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D-半乳糖诱导的衰老大鼠心脏S100A8/A9及相关炎症通路基因表达的研究

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中国病理生理杂志 2023年第10期39卷 1746-1755页

作者：周荧苑婕吕东颖富丹婷蔡兆伟王德军浙江中医药大学药学院浙江杭州310053 浙江中医药大学中医药科学院动物实验研究中心浙江杭州310053 浙江省中医药研究院实验动物中心浙江杭州310012

目的:探讨D-半乳糖(D-Gal)诱导的衰老大鼠模型心脏差异基因表达的变化,并对其中S100钙结合蛋白A8/A9(S100A8/A9)及其下游p38丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)/核因子κB(NF-κB)通路关键因子进行验证。方法:(1)将8~10周龄SD大鼠随机分为正常对... 详细信息

目的:探讨D-半乳糖(D-Gal)诱导的衰老大鼠模型心脏差异基因表达的变化,并对其中S100钙结合蛋白A8/A9(S100A8/A9)及其下游p38丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)/核因子κB(NF-κB)通路关键因子进行验证。方法:(1)将8~10周龄SD大鼠随机分为正常对照(control)组和D-Gal组,每组6只。D-Gal组大鼠每天颈背部皮下注射D-Gal(150 mg/kg),control组大鼠注射相同体积的生理盐水。Morris水迷宫检测学习记忆能力;测定血清超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)和丙二醛(MDA)水平;超声心动图测定心功能变化;进行心脏HE、Masson、衰老相关β-半乳糖苷酶(SA-β-Gal)和二氢乙啶染色,并用透射电镜观察线粒体超微结构。转录组测序分析大鼠心脏基因表达差异,qRT-PCR和Western blot检测大鼠心肌组织衰老标志基因、S100A8/A9、p38 MAPK和NF-κB通路相关因子的mRNA和蛋白表达。(2)利用D-Gal(10 g/L)诱导建立H9C2心肌细胞衰老模型,并用S100A8/A9抑制剂帕奎莫德(paquinimod)干预,检测衰老相关指标和S100A8/A9下游炎症通路相关因子的mRNA和蛋白表达。结果:与control组相比,D-Gal组大鼠出现学习记忆能力障碍,血清SOD和CAT水平显著降低(P<0.01);D-Gal组大鼠射血分数和短轴缩短分数显著降低(P<0.01),心肌细胞排列紊乱,纤维断裂和炎性细胞浸润,纤维化面积、SA-β-Gal和活性氧含量均显著增加,线粒体结构发生变化,且细胞周期蛋白依赖性激酶抑制剂1A(CDKN1A)、CDKN2A和P53的mRNA表达较control组也显著上调(P<0.01);转录组测序分析显示,S100A8和S100A9的mRNA和蛋白水平在衰老大鼠心脏中显著上调,同时p38 MAPK和NF-κB磷酸化蛋白水平及白细胞介素1β(IL-1β)、IL-6和肿瘤坏死因子α等炎症因子的mRNA表达水平也显著升高(P<0.05或P<0.01)。D-Gal持续刺激可诱导H9C2细胞衰老,伴随S100A8/A9的表达增高,而paquinimod可显著减少D-Gal诱导的心肌细胞SA-β-Gal阳性率和衰老标志基因表达,并抑制p38 MAPK和NF-κB磷酸化活化及下游炎症因子表达(P<0.05或P<0.01)。结论:S100A8和S100A9通过诱导p38 MAPK/NF-κB炎症通路激活,促进心肌细胞炎症,从而参与D-Gal诱导的大鼠心脏衰老过程。

关键词：心脏衰老 S100钙结合蛋白A8 S100钙结合蛋白A9 p38 MAPK/NF-κB信号通路慢性炎症

土茯苓总黄酮对兔离体胸主动脉环的舒张作用及机制

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中国药理学与毒理学杂志 2023年第10期37卷 753-758页

作者：吴文斌周江峰周荧潘永明屠珏蔡兆伟王德军浙江中医药大学中医药科学院动物实验研究中心浙江杭州310053 上海中医药大学科技实验中心上海201203

目的探讨土茯苓总黄酮(SGF)对兔胸主动脉环的舒张作用及作用机制。方法制备内皮完整或去内皮的兔离体胸主动脉环并检验其内皮完整性,利用MedLab-U/8c生物信号采集处理系统检测药物刺激后血管张力。①内皮完整胸主动脉环分为氯化钾(KCl)6... 详细信息

目的探讨土茯苓总黄酮(SGF)对兔胸主动脉环的舒张作用及作用机制。方法制备内皮完整或去内皮的兔离体胸主动脉环并检验其内皮完整性,利用MedLab-U/8c生物信号采集处理系统检测药物刺激后血管张力。①内皮完整胸主动脉环分为氯化钾(KCl)60 mmol·L^(-1)、去氧肾上腺素(PE)1μmol·L^(-1)、去甲肾上腺素(NE)1μmol·L^(-1)、一氧化氮合酶抑制剂左旋硝基精氨酸甲酯(L-NAME)100μmol·L^(-1)和β2肾上腺素能受体阻滞剂ICI1185510.1μmol·L^(-1)组。KCl组、PE组和NE组分别预收缩胸主动脉环10 min,L-NAME组和ICI118551组分别预处理胸主动脉环30 min,并加入NE 1μmol·L^(-1)预收缩10 min。所有组间隔6 min加1次SGF,检测SGF 15.625~500 mg·L^(-1)浓度作用下血管张力;②去内皮胸主动脉环分为PE 1μmol·L^(-1)、NE 1μmol·L^(-1)和氯化钙(CaCl_(2))组。PE组和NE组预收缩胸主动脉环10 min,间隔6 min加1次SGF,检测SGF 15.625~250 mg·L^(-1)浓度作用下血管张力。CaCl_(2)组在无钙环境中加入KCl 60 mmol·L^(-1)预收缩胸主动脉环,同时加SGF 500 mg·L^(-1)预处理20 min,间隔6 min添加1次CaCl_(2),检测CaCl_(2)0.15~2.4 mmol·L^(-1)浓度作用下血管张力。同时设生理盐水组。结果在内皮存在条件下,SGF 15.625~250 mg·L^(-1)对KCl预收缩胸主动脉环无明显作用,而SGF 31.25~500 mg·L^(-1)对PE和NE预收缩胸主动脉环有显著舒张作用(P<0.01),最大舒张率分别达(56±12)%和(76±13)%。SGF 500 mg·L^(-1)对胸主动脉环的舒张功能减弱,舒张率为(40±10)%和(46±15)%。L-NAME 100μmol·L^(-1)预处理基本阻断SGF诱导的胸主动脉环舒张作用(P<0.01),而ICI1185510.1μmol·L^(-1)预处理仅部分阻断SGF的舒张效应(P<0.01)。去除胸主动脉环内皮后,SGF对PE和NE预收缩胸主动脉环无舒张作用,但SGF 500 mg·L^(-1)预处理能显著降低CaCl_(2)0.6~2.4 mmol·L^(-1)诱导的胸主动脉环收缩(P<0.05)。结论SGF可能具有一氧化氮依赖性诱导血管舒张、钙离子通道阻滞剂和β受体阻滞剂作用。

关键词：土茯苓总黄酮离体胸主动脉环血管舒张内皮依赖性

中药酚酸类物质通过调节肠道菌群防治心血管疾病的研究进展

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中成药 2022年第12期44卷 3920-3926页

作者：杨钦钦陈民利浙江中医药大学中医药科学院浙江杭州310053 浙江省中医药研究院实验动物中心浙江杭州310007

酚酸是植物类中药中广泛存在的一种活性物质,具有多种药理活性,尤其在心血管疾病的防治方面具有一定的优势。酚酸单体或富含酚酸类物质的口服类中药在临床应用中均能表现出显著疗效,然而药代动力学研究表明,酚酸类物质口服生物利用度低... 详细信息

酚酸是植物类中药中广泛存在的一种活性物质,具有多种药理活性,尤其在心血管疾病的防治方面具有一定的优势。酚酸单体或富含酚酸类物质的口服类中药在临床应用中均能表现出显著疗效,然而药代动力学研究表明,酚酸类物质口服生物利用度低,药物原型在血液中几乎不暴露,故长时间以来中药酚酸类物质药理机制均不明确。近年来,大量研究证实酚酸类物质可通过影响肠道菌群及其代谢物而发挥治疗心血管疾病的作用,提示调控肠道菌群可能是中药酚酸类物质的关键作用途径。基于此,本文从肠道菌群及其代谢产物角度出发,对中药酚酸类物质防治心血管疾病的概况及相关机制进行总结与归纳,以期为中药酚酸类物质抗心血管疾病的药理作用机制研究提供参考。

关键词：中药酚酸类物质肠道菌群代谢产物心血管疾病

基于多指标成分含量结合化学计量学评价不同产地浙贝母质量

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中成药 2023年第7期45卷 2317-2322页

作者：唐瑞杜伟锋孙贝贝赵明方李亚飞方可儿张海瑞李昌煜葛卫红浙江中医药大学药学院浙江杭州310053 浙江中医药大学中药炮制技术研究中心浙江杭州311401 浙江中医药大学中药饮片有限公司浙江杭州311400 浙江中医药大学中医药科学院浙江杭州311401

目的评价不同产地浙贝母质量。方法采用UV-Vis、HPLC-ELSD、HPLC-DAD法测定总生物碱含量,贝母素甲、贝母素乙总含量,水溶性成分(尿嘧啶、胞苷、尿苷、2-脱氧尿苷、肌苷、腺嘌呤、胸苷、腺苷、2-脱氧腺苷)总含量,主成分分析(PCA)、偏最... 详细信息

目的评价不同产地浙贝母质量。方法采用UV-Vis、HPLC-ELSD、HPLC-DAD法测定总生物碱含量,贝母素甲、贝母素乙总含量,水溶性成分(尿嘧啶、胞苷、尿苷、2-脱氧尿苷、肌苷、腺嘌呤、胸苷、腺苷、2-脱氧腺苷)总含量,主成分分析(PCA)、偏最小二乘法-判别分析(OPLS-DA)评价质量。结果浙江产浙贝母中总生物碱含量,贝母素甲、贝母素乙总含量,9种水溶性成分总含量均高于湖南安化、湖北宜昌产,其中舟山产样品中9种水溶性成分总含量、总生物碱含量,象山产样品中贝母素甲、贝母素乙总含量显著高于其他浙江产地样品中。结论浙江产浙贝母质量较好,以舟山、象山产更明显。本实验可为该药材采购产地选择及优良新品种选育提供参考。

关键词：浙贝母产地总生物碱贝母素甲贝母素乙水溶性成分主成分分析(PCA) 偏最小二乘法-判别分析(OPLS-DA)

基于色度原理的薏苡仁炮制过程颜色与化学成分相关性分析

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药物分析杂志 2022年第8期42卷 1391-1399页

作者：杜伟锋汤璐璐朱伟豪孙贝贝吕悦吴杭莎葛卫红李昌煜浙江中医药大学药学院杭州311402 浙江中医药大学中药炮制技术研究中心杭州311401 浙江中医药大学饮片有限公司杭州311401 浙江中医药大学中医药科学院杭州310053

目的:研究薏苡仁炮制过程中化学成分含量与颜色值的相关性,为薏苡仁炮制过程质量控制提供理论依据。方法:采用HPLC法对薏苡仁中9个化学成分(甘油三亚油酸酯、1,2-二油酰基-3-油酰反式甘油、1,2-二亚油酸-3-棕榈酸甘油酯、1,2-二油酸-3-... 详细信息

目的:研究薏苡仁炮制过程中化学成分含量与颜色值的相关性,为薏苡仁炮制过程质量控制提供理论依据。方法:采用HPLC法对薏苡仁中9个化学成分(甘油三亚油酸酯、1,2-二油酰基-3-油酰反式甘油、1,2-二亚油酸-3-棕榈酸甘油酯、1,2-二油酸-3-亚油酸甘油酯、1-棕榈酸2-油酸-3-亚油酸甘油酯、1,3-二棕榈酸-2-亚油酸甘油酯、甘油三油酸酯、1,3-二油酸-2-棕榈酸甘油三酯和1,3-二棕榈酸-2-油酸甘油酯)含量进行测定;以薏苡仁炮制过程样品为研究对象,利用色差计采集色度值(L^(*)、a^(*)、b^(*)、E^(*)ab)。结果:3批生品到麸炒品的炮制过程中,色度值L^(*)、E^(*)ab数值越小,9个指标性成分含量越大;色度值a^(*)、b^(*)数值越大,9个指标性成分含量越大。在3批麸炒品到炮制太过的炮制过程中,色度值L^(*)、E^(*)ab与9个指标性成分含量均基本呈显著性正相关;色度值a^(*)与9个指标性成分含量均基本呈显著性负相关;色度值b^(*)与9个指标性成分含量在产地山东和安徽批次中均基本呈正相关,但均无显著性,产地四川批次中呈负相关,无显著性。结论:薏苡仁炮制过程含量与颜色具有一定的相关性,本实验为薏苡仁炮制过程质量控制提供了理论依据。

关键词：薏苡仁炮制过程内在质量色度值 Pearson相关性分析

西藏小型猪颈动脉粥样硬化模型的建立及评价研究

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中国实验动物学报 2023年第3期31卷 287-295页

作者：徐雁云潘永明黄俊杰屠海烨郁晨陈民利徐孝平浙江中医药大学药学院杭州310053 浙江中医药大学动物实验研究中心/比较医学研究所杭州310053

目的采用高脂饮食联合左侧颈动脉球囊损伤术建立西藏小型猪颈动脉粥样硬化(carotid atherosclerosis,CAS)模型,观察西藏小型猪CAS模型的血液生化、影像学及病理学特点。方法10只雄性西藏小型猪随机分为两组,正常组饲喂正常饲料,模型组... 详细信息

目的采用高脂饮食联合左侧颈动脉球囊损伤术建立西藏小型猪颈动脉粥样硬化(carotid atherosclerosis,CAS)模型,观察西藏小型猪CAS模型的血液生化、影像学及病理学特点。方法10只雄性西藏小型猪随机分为两组,正常组饲喂正常饲料,模型组持续饲喂高脂饲料且2周后进行左侧颈动脉球囊损伤术,造模周期为12周。分别在高脂饲喂前(-2周)、球囊损伤(0周)及术后2周、6周、10周检测其体重和血液生化等指标,并在术后10周进行超声、血流多普勒、血管造影等影像学观测。动物安乐死后取左侧颈动脉进行HE、Masson和油红“O”染色,观察其形态、炎症、纤维化和脂质沉积等情况,分析西藏小型猪的病变特点。结果西藏小型猪CAS模型的多项血液生化指标与临床相似;影像学结果显示CAS模型左颈动脉血管显著狭窄且阻力增大,导致血流速度减小;病理观察有明显炎症细胞浸润、胶原纤维增生、血管壁增厚和脂质沉积等,与临床表现近似。结论西藏小型猪CAS模型与临床特点相似,模型易感且稳定,是适用于研究CAS的良好的理想模型。

关键词：西藏小型猪颈动脉粥样硬化动物模型

薏苡仁麸炒前后治疗脾虚水湿不化谱效关系研究

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中成药 2022年第2期44卷 475-481页

作者：孙贝贝孙海英朱伟豪洪浩洪智慧杜伟锋葛卫红李昌煜浙江中医药大学药学院浙江杭州311402 浙江省台州医院浙江台州317000 浙江中医药大学中药炮制技术研究中心浙江杭州311401 浙江中医药大学中医药科学院浙江杭州310053

目的研究薏苡仁麸炒前后HPLC指纹图谱与治疗脾虚水湿不化药效之间的相关性,为明确薏苡仁麸炒前后药效物质基础提供实验依据。方法通过HPLC法建立麸炒前后薏苡仁指纹图谱;建立脾虚水湿不化大鼠模型,比较其麸炒前后的药效作用;同时采用灰... 详细信息

目的研究薏苡仁麸炒前后HPLC指纹图谱与治疗脾虚水湿不化药效之间的相关性,为明确薏苡仁麸炒前后药效物质基础提供实验依据。方法通过HPLC法建立麸炒前后薏苡仁指纹图谱;建立脾虚水湿不化大鼠模型,比较其麸炒前后的药效作用;同时采用灰色关联度法,对5批生品及其麸炒品进行谱效关系分析,分别找出关联度较大的化学成分,并比较麸炒前后谱-效关系差异。结果 HPLC指纹图谱中指认9个共有峰。与模型组比较,生品与麸炒品均有显著性差异;与生品组比较,麸炒薏苡仁各药效指标明显高于生品。麸炒品中9种共有成分与GAS、MTL、SS、体质量、胸腺指数以及脾指数的关联度明显高于生品;生品中9种共有成分与VIP的关联度明显高于麸炒品。结论薏苡仁治疗脾虚水湿不化的药效是多成分共同作用结果,麸炒后药效明显高于麸炒前。

关键词：薏苡仁麸炒脾虚水湿不化 HPLC指纹图谱灰色关联度法谱效关系

肠道菌群与肠屏障互作影响动脉粥样硬化形成的研究进展

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中国实验动物学报 2022年第7期30卷 973-982页

作者：徐雁云陈民利浙江中医药大学药学院杭州310053 浙江中医药大学动物实验研究中心/比较医学研究所杭州310053

动脉粥样硬化(atherosclerosis,AS)是一种慢性炎症代谢性疾病,与高血压、高血脂、高血糖、高尿酸等危险因素联系密切。肠道屏障功能对维持人体肠道功能稳态发挥着重要调节作用,肠道菌群是肠道屏障的重要组成部分,肠道菌群紊乱会导致肠... 详细信息

动脉粥样硬化(atherosclerosis,AS)是一种慢性炎症代谢性疾病,与高血压、高血脂、高血糖、高尿酸等危险因素联系密切。肠道屏障功能对维持人体肠道功能稳态发挥着重要调节作用,肠道菌群是肠道屏障的重要组成部分,肠道菌群紊乱会导致肠道屏障受损、肠道通透性增加,同时菌群相关产物如脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)、短链脂肪酸(short chain fatty acid,SCFAs)、胆汁酸(bile acids,BAs)、氧化三甲胺(trimethylamine oxide,TMAO)等发生改变,可引发机体炎症反应、氧化应激等不良反应,影响AS的发生发展。本文就肠道菌群与肠屏障互作对于AS的形成及其危险因素的影响作一综述,为研究和防治AS提供参考。

关键词：动脉粥样硬化肠道菌群肠道屏障危险因素

一种新型糖尿病视网膜病变大鼠模型的建立及其病理特点研究

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中华糖尿病杂志 2021年第5期13卷 490-497页

作者：杨钦钦马全鑫施佳君富丹婷郑纯威周洁陈宇浙江省中医药研究院实验动物中心杭州310007 浙江中医药大学中医药科学院/比较医学研究所杭州310053 浙江省中医药研究院药用资源研究中心杭州310007

目的:探讨一种新型的糖尿病视网膜病变(DR)大鼠模型的建立及其病理特点。方法:取褐色挪威(BN)大鼠36只,分为对照组、链脲佐菌素(STZ)组和STZ+亚精胺(SP)组,每组12只。STZ组和STZ+SP组尾静脉注射STZ,STZ+SP组玻璃体注射亚精胺,对照组给... 详细信息

目的:探讨一种新型的糖尿病视网膜病变(DR)大鼠模型的建立及其病理特点。方法:取褐色挪威(BN)大鼠36只,分为对照组、链脲佐菌素(STZ)组和STZ+亚精胺(SP)组,每组12只。STZ组和STZ+SP组尾静脉注射STZ,STZ+SP组玻璃体注射亚精胺,对照组给与同体积的溶剂。造模后继续饲喂12周,期间监测体重和空腹血糖。利用超声成像系统观察视网膜中央动脉血流供应情况。动物处死后取眼球行苏木精-伊红染色,观察视网膜基本结构,分析各层厚度。视网膜消化铺片行过碘酸雪夫染色和神经胶质抗原2免疫荧光染色,观察微血管和周细胞情况。采用流式细胞术检测视网膜组织活性氧簇(ROS)水平;最后利用分子生物学技术检测紧密连接蛋白闭合蛋白-1(claudin-1)和咬合蛋白(occludin)mRNA和蛋白表达。多组重复测量的计量资料的比较采用重复测量的方差分析,组间两两比较采用LSD-t法。结果:与对照组比较,STZ组和STZ+SP组大鼠体重下降(P动物模型,病变特征主要表现为更严重的视网膜血管顺应性下降,血流供应减少,视网膜水肿,新生无细胞毛细血管大量生成以及视网膜周细胞凋亡增多。

关键词：糖尿病视网膜病变动物模型大鼠病理特点