万里学院生物与环境学院浙江宁波315100 浙江大学动物科学学院奶业科学研究所浙江杭州310058 杭州云心质力生物科技有限公司浙江杭州310018

【目的】葡聚糖酶是饲用添加剂的重要成分,本研究旨在从湖羊消化道微生物中挖掘性质优良的GH9家族葡聚糖酶基因,用于研发新型饲用酶制剂。【方法】从湖羊瘤胃微生物cDNA中扩增IDSGLUC9-25基因,在大肠杆菌中进行异源表达,对重组蛋白进行... 详细信息

【目的】葡聚糖酶是饲用添加剂的重要成分,本研究旨在从湖羊消化道微生物中挖掘性质优良的GH9家族葡聚糖酶基因,用于研发新型饲用酶制剂。【方法】从湖羊瘤胃微生物cDNA中扩增IDSGLUC9-25基因,在大肠杆菌中进行异源表达,对重组蛋白进行诱导表达和纯化,研究重组蛋白的酶学性质和底物水解模式。【结果】IDSGLUC9-25基因编码527个氨基酸,包含一个CelD_N结构和一个GH9家族催化结构域;重组蛋白rIDSGLUC9-25分子量约为62.7 kDa,最适反应温度和pH分别为40℃和6.0,在30–50℃下活性较高,在pH 4.0–8.0范围内能够保持较高的稳定性,经pH4.0–8.0缓冲液处理1h后残余活性均大于90%;底物谱分析表明,rIDSGLUC9-25能催化大麦β-葡聚糖、苔藓地衣多糖、魔芋胶和木葡聚糖,比活性分别为(443.55±24.48)、(65.56±5.98)、(122.37±2.85)和(159.16±7.73)U/mg;利用薄层色谱法(thinlayer chromatography,TLC)和高效液相色谱法(high performance liquid chromatography,HPLC)分析水解产物发现,rIDSGLUC9-25降解大麦葡聚糖主要生成纤维三糖(占总还原糖64.19%±1.19%)和纤维四糖(占总还原糖26.24%±0.12%),催化地衣多糖主要生成纤维三糖(占总还原糖78.46%±0.89%)。【结论】本研究报道了一种来自密螺旋体属细菌的内切β-1,4-葡聚糖酶IDSGLUC9-25(EC3.***.1.4),能高效催化多糖底物生成纤维三糖和纤维四糖,为研发饲用酶制剂和制备低聚寡糖建立基础。

关键词：湖羊消化道微生物葡聚糖酶 IDSGLUC9-25 纤维寡糖

捻转血矛线虫blister-5基因序列特征及表达特性分析

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中国农业大学学报 2024年第10期29卷 199-207页

作者：汤洪宁吴飞项继忠童丹妮杜振东陈学秋马光旭杨怡浙江大学动物科学学院/浙江省动物预防医学重点实验室杭州310058 湖州咩咩羊牧业有限公司浙江湖州313023

为明确捻转血矛线虫(Haemonchus contortus)中Kunitz型蛋白BLI-5的表达特性,利用生物信息学软件对其基因结构、保守结构域、进化关系和蛋白质三维结构进行分析;基于WormBase数据库,分析捻转血矛线虫发育过程各个阶段Hc-bli-5与Hc-bli-4... 详细信息

为明确捻转血矛线虫(Haemonchus contortus)中Kunitz型蛋白BLI-5的表达特性,利用生物信息学软件对其基因结构、保守结构域、进化关系和蛋白质三维结构进行分析;基于WormBase数据库,分析捻转血矛线虫发育过程各个阶段Hc-bli-5与Hc-bli-4的相对转录丰度;通过构建原核表达载体诱导表达重组蛋白,并制备多克隆抗体,采用虫体组织免疫荧光试验分析目标蛋白(Hc-BLI-5)在捻转血矛线虫中的组织定位情况。结果显示:1)Hc-bli-5基因全长2088 bp,由4个外显子和3个内含子组成,Hc-BLI-5共有195个氨基酸,132~192位氨基酸为Kunitztype super family结构域,是一种丝氨酸蛋白酶抑制因子。2)进化树分析发现,丝氨酸枯草杆菌蛋白酶超家族蛋白BLI-5在寄生线虫和自由生活线虫中均有较为密切的进化关系,捻转血矛线虫与柏氏血矛线虫(Haemonchus placei)在该基因的进化关系上最为接近,聚集在进化树的同一小分支上。3)蛋白质结构对比分析显示,捻转血矛线虫和秀丽隐杆线虫(Caenorhabditis elegans)BLI-5具有一定的相似性,尤其是Kunitz结构域。4)各时期转录丰度检测显示,Hc-bli-5与Hc-bli-4的表达趋势有一定的重叠,提示二者可能互相作用、参与共同的生物学过程。5)组织定位研究表明,Hc-BLI-5蛋白主要表达于捻转血矛线虫的表皮和肌肉组织。综上,Hc-bli-5可能与Hc-bli-4相互作用参与捻转血矛线虫蜕皮过程。本研究明确了Hc-bli-5的序列特征及其蛋白的表达特性,为探索其是否参与捻转血矛线虫蜕皮过程及其作用机制提供了理论依据。

关键词：捻转血矛线虫蜕皮 Hc-bli-5 序列特征表达特性

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繁殖周期内大白猪母猪肠道菌群特征分析

黑龙江畜牧兽医 2024年第2期 50-59页

作者：孙正瑶陈宇梁瑾陈超刘瑞倪宏波张晓轩马赫青岛农业大学动物医学院山东青岛266109 黑龙江八一农垦大学动物科技学院黑龙江大庆163319 浙江海正动物保健品有限公司杭州311400 吉林农业大学动物医学院长春130118

为了探究繁殖周期内母猪肠道菌群的演替规律和结构特征,试验从山东省莱西市某猪场选取12头大白猪母猪为研究对象,采集其空怀期(配种前2天)、妊娠早期(妊娠第28,42,56天)、妊娠末期(妊娠第70,84,98天)、分娩期(分娩当天)及哺乳期(泌乳第7... 详细信息

为了探究繁殖周期内母猪肠道菌群的演替规律和结构特征,试验从山东省莱西市某猪场选取12头大白猪母猪为研究对象,采集其空怀期(配种前2天)、妊娠早期(妊娠第28,42,56天)、妊娠末期(妊娠第70,84,98天)、分娩期(分娩当天)及哺乳期(泌乳第7,14,21天)繁殖周期5个阶段11个时间点的新鲜粪便样本,提取粪便样本基因组DNA,采用16S rRNA高通量测序技术进行测序,分析大白猪母猪繁殖周期不同阶段肠道微生物的多样性及在门、科、属水平上的组成结构特征。结果表明:大白猪母猪繁殖周期肠道微生物在空怀期时的α多样性最低,随着妊娠的进行,α多样性逐渐上升,在妊娠末期达到最高,进入分娩期后急剧下降,但分娩期与哺乳期差异不显著(P>0.05)。空怀期、妊娠早期、妊娠末期、分娩期和哺乳期5个阶段的平均物种数量在400~800种之间,妊娠末期时的物种数量最多,且除空怀期和妊娠早期物种数量差异不显著(P>0.05)外,其余繁殖阶段间均差异显著或极显著(P2.0],其中空怀期存在9个特征菌属,相对丰度最高的为梭状芽孢杆菌属(Clostridium_sensu_stricto_1);妊娠早期存在8个特异性菌属,相对丰度最高的为克里斯滕森菌属(Christensenellaceae_R_7_group);妊娠末期存在13个特征菌属,相对丰度较高的为梭状芽孢杆菌属UGG_014(Clostridia_UCG_014)和普雷沃氏菌属NK3B31_group(Prevotellaceae_NK3B31_group);分娩期存在7个特征菌属,相对丰度最高的为Muribaculaceae;哺乳期存在11个特征菌属,相对丰度最高的为拟杆菌属(Bacteroides)。说明大白猪母猪繁殖周期不同阶段肠道菌群的多样性存在差异,各有其特征菌属。

关键词：母猪繁殖周期空怀期妊娠期哺乳期肠道微生物多样性 16S rRNA测序

氧化再生纤维素止血材料在猪肝脏出血创面模型中的止血效果

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中国组织工程研究 2024年第10期28卷 1490-1496页

作者：霍云孙晓青杭州协合医疗用品有限公司浙江省杭州市310018

背景:目前植物来源的可吸收止血材料以进口为主,研发出非劣于同类进口产品的国产替代非常有必要。目的:观察氧化再生纤维素止血材料对猪肝出血模型的止血效果。方法:选取巴马小型猪24只,采用随机数字表法分为3组:假手术组(n=6)只做开腹... 详细信息

背景:目前植物来源的可吸收止血材料以进口为主,研发出非劣于同类进口产品的国产替代非常有必要。目的:观察氧化再生纤维素止血材料对猪肝出血模型的止血效果。方法:选取巴马小型猪24只,采用随机数字表法分为3组:假手术组(n=6)只做开腹手术,将伤侧肝脏取出后放回原位;实验组(n=12)建立肝脏出血创面模型后将氧化再生纤维素止血材料敷于创面上;对照组(n=6)建立肝脏出血模型后将市售可吸收止血纱敷于创面上,记录止血时间和出血量。造模前及造模后不同时间点取猪前腔静脉血,进行血常规、肝肾功能分析;造模后2,6,14周,进行创面组织苏木精-伊红与Masson染色;造模后14周,进行主要脏器病理组织学观察;造模后不同时间点进行肝脏超声检查,观察材料降解吸收情况。结果与结论:①实验组与对照组猪肝脏创面止血时间与出血量比较差异均无显著性意义(P>0.05);②血液生化指标监测结果显示,3组猪造模后24 h的谷草转氨酶和谷丙转氨酶水平均高于造模前,造模后72 h这些指标基本恢复到造模前正常水平,3组间肝肾功能、血糖及炎症因子等血液生化指标值比较差异均无显著性意义(P>0.05);③创面组织苏木精-伊红与Masson染色显示,造模后2周时,两组肝脏创面可见肉芽组织形成及大量的胶原纤维沉积,有明显的纤维增生带和炎症细胞浸润,创面愈合良好;造模后14周,两组猪肝脏创面有轻度的纤维增生带、胶原纤维沉积和少量炎症细胞浸润,材料降解完全,创面愈合;苏木精-伊红染色显示主要脏器无明显的病理组织变化;④超声检查显示,随着植入时间的延长,两组材料逐渐降解,至造模后56 d时已大部分降解吸收;⑤结果显示氧化再生纤维素止血材料能有效防止猪肝脏创面出血,且应用安全可靠。

关键词：氧化再生纤维素可吸收止血材料肝脏出血创面可吸收止血纱动物模型止血效果